增加大鼠肝细胞内糖原含量的实验研究

以ＳｐｒａｇｕｅＤａｗｌｅｙ大鼠是肝脏的为研究对象，经门静脉以５种不同液体（柠檬酸盐为基础的液体，即Ｃｏｌｌｉｎ液；乳糖盐为基础的液体即ＵＷ液；ＵＷ液加入葡萄糖甙／和胰岛素）分别行活体肝脏原位灌洗并用同样液分别保存在０～２℃的条件下２４小时，观察不同时间的糖原变化情况，结果表明，只有在同时含有葡萄糖及胰岛素的灌洗液时，可阻止肝细胞内糖原分解或增加糖原的含量。对此作用机制及对供肝灌洗保存液的改进，进     

IL—1β对醋氨酚诱导的离体小鼠肝细胞损伤的保护作用

目的：在原代培养的小鼠肝细胞上观察白细胞介素－１β（ＩＬ－１β）对醋氨酚诱导的细胞损伤的影响及其与一氧化氮、环磷酸鸟苷的关系。方法：以两步灌流法分离小鼠肝细胞，进行原代培养：以放射免疫法测定细胞内ｃＧＭＰ和环磷酸腺苷含量。结果：ＩＬ－１β可减轻醋氨酚诱导的转氨酶漏出，增加肝细胞内ｃＧＭＰ含量，一氧化氮合酶阻断剂Ｌ－ＮＭＭＡ可完全阻断ＩＬ－１β的抗损伤作用。结论：ＩＬ－１β对醋氨酚诱导的肝细胞损伤具     

体外诱导大鼠骨髓干细胞向肝细胞横向分化

近期研究证明，某些骨髓干细胞可以分化成为肝细胞或胆管细胞^[1，2]，这些发现具有重要的临床应用价值，如用其来作为生物人工肝或肝细胞移植的供体细胞，以解决供体缺乏，同时自体细胞还可免除异基因或异种细胞所致的许多不便。为此，作者通过肝细胞生长因子(HGF)、上皮细胞生长因子(EGF)体外诱导骨髓干细胞向肝细胞分化的研究，探索骨髓干细胞横向分化为肝细胞的作用机制。     

大鼠肝细胞线粒体周围内质网的体视觉分析

目的：D直细胞与其周围内质网的结构关系,方法：使用钻占石刀对肝组织进行连续切片,电镜下观察线粒体及其周围内质网的三维结构。对肝细胞细胞器,特别是线粒体及其周围内质网进行体视学分析。结果：几乎所有的线粒体都在内质网的包绕下工作,在整个肝细胞内有26％的RER的32％的SER贴附近线粒体的周围。结论：肝细胞线粒体通常在内质网在包绕下执行生理功能,二者是结构和功能紧密联系的整体。     

构建肝细胞凋亡的离体实验模型

目的构建肝细胞凋亡的离体实验模型。方法采用抗坏血酸和硫酸亚铁建立肝细胞凋亡的离体实验模型，DNA琼脂糖凝胶电泳，流式细胞技术和显微镜荧光分光光度计观察等方法研究肝细胞凋亡。结果实验结果指出：肝细胞经低浓度的抗坏血酸和硫酸亚铁诱导后，在琼脂糖凝胶电泳上未发现明显的DNA“梯子”（Ladder）凋亡图谱。在反应体系中加入较高浓度的抗坏血酸和硫酸亚铁，琼脂糖凝胶电泳上呈现典型的DNA“梯子”（Ladder）凋亡图谱。而且，该图谱的出现也取决于抗坏血酸和硫酸亚铁在反应体系中诱导的时间。从流式细胞技术分析的结果表明：肝细胞经抗坏血酸和硫酸亚铁诱导后，G1峰左侧呈现亚二倍体峰（凋亡峰）。荧光显微镜观察到肝细胞核固缩，体积缩小，外形不规则，有的核膜呈泡状突起，细胞核染色体凝集成致密的团块状，有的核DNA断裂形成核小体，并靠近核膜。结论抗坏血酸和硫酸亚铁诱导肝细胞凋亡的离体实验模型成立。     

茵陈蒿汤醇提物的氯仿萃取部位对离体大鼠肝细胞的影响

目的：观察茵陈蒿汤醇提物中氯仿萃取部位的五个薄层区带对D－GalN诱导的离体大鼠肝细胞损伤的影响。方法：用苯：甲酸乙酯：甲酸：甲醇：水－3：1：0．2：0．5：0．5作为展开剂，在硅胶薄层板上点样分离茵陈蒿汤醇提物的氯仿萃取部位，得到5个薄层区带，Rf0.90,0.82,0.48,0.41,0.20，观察其对D－GalN诱导的离体大鼠肝细胞损伤的影响。结果：薄层层析区带4（Rf0.4)和5（Rf0.2)有降低ALT活性的作用，未观察到区带1（Rf0.9),2(Rf0.82)和3（Rf0.48)有抗离体肝细胞的化学损伤作用。结论：茵陈蒿汤保肝作用的效应薄层层析区带Rf值分别为0．41及0．20，提示该两个区带属于茵陈蒿汤保肝作用的成分及成分群。     

能量抑制剂对离体大鼠肝细胞线粒体功能及胞浆膜完整性的影响

使用能量抑制剂制备离体大鼠肝细胞损伤模型并比较了ＦＣＣＰ、抗霉素、鱼藤酮、缬霉素和氰化钾等对肝细胞氧消耗量、ＡＴＰ水平和ＬＤＨ逸出率的影响结果。发现氧化磷酸化解偶联剂ＦＣＣＰ和呼吸链抑制剂氰化钾用于制备损伤模型效果最好，两者均可在４０分钟内使ＡＴＰ耗竭和ＬＤＨ逸出率达７０％以上。另外，如果评价大鼠肝细胞氧消耗量则只能用ＦＣＣＰ，因氰化钾具有挥发性可导致错误结果而不宜使用。     

外源激素对远志根尖离体生长的影响

目的:探讨不同种类的外源激素及其配比对远志根尖离体生长的影响.方法:以从远志无根苗分化出来的根为实验材料,研究外源激素对远志根尖离体生长的影响.结果:就远志根尖离体生长而言,适宜的激素组合为二苯基脲双磺酸钙(DSC)1.0 mg/L+IBA 0.5 mg/L.结论:外源激素的配比及种类与外植体的生长发育有密切关系.     

肝细胞生长因子诱导糖尿病大鼠早期肾小球肥大

目的 :检测链脲佐菌素 (STZ)诱导的糖尿病 (DM)大鼠早期肾脏中肝细胞生长因子 (HGF)和P2 1的表达 ,探讨HGF在DM大鼠早期肾小球肥大中的作用。方法 :STZ诱导DM大鼠动物模型后第 3,7,14d ,分别用免疫组化法、ELISA法和RT PCR检测了肾脏中HGF蛋白及mRNA的表达 ,同时用免疫组化法检测了肾脏中P2 1蛋白的表达。结果 :STZ诱导的DM大鼠早期 ,HGF在肾脏中的表达主要位于肾小球内 ,HGF蛋白和mRNA均于STZ注射后的第 3d开始升高 ,并于第 7d时达到高峰 ;肾小球内P2 1蛋白的表达于STZ注射后的第 7d达到高峰 ;DM大鼠肾小球内HGF蛋白水平和P2 1蛋白积分呈正相关 (r=0 .9346 ,P <0 .0 1)。结论 :STZ诱导的DM大鼠早期肾小球内有HGF的表达 ,其表达可能与DM早期肾小球肥大有关。     

介绍一种大鼠肝细胞的分离和培养方法

介绍分离、纯化大鼠肝细胞(用胶元酶二步灌流和PercoⅡ不连续密度离心)及分离后的培养。此方法可靠易行，可制备出质量合格的肝细胞(实质细胞)。讨论了保证分离和纯化成功的一些关键步骤、条件和原理．提出分离肝细胞应首选胶元酶Ⅳ，PereoⅡ的渗透压和pH也是影响肝细胞的漂浮密度和存活能力的因素。     

大鼠肝细胞外向钾电流的实验研究

目的：研究大鼠肝细胞上外向钾电流。方法：全细胞膜片钳制方法观察大鼠肝细胞延迟外向钾电流（Ｉｋ）和瞬间外向钾电流（Ｉｔｏ）及去甲肾上腺素等对Ｉｋ的影响。结果：正常细胞外液条件下，大鼠肝细胞在保持电位－５０ｍＶ，＋１４０ｍＶ刺激电压时Ｉｋ为（２．８５±１．２１）ｎＡ。应用改变保持电位（－８０ｍＶ和－３０ｍＶ）的方法。初步区分Ｉｔｏ和Ｉｋ，Ｉｔｏ值为（１．３９±０．５８）ｎＡ。结论：去甲肾上腺素明显降低Ｉｋ，异丙肾上腺素和乙酰胆碱对Ｉｋ无影响     

三种原代大鼠肝细胞分离方法的比较

目的寻求一种高效、价廉的原代大鼠肝细胞分离方法。方法采用组织块法、胶原酶原位灌流法、改良二步胶原酶灌流法对大鼠原代肝细胞进行分离。比较3种方法所获得的肝细胞的产率、存活率、纯度及胶原酶的用量。结果组织块法、胶原酶原位灌流法、改良二步胶原酶灌流法所获得大鼠原代肝细胞的产量分别(0.21±0.11)、(1.87±0.51)、(1.94±0.55)×108/只大鼠;存活率分别为(54.34±8.21)%、(85.18±4.90)%、(90.34±4.46)%;肝细胞纯度分别为(68.80±10.30)%、(85.12±2.87)%、(91.84±30.3)%;胶原酶用量分别为(17.38±2.13)、(78.75±20.83)、(31.2±12.46)mg/只大鼠。结论相比于组织块法和胶原酶原位灌流法,胶原酶二步灌流法为一种经济、高效的原代大鼠肝细胞分离方法。     

三明治构型大鼠原代肝细胞长期培养及生物学特性的研究

目的观察三明治构型大鼠原代肝细胞长期培养的形态学变化,并对其功能进行测定。方法采用改良原位2步法门静脉胶原酶灌注分离单肝细胞,台盼蓝拒染实验观察细胞活力,利用三明治培养构型培养成年大鼠原代肝细胞,倒置显微镜下连续观察肝细胞的形态学变化,定期收集培养细胞上清液,检测培养肝细胞的分泌及合成功能,并与单层胶原培养肝细胞比较。结果平均每个鼠肝可获取2×108~3×108个肝细胞,活率在(93±3)%;体外肝细胞培养第3天,清蛋白分泌功能、尿素合成能力恢复到最佳状态。三明治构型培养的肝细胞清蛋白分泌功能、尿素合成能力在培养的14d内始终维持较高的水平,并形成肝索样结构,伴胆小管网络形成,肝细胞形态维持达28d以上。结论三明治构型肝细胞培养体系更接近于肝细胞体内生长环境,肝细胞可在较长时间内保持良好的形态结构和功能,三明治构型不仅可以应用于肝细胞的基础研究,而且为肝细胞移植和生物人工肝治疗肝衰竭奠定了一定的基础。     

胰腺激素对肝细胞DNA合成影响的实验观察

以CCl_4复制成大鼠急性肝细胞坏死模型,用单克隆抗溴脱氧脲嘧啶标记DNA技术,体内观察了胰腺激素对肝细胞DNA合成的影响,结果表明,胰高血糖素对肝细胞DNA合成具有一定的刺激作用,投予胰高血糖素后,DNA合成期细胞标记指数从对照组的0.04±0.02增高至7.40±1.61(P<0.01)。而胰岛素单独使用时对肝细胞再生无明显影响。     

肝细胞产生胶原纤维的进一步研究

对32例肝胆系统疾病的肝穿刺材料进行电镜观察,发现肝内增生的胶原纤维不仅存在于汇管区及Disse腔,也见于肝细胞内。肝细胞内的胶原绝大部分为胶原原纤维,其排列紊乱,混杂于肝细胞器之间,无界膜包裹,提示肝细胞内的胶原原纤维由肝细胞所产生。     

内、外源性性激素对大鼠实验性十二指肠溃疡形成的影响

雌鼠较雄鼠有较强的抗实验性十二指肠溃疡(DU)形成的能力,卵巢摘除后这种能力减弱,睾丸摘除对DU形成无影响。戊酸雌二醇和孕酮也有抗雄鼠DU形成的作用,而丙酸皋酮则无此作用。雌鼠血清胃泌素水平和胃酸分泌均低于雄鼠,卵巢摘除后血清胃泌素水平和胃酸分泌均明显升高。睾丸摘除对雄鼠血清胃泌素水平和胃酸分泌无影响。戊酸雌二醇可减少雄鼠血清胃泌素水平和胃酸分泌,而丙酸睾酮则无此作用。本实验结果可部分解释女性DU发病率明显低于男性。抑制胃泌素和胃酸分泌作用,可能是戊酸雌二醇抗DU形成机制之一。     

肝硬化鼠自体肝细胞脾内移植实验研究

本实验通过诱导大鼠肝硬变，在模型上进行半肝切除，正体肝细胞脾内移植，通过光镜，电镜，组织化学及＾９９ｍ锝标记亚锡酸钠（ＥＨＩＤＡ）扫描等，观察肝硬变情况下移植于脾内的肝细胞在不同时期的形态结构与功能变化，结果显示：移植于脾内的肝细胞能长期存活，并维持基本正常的肝细胞形态结构和功能，而且增殖能力较正常强，显示肝细胞脾内移植可能成为临床上难治性肝病的一种治疗手段。     

成人正常肝细胞的持续旋转培养

探讨维持培养成人肝细胞较长时间高活性的方法。方法采用限制贴壁、培养液中加入细胞生长因子和激素，持续轻微旋转的方法培养肝细胞。定期进行活细胞计数及培养上清液中人白蛋白检测，并在光镜和透射电镜下观察细胞的生长情况。结论应用该法能较长时间保持成人肝细胞的高活性状态，可用于生物人工肝系统所需的细胞供体培养。     

Changes of Lysosomes of Hepatocytes in Rats Aged One to Ninety Days

The changes of lysosomes of the hepatocytes in 27 rats aged 1,5,15,30,50 and 90 days respectively were observed with morphometry andby studying the ultrastructures.The results indicate that during thisperiod of development,the volume density and the numerical density ofthe lysosomes markedly increased.Lysosomes originally scattered inthe cytoplasm of the hepatocytes gradually migrated to the peripheryof the bile canaliculi,and the changes of the proportions amongcertain forms of secondary lysosomes were also observed.The author,considering from all the results,suggest that the first 5 days of the lifeof the rats is a critical period for the development of the lysosomesof the hepatocytes.