大鼠肝氨甲酰磷酸合成酶T基因在非肝细胞中的表达

氨甲酰磷酸合成酶I(CPSI)cDNA全序列基因片段与pSV_2载体的重组及重组质粒pSV_2-CPScf在7402人肝癌细胞、CHO细胞和NIH/3T3细胞中的表达结果表明,pSV_2-CPScf转染的以上3株细胞均可稳定、高效地表达CPSI。通过核Run-off转录活性的检测和Northern杂交证实,表达的CPSI转录产物结构完整。提示CPSI肝组织特异表达主要与转录改变有关。     

大鼠肝氨甲酰磷酸合成酶I cDNA片段在肝癌及非肝细胞中表达体系的构建

观察０．５８７和０．７１２ｋｂＣＰＳＩｃＤＮＡ片段分别与ｐＳＶ＿２载体的重组质粒ｐＳＶ＿２－ＣＰＳ＿（５０５）和ｐＳＶ＿２－ＣＰＳ＿（５０７）在人肝癌和非肝细胞中的表达情况。结果证实，两种重组的表达质粒转染的７４０２人肝癌细胞和ＮＩＨ／３Ｔ３细胞均能有效地表达ＣＰＳＩ，ＣＰＳＩ基因的非翻译区顺序与其高度组织特异性无关。这些体系的建立为体外生产ＣＰＳＩ抗原和天然ＣＰＳＩ蛋白提供了细胞模型和实验依据，对深入了解ＣＰＳＩ的表达过程及其癌变和分化的关系具有重要的意义。     

大鼠肝含5/端的氨甲酰磷酸合成酶I基因的克隆(简报)

氨甲酰磷酸合成酶I(CPSI)是尿素循环的第一个酶,主要存在于肝细胞线粒体,在肝细胞癌变过程中CPSI基因调控异常,以致酶活性显著降低。为研究CPSI基因的调控机制以及与肝细胞分化及癌变的关系,本文克隆了含5′末端的CPSI基因。根据编码CPSI的1～10氨基酸的mRNA顺序合成30个核苷酸寡聚物作为探针,对大鼠肝DNA EcoRI部份酶切组建的Charon 4A基因库进行筛选。噬菌体在     

大鼠肝氨甲酰酸合成酶IcDNA片段在肝癌及非肝细胞中表达体…

观察０．５８７和０．７１２ｋｂＣＰＳＩｃＤＮＡ片段分别与ＰＳＶ２载体的重组质粒ｐＳＶ２－ＣＰＳ５０５和ｐＳＶ２－ＣＰＳ５０７在人肝癌和非肝细胞中的表达情况。结果证实，两种重组的表达质粒转染的７４０２人癌细胞和ＮＩＨ／３Ｔ３细胞能有效地表达ＣＰＳＩ，ＣＰＳＩ基因的非翻译区顺序与其高度组织特异性无关。这些体系的建立为体外生产ＣＰＳＩ抗原和天然ＣＰＳＩ蛋白提供了细胞模型和实验依据，对深入了解ＣＰＳＩ的表     

人肝细胞生长因子在CHO细胞中的表达

以ｐＲＣ／ＣＭＶ作为真核细胞表达性载体，用限制性内切酶ＢａｍＨＩ／ＸｂａⅠ将ＨＧＦｃＤＮＡ全序列定向重组到ｐＲＣ／ＣＭＶ的多克隆位点上。筛选得到的重组质粒以磷酸钙ＤＮＡ共沉淀的方法转染ＣＨＯ细胞，经８００ｍｇ／Ｌ的Ｇ４１８筛选，获得阳性细胞克隆。用ＨＣＣ－７９０２细胞及原代培养的成年大鼠肝细胞对转染阳性细胞培养基收集上清进行活性测定。３Ｈ－ＴｄＲ掺入等分析证明，它能有效地抑制体外培养的人肝癌细胞的生长，并可明显刺激鼠肝细胞ＤＮＡ的合成。结果表明，重组人ＨＧＦ基因在ＣＨＯ细胞中成功地获得表达，为基因工程大量制备和纯化ＨＧＦ奠定了基础     

正常大鼠肝及喂二乙基亚硝胺大鼠肝氨甲酰磷酸合成酶Ⅰ在兔网织红细胞溶解物系统中的生物合成

用放射免疫沉淀和荧光自显影方法证明,正常的及喂二乙基亚硝胺诱发肝癌的大鼠肝多聚核糖体在兔网织红细胞溶解物系统中新合成的CPS_1具有相同的电泳迁移率,但在相同时间内,肝癌肝CPS_1的合成量少于正常肝,表明肝癌肝中可翻译的CPS_1 mRNA量较正常肝减少。     

MTLC基因在肝细胞癌及其癌旁肝组织中的表达

目的 研究MTLC基因在肝细胞癌及其癌旁肝组织中的表达.方法 利用RT-PCR检测28例肝细胞癌及其相对应的癌旁肝组织中MTLC mRNA的表达.结果 28例肝细胞癌组织中,24例MTLC mRNA表达下调,其下调与肝细胞癌的分化程度无关.结论 本结果提示MTLC基因在肝细胞癌组织中表达下调,进一步说明MTLC表达降低可能与肿瘤发生发展关系密切.     

肝细胞黏附分子基因在膀胱移行细胞癌中的表达

目的研究编码人类免疫球蛋白类细胞黏附分子的肝细胞黏附分子(hepaCAM)基因的表达与膀胱移行细胞癌(TCCB)生物学行为之间的关系。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测在28例正常膀胱黏膜组织、34例TCCB组织及2株TCCB癌细胞株中hepaCAM基因的表达情况,并对TCCB患者hepaCAM基因的表达情况与其临床病理学指标进行分析。结果hepaCAM在正常膀胱黏膜组织标本中的表达均一,82.4%的TCCB组织中表达降低,17.6%的TCCB组织中表达缺失,2株TCCB T24细胞株和B IU-87细胞株中hepaCAM表达完全缺失,TCCB组织中hepa-CAM基因表达半定量值低于正常膀胱黏膜组织(P<0.05)。hepaCAM基因表达与TCCB的病理学分级有关(P<0.05),与临床分期、性别及是否复发无明显相关(P>0.05)。结论TCCB组织中hepaCAM表达降低与其临床病理分级相关,提示其可能与TCCB的恶性改变有关。     

氨甲酰磷酸合成酶I上游顺序功能和特性的CAT检测

首次构建了一系列含有不同长度氨甲酰磷酸合成酶Ｉ（ＣＰｓＩ）上游ＤＮＡ顺序的ｐＫＣＰＳｘ－ＣＡＴ表达质粒，并通过ＣＡＴ检测观察了ＣＰＳⅠ调控顺序的功能及特性。结果表明，ＣＰＳⅠ上游顺序具有高度组织特异性基因表达调控作用；－１４２～－３８ｂｐ上游顺序与特异性调控有密切关系，是维持ＣＰＳⅠ转录必不可少的顺序；－１７００～－１６１ｂｐ顺序中含有增强ＣＰＳⅠ启动子转录作用的顺序。地塞米松和促分化剂硫杂脯氨酸对肝癌细胞中ＣＰＳⅠ的转录均有改善作用。这对探索ＣＰＳⅠ调控机制的细胞内过程，研究肝癌细胞的逆转和分化机制有重要意义，并提供了特殊模型。     

胰岛素基因在非β细胞中的调节表达

目的　应用四环素 (Tet)可调控性表达系统 ,建立条件控制性人工 β细胞株 ,定量调节胰岛素基因在tet2 93细胞中的表达。方法　构建含四环素反应元件和表达胰岛素原基因的重组载体pTRE2mINS。再将此载体与具有潮霉素抗性的质粒pTK Hyg共转染能稳定表达反义四环素激活因子的细胞株tet2 93,然后用潮霉素筛选表达胰岛素的细胞株 ,通过四环素的衍生物强力霉素 (Dox)调节胰岛素在此细胞株中的表达。采用Northern印迹、逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)和放射免疫分析法 ,从mRNA和蛋白水平观察细胞培养基中强力霉素浓度的变化对胰岛素基因表达的影响。结果　从2 8个单克隆细胞株中筛选 1株能自主分泌一定量的胰岛素 ,又能受强力霉素调控分泌的细胞株。当细胞培养液中加入或不加强力霉素时 ,培养基中胰岛素的表达量分别为每 2 4h 2 4 1 0U/1 0× 10 6细胞和每 2 4h 9 7U/1 0× 10 6细胞 ,加强力霉素组是不加强力霉素组的 2 5倍。而且随着强力霉素浓度的增加 ,tet2 93细胞内外胰岛素的表达水平逐步增高。结论　人胰岛素基因在tet2 93细胞中的成功转移和高效表达 ,受四环素及其衍生物定时、定量调节 ,从而提高糖尿病基因治疗的精确性 ,安全性和有效性。     

癌变原理研究Ⅵ.大鼠肝及肝癌中氨甲酰磷酸合成酶Ⅰ的免疫化学研究

在研究大鼠肝癌变过程中氨甲酰磷酸合成酶I(CPS_1)活性降低机制同时,作者自大鼠肝线粒体中,经十六烷基三甲基溴化铵处理,硫酸铵分步沉淀及QAE-Sephadex A-50柱层析,分离提纯了CPS_1。本法能将CPS_1从尿素循环中另一线粒体酶鸟氨酸氨甲酰转移酶(OCT)中全部析出。纯化的 CPS_1制剂在聚丙烯酰胺凝胶电泳中呈均一状。由纯化的CPS_1制备的单价兔抗血清可以完全抑制正常大鼠肝及二乙基亚硝胺(DENA)诱发肝癌中的CPS_1     

肝细胞生长因子及其受体基因在人肝癌和癌旁肝组织中的表达

目的：了解肝细胞生长因子（ＨＧＦ）及其受体基因在人肝癌和癌旁肝组织中的表达的变化规律，以及这种变化与肿瘤生物学行为的关系。方法：采用地高辛标记的ＨＧＦ及其受体ＤＮＡ探针，检测２６例人原发性肝癌及其癌旁肝组织中ＨＧＦ及其受体基因的表达。结果：ＨＧＦ在人肝部和癌旁肝组织中虽都有表达，但阳性率不及其受体基因表达，ＨＧＦ受体在肝癌和癌旁肝组织中均呈过度表达，且肝癌组织中杂交信号明显高于癌旁肝组织，有肝内外     

鼠bcl-XL基因在CHO细胞中的表达

目的：构建携带鼠bcl-XL基因的真核表达载体，并将其在CHO细胞中表达。方法：用反转录PCR获取鼠bcl-XL全长cDNA序列，将其克隆进pEGFP重组融合表达质粒，脂质体法转染CHO细胞，荧光检测目的蛋白表达。结果：成功获得了鼠bcl-XL cDNA，构建了编码鼠bcl-XL的真核融合表达载体pEGFP-bcl-XL，转染CHO细胞后观察到融合蛋白表达。结论：鼠bcl-XL基因的克隆及融合表达，为进一步在高密度、大规模细胞培养中利用bcl-XL具有重要意义。     

不同发育时期胚胎肝Cx基因的表达

为探索不同分化阶段胚胎肝中细胞连接蛋白（Ｃｘ）基因表达的时间顺序，规律及其与细胞分化的关系，本文采用Ｃｘ基因系列作为分子探针，通过Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹法，研究了不同发育时胚胎肝中Ｃｘ基因表达状态。     

大鼠β细胞素基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

目的: 获得大量重组大鼠β细胞素(BTC),为研究β细胞素的功能及制备其抗体奠定基础. 方法: 利用PCR方法从大鼠肾组织扩增出544 bp的β细胞素基因片段并按读框克隆到原核表达载体pET28a( )上,得到重组质粒pET28a-rBTC,转化大肠杆菌BL-21(DE3)菌株,IPTG诱导β细胞素蛋白表达,SDS-PAGE 和Western blot检测. 结果: 经IPTG诱导后,有明显的目的蛋白表达,分子量符合β细胞素;表达的蛋白主要以包涵体形式存在;表达量约占菌体蛋白总量的20%～30%;目的蛋白与抗His标签抗体具有良好的反应原性. 结论: 大鼠β细胞素基因的克隆与表达为进一步开展β细胞素蛋白功能和胰腺干细胞的研究奠定了基础.     

醛固酮合成酶基因mRNA在肝纤维化大鼠体内的表达

目的 探讨醛固酮合成酶基因CYP11B2在正常与肝纤维化大鼠肝组织中的表达。方法 48只雄性Wistar大鼠，随机分为模型组与对照组。模型组：40% CCl4 油2.5 ml/kg(b.w.皮下注射，每周3次；对照组：橄榄油2.5 ml/kg(b.w.皮下注射。于第4、6、8、10周处死大鼠，光镜下观察肝组织形态学变化。RT-PCR和原位杂交法检测CYP11B2 的表达。结果与结论 原位杂交法及RT-PCR检测显示CYP11B2在纤维化形成时表达增强，提示CYP11B2在纤维化肝脏的储脂细胞中表达增强。     

神经生长因子基因在大鼠心肌组织中的表达

目的：观察神经生长因子（NGF）基因在生后不同时期大鼠心肌组织中的表达,方法：采用RT－PCR方法,半定量分析生后1天、15天、30天、60天、120天,360天大鼠心肌组织中NGFmRNA含量。结果：大鼠生后1天,心肌组织即NGFmRNA的表达;随着生后发育过程,表达量逐步增加,30天时达峰值;此后随鼠龄的增加,表达量呈级慢下降趋势,结论：大鼠心肌组织中NGFmRNA的表达量,随鼠龄的增加,而呈现出先升后降的动态变化趋势。     

人phb1基因在哺乳动物细胞株中的转染定位和表达

目的 构建带Flag标签的phb1真核表达载体,将其转染至COS7细胞中观察phb1蛋白在细胞内的定位,并转染至HEK293T细胞检测其表达.方法 以含人phb1全长cDNA序列的质粒pLenti6-phb1为模板,用PCR方法扩增phb1全长序列,连接至T载体,构建pUCm-T-phb1,Kpn Ⅰ和EcoR I双酶切后插入真核表达载体pCDNA3中,将重组表达质粒pCDNA3-Flag-phb1转染至COS7细胞,在荧光显微镜下观察其细胞定位.转染至HEK2931、细胞,提取总蛋白,进行Western blot检测.结果 经测序鉴定,成功构建了真核表达载体pCDNA3-Flag-phb1,转染后荧光显微镜观察phb1在COS7细胞中主要定位于胞质;经Western blot检测phb1基因在HEK293T细胞中能够有效表达.结论 实验结果为进一步了解phb1的功能打下了基础.