原代肺癌细胞培养与耐药性研究进展

肿瘤细胞的多药耐药是导致肿瘤患者化疗失败的主要原因,针对不同个体制定个体化化疗方案是临床化疗中亟待解决的问题。检测肿瘤细胞耐药基因的表达和药物敏感性将为临床化疗提供有效的帮助。现综述肺癌细胞的体外培养、耐药基因及药物敏感性检测方面的研究进展。     

耐药基因与肺癌药敏的相关性研究

目的 研究耐药基因P-糖蛋白（p-g）、拓扑异构酶Ⅱ（TopoⅡ）表达与肺癌药物敏感试验的相关性及临床应用价值.方法 50例肺癌组织（纤支镜＋手术）纳入研究,耐药基因选用免疫组织化学进行检测,药敏方法采用MTT比色法.结果 （1）P-gp、TopoⅡ在肺癌中阳性表达率分别为：67.5％、50.0％.其两者在鳞癌和腺癌中表达差异无统计学意义（P＞0.05）,但在非小细胞肺癌和小细胞肺癌中,P-gp表达有显著性差异（P＜0.05）.（2）P-gp的表达与化疗药物（顺铂、吉西他滨、长春瑞滨、紫杉醇）的耐药性均呈显著的正相关（P＜0.05）,与异环磷酰胺的耐药性无显著性差异（P＞0.05）;TopoⅡ的表达与顺铂、吉西他滨、紫杉醇、异环磷酰胺的耐药性均呈显著的正相关（P＜0.05）,与长春瑞滨的耐药性无显著性差异（P＞0.05）.结论 P-gp高表达及TopoⅡ的低表达共同介导并可能参与了肺癌耐药机制,且与检测的化疗药物有不同程度的相关性.耐药基因检测可能对指导临床化疗药物的选择具有一定的参考性.     

肺癌组织多药耐药基因蛋白表达研究

目的 检测肺癌体外组织药敏及多药耐药基因蛋白表达,为临床患者治疗提供依据。 方法 选取内蒙古医科大学附属医院2008—2009年50例肺癌患者,手术切除18例,支气管镜检32例;男性36例,女性14例;平均年龄(56.8±8.5)岁。采用MTT法检测组织对顺铂(DDP)、长春瑞滨(NVB)、吉西他滨(GEM)、紫杉醇(PTX)及异环磷酰胺(IFO)的药敏情况,采用IHC法检测多药耐药相关蛋白1(MRP1)、P-糖蛋白(P-gp)、拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)表达水平。 结果 (1) MRP1、P-gp、TopoⅡ在50例肺癌(10例污染)的表达率为:72.5%(29/40)、67.5%(27/40)和50.0%(20/40)。其中在鳞癌、腺癌、小细胞肺癌(SCLC)的表达率分别为76.2%、80.0%、55.6%;80.9%、80.0%、22.2%;42.9%、60.0%、55.6%。故三者在非小细胞肺癌(NSCLC)中表达差异无统计学意义(P>0.05),仅P-gp在SCLC与NSCLC之间表达差异有统计学意义(P<0.05)。(2) MRP1的表达与DDP、GEM、NVB的耐药性均呈显著正相关(P<0.05),与PTX、IFO的耐药性差异无统计学意义(P>0.05);P-gp的表达与DDP、NVB、GEM、PTX的耐药性呈显著的正相关(P<0.05),与IFO的耐药性无显著性差异(P>0.05);TopoⅡ的表达与DDP、GEM的耐药性呈显著的正相关(P<0.05),与NVB、PTX、IFO的耐药性无显著性差异(P>0.05)。 结论 肺癌耐药是多耐药基因蛋白共同作用的结果。      

乳腺癌原代细胞培养方法的研究进展

原代细胞培养就是将取得的肿瘤组织或细胞在体外进行的首次培养,通过原代培养获得的肿瘤细胞可为日益深入的肿瘤研究及治疗提供充足有效的细胞来源.乳腺癌的原代培养成功率低,使其广泛应用受到限制,但我们相信随着科研技术的进步,其仍然可能成为乳腺癌肿瘤在体外研究的重要技术手段,为乳腺癌患者带来福音.     

大肠癌原代细胞培养方法的探索

目的：探讨肿块大体类型、分化程度、取材位置以及不同培养方法等因素对大肠癌原代细胞培养成功率的影响,寻求一种简便而高效的大肠癌原代细胞培养方法。方法：分别对选材不同的人大肠癌细胞进行胶原酶消化法、组织块法培养,并比较不同培养基、细胞培养方法和细胞纯化方法对大肠癌细胞原代培养结果的影响,倒置显微镜下观察原代细胞的生长情况,免疫细胞化学法检测细胞表面标记物的表达情况。结果：肿块增生型肿瘤标本污染较少,肿瘤中心部位取材的肿瘤细胞活性好（2例培养出满意细胞均为肿块增生型中央深部取材获得）。低分化级别肿瘤短期生长可表现出明显活力,细胞数多于中分化,但长期生长结果未发现细胞数明显增多。2例培养出肿瘤细胞并顺利传代,1例分化为Broder Ⅱ级,1例分化为Ⅲ级。采用RPMI1640培养基,培养瓶瓶底用鼠尾胶原包被,加入适量生长激素,用组织块培养法进行原代培养,胰酶消化法纯化细胞,简便且效果好。免疫细胞化学检测培养的细胞来源于上皮组织。结论：肿块型肿瘤的中心部位、分化较差的肿瘤细胞活性好。大肠癌细胞原代培养,用组织块培养法和胰酶消化法纯化,采用RPMI 1640培养基,培养瓶瓶底用鼠尾胶原包被并加入适量生长激素,效果较好。     

三维细胞培养在膀胱癌中的研究进展

膀胱癌是我国男性泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一,近年来发生率呈逐年上升趋势,当发生淋巴结转移时,患者的生存率显著降低,患者接受手术治疗后仍无法有效改善预后。细胞培养可充分了解膀胱癌的发生、发展机制,对研究疾病的病理生理机制有重要作用。研究表明,三维细胞培养能更好的模拟细胞生长的真实情况,对于研究肿瘤微环境、肿瘤细胞的生物学行为及抗肿瘤药物筛选等方面具有重要的意义。本文主要对三维细胞培养在膀胱癌中的应用及研究进展做一综述。     

肺耐药相关蛋白与肿瘤的多药耐药性

肿瘤细胞对化疗药物产生耐药性是造成化疗失败的主要原因.耐药性产生原因是多方面的,其中以肿瘤多药耐药(multidrug resistance,MDR)最为常见.     

肺癌相关基因研究进展

肺癌是对人类健康与生命危害最大的一类恶性肿瘤,起源于肺支气管和肺泡上皮细胞,其发生和进展是一个多基因参与、多阶段发生和极其复杂的病变过程.肺癌的发生既与癌基因的激活和抑癌基因的突变或缺失有关,又与肿瘤细胞凋亡抑制等因素有关.本文仅就几种肺癌相关基因的研究进展作一简要综述.     

胃肠道肿瘤冻存组织原代细胞培养的实验研究

目的探讨冻存胃肠道肿瘤组织复苏后原代细胞培养的可行性方法。方法采用胎牛血清、RPMI Medium 1640培养液、二甲基亚砜（DMSO）配制冻存液,复苏以此冻存液冷冻保存的8例胃肠道肿瘤组织并行原代细胞培养,另复苏2例未加冻存液直接冻存的胃肠肿瘤组织为对照组。结果8例冻存液保存的胃肠道肿瘤组织原代细胞培养均获成功,成功率为100%。对照组2例未加冻存液冻存的肿瘤组织培养失败。结论 复苏应用冻存液冻存的胃肠道肿瘤组织进行原代细胞培养可获得成功,细胞生长时间与冻存时间及肿瘤细胞恶性程度有关,采用高浓度血清冷冻保存效果较好。     

LRP的表达与非小细胞肺癌耐药性的关系

目的探讨非小细胞肺癌的化疗耐药性和参与介导多药耐药的相关基因LRP和蛋白的表达,对比分析非小细胞肺癌的多药耐药性与LRP的关系。方法应用肿瘤细胞体外培养和MTT法对91例未经化疗的非小细胞肺癌进行体外化疗药物敏感性测试,观察非小细胞肺癌分别对环磷酰胺、阿霉素、顺铂 氟尿嘧啶三种单药和联合用药方案耐药情况和总的耐药情况,并用免疫组织化学方法对其进行LRP表达的检测,并将其表达情况与对应的化疗耐药性进行相关分析。结果91例NSCLC化疗敏感性检测结果显示:53例(58.2%)对环磷酰胺耐药,51例(56.0%)对阿霉素耐药,42例(46.2%)对顺铂 氟尿嘧啶耐药。其中,19例(20.9%)对三种用药均敏感,27例(29.8%)对三种用药均耐药,其耐药性与组织学类型和分化程度无关(P>0.05)。LRP在91例非小细胞肺癌中总的阳性表达率为53.8%鳞癌和腺癌相比LRP的表达无显著性差异(P>0.05)。且LRP的表达与三种化疗用药的耐药性均呈显著正相关(P<0.05),并且不同表达程度间也有显著差异性(P<0.05)。结论LRP在非小细胞肺癌中均有较高的阳性表达并参与介导了非小细胞肺癌固有多药耐药机制。     

1例肺腺癌组织的原代培养及异种移植检测

目的选取1例云南宣威女性肺腺癌组织进行原代培养,观察其生长增殖及异种动物接种成瘤情况,建立理想的实验模型.方法以手术切除的无菌肺癌组织标本进行原代培养,以有限稀释法获克隆化生长的肺腺癌细胞,通过光镜、生长曲线、异种动物成瘤实验、免疫组化等对其生物学特性进行分析.结果体外培养细胞生长稳定、状态良好,细胞形态学、增殖动力学实验表明该细胞系符合恶性肺腺癌细胞特征;动物接种成瘤率为100%,表明肿瘤对正常组织的侵袭能力,免疫组化结果证实瘤细胞为腺癌细胞,与原患者的病理切片相同.结论通过一系列对该细胞的体外研究证实本细胞株为恶性肺腺癌细胞,是一株具有地区特异性的肺腺癌细胞株,对研究肺癌癌变、侵袭转移、生物学特征以及开发抗肺癌新药等均有十分重要的理论和临床意义.     

肺癌患者气道阻力测定

目的:探讨脉冲振荡法(IOS)对肺癌患者呼吸阻抗的测定。方法:对46例健康者和53例肺癌患者进行IOS各项指标的测量,对所有指标进行t检验。结果:肺癌患者共振频率(Fres)、外周阻力(Rpc)、脉冲频率在5Hz、20Hz时的气道粘性阻力(R5、R2O)明显增加,与健康对照组有显著差异。结论:肺癌患者Rpc、R5、R20均有增加,肺癌患者呼吸阻抗的测定在鉴别肺癌的类型上无意义。     

非小细胞肺癌小分子靶向药物耐药处理共识

2013年3月8-9日,中国抗癌协会肺癌专业委员会和中国抗癌协会临床肿瘤学专业委员会(Chinese Society of Clinical Oncology,CSCO)联合主办了第十届"中国肺癌高峰共识会",来自全国的600多位专家,讨论了肺癌小分子靶向药物的耐药机制和应对策略。专家们认为,小分子靶向药物是肺癌治疗史上的里程碑事件,但其无可避免     

PDGFRA在肺癌细胞系中的表达及其对细胞增殖和侵袭能力的影响

目的:明确血小板源性生长因子受体A(platelet-derived growth factor receptor alpha,PDGFRA)对肺癌细胞增殖和侵袭能力的影响.方法:在8种肺癌细胞系以及正常肺细胞HBE中通过RT-PCR方法检测PDGFRA的基本表达水平,分别选取PDGFRA表达高的两组肺癌细胞系(A549)通过慢病毒转染构建稳定knock down和过表达PDGFRA细胞系,再进一步通过MTS,划痕实验,transwell实验以及western-blot实验明确PDGFRA对肺癌细胞增殖和侵袭能力的影响.结果:与对照组相比,过表达PDGFRA后,细胞增殖以及侵袭能力显著增加,同时与侵袭能力相关的细胞黏附分子E-cadherin和细胞骨架蛋白Vimentin表达上调,划痕实验和transwell实验结果表明PDGFRA能够促进细胞侵袭能力.在knock down PDGFRA细胞系中,细胞增值能力降低,细胞黏附分子E-cadherin和细胞骨架蛋白Vimentin表达下调,与对照组相比,细胞侵袭能力下降.结论:PDGFRA能够促进肺癌细胞增殖并有助于肺癌细胞的侵袭转移.     

云南宣威肺腺癌原代细胞和肺腺癌细胞株XWLC-05体外形态学比较

目的比较宣威肺腺癌原代细胞和已建立的宣威肺腺癌细胞株XWLC-05的形态学变化.方法用含10%胎牛血清的RPMI Medium1640培养基培养宣威肺腺癌细胞和XWLC-05,观察两者的形态学变化,比较不同时间点肺癌细胞数量变化,探讨其生长特性.结果培养的肺癌原代细胞为贴壁成团片状生长,为多边形或类圆形,异型性明显;而XWLC-05细胞成翼状,多边形,增殖速度比本实验室培养肺癌原代细胞快.结论肺癌原代细胞形态学上不同于XWLC-05,有其自身生长特性.     

XIAP表达与非小细胞肺癌化疗耐药的研究进展

非小细胞肺癌恶性程度高,预后差,已成为世界上难以治疗的肿瘤之一。X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)是新发现的细胞内源性凋亡抑制蛋白家族的主要成员,是最重要的凋亡抑制因子,它可以直接抑制半胱氨酸蛋白酶(caspase)并多途径调节细胞凋亡。近年的研究发现,XIAP与非小细胞肺癌的发生、发展及耐药性有着密切联系,并可能成为非小细胞肺癌的治疗新靶点。     

异搏定对膀胱癌耐药性的逆转研究

目的通过钙通道阻滞剂异搏定阻止抗癌药物从细胞内排出,探讨肿瘤细胞抗药性逆转的可能性。方法利用氮唑化合物(MTT)试验方法及高效液相色谱分析(HPLC)方法检测应用异搏定后肿瘤细胞对抗癌药物敏感性的改变。结果发现异搏定对膀胱癌敏感细胞(EJ)的生长无影响,而对膀胱癌耐药细胞(EJ-R)则随着异搏定质量浓度的增加,化疗药物的抗癌作用逐渐增强。结论异搏定通过阻滞钙通道,降低P-GP170排出抗癌药物的作用,使癌细胞内抗癌药物浓度得到保证,达到杀死肿瘤细胞的目的,即癌细胞抗药性得到逆转。