骨髓间充质干细胞移植对严重烧伤大鼠肝损伤的修复作用及其机制

目的：探讨骨髓间充质干细胞（BMSCs）移植对严重烧伤大鼠肝损伤的修复作用,初步阐明其作用机制。方法：体外分离、培养、扩增、鉴定并标记大鼠BMSCs。将30只Wistar大鼠随机分成正常对照组、模型组和细胞治疗组,每组10只。制备大鼠烧伤模型,将氯甲基苯甲酰胺（CM-Dil）标记的BMSCs经球后静脉移植到细胞治疗组大鼠体内,模型组大鼠注射生理盐水。观察各组大鼠的一般状况。细胞移植后2周取大鼠肝组织,进行病理组织学观察和评分;TUNEL法检测肝细胞凋亡率;激光共聚焦显微镜观察BMSCs在大鼠肝组织中的定植情况。结果：细胞移植后2周,模型组大鼠精神明显萎靡、少动;细胞治疗组大鼠精神状态较好,大鼠体质量显著高于模型组（P<0.05）。病理组织学观察,模型组大鼠肝小叶结构消失,肝索排列紊乱,部分肝窦扩张充血,散在淋巴细胞浸润,偶见小灶性聚集,肝细胞浊肿,有些细胞胞浆疏松,脂肪变性;细胞治疗组大鼠肝组织的病理学改变较轻,明显好于模型组;细胞治疗组大鼠病理组织学评分明显低于模型组(P<0.05)。TUNEL法检测,模型组大鼠肝组织出现较多凋亡肝细胞,细胞治疗组大鼠肝细胞凋亡率明显低于模型组（P<0.05）。激光共聚焦显微镜观察,细胞治疗组大鼠肝组织中有CM-Dil标记的BMSCs。结论：BMSCs移植后能够向受损肝组织定植,对烧伤引起的肝损伤有明显的修复作用,其机制可能与抑制细胞凋亡有关。     

不同途径移植大鼠骨髓间充质干细胞对大鼠肝硬化的作用研究

目的探索不同途径移植绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP）标记的大鼠骨髓间充质干细胞（rat bone marrow mesenchymal stem cells,rBMSCs）在慢性肝纤维化中的作用,以及移植后细胞在肝脏组织内的存活、分布情况。方法全骨髓差速贴壁法分离、培养BMSCs,利用携带GFP基因的慢病毒载体感染P3代BMSCs,建立四氯化碳慢性肝纤维化大鼠模型,通过不同途径移植GFP标记的BMSCs,移植后维持四氯化碳肝损伤,1月后处死大鼠,行肝脏功能相关指标白蛋白（albumin,ALB）、谷丙转氨酶（alaninotransferase,ALT）和谷草转氨酶（aspartate aminotrans-ferase,AST）检测,观察肝脏局部组织标本苏木精-伊红染色（hematoxylin-eosin staining,HE）、胶原纤维染色和荧光分布情况。结果不同途径BMSCs移植对大鼠四氯化碳所致慢性肝纤维化肝脏功能无明显改善,移植后GFP标记的BM-SCs均可向损伤肝脏迁移或停留,不同途径移植的BMSCs在肝脏内分布不同。结论大鼠骨髓间充质干细胞移植对大鼠慢性肝纤维化无明显治疗作用,可能参与了肝纤维化的形成。     

miR-122在骨髓间充质干细胞治疗大鼠急性肝损伤中的作用

目的:探讨miR-122在骨髓间充质干细胞(BMSCs)治疗大鼠急性肝损伤中的作用,阐明相关作用机制。方法:密度梯度离心法分离收集雄性大鼠的BMSCs,分为转染组和对照组,其中转染组BMSCs采用脂质体介导转染miR-122 mimics,对照组BMSCs未接受转染。将60只四氯化碳(CCl₄) 诱导的急性肝损伤大鼠随机分为肝损伤对照组(静脉注射生理盐水)、普通治疗组(静脉移植普通BMSCs)和实验治疗组(静脉移植转染miR-122的BMSCs)(n=20)。移植细胞后1、7和14 d检测大鼠肝功能,肝组织行HE染色观察其病理学改变。结果:转染miR-122 mimics后7 d,BMSCs中白蛋白(ALB)表达水平明显上调,而甲胎蛋白(AFP)的表达水平则明显下调。移植细胞后1d,与普通治疗组比较,实验治疗组血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)活性差异无统计学意义(P>0.05);移植细胞后7和14 d时,实验治疗组大鼠血清ALT和AST活性均低于普通治疗组(P<0.05);HE染色,实验治疗组大鼠肝脏充血、细胞质内空泡变性及肝细胞坏死情况明显好于普通治疗组。结论:上调BMSCs中miR-122表达水平能够促进其分化为肝样细胞,并可明显改善CCl₄所致大鼠肝脏损伤。     

不同途径移植大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)对大鼠肝硬化的治疗作用

目的探讨BMSCs移植治疗肝硬化的最佳移植途径。方法1.取6周龄健康SD雌性大鼠股骨骨髓,以密度梯度离心和贴壁法分离纯化BMSCs。2.体重250~300g雌性SD大鼠60只,CCl4联合酒精制做肝硬化模型。3.取模型大鼠50只随机分为对照组,尾静脉移植组,肝脏移植组,脾脏移植组,门静脉移植组,每组10只。各实验组均移植DAPI标记的BMSCs。4.3周后比较各组大鼠肝功能。结果实验各组大鼠肝功能均明显改善,其中肝脏局部移植组效果优于其他各组,其他各组之间差异无统计学意义。结论通过肝脏局部移植BMSCs治疗肝硬化比经外周静脉、门静脉、脾脏更有优势。     

骨髓间充质干细胞移植对大鼠溃疡性结肠炎的修复

目的：观察移植骨髓间充质干细胞（BMSCs）对溃疡性结肠炎（UC）大鼠结肠病变的修复.方法：分离培养、荧光标记SD大鼠BMSCs.A,B,C组大鼠制作UC模型,D组为非模型组.4组大鼠均经尾静脉注射1 mL液体：A组为生理盐水;B,D组为BMSCs;C组为加表皮生长因子（EGF）的BMSCs.移植后3,7,14 d各处死5只大鼠,荧光显微镜下观察荧光标记BMSCs在结肠的分布,光镜观察结肠病变以及TNF-α和IL-10的表达.结果：移植第3日各组均可见BMSCs分布于结肠黏膜,病灶处多于正常结肠黏膜.移植第14日,B,C组结肠BMSCs高于D组（P〈0.05）;与A组比较,B,C组结肠黏膜高表达IL-10,低表达TNF-α,其黏膜损伤修复程度也明显优于A组.B,C组间差异不明显（P〉0.05）.结论：移植BMSCs可促进UC大鼠结肠损伤的修复.单次给予EGF不能促进BMSCs向病灶的迁移和损伤的修复.     

骨髓间充质干细胞移植对大鼠脑梗死的治疗作用

目的 观察大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)对缺血性脑损伤的保护和修复作用,探讨不同时间点移植BMSCs对大鼠脑梗死治疗效果的差异. 方法 建立大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)再灌注模型,在MCAO术后3、6、12、24、72 h这5个时间点经尾静脉移植BMSCs到脑梗死大鼠,并与PBS移植组和空白对照组进行脑梗死体积和神经损伤严重程度评分(NSS)比较. 结果 MCAO术后28 d,TTC染色显示:与PBS移植组和空白对照组比较,BMSCs移植组的脑梗死体积明显减小(P＜0.05);随着细胞移植时间推后,梗死体积逐渐增大,BMSCs 3、6、12、24、72 h移植组脑梗死体积分别为(40±27)、(80±25) 、(123±21)、(161±19)和(202±27) mm3.BMSCs移植组大鼠NSS明显低于PBS移植组和空白对照组(P＜0.05),并且BMSCs移植越早,NSS越低. 结论 在MCAO术后3～72 h移植BMSCs对大鼠脑梗死都有治疗效果,并且移植越早,治疗效果越好.     

不同时期骨髓间充质干细胞移植对大鼠肝纤维化的作用

目的探讨骨髓间充质干细胞移植对大鼠肝纤维化的作用,并探索最佳移植时期。方法应用贴壁培养法分离SD大鼠MSCs,分别于肝硬化造模第6周,10周经尾静脉注射1×106MSCs。在移植4周后,评价移植组与对照组的生存状态,行肝功能检测(ALB,ALT,TBIL),肝脏HE染色。结果MSCs经尾静脉移植入肝硬化大鼠后,大鼠肝功能均明显改善,与对照组相比有统计学意义(P0.05),其中6周移植组较10周移植组效果更佳。结论MSCs移植可以改善大鼠外周血液的血生化特性和肝的组织学结构,且在肝纤维化早期进行移植效果更优。     

骨髓间充质干细胞移植对大鼠脑梗死的治疗作用

目的观察大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)对缺血性脑损伤的保护和修复作用,探讨不同时间点移植BMSCs对大鼠脑梗死治疗效果的差异。方法建立大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)再灌注模型,在MCAO术后3、6、12、24、72 h这5个时间点经尾静脉移植BMSCs到脑梗死大鼠,并与PBS移植组和空白对照组进行脑梗死体积和神经损伤严重程度评分(NSS)比较。结果MCAO术后28 d,TTC染色显示:与PBS移植组和空白对照组比较,BMSCs移植组的脑梗死体积明显减小(P<0.05);随着细胞移植时间推后,梗死体积逐渐增大,BMSCs 3、6、12、24、72 h移植组脑梗死体积分别为(40±27)、(80±25)、(123±21)、(161±19)和(202±27)mm3。BMSCs移植组大鼠NSS明显低于PBS移植组和空白对照组(P<0.05),并且BMSCs移植越早,NSS越低。结论在MCAO术后3~72 h移植BMSCs对大鼠脑梗死都有治疗效果,并且移植越早,治疗效果越好。     

骨髓间充质干细胞移植对小鼠急性肝功能衰竭的治疗作用

目的:观察骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对小鼠急性肝功能衰竭(ALF)的治疗作用,为MSCs的临床应用提供理论依据。方法:分离、纯化、扩增、鉴定小鼠MSCs,用CCl4灌胃制备稳定的小鼠ALF模型,将小鼠随机分为实验组和对照组,MSCs经尾静脉移植入实验组小鼠体内,对照组小鼠注入等量生理盐水,观察2组小鼠的活动、对外界反应及存活情况,检测2组小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)及总胆红素(TBIL),并进行病理学检测,免疫组织化学染色法检测肝脏白蛋白（ALB）表达。结果：流式细胞术检测,分离培养的MSCs 75.27%处于G0-G1期,而且MSCs强表达CD44,表达率为88.71%,基
本不表达造血细胞表面标志物CD34。将MSCs移植入ALF小鼠体内后,实验组小鼠术后7 d生存率为65%,明显高于对照组（25%）（P<0.01）。实验组与对照组小鼠血清ALT、AST及TBIL水平均明显升高,但实验组明显低于对照组,各时间点2组间比较差异有统计学意义（P<0.01）。实验组小鼠肝细胞坏死程度及炎细胞浸润等明显轻于对照组;7 d后实验组小鼠病理组织学改善情况较对照组明显。免疫组织化学检测,7 d后实验组小鼠肝组织中ALB表明显高于对照组。结论:骨髓MSCs移植能明显改善ALF小鼠的肝功能,提高其生存率,提示骨髓MSCs移植对小鼠ALF具有明显的治疗作用。     

骨髓间充质干细胞移植对大鼠肺动脉高压的治疗作用

目的：通过手术建立大鼠肺动脉高压模型,探讨采用骨髓间充质干细胞（MSCs）对肺动脉高压的治疗作用,阐明其可能机制。方法：分离、培养并鉴定MSCs。48只大鼠随机分为对照组、模型组、低剂量MSCs（MSCL）和高剂量MSCs（MSCL）组,除对照组外,其余各组大鼠通过腹主动脉-下腔静脉分流术制备大鼠肺动脉高压模型,8周后MSCL和MSCH组大鼠注入相应剂量（3×10⁵和6×10⁵个）MSCs,模型组大鼠注入等量生理盐水。6周后,测定大鼠右心室收缩压（RVSP）、平均右室压（MRVP）、平均肺动脉压（MPAP）和右心室系数（VDI）;采用试剂盒检测大鼠血清和肺组织中一氧化氮（NO）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平;Q-PCR法测定大鼠肺组织中NADPH mRNA表达水平;HE染色法观察大鼠肺组织形态表现。结果：成功分离鉴定原代MSCs,MSCs分离纯度>85%。治疗结束后,与对照组比较,模型组大鼠RVSP、MRVP、MPAP和VDI明显升高（P<0.05）;与模型组比较,MSCL和MSCH组大鼠MRVP和MPAP明显下降（P<0.05）,MSCH组大鼠RVSP和VDI明显下降（P<0.05）。与对照组比较,模型组大鼠血清及肺组织中NO和TNF-α水平明显升高（P<0.05）;与模型组比较,MSCL和MSCH组大鼠肺组织中的NO和TNF-α水平明显降低（P<0.01）,MSCH组大鼠血清中NO和TNF-α水平明显降低（P<0.05）。与对照组比较,模型组大鼠NADPH mRNA表达水平明显升高（P<0.01）;与模型组比较,MSCH组大鼠NADPH mRNA表达水平明显降低（P<0.01）。MSCL和MSCH组大鼠的肺组织结构损伤明显减轻,同时肺壁未见明显增厚。结论：MSCs具有治疗肺内高压的作用,并且可以抑制NO和TNF-α的产生,其作用机制与抑制NADPH基因表达有关。     

肝素联合肝干细胞经脾移植治疗SD大鼠急性肝损伤

目的:探讨肝素联合肝干细胞(WB-F344细胞)经脾移植对大鼠急性肝损伤的治疗作用.方法:构建携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的慢病毒载体,体外培养、扩增WB-F344细胞,携带GFP基因的慢病毒转染WB-F344细胞.通过腹腔注射四氯化碳(CCl4)建立大鼠急性肝损伤模型,造模后24 h分别将1 mL含2×107个肝干...     

神经干细胞移植联合促红细胞生成素对大鼠脊髓损伤的修复作用

目的:观察神经干细胞(NSCs)联合促红细胞生成素(EPO)对横断性大鼠脊髓损伤的修复作用,为临床治疗脊髓损伤提供理论依据。方法:40只成年雌性Wistar大鼠建立大鼠T10全横断脊髓损伤模型,并随机分为对照组、NSCs组、EPO组和NSCs+EPO组,每组10只。术后8周采用NF-200免疫组织化学染色和免疫荧光染色对各组大鼠损伤区脊髓神经纤维再生情况进行形态学观察;应用BBB评分评估各组大鼠后肢运动功能恢复情况。结果:组织形态学观察,对照组大鼠横断处脊髓组织残端萎缩,脊髓白质和灰质间可见大量空洞形成,未见有明显的神经纤维再生;NSCs+EPO组大鼠横断处脊髓组织残端轻度萎缩,横断区可见大量呈杂乱、无序生长的神经纤维,可见有连续性神经纤维通过脊髓横断区,脊髓白质和灰质间可见少量空洞形成。NSCs+EPO组大鼠中,FITC共轭抗神经丝蛋白抗体NF-200标记的再生神经纤维在横断区头侧大量再生,呈无序状生长,并通过损伤区到达尾侧;NSCs组大鼠可见少量神经纤维再生,未通过损伤区到达尾侧。NSCs+EPO组大鼠后肢运动功能BBB评分,术后7 d内均高于其他各组(P<0.05);NSCs组大鼠后肢运动功能BBB评分术后7 d内均高于对照组和EPO组(P<0.05)。结论:NSCs移植联合腹腔注射EPO可有效促进大鼠损伤脊髓功能的恢复、轴突的存活和再生。     

同种异体移植骨髓基质干细胞修复大鼠急性化学性肝损伤的组织学观察

目的 探讨同种异体移植骨髓基质干细胞修复大鼠急性化学性肝损伤的可行性。方法 采用CCl4喂养制作SD大鼠急性化学性肝损伤模型，通过肝实质局部注射同种BMSCs（肝损伤移植组），或不行细胞移植（肝损伤对照组）。分别在造模前、BMSCs移植术后6h、1周、5周取肝组织石蜡包埋、切片、HE染色，光镜下观察。结果 肝损伤大鼠造模后肝内出现弥漫性分布的点片块坏死，肝血窦充血明显，弥散性炎性细胞浸润。BMSCs移植组大鼠移植术后6h肝内坏死、充血、炎性细胞等改变与肝损伤对照组组织学改变基本类似，移植术后1周、5周上述组织学改变逐渐好转，但BMSCs移植组较肝损伤对照组好转更明显。结论 同种异体移植BMSCs有助于修复大鼠急性化学性损伤的肝组织。     

骨髓间充质干细胞治疗大鼠白毒伞中毒致急性肝衰竭的效果

目的：探讨骨髓间充质干细胞（BMSCs）治疗大鼠白毒伞中毒致急性肝衰竭的疗效及机制。方法选取10只体重约80 g的雄性清洁级SD大鼠用于BMSCs的培养。另选取体重在220～250 g的成年大鼠45只作为研究对象,用于肝衰竭模型制备以及BMSCs输注治疗。在45只大鼠中随机抽取15只作为空白对照组,剩下的30只均给予白毒伞粗毒素灌胃制备肝衰竭模型,将造模成功的大鼠随机均分为两组,肝衰竭模型组和治疗组（实验BMSCs输注治疗）。对比各组大鼠7 d生存率及肝功能、凝血功能、炎症因子、肝脏病理等指标情况。结果与肝衰竭模型组相比,治疗组SD大鼠体重减轻明显更少,7 d生存率明显更高。移植结束后治疗组大鼠肝功能、凝血功能、炎症因子等指标及肝脏病理均较肝衰竭模型组显著改善（ P＜0.05）。结论 BMSCs输注对白毒伞中毒致急性肝衰竭大鼠具有十分明显的治疗作用,能显著改善大鼠肝功能衰竭。     

干细胞在急性肾损伤后肾脏修复中的作用

急性肾损伤是多种原闵引起的肾功能骤然下降的临床综合征,具有高发病率和高病死率的特点。急性肾损伤最主要的病理改变是肾小管上皮细胞坏死脱落阻塞管腔及基膜裸露。肾损伤修复依赖残存肾小管上皮细胞迁移、增殖、分化,覆盖暴露的肾小管基膜,从而恢复肾功能。干细胞是一类具有自我更新和多向分化潜能的克隆细胞,在肾损伤的修复中发挥重要作用。肾损伤动物模型的研究证实,坏死细胞的更替主要依赖成熟细胞分化,再次进入细胞周期,或依赖骨髓干细胞或肾脏器官特异干细胞的修复作用。文章就骨髓干细胞和肾脏成体干细胞在急性肾损伤后肾脏修复中的作用进行综述。     

骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠脑组织辐射损伤

目的 研究间充质干细胞(MSCs)对脑组织辐射损伤的修复作用,为治疗放射性脑损伤奠定理论基础.方法 选取24只雄性SD大鼠随机分为3组,即对照组、模型组和治疗组.模型组和治疗组大鼠均接受直线加速器产生的X线行一次性全脑照射20 Gy;正常对照组不接受照射.其中治疗组大鼠接受辐射24 h、7 d、14 d、21 d后尾静脉注射MSCs 3×106/只;模型组和正常对照组大鼠尾静脉注射同体积生理盐水1 mL.28 d后处死所有大鼠,检测血清中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性;采用苏木精-伊红染色法 (HE染色法)制作大鼠的脑组织病理切片观察辐射对脑组织形态学的影响.结果 模型组大鼠精神较差,反应迟钝,少动,毛发粗糙、变黄,眼睑分泌物增多,睁眼困难;治疗组大鼠精神好,毛发微黄,眼睑有少量分泌物.治疗组大鼠血清SOD明显高于模型组,而MDA水平低于模型组.病理结果显示模型组大脑皮质变薄,神经元细胞聚集排列,数目显著减少,可见核固缩、深染;尼氏小体融解消失,呈凋亡状态;治疗组大脑皮质较模型组明显增厚,海马神经元细胞增多,仍可见凋亡状态的尼氏小体,细胞染色较淡,损伤的细胞数目明显减少,损伤程度减轻.结论 MSCs能够使神经细胞再生,修复脑组织的辐射损伤.     

自体骨髓干细胞动员治疗心肌梗死

目的探讨基因重组人粒细胞集落刺激因子(rhGCSF)动员骨髓干细胞对急性心肌梗死动物模型的治疗作用。方法将60只SD大鼠随机分成对照组和治疗组,结扎冠状动脉左前降支建立大鼠心肌梗死实验模型。治疗组在复制大鼠心肌梗死模型3h后用经生理盐水稀释的rhGCSF(2mg·L-1)皮下注射10μg·kg-1·d-1,共5d;对照组复制大鼠心肌梗死模型3h后皮下注射等量生理盐水,共5d。在复制大鼠心肌梗死模型24、48h和2周后,两组分别先后各取10只大鼠行在体心功能(±dpdtmax)测定,测定完毕后各组随机选取6只大鼠处死行心脏梗死范围的测量,其余大鼠处死取出心脏行HE染色及CD34+免疫组织化学分析。结果结扎冠状动脉左前降支24、48h和2周后治疗组±dpdtmax均高于对照组(P<0.01);治疗组心脏梗死范围低于对照组(P<0.01)。病理检查显示对照组心肌梗死区周围有较多以中性粒细胞为主的炎症细胞浸润,而治疗组大鼠心肌坏死程度较对照组轻,浸润的细胞以CD34+的单个核细胞为主,并可见新生的心肌细胞生长。结论rhGCSF动员自体骨髓干细胞原位移植可修复梗死心肌、减少梗死范围、提高心功能,可用于急性心肌梗死的治疗。