胃癌及慢性胃炎幽门螺杆菌的蛋白质组学研究

目的:建立胃炎与胃癌相关幽门螺杆菌的双向凝胶电泳图谱,识别鉴定其差异表达的蛋白质,探讨细菌本身因素在发病过程中的作用.方法:利用固相pH梯度双向凝胶电泳分离胃炎与胃癌相关幽门螺杆菌菌株的总蛋白质,凝胶经蓝银显色后,采用PDQuest图像分析软件比较、分析、识别差异表达的蛋白质,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱得到相应的肽质指纹图谱,然后搜索数据库鉴定部分差异蛋白质点.结果:获得分辨率较高、重复性较好的胃炎与胃癌相关幽门螺杆菌双向凝胶电泳图谱,鉴定出14个差异蛋白质,包括抗氧化作用、分子伴侣、解毒和DNA修复相关蛋白质、三大代谢相关酶类、细胞结构相关蛋白质以及信号传导相关蛋白质.结论:建立了分辨率高且重复性较好的胃炎与胃癌相关幽门螺杆菌双向凝胶电泳图谱,并识别鉴定出了两种不同疾病来源幽门螺杆菌差异表达的蛋白质,其蛋白质表达的差异可能在胃癌的发生中起重要作用.     

TA2小鼠自发乳腺癌血清蛋白质组学研究

目的:采用双向电泳-质谱技术寻找TA2小鼠自发性乳腺癌发生相关的差异蛋白.方法:收集5只TA2自发乳腺癌小鼠和5只正常TA2小鼠血清,将血清标本进行双向电泳,经软件分析结合人工比对确认差异蛋白点,基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱对差异蛋白点进行鉴定.结果:在TA2自发乳腺癌小鼠和正常TA2小鼠血清间共找到11个差异蛋白质点,成功鉴定出5种蛋白质,它们分别为:妊娠区带蛋白、对氧磷酶、HemK家族修饰性甲基化酶、结合珠蛋白和血清淀粉样P成分.其中这5种蛋白均在TA2自发乳腺癌小鼠高表达,而在正常TA2小鼠呈低表达或表达缺失.结论:通过双向电泳质谱技术鉴定出的5种差异蛋白与乳腺癌的发生有一定关系,初步阐述了TA2小鼠自发乳腺癌发生的机制.     

应用基质辅助激光解吸质谱的源内衰变及串联质谱技术测定重组人纽兰格林的C端序列

目的测定重组人纽兰格林的C端序列。方法用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI—TOF-MS）的源内裂解（ISD）及串联质谱技术（TOF—TOF,LIFT）,测定重组蛋白纽兰格林的C端序列。结果用该方法鉴定了重组蛋白纽兰格林C端序列的10个氨基酸残基。结论与现有的C-端序列测定方法比较,该方法简便快捷,可适用于部分重组蛋白药物的质量控制。     

复发性卵巢癌血清蛋白质质谱分析

目的 探讨复发性卵巢癌早期筛查的血清标志物.方法 应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术分析21例复发性卵巢癌和18例完全临床缓解期卵巢癌的血清蛋白质质谱差异. 结果在Mr 1 000～12 000 D区段,Mr 1944、1980、2080、2661、2993、4450、4659、535...     

SELDI-TOF-MS技术结合LCM技术分析结肠癌细胞蛋白质组学构成

目的表面增强激光解吸电离质谱(SELDI-TOF-MS)技术结合激光捕获微切割(LCM)分析正常结肠粘膜上皮细胞和结肠癌细胞的蛋白质组学构成.方法将新鲜结肠标本常规制备冰冻组织切片,通过激光捕获微切割从组织冰冻切片中分别切取结肠粘膜上皮细胞和结肠癌细胞,SELDI技术分析蛋白质组学构成.结果激光捕获微切割可正确有效地分离结肠癌和正常粘膜上皮细胞;比较结肠癌和正常结肠粘膜细胞的飞行质谱图提示有多处峰存在显著性差异.结论 SELDI技术结合激光捕获微切割技术可以快速有效分析结肠癌细胞的蛋白质构成;所获结果为结肠癌发生发展过程细胞蛋白质文库的建立提供了依据.     

蜈蚣提取液治疗肝癌Bel-7404细胞后的差异表达蛋白研究

目的 筛选蜈蚣提取液(ECP)治疗肝癌Bel-7404细胞后的相关差异表达蛋白,探讨其药物治疗机.方法 一步抽提法制备肝癌Bel-7404细胞株治疗组ECP浓度(10 mg/mL)和对照组(RPIM1640完全培基培养)的总蛋白质,双向凝胶电泳建立两组总蛋白的双向凝胶电泳图谱,PDQuest软件对其图谱比较,MALDI-TOF-MS对差异表达的蛋白质进行分析并获取肽质量指纹图谱,数据库搜索鉴定主要差异表达蛋白质.结果 共发现76个差异表达蛋白点(P<0.05).治疗组中41个表达下调,35个表达上调.选择最明显的14个蛋白质斑点作质谱分析,其中肽基脯氨酰顺反异构酶A(PPIA)、核纤层蛋白-Bl(Lamin-B1)、黄素还原酶(FRase)、转铁结合蛋白2(Tbp2)、唾液酸合成酶(SAS)、3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH),周期素依赖激酶抑制蛋白1(P21)和半乳凝素(Gal-7)在治疗组中表达上调,角蛋白(CK-19)、肌动蛋白(Actin)、转内质网ATP(三磷酸腺苷酶)酶(TER AIPase)、ω-1谷胱甘肽转移酶(GSTOl-1)、抑制蛋白(PFNl)及碱性磷酸酶(ALP)在治疗组中表达下调.结论 ECP能诱导肝癌Bel-7404细胞内某些蛋白异常表达,能多途径抑制肝癌细胞的生长,诱导其凋亡或直接死亡.     

BRAF基因的多态性与黑素瘤易感性间的关系

黑素瘤和痣中BRAF的体细胞突变很常见，但BRAF基因的多态性与黑素瘤或痣易感性的关系尚不明确。在一组澳大利亚病例对照样本的BRAF基因中发现16个单核苷酸多态性（SNP），在3个邻近基因中发现5个SNP。该样本包括按黑素瘤家族史分层的740个家庭中的755例黑素瘤病例和来自635个未经选择的双生子家庭的对照（2239例个体）。记录病例组和对照组的祖先。孪生儿经皮肤检查评估全身痣总数、雀斑程度和色素沉着的表现型。用经引物延伸后基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱进行基因分型。结果发现BRAF的SNP与黑素瘤的形成呈弱相关，但与痣或雀斑的生成不相关。估计BRAF基因突变在黑素瘤的归因危险度为1．6％。本研究显示BRAF基因的多态性可能与黑素瘤易感性有关，但致病突变尚需确定。这种突变与黑素瘤的相关程度明显高于黑素瘤易感基因位点CDKN2A与黑素瘤的相关程度，后者的期望归因危险度是0．2％。     

胰腺组织总蛋白分步提取法的建立

目的:通过对提取狗胰腺组织总蛋白不同方法的研究,建立提取胰腺组织总蛋白的标准方法.方法:用常规的总蛋白一步提取法和三步提取法,以三种溶解性能不同的裂解液分步提取胰腺组织中的总蛋白,测量蛋白浓度并分别用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight-mass spectra,MALDI-TOF-MS)做蛋白全谱.结果:一步法和分步法总蛋白提取量分别为(18.8±1.2) mg和(23.3±0.9) mg,MALDI-TOF-MS蛋白全谱的谱峰数分别为(22.2±4.5)个和(32.8±3.8)个.结论:分步法与常规的一步法相比具有蛋白提取率高、蛋白溶解性好等优点.     

肢端恶性黑素瘤局部切除疗效观察

目的 观察21例肢端恶性黑素瘤(acral malignant melanoma,AMM)局部切除后疗效.方法 7例切除后直接缝合;13例较大损害,切除后植皮,切除范围距病灶0.5～3 cm;1例甲周损害截趾.结果 病理肢端原位黑素瘤8例全部存活;侵袭性黑素瘤13例,存活11例,死亡2例,5～11年存活率84.6%.结论 肢端恶性黑素瘤(AMM)依据损害形态,初步确定是原位或侵袭性,再确定切除范围,侵袭性恶性黑素瘤(MM)术后5～11年存活率为84.6%;原位恶性黑素瘤术后存活率100%.     

应用激光捕获显微切割和蛋白质组学技术筛选鼻咽癌的差异表达蛋白质

目的:筛选鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)的差异表达蛋白质,为寻找NPC的分子标志物提供科学依据. 方法:采用激光捕获显微切割技术(laser capture microdissection,LCM)分别从NPC组织和正常鼻咽上皮组织(normal nasopharyngeal epithelial tissue,NNET)中纯化NPC细胞和正常鼻咽上皮细胞(normal nasopharyngeal epithelial cells,NNEC),应用二维凝胶电泳(2-DE)分离LCM 纯化细胞的蛋白质,图像分析识别差异表达的蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和电喷雾电离串联质谱(ESI-Q-TOF-MS)鉴定差异蛋白质点,Western 印迹和组织芯片(tissue microarray,TMA)免疫组织化学验证差异蛋白鳞状细胞癌抗原1(SCCA1)在两种组织中的表达水平.结果:建立了LCM 纯化的NPC细胞和NNEC的2-DE图谱,质谱鉴定了36个差异蛋白质,其中20个蛋白只在NPC表达或表达上调,16个蛋白在NPC中表达下调或缺失. Western 印迹和组织芯片免疫组织化学结果显示:SCCA1在NPC中的表达水平较NNET明显下调,与比较蛋白质组学结果一致.结论:36个差异蛋白可能与NPC的发病有关,为筛选NPC分子标志物奠定了基础.     

SELDI-TOF-MS技术在预测肿瘤化疗敏感性中的应用

表面增强激光解析离子化飞行时间质谱技术是新一代蛋白质组研究技术,它使用特殊的增强表面直接捕获待测样本中的蛋白质分子,能够快速、敏感地发现并鉴定蛋白,提供一个高通量和高灵敏度的检测平台。最初主要应用于疾病早期诊断相关的蛋白质标志物。目前在预测肿瘤化疗敏感性方面的应用也逐渐增多。本文除对表面增强激光解析离子化飞行时间质谱技术做详尽的介绍外,重点阐述其在预测肿瘤化疗敏感性方面的应用,并对其优缺点和发展前景进行评估。     

利用SELDI-TOF-MS技术从结直肠癌患者血清中筛选特异的生物标记物

目的 通过对血清中蛋白质组的质谱分析来发现可用于结直肠癌鉴定的生物标记物。方法 随机取73例结直肠癌患者血清、31例正常人血清及16例结直肠相关良性疾病患者血清。将血清与金属亲和表面（IMAC3）芯片结合后,用蛋白芯片仪读取数据并进行软件分析。结果 软件分析结果显示3类血清蛋白质在质荷比为4467,8131,8939,9192,9134,8221,5928,8324,11732D9处含量有显著差异,得到树状分类规则,其分类准确率为98．33％（118／120）,灵敏度为97．26％（71／73）,特异性为100％（47／47）。结论 用SELDI—TOF—MS技术对正常人、良性病患者及结直肠癌患者进行比较蛋白质组学研究,发现了结直肠癌病理发展中生物标记物。     

表面增强激光解析电离光谱技术分析人卵泡发育过程中蛋白质组学变化

目的 应用蛋白质芯片和质谱技术,建立人成熟卵泡液及窦卵泡液的蛋白质表达指纹图谱,寻找在卵泡生长发育过程中起关键作用的蛋白质.方法 采用表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术和弱阳离子交换蛋白质芯片检测48例人成熟卵泡液、21例窦卵泡液中的蛋白质变化,使用PBSⅡ-C型蛋白质芯片阅读机读取数据,获得的结果采用Ciphergen公司的Biomarkcr wizard和Biomarkcr Patterns System软件进行分析.结果 成熟卵泡液组与窦卵泡液组蛋白质谱相比,有4种蛋白质在含量上有显著差异,2种蛋白质在成熟卵泡液组表达上调,2种蛋白质表达下降.结论 成熟卵泡液与窦卵泡液蛋白质谱存在显著差异,差异蛋白可能与卵泡发育、卵子受精密切相关.     

应用SELDI-TOF-MS技术筛选人肝癌细胞多药耐药相关差异表达蛋白

【目的】通过SELDI-TOF-MS技术筛选体外培养人肝癌细胞多药耐药相关差异表达蛋白。【方法】采用体外培养人肝癌细胞Bel-7402及其耐5-氟尿嘧啶细胞Bel-FU,MTT法检测Bel-FU的多药耐药性;SELDI-TOF-MS技术结合CM-10芯片检测Bel-7402与Bel-FU蛋白质指纹图谱。【结果】细胞Bel-FU对于5-氟尿嘧啶、阿糖胞苷、长春新碱、阿霉素、柔红霉素的耐药指数分别为:89.6倍、3.9倍、37.2倍、16.5倍、3.7倍。在质荷比(M/Z)2 000～50 000的范围内,Bel-FU与Bel-7402间共检测到8个差异蛋白(P<0.05),其中上调蛋白有3个,下调蛋白有5个。【结论】SELDI-TOF-MS技术为筛选肝癌MDR蛋白标志物提供了一个简便、有效的方法。     

MALDI-TOF MS直接鉴定腹水培养阳性样本的研究

目的 探讨用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)直接鉴定腹水培养阳性病原菌的方法.方法 收集2016年9～11月培养阳性的腹水标本202瓶,差速离心法富集菌体,利用MALDI-TOF MS对菌液进行直接鉴定.结果 202瓶样本中,196瓶为单菌株感染,6瓶为混合菌感染.单菌株感染中,菌株的种、属鉴定符合率分别为77.6％和93.4％.其中革兰阴性菌的种、属鉴定符合率为75.9％和91.1％;革兰阳性菌的种、属鉴定符合率为80.2％和95.3％;真菌的菌种、属鉴定符合率为12.5％和50.0％.6瓶混合菌感染样本,均鉴定出其中一种菌.结论 利用MALDI-TOF MS直接鉴定腹水培养阳性样本中的病原菌,鉴定准确率高,检测时间短,为腹腔感染的快速诊断提供了有力的检测手段.     

脑脊液蛋白质质谱在非小细胞肺癌脑转移诊断中的应用

目的本研究旨在分析非小细胞肺癌(NSCLC)脑转移患者、非肿瘤患者和早期NSCLC无脑转移患者脑脊液的蛋白质谱,找出差异蛋白峰,建立NSCLC脑转移的蛋白质谱诊断模型。方法收集上述三组患者的脑脊液标本各29例、23例和10例,采用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)进行检测,Biomarker Wizard软件统计分析三组样本的蛋白质峰,Biomarker patterns软件的决策树模型进行差异蛋白峰的比较和判别,建立分类决策树诊断模型,评价其诊断和应用价值。结果脑转移组与早期无脑转移组有5个显著差异性表达蛋白质峰,运用m/z8698.00、1215.32和1245.70蛋白质峰将两组样本分开,诊断模型的灵敏度100%(29/29),特异度为100%(10/10)。早期无脑转移组与非肿瘤组结果有5个显著差异性表达蛋白峰,应用m/z6050.00蛋白峰可以把无脑转移组和非肿瘤组分开,诊断模型的灵敏度为90.00%(9/10),特异度为78.26%(18/23)。结论采用SELDI技术可以发现三组患者的脑脊液存在显著差异表达蛋白质峰,利用这些差异蛋白质建立的蛋白质谱分类决策树状诊断模...     

蕨麻对大鼠缺血心肌的保护作用及其血清差异蛋白表达的影响

【目的】研究蕨麻乙醇提取物对大鼠结扎冠状动脉所致急性心肌缺血损伤的保护作用及其差异蛋白质表达谱的影响。【方法】选取雄性SD大鼠随机分为手术对照组,模型组,盐酸地尔硫卓组(diltiazem,30 mg/kg),蕨麻乙醇提取物7.2、3.6、1.8 g/kg干预组。连续灌胃10 d后,结扎在体大鼠冠状动脉致急性心肌缺血损伤模型。缺血时间持续30 min。记录各处理组动物心电图,左心室收缩压LVSP,左心室舒张末期压LVEDP及左室内压最大变化速率(±dp/dt max);取血清检测乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)含量;用强阴离子交换芯片(SAX-2)及弱阳离子交换芯片(WCX-2)结合表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术分析大鼠急性心肌缺血损伤后不同处理组血清中蛋白质表达谱的改变。【结果】冠状动脉结扎致心肌缺血后,心电图ST段出现抬高,蕨麻醇提物7.2和3.6 g/kg组显著抑制了急性心肌缺血损伤导致的大鼠心电图ST段升高(P<0.05)。蕨麻醇提物各剂量组的各项心功能指标[左心室收缩压LVSP,左心室舒张末期压LVEDP及±dp/dt均优于模型组(P<0.05)]。心肌缺血后,血清中LDH和CK含量显著升高,蕨麻醇提物各剂量组血清中LDH和CK均显著降低(P<0.05)。蛋白质芯片结果显示:WCX-2芯片共获得338个血清蛋白质峰;SAX-2芯片共获得348个血清蛋白质峰。缺血30 min,模型组质/荷(M/Z)比为4 972 Da的蛋白质相对含量明显高于对照组(P<0.01),蕨麻干预后,该蛋白质峰随药物浓度升高而降低,至高剂量组时降至对照组水平,呈现出明显的剂量依赖关系,提示4 972Da蛋白质可能是蕨麻抗心肌缺血损伤的药物作用靶点之一,有待进一步研究证实。【结论】蕨麻乙醇提取物能够显著保护急性心肌缺血所致心肌损伤,改善心脏功能。不同剂量蕨麻干预后,心肌损伤后异常表达的蛋白质(4 972 Da)剂量依赖性下降。     

激光捕获显微切割技术纯化的肺鳞癌原发灶与淋巴结转移灶肿瘤细胞的比较蛋白质组学

目的：筛选肺鳞癌淋巴结转移相关的蛋白质。方法：采用激光捕获显微切割技术（lasercapture microdissection,LCM）分别从肺鳞癌原发灶组织和匹配的淋巴结转移灶癌组织中切割纯化鳞癌细胞;应用二维凝胶电泳（two-dimensional electrophoresis,2-DE）分离LCM纯化细胞的蛋白质;图像分析识别差异表达的蛋白质点;基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定差异蛋白质点,Western印迹验证差异蛋白Rho-GDIα在LCM纯化的肺鳞癌原发灶肿瘤细胞（lung primary tumor cells,LPTC）和匹配的淋巴结转移灶肿瘤细胞（lymph node metastatic tumor cells,LNMTC）中的表达。结果：建立了LCM纯化的LPTC和匹配的LNMTC的2-DE图谱,质谱鉴定了22个差异蛋白质,与LPTC相比,8个蛋白质在LNMTC中表达明显增高。结论：22个差异蛋白可能与肺鳞癌淋巴结转移有关,为筛选肺鳞癌转移标志物奠定了基础。     

激光捕获显微切割技术纯化的肺鳞癌原发灶与 淋巴结转移灶肿瘤细胞的比较蛋白质组学

目的：筛选肺鳞癌淋巴结转移相关的蛋白质。 方法：采用激光捕获显微切割技术(laser capture microdissection,LCM)分别从肺鳞癌原发灶组织和匹配的淋巴结转移灶癌组织中切割纯化鳞癌细胞;应用二维凝胶电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)分离LCM纯化细胞的蛋白质;图像分析识别差异表达的蛋白质点;基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定差异蛋白质点,Western印迹验证差异蛋白Rho-GDIα在LCM纯化的肺鳞癌原发灶肿瘤细胞（lung primary tumor cells, LPTC）和匹配的淋巴结转移灶肿瘤细胞（lymph node metastatic tumor cells, LNMTC）中的表达。结果：建立了LCM纯化的LPTC和匹配的LNMTC的2-DE图谱,质谱鉴定了22个差异蛋白质,与LPTC相比,8个蛋白质在LNMTC中表达明显增高。结论：22个差异蛋白可能与肺鳞癌淋巴结转移有关,为筛选肺鳞癌转移标志物奠定了基础。     

恶性黑色素瘤的预后研究

目的拟找出与各级恶性黑色素瘤预后相关的因素。方法选择南京军区福州总医院、福建医科大学第一附属医院及第三军医大学附属西南医院、附属新桥医院、附属大坪医院病理科1995~1998年间归档的各级恶性黑色素瘤标本55例。同时选取尸检对应部位正常组织共10份作为阴性对照。应用链霉素亲生物素-过氧化物酶标S-P法检测石蜡标本中耐药基因胎盘型谷胱甘肽-S-转移酶(GST-π)、DNA拓朴酶Ⅱ(TopoⅡ)、P-糖蛋白(Pgp)和Ki-67、血管内皮生长因子(VEGF)的表达,并用形态计量方法检测肿瘤内微血管密度(MVD),对所得的各项指标进行统计学分析。结果美国癌症联合会(AJC)分级与预后相关(P<0.05)。耐药基因Pgp、GST-π和TopoⅡ的表达率分别为36.4%(20/55=36.4%)、52.7%(29/55=52.7%)和43.6%(24/55=43.6%),相互间差异无显著性(P>0.05)。Pgp、GSTπ和TopoⅡ的表达和TopoⅡ和TopoⅡ的表达与患者预后显著相关(P<0.05)。Ki-67在肿瘤和正常组织中呈多少不等的阳性,不同级别及与非肿瘤组织之间差异有显著性。多元回归分析显示该指标是预后的独立危险因素之一,以27%为分界点两条生存曲线间时序分析差异有显著性(P<0.01)。微血管密度:AJC分级中Ⅰ级与正常黏膜组织之间的微血管密度差异无显著性,而Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级的微血管密度均显著增多(