克隆化LAK细胞及其培养上清对白血病细胞的细胞毒和分化诱导作用

用半固体－液体两步法克隆的人ＬＡＫ细胞不仅表现对ＮＫ敏感的Ｋ５６２细胞和ＮＫ抵抗的ＨＬ－６０细胞强烈的细胞毒性，在二次杀瘤过程中表现同样高的活性，而且ＬＡＫ细胞培养上清对白血病细胞系ＨＬ－６０和新鲜白血病细胞具有增殖抑制和分化诱导作用。然而不同杀伤活性的ＬＡＫ细胞培养上清对新鲜白血病细胞增殖的影响不同。结果表明ＬＡＫ细胞在直接杀伤白血病细胞的同时，还通过分泌一些活性因子间接影响白血病细胞的增殖和促进其分化成熟，反映了ＬＡＫ细胞抗白血病作用的多向性。     

逆转录病毒载体介导的IL-4基因修饰对HL-60细胞增殖及T细胞功能的影响

目的观察ＩＬ－４基因转染对ＨＬ－６０增殖及Ｔ细胞功能的影响及其可能机制。方法采用逆转录病毒载体介导基因转染法将人ＩＬ－４基因导入髓系白血病细胞ＨＬ－６０,观察高表达外源性ＩＬ－４基因ＨＬ－６０株的增殖反应及其诱导的正常人ＰＢＭＣ增殖,ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＦＮ－γ基因表达及肿瘤特异性ＣＴＬ杀伤活性。结果ｒＩＬ－４或瘤细胞产生的ＩＬ－４早期促进ＨＬ－６０细胞增殖,培养５天后则明显抑制其增殖;与ｒＩＬ－４处理的ＨＬ－６０细胞比较,ＩＬ－４基因修饰的ＨＬ－６０细胞明显促进正常人ＰＢＭＣ增殖并合成ＩＬ－２、ＩＬ－６及ＩＦＮ－γｍＲＮＡ,其诱导的特异性ＣＴＬ杀伤活性明显高于野生型ＨＬ－６０、仅导入载体的ＨＬ－６０和加入ｒＩＬ－４共育的ＨＬ－６０细胞诱导者。结论ＩＬ－４基因转染在影响ＨＬ－６０细胞增殖和分化过程的同时,可能促进某些抗原（如ＭＨＣⅠ类抗原）的抗原性,从而有利于机体建立有效的抗肿瘤免疫反应。     

MTT比色法检测IL—2和杀伤细胞活性的研究

本文采用ＭＴＴ比色法测定了ＬＡＫ和ＴＩＬ细胞培养上清ＩＬ－２活性及ＬＡＫ细胞介导对体外培养的白血病细胞株的杀伤活性。结果表明ＬＡＫ细胞和ＴＩＬ细胞培养上清有较高的ＩＬ－２活性，可用于支持培养ＩＬ－２依赖株的生长；ＬＡＫ细胞对体外培养的白血病细胞株有明显的杀伤作用。其杀伤效应随效靶比例增加而增高；同时亦证明：活的白血病细胞数与ＭＴＴ甲赞形成产物呈直线相关性，提示通过ＭＴＴ法测定ＯＤ值能较好地反映活细     

抗MHC I类单抗对NK细胞杀伤能力的影响

探讨ＮＫ细胞杀务与靶细胞表面ＭＨＣＩ类分子的关系。方法用ＨＬＡ－ＡＢＣ单抗培养上清或腹水封闭靶细胞Ｋ５６２表面的ＨＬＡ－ＡＢＣ分子后,分别观察了外周血新鲜ＮＫ细胞、纯化ＮＫ细胞、ＬＡＫ细胞和ＣＤ３ＡＫ细胞对Ｋ５６２细胞杀伤能力的变化。     

MTT比色法检测IL－2和杀伤细胞活性的研究

本文采用ＭＴＴ比色法测定了ＬＡＫ和ＴＩＬ细胞培养上清ＩＬ－２活性及ＬＡＫ细胞介导对体外培养的白血病细胞株的杀伤活性。结果表明ＬＡＫ细胞和ＴＩＬ细胞培养上清有较高的ＩＬ－２活性，可用于支持培养ＩＬ－２依赖株的生长；ＬＡＫ细胞对体外培养的白血病细胞株有明显的杀伤作用。其杀伤效应随效靶比例增加而增高；同时亦证明：活的白血病细胞数与ＭＴＴ甲赞形成产物呈直线相关性，提示通过ＭＴＴ法测定ＯＤ值能较好地反映活细胞数目及细胞毒效应。     

逆转录病毒载体介导的IL—4基因修饰对HL—60细胞？…

目的 观察ＩＬ－４基因转染对ＨＬ－６０增殖及Ｔ细胞功能的影响及其可能机制。方法 采用逆转病毒载体介民基因转染法将人ＩＬ－４基因导入髓系白血病细胞ＨＬ－６０,观察高表达外源性ＩＬ－４基因ＨＬ－６０株的增殖反应及其诱导的正常人ＰＢＭＣ增殖,ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＦＮ－γ基因表达及肿瘤特异性ＣＴＬ杀伤活性。结果 ｒＩＬ－４或瘤细胞产生的ＩＬ－４早期促进ＨＬ－６０细胞增殖,培养５天后则明显和抑制其增殖;与     

γ－干扰素在淋巴细胞介导的子宫颈角化上皮细胞毒作用中的意义

本研究以子宫颈角化上皮为靶细胞，用试管培养技术及非同位素细胞毒性试验，探讨了干扰素（ＩＦＮ－γ）对淋巴细胞介导的对宫颈角化上皮细胞毒作用的影响及细胞间吸附分子１（ＩＣＡＭ－１）与白细胞功能相关抗原１（ＬＦＡ－１）在细胞毒作用中的意义。结果显示ＣａＳｋｉ、ＳｉＨａ、ＨｅＬａ、Ｗ１２及ＮＣｘ均为ＮＫ抵抗、ＬＡＫ敏感细胞。ＩＦＮ－γ预处理靶细胞明显增加ＬＡＫ细胞的杀伤活性，但对ＮＫ活性影响不大；ＩＦＮ－γ预处理效应细胞可增强ＬＡＫ细胞对上述靶细胞的溶解作用，但并不改变ＮＫ对靶细胞的选择性；抗ＩＣＡＭ－１与ＬＦＡ－１单克隆抗体能有效地降低ＬＡＫ细胞对靶细胞的杀伤作用，而抗ＨＬＡＡＢＣ及ＨＬＡＤＲ则无此作用。提示ＩＦＮ－γ仅对ＬＡＫ细胞介导的对宫颈角化上皮的细胞毒作用有明显增强作用，而对ＮＫ细胞无明显影响；ＩＣＡＭ－１－ＬＦＡ－１通路为ＬＡＫ细胞结合并溶解靶细胞的主要通路，且这种细胞毒作用是非ＭＨＣ限制的。     

rhIL-15和rhIL-2诱生的LAK细胞特性比较

目的：研究ｒｈＩＬ－１５激活的ＬＡＫ细胞的增殖、细胞毒作用及相关表型的变化。方法：通过用不同浓度的ｒｈＩＬ－１５和ｒｈＩＬ－２分别诱生 ＬＡＫ细胞，研究二者诱生的 ＬＡＫ细胞的增殖状况；当 ｒｈＩＬ－２和 ｒｈＩＬ－１５为 １５００ Ｕ／ｍｌ时，ＭＴＴ法检测 ＬＡＫ细胞的细胞毒作用，利用流式细胞仪检测细胞表面ＣＤ分子表达情况。结果：ＬＡＫ细胞的增殖对ｒｈＩＬ－２和ｒｈＩＬ－１５均具有时间和剂量依赖性，且无明显差异；终浓度为 １５００ Ｕ／ｍｌ时，ｒｈＩＬ－１５诱生的 ＬＡＫ细胞杀伤 Ｋ５６２细胞的能力强于 ｒｈＩＬ－２诱生的 ＬＡＫ细胞，而对Ｒａｊｉ细胞的杀伤活性，ｒｈＩＬ－２诱生的ＬＡＫ细胞却明显高于 ｒｈＩＬ－１５诱生的 ＩＡＫ细胞，且二者杀伤活性均具有时间依赖性；同时ｒｈＩＬ－１５诱生的ＬＡＫ细胞的ＣＤ３－ＣＤ５６＋细胞、Ｃｄ９４＋细胞百分率均高于ｒｈＩＬ－２诱生的ＬＡＫ细胞。结论：ｒｈＩＬ－１５在体内对ＮＫ细胞功能可能具有较强的调节作用。     

冬虫夏草对白血病人NK和LAK细胞活性的影响

本文采用１２５ＩＵｄＲ释放法，研究了冬虫夏草水提液对缓解期和活动期白血病人ＮＫ和ＬＡＫ细胞活性的影响。结果表明冬虫夏草水提液能显著增强活动期白血病人ＮＫ细胞杀伤Ｋ５６２肿瘤细胞的能力，但对ＬＡＫ细胞活性有抑制作用，前列腺素Ｅ１能阻断冬虫夏草水提液增强ＮＫ细胞活性。由此可见，冬虫夏草水提液增强ＮＫ细胞活性在其抗肿瘤免疫中有着极其重要的作用。     

bcl—2基因反义核酸对白血病细胞药物敏感性的影响

目的：探讨ｂｃｌ－２基因反义核酸对白血病细胞药物敏感性的影响。方法：应用细胞培养，免疫标记及流式细胞仪技术，检测了ｂｃ１－２基因反义寡脱氧核糖核苷酸（ＡＳＯＤＮ）和阿糖胞苷（Ａｒａ－Ｃ）对白血病Ｋ５６２和ＨＬ－６０细胞作用和ｂｃｌ－２基因表达。结果：Ａｒａ－Ｃ（１０μｍｏｌ／Ｌ）与ｂｃｌ－２ＡＳＯＤＮ同时作用比单独用Ａｒａ－Ｃ或Ａｒａ－Ｃ与正义寡脱氧核糖核苷酸（ＳＯＤＮ）细胞存活率显著减少（Ｐ＜０００１），并且流式细胞仪检测显示ｂｃｌ－２ＡＳＯＤＮ使ｂｃｌ－２蛋白阳性率降低。结论：ｂｃｌ－２基因反义寡核苷酸能抑制该基因表达，提高白血病细胞对Ａｒａ－Ｃ的敏感性     

T-AK细胞的细胞毒活性研究

探讨抗ＣＤ３单抗和ｒＩＬ－２共同激活诱生的Ｔ－ＡＫ细胞的细胞毒活性本质。方法：采用ＭＴＴ法分别检测Ｔ－ＡＫ细胞杀伤白血病细胞的活性及其构成。结论Ｔ－ＡＫ细胞为异质性细胞群体,其杀伤活性主体为ＣＤ３ＡＫ活性和ＬＡＫ活性。     

脐血LAK细胞对白血病细胞杀伤作用研究

脐血ＬＡＫ细胞对白血病细胞杀伤作用研究李学荣（青岛医学院附属医院儿科青岛２６６００３）沈柏均，张洪泉，侯怀水，时庆，马秀峰（山东医科大学附院低温医学室济南２５００１２）据报道，脐血ＬＡＫ（ＣＢ－ＬＡＫ）对一些靶细胞株的杀伤活性至少与成人外周血ＬＡＫ（...     

TNF基因转染后分泌不同水平TNF的LAK细胞克隆增殖能力和杀伤活性的比较

在逆转录病毒介导下将ＴＮＦ基因转染入小鼠ＬＡＫ细胞中，采用Ｇ４１８抗性筛选和有限稀释法，将ＬＡＫ细胞克隆化，并筛选出３株分泌不同水平ＴＮＦ的ＬＡＫ细胞克隆。结果表明，这３株ＬＡＫ细胞克隆分泌的ＴＮＦ水平、增殖能力和杀伤活性均显著高于对照组ＬＡＫ细胞。而高分泌株的ＬＡＫ细胞克隆，其增殖能力和杀伤活性最高；中分泌株次之；低分泌株相对较低。抗ＴＮＦ单抗可显著抑制此３株ＬＡＫ细胞体外杀伤活性，表明其杀伤活性升高是由基因转染后所表达的ＴＮＦ介导的，所表达ＴＮＦ水平越高，其增殖能力和杀伤活性越高。     

亚硒酸钠对人白血病HL-60细胞作用机制的研究

目的和方法：实验观察亚硒酸钠对人急性髓性白血病细胞系ＨＬ－ ６０ 细胞生长增殖、诱导分化、细胞内自由基产生和清除系统以及胞内环核苷酸累积的影响,探索亚硒酸钠对人白血病ＨＬ－ ６０ 细胞作用机制。结果：８ ×１０６ｍｏｌＬ 或更高浓度的亚硒酸钠均可显著抑制ＨＬ－ ６０ 细胞的生长增殖,作用５ ｄ 可在一定程度上诱导ＨＬ－ ６０ 细胞向成熟粒细胞方向分化。８ ×１０６ ｍｏｌＬ 亚硒酸钠作用一段时间,可增强自由基清除系统酶活性,减低胞内自由基水平,降低细胞内ｃＧＭＰ 累积而对ｃＡＭＰ 累积无明显影响。结论：硒的抗白血病作用可能与亚硒酸钠的这些作用相关     

人胎脾抗癌效应细胞及相关细胞因子的胚胎发育动力学研究

对不同胎龄胎脾抗癌效应细胞及相关细胞因子的胚胎发育动力学进行了系统观测。结果显示：２０周龄前基本无ＮＫ活性和Ｍ杀伤功能，但可随胎龄增长而逐渐加强，至出生前后已接近成人水平，ＬＡＫ活性在１６周龄即与成人基本相同。ＩＬ－２，ｒＦＮ－α和ＩＬ－６能分别促进ＮＫ和ＬＡＫ活性。胎脾Ｍ２０周龄即合成高水平ＩＬ－６，出生前已显著高于成人，３２周龄时分泌ＩＬ－１的能力达成人水平，ＴＮＦ活性达高峰。ＦＳＭＣ合成ＩＬ－２的能力在３６周龄才达成人水平，合成的ＩＬ－６至出生前仍低于成人。ＦＳＭＣ的ＨＬＡ－ＤＲ抗原表达显著低于成人。因此以胎脾细胞作为抗癌效应细胞来源是安全、有效、可行的。     

TNF基因转染后分泌不同水平TNF的LAK细胞克隆增殖能力和杀？…

在逆转录病毒介导下将ＴＮＦ基因转染入小鼠ＬＡＫ细胞中，采用Ｇ４１８抗性筛选和有眼稀释法，将ＬＡＫ细胞克隆化，并筛选出３株分泌不同水平ＴＮＦ的ＬＡＫ细胞克隆。结果表明，这３株ＬＡＫ细胞克隆分泌的ＴＮＦ水平、增殖能力和杀伤生均显著高于对照组ＬＡＫ细胞。而高分泌株的ＬＡＫ细胞克隆，其增殖能力和杀伤活性最高；中分泌株次之；低分泌株相对较低。抗ＴＮＦ单抗可显著抑制此３株ＬＡＫ细胞体外杀伤活性，表明基杀伤活性     

茶多酚在体外诱导HL-60细胞的凋亡

目的：寻找新的肿瘤细胞凋亡诱导剂。方法：选用茶的主要活性成分茶多酚,采用噻唑蓝（ＭＴＴ）还原法,ＤＮＡ凝胶电泳以及透射电镜技术,在体外观察了茶多酚对人急性早幼粒白血病细胞（ＨＬ－６０）凋亡的影响。结果：被２５０ｍｇ／Ｌ茶多酚作用５ｈ后ＨＬ－６０细胞进行凝胶电泳呈现出典型的ＤＮＡ条带,透射电镜下看到凋亡小体,茶多酚对ＨＬ－６０细胞凋亡的诱导活性平行于它的细胞杀伤作用。结论：在体外培养条件下,茶多酚可诱导ＨＬ－６０细胞凋亡     

IL-2、IL-4和IL-7体外诱导人外周血淋巴因子激活的杀伤细胞效应的比较

比较了淋巴因子ＩＬ－２、ＩＬ－４和ＩＬ－７在体外诱导健康人外周血淋巴因子激活的杀伤 （ＬＡＫ）细胞活性的效应。结果表明，ＩＬ－７可单独，亦可与ＩＬ－２、ＩＬ－４协同诱导ＬＡＫ细胞，而且ＩＬ－７ 诱导ＬＡＫ细胞的效应不被抗ＩＬ－２、抗ＩＬ－４所抑制。ＩＬ－７单独诱导的ＬＡＫ细胞活性高峰迟于ＩＬ－ ２或ＩＬ－４所诱导的活性高峰，且与增殖反应曲线一致。抗ＣＤ８抗体明显抑制ＩＬ－７诱导ＬＡＫ细胞 的效应，而ＩＬ－７诱导ＬＡＫ细胞的效应不能被抗ＮＫＨ－１所抑制。提示：ＩＬ－７ 激活ＬＡＫ细胞的效应 机制不依赖ＩＬ－２和ＩＬ－４，并很可能成为肿瘤过继治疗中的重要淋巴因子。     

双歧杆菌脂磷壁酸对HL-60细胞端粒酶活性的影响

目的 探讨双歧杆菌表面分子脂磷壁酸（ＬＴＡ）对体外培养的ＨＬ－６０白血病细胞端粒酶活性的影响。方法 采用ＰＣＲ－ＥＬＩＤＡ法检测经ＬＴＡ处理前后的ＨＬ－６０白血病细胞株端粒酶活性的改变。结果 经ＬＴＡ处理后,ＨＬ－６０白血病细胞的生长受到抑制,端粒酶活性明显降低。结论 双歧杆菌ＬＴＡ对ＨＬ－６０白血病细胞具有生长抑制作用,其抗肿瘤作用的机理可能与抑制肿瘤细胞的端粒酶活性有关。     

肿瘤患者自体CD3AK与LAK细胞生物学特性研究

目的：ＣＤ３ＡＫ细胞是由抗ＣＤ３单克隆抗体和ＩＬ－２共同激活诱导的肿瘤杀伤细胞。对３０例肿瘤患者自体ＤＣ３ＡＫ细胞及ＬＡＫ细胞进行了比较性研究。方法：采用ＭＴＴ法检测ＣＤ３ＡＫ细胞及ＬＡＫ细胞的杀瘤活性,应用流工细胞术进行免疫标志物分析。结果与结论：肿瘤患者ＰＢＭＮＣ诱导后产生的ＣＤ３ＡＫ细胞较ＬＡＫ细胞有更强的增殖能力,但对Ｒａｊｉ、Ｋ５６２细胞的生长抑制作用无明显区别;４０％～６０％ＣＤ３ＡＫ