隐孔菌发酵物对脾虚证哮喘小鼠气道高反应性及炎症的影响

目的建立脾虚证哮喘小鼠模型,观察隐孔菌发酵物(CVFS)对脾虚证哮喘小鼠气道高反应性及炎症的影响。方法以卵白蛋白(OVA)致敏 饮食不节 劳倦过度伤脾法建立脾虚证哮喘小鼠模型;测定小鼠的肺阻力(RL)和支气管-肺泡灌洗液(BALF)中的炎症细胞,观察肺组织和免疫器官脾脏的病理变化。结果脾虚证哮喘小鼠的气道高反应性、BALF中的嗜酸性粒细胞数目,肺组织嗜酸性粒细胞炎性病理变化以及脾脏指数与单纯哮喘小鼠比较有明显差异(P<0.05)。CVFS能明显改善单纯哮喘小鼠和脾虚证哮喘小鼠由乙酰甲胆碱(MCH)诱导的气道高反应性,减少BALF中的嗜酸性粒细胞数目,以及改善肺组织嗜酸性粒细胞炎性病理变化,而对脾虚证哮喘小鼠作用更为明显。CVFS能明显增加脾虚证哮喘小鼠脾脏指数,而对单纯哮喘小鼠的脾脏指数无明显影响。结论OVA致敏 饮食不节 劳倦过度伤脾法可建立脾虚证哮喘小鼠模型;CVFS可明显改善脾虚症状,抑制脾虚证哮喘小鼠的气道高反应性和炎症反应,提示CVFS可用于临床脾虚证哮喘的治疗。     

α半乳糖神经酰胺活化iNKT细胞对哮喘小鼠过敏性气道炎症的影响

目的:观察α半乳糖神经酰胺(α-GalCer)活化iNKT细胞对卵清蛋白(OVA)诱导的哮喘小鼠过敏性气道炎症的影响。方法:将24只BALB/c小鼠随机分为:正常小鼠组(A组)、哮喘小鼠组(B组)和哮喘小鼠α-GalCer干预组(C组)。建立哮喘模型,以α-GalCer或PBS干预。分别以苏木素伊红(HE)染色和过碘酸雪夫(PAS)染色观察肺组织炎症和气道杯状细胞增生;检测肺泡灌洗液(BALF)细胞计数。流式细胞术检测肺组织iNKT细胞的数量、表面分子CD69及分泌细胞因子水平。结果:与B组比较,C组小鼠肺组织炎性细胞浸润增多,杯状细胞增生增加,BALF中细胞总数及分类数增加。同时α-GalCer干预后哮喘小鼠肺iNKT细胞被激活,表现为iNKT细胞的数量及表面分子CD69和分泌细胞因子水平增加。结论:α-GalCer可能通过活化的iNKT细胞促进哮喘小鼠过敏性气道炎症。     

柴胡皂苷d通过调控p38 MAPK/NF-κB通路减轻过敏性哮喘小鼠的气道炎症反应

目的：探讨柴胡皂苷d对卵清蛋白(OVA)诱导的过敏性哮喘小鼠p38丝裂原活化蛋白激酶/核因子κB(p38 MAPK/NF-κB)信号通路及气道炎症的影响。方法：60只BALBc小鼠随机分为正常组、模型组、柴胡皂苷d低（25 mg/kg）、中（50 mg/kg）、高剂量组（100 mg/kg）、阳性对照组（地塞米松,10 mg/kg）,每组10只。蛋白免疫印迹法检测小鼠肺组织中p38 MAPK/NF-κB通路相关蛋白的表达。结果：与模型组相比,柴胡皂苷d低、中、高剂量组、阳性对照组小鼠气道阻力参数Penh值、肺泡灌洗液中炎性因子水平、炎性细胞数量、肺组织炎症细胞浸润、肺组织中p38 MAPK/NF-κB通路相关蛋白表达降低（P<0.05）。结论：柴胡皂苷d可减轻OVA诱导的过敏性哮喘小鼠的气道炎症反应,其机制可能与抑制p38 MAPK/NF-κB通路有关。     

白藜芦醇对哮喘小鼠磷脂酶A2活性和气道炎症的影响

目的 探讨白藜芦醇对哮喘小鼠磷脂酶A2活性和气道炎症的影响.方法 采用卵清蛋白(OVA)刺激,建立小鼠哮喘模型,测定哮喘小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数及嗜酸粒细胞(EOS)计数;紫外分光光度法测定肺组织中前列腺素E2(PGE2)的含量;盐酸滴定法测定肺组织和血清中磷脂酶A2活性.结果 白藜芦醇能显著减少哮喘模型小鼠BALF中白细胞总数及EOS计数,减少肺组织中PGE2含量,降低磷脂酶A2活性.结论 白藜芦醇对哮喘小鼠有保护作用,可能与其降低磷脂酶A2活性、减轻炎性细胞浸润、减少炎症介质PGE2的产生有关.     

泡桐花总黄酮抗BALB／c小鼠哮喘气道炎症的实验研究

目的探讨泡桐花总黄酮抗实验性BALB/c小鼠哮喘气道炎症的作用。方法以卵蛋白(OVA)致敏和引喘BALB/c小鼠为模型,结合图像分析技术,观察泡桐花总黄酮大、小剂量对小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中蛋白含量、炎细胞总数和嗜酸性粒细胞(EOS)%以及支气管粘膜EOS计数的影响。结果泡桐花总黄酮可使BALF中白细胞总数明显下降,抑制支气管粘膜EOS的浸润聚集,抑制气道炎症时毛细血管通透性的增加,减少炎性蛋白的渗出。结论泡桐花总黄酮对哮喘气道炎症有一定的防治效果。     

泡桐花总黄酮抗BAIB/c小鼠哮喘气道炎症的实验研究

目的 探讨泡桐花总黄酮抗实验性BALB/c小鼠哮喘气道炎症的作用.方法 以卵蛋白(OVA)致敏和引喘BALB/c小鼠为模型,结合图像分析技术,观察泡桐花总黄酮大、小剂量对小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中蛋白含量、炎细胞总数和嗜酸性粒细胞(EOS)%以及支气管粘膜EOS计数的影响.结果 泡桐花总黄酮可使BALF中白细胞总数明显下降,抑制支气管粘膜EOS的浸润聚集,抑制气道炎症时毛细血管通透性的增加,减少炎性蛋白的渗出.结论 泡桐花总黄酮对哮喘气道炎症有一定的防治效果.     

YKL-40在哮喘小鼠外周血、肺泡灌洗液、气道上皮中的表达及其与气道嗜酸性粒细胞炎症的关系

目的:探讨YKL-40在哮喘小鼠外周血、肺泡灌洗液以及气道上皮中的表达及其与气道嗜酸性粒细胞炎症的关系。方法:以卵白蛋白(OVA)致敏并激发建立BALB/C小鼠哮喘模型,对照组以同等剂量的生理盐水代替OVA。造模成功后留取小鼠外周血、肺泡灌洗液、肺组织,HE染色观察肺组织嗜酸性粒细胞浸润情况,免疫组化法观察气道上皮YKL-40的表达,ELISA法定量检测外周血、肺泡灌洗液中YKL-40浓度。结果:(1)哮喘组气道周围有明显的嗜酸性粒细胞浸润,气道上皮杯状细胞增生肥大,并有大量黏液分泌。对照组气道未见明显炎症细胞浸润及粘液高分泌。(2)哮喘组外周血和BALF中YKL-40均明显高于对照组(P<0.05),差异有统计学意义。哮喘组外周血和BALF中Eos数均明显高于对照组(P<0.05),差异有统计学意义。(3)哮喘组气道上皮细胞胞浆中可见YKL-40表达,而对照组未见明显YKL-40表达。结论:(1)哮喘组小鼠外周血、肺泡灌洗液中YKL-40的表达均高于对照组,提示YKL-40可以作为哮喘诊断指标之一。(2)肺泡灌洗液中YKL-40浓度明显高于血液YKL-40浓度,结合免疫组化气道上皮YKL-40的表达,提示哮喘状态下YKL-40主要来源于气道上皮。(3)YKL-40表达水平与Eos数变化趋势一致,提示YKL-40水平可在一定程度上反映气道嗜酸性粒细胞炎症情况。     

短期暴露于不同剂量细颗粒物对哮喘小鼠气道炎症的影响

目的:观察短期暴露于不同剂量细颗粒物(fine particulate matter,PM2.5)对哮喘小鼠气道炎症的影响,并初步探索PM2.5影响哮喘小鼠气道炎症机制?方法:将40只Balb/c小鼠采用随机数字表法分为5组:对照组?卵清蛋白(ovalbumin,OVA)组?OVA+低剂量PM2.5(10 ?滋g)组?OVA+中剂量PM2.5(31.6 ?滋g)组和OVA+高剂量PM2.5(100 ?滋g)组?通过腹腔注射OVA致敏?雾化吸入OVA构建小鼠哮喘模型,第26?28?30天予以PM2.5滴鼻激发?第31天处死小鼠后观察HE染色观察各组小鼠肺组织病理变化?炎性细胞浸润情况,比较各组小鼠肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数及分类计数;并通过ELISA方法检测各组小鼠肺泡灌洗液中IL-3?IL-14及血清IgE水平?结果:OVA+低剂量PM2.5组小鼠BALF中细胞总数?分类计数百分比及IL-4?IL-13水平与OVA组相比均无统计学差异(P > 0.05);而OVA+中剂量PM2.5组及OVA+高剂量PM2.5组较OVA组升高(P < 0.05)?OVA+低剂量PM2.5组和OVA+中剂量PM2.5组血清IgE与OVA组相比轻度升高,但无统计学差异 (P > 0.05);OVA+高剂量PM2.5组较OVA组升高(P < 0.05)?结论:中剂量PM2.5(31.6 ?滋g)和高剂量PM2.5(100 ?滋g)可进一步加重哮喘小鼠气道炎症;而低剂量PM2.5(10 ?滋g)对哮喘小鼠气道炎症无显著影响?     

Der p2重组BCG对哮喘小鼠气道炎症的抑制作用

目的：观察胞壁型屋尘螨抗原Derp2重组卡介苗（Derp2rBCG）对哮喘小鼠气道炎症的抑制作用.方法：实验分4组,小鼠分别给予生理盐水、BCG或Derp2rBCG处理,然后以Derp2为变应原建立哮喘模型,正常对照组给予生理盐水致敏及气道内滴入,取肺泡灌洗液、肺组织标本,观察肺部炎症细胞浸润、气道杯状细胞增殖及肥大细胞脱颗粒情况.结果：①Derp2rBCG下调了哮喘小鼠气道局部炎症;②Derp2rBCG减轻了哮喘小鼠肺组织中的炎症细胞浸润;③Derp2rBCG可以减轻哮喘小鼠气道粘液高分泌现象并下调杯状细胞数量;④Derp2rBCG减轻了哮喘小鼠气道中的肥大细胞脱颗粒现象.结论：Derp2rBCG是一种有效的哮喘免疫治疗方法.     

血红素加氧酶-1抑制哮喘小鼠IL-17分泌的抗炎机制研究

目的探讨血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)在哮喘小鼠模型中抑制IL-17分泌减轻气道炎症作用的机制。方法用卵清蛋白(OVA)致敏、激发Balb/C小鼠建立哮喘模型,并在致敏、激发阶段经血红素(hemin)干预。肺组织病理切片,肺泡灌洗液炎症细胞计数观测哮喘小鼠模型气道炎症程度,real-time PCR法分别测定肺脏组织HO-1、IL-17A、IL-17E、IL-23、RORgammat、IL-15 mRNA的表达。结果成功建立OVA致敏、激发的哮喘小鼠模型,模型经hemin干预后,肺组织炎症细胞浸润减少,IL-17A、IL-17E、IL-23、RORgammat、IL-15 mRNA的表达降低。结论表明HO-1可能通过抑制IL-17A/E及与其分化、转录、分泌相关的IL-23、RORgammat、IL-15 mRNA的表达发挥抗炎作用,减轻哮喘小鼠气道炎症。     

抗小鼠TLR2胞外段单表位抗体TSP-2对C48/80诱导P815细胞脱颗粒的影响

目的观察抗小鼠TLR2胞外段单表位抗体(TSP-2)对C48/80诱导的肥大细胞瘤P815细胞脱颗粒的影响。方法用RT-PCR、免疫组化检测了小鼠肥大细胞瘤P815细胞在mRNA水平的表达及膜表面TLR2与抗体TSP-2的结合;利用激光共聚焦显微镜观察小鼠TLR2胞外段单表位抗体TSP-2对C48/80诱导的肥大细胞瘤P815细胞脱颗粒的影响。结果P815细胞在mRNA水平以及膜表面均有TLR2表达,抗体TSP-2能有效抑制C48/80诱导的肥大细胞瘤P815细胞脱颗粒反应所致的形态学改变与钙流出。结论抗小鼠TLR2胞外段单表位抗体TSP-2可与P815细胞膜表面TLR2结合,并能抑制C48/80诱导的P815肥大瘤细胞脱颗粒。     

抗小鼠TLR-2胞外段B细胞识别表位抗体抑制肉瘤生长的初步研究

目的 观察抗小鼠TLR-2胞外段B细胞识别表位抗体对小鼠肉瘤S180生长的影响。方法 在对小鼠Toll样受体2(mTLR-2)B细胞优势表位预测的基础上,合成B细胞识别表位20mer短肽,将其与载体蛋白偶联,制备免疫原。所得兔抗mTLR-2胞外段B细胞识别表位多克隆抗体TSP-1纯化后,采用Westernblotting、免疫组织化学和流式细胞仪进行初步鉴定。小鼠肉瘤株S180细胞注射小鼠左后肢,其中实验组混合100μg纯化抗体TSP-1,无关免疫球蛋白对照组混合100μg正常兔IgG,空白对照组仅接种S180。小鼠经麻醉分别于10、14、18d处死,称量瘤质量并计算抑瘤率。结果 Westernblotting显示在相对分子质量约95000处可见清晰的反应条带;免疫组织化学和流式细胞术检测显示抗体可与表达天然mTLR-2的J774A.1细胞反应;实验组小鼠肉瘤生长明显受到抑制,其瘤质量在10、14、18d与对照组相比差异显著(P<0.05);抑瘤率分别为77%、51%和53%。结论 局部应用抗mTLR-2胞外段B细胞识别表位抗体可抑制小鼠肉瘤S180生长,且表现在肿瘤生长的早期。     

抗小鼠TLR2胞外段单表位抗体TSP-2对酵母多糖诱发小鼠腹膜炎的影响

目的 观察抗小鼠TLR2胞外段(mTLR2ECD)单表位抗体TSP-2对酵母多糖诱发的小鼠腹膜炎的主要作用.方法 用腹腔灌洗、细胞计数及特异染色、免疫组化、ELISA 等各种方法检测了抗体TSP-2对模型动物的扭身次数、腹腔灌洗液的伊文思兰渗出、腹腔白细胞浸润的数量变化、腹腔肥大细胞脱颗粒情况以及腹腔灌洗液离心上清中PAF和TNFa水平的影响.结果 与PBS处理组和正常兔IgG组相比,抗体TSP-2能促使小鼠因腹腔炎症引起的扭身次数减少,腹腔灌洗液中伊文思蓝OD值降低,腹腔灌洗液中白细胞渗透减少以及C48/80诱导的腹腔肥大细胞脱颗粒降低.结论 抗体TSP-2可能通过对肥大细胞脱颗粒的抑制作用减轻酵母多糖诱导的小鼠腹膜炎炎症症状.

Abstract：

Objective To observe the effect of the antibody TSP-2 against a single epitope of mouse Toll-like receptor 2 extracellular domain (mTLR2ECD) on the inflammation in mice with zymosan A-induced peritonitis. Methods In mice with peritonitis induced by intraperitoneal injection of zymosan A, pretreatments with PBS, normal rabbit IgG and TSP-2 antibody at two different doses (2.5 and 5.0 mg/kg) were administered via the tail vein. Six hours after intraperitoneal injection of zymosan A, Evans blue was injected through the tail vein, and the frequency of writhing of the mice within 20 min were recorded. The mice were then sacrificed for peritoneal lavage, and the lavage fluid was collected to assess the exudation of Evans blue in the supernatant. The peritoneal leukocyte count, mast cell degranulation and release of such inflammatory mediators as platelet activating factor (PAF) and tumor necrosis factor-a (TNFa) in the lavage fluid were observed by cell counting, specific cell staining, immunohistochemistry and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Results Compared with PBS or rabbit IgG groups, TSP-2 treatment resulted in significantly reduced writhing response of the mice and lowered Evans blue exudation and leukocyte count in the peritoneal lavage, with also decreased degranulation of the mast cells induced by C48/80. Conclusion TSP-2 antibody against a single epitope of mTLR2ECD inhibits the inflammatory response in mice with zymosan A-induced peritonitis.     

抗小鼠TLR-2胞外段B细胞识别表位抗体抑制肉瘤生长的初步研究

OBJECTIVE: To observe the effect of the antibody to a B cell epitope on mouse Toll-like receptor-2 (mTLR-2) extracellular domain on the growth of murine fibrosarcoma. METHODS: An immunogen was prepared by conjugating a 20-mer peptide, synthesized on the basis of prediction for B cell dominant epitope of mTLR-2, to a carrier protein. Rabbit polyclonal antibodies against B cell epitope of mTLR-2 were prepared and purified, and characterized by Western blotting, immunohistochemistry and flow cytometry. Murine fibrosarcoma S180 cells were inoculated into the left hindlimbs of Swiss mice, and in the treatment group, the injected cells were mixed with 100 microg anti-mTLR-2 antibody TSP-1, with the same dose of irrelevant rabbit IgG in the IgG control group and with buffer solution only in the blank control group. The mice in each group were anesthetized and sacrificed on days 10, 14, and 18 following the injections, respectively, and the weight of the tumors was measured and the inhibition rate calculated. RESULTS: A distinct band for the antibody TSP-1 was shown at the relative molecular mass of 95 000 by Western blotting. The antibody TSP-1 could also react with native mTLR-2 expressed on J774A.1 cells, as identified by immunohistochemistry and flow cytometry. The growth of the fibrosarcoma S180 was obviously inhibited by injections with the antibody TSP-1 mixture, and the weight of tumor in mice treated with TSP-1 was significantly lower than that in the two control groups (P<0.05), with an inhibition rate of 77% on day 10, 51% on day 14 and 53% on day 18. CONCLUSION: Local application of the antibody against B cell epitope on mTLR-2 extracellular domain can inhibit the growth of murine fibrosarcoma, especially in the early stage of tumor proliferation.     

粉尘螨-壳聚糖疫苗治疗过敏性哮喘小鼠肝脏Bcl-2的表达

目的探讨粉尘螨-壳聚糖疫苗经鼻粘膜免疫治疗过敏性哮喘小鼠肝脏疗效及Bcl-2在肝脏所起的作用。方法用粉尘螨(Dermatophagoides farinae,Der f)提取液致敏、激发BALB/c小鼠,建立哮喘模型。24只BALB/c小鼠随机分为正常对照组(A组)、哮喘模型组(B组)、粉尘螨治疗组(C组)、粉尘螨-壳聚糖疫苗治疗组(D组)。通过HE染色观察小鼠肝脏炎症变化;用免疫组化检测肝脏巨噬细胞Bcl-2的表达。结果粉尘螨和粉尘螨-壳聚糖疫苗治疗组肝脏炎症病理变化较哮喘模型组明显减轻;哮喘模型组肝脏出现大量巨噬细胞Bcl-2阳性细胞,而两治疗组肝脏阳性细胞较哮喘模型组明显减少。结论粉尘螨-壳聚糖疫苗对过敏性哮喘小鼠的肝脏炎症有治疗作用,效果较粉尘螨免疫治疗组更好,炎症细胞的凋亡在其过程中起到重要作用。     

夏秋花粉免疫治疗哮喘患者SIL-2R和总IgE的变化

目的 探讨变应原免疫治疗变应性哮喘SIL-2R及总IgE水平的变化。方法 用夏秋花粉浸液按脱敏常规方法对36例夏秋花粉变应性哮喘患者进行免疫治疗1年。治疗前后测定SIL-2R和总IgE水乎。结果 免疫治疗后临床有效率达86．11％，治疗前非免疫疗法组和免疫疗法组血清SIL-2R和总IgE明显高于对照组(P＜0．01，P＜0．001)。治疗后免疫疗法组2项指标明显下降(P＜0．01，P＜0．001)。5例无效者和非免疫疗法组下降不明显(P＞0．05)。结论 免疫疗法能使夏秋花粉变应性哮喘息者血清SIL-2R和总IgE水乎明显降低。     

钙ATP酶在豚鼠过敏性哮喘发病过程中的作用

本实验给致敏豚鼠吸入卵蛋白建立速发型过敏性哮喘的动物模型，观察了呼吸系总阻抗（Ｚｒｓ）及豚鼠肺组织钙ＡＴＰ酶（Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ）活性的变化以及６５４－２，异搏定对二者的影响。结果表明哮喘组Ｚｒｓ明显高于正常组（Ｐ＜０．０１），肺组织Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活性明显低于正常组（Ｐ＜０．０１），６５４－２有增Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活性的作用。说明在过敏性哮喘的发病过程中Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活性下降是其病理生理变化的一个重要因素，细胞内钙浓度升高可能与此有关。     

M2受体抗体在支气管哮喘发病中的实验性研究

目的测定Wistar大鼠外周血中M2受体的自身抗体,观察地塞米松对M2受体的自身抗体影响以及M2受体的自身抗体在哮喘发病中的可能机制。方法以卵白蛋白致敏制备Wistax大鼠哮喘模型,分为健康对照组、哮喘模型组和地塞米松组。以细胞外第二环表位肽段的合成肽作为抗原,分别通过SA—ELISA检测各组大鼠外周血中的M2受体的自身抗体,计算抗体阳性率和抗体滴度的几何均数;观察各组动物哮喘发作症状、末次卵白蛋白致敏攻击24h内支气管肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞的数量及支气管肺组织病理学改变。结果哮喘模型组的M2受体自身抗体阳性率为66．7％,明显高于对照组的8．3％和地塞米松组的16．7％（P〈0．05）;哮喘模型组自身抗体阳性患者的抗体滴度为1-105,明显高于对照组的1—20和地塞米松组的1-30（P〈0．05）。在哮喘模型组中,M2受体的自身抗体阳性率和抗体滴度明显高于健康对照组与地塞米松组,地塞米松组的BALF中的嗜酸性粒细胞与哮喘组相比有明显减少,地塞米松组的气道炎症程度轻于哮喘组。结论应用地塞米松可以降低M2受体的自身抗体阳性率和抗体滴度,提示M2受体的自身抗体可能参与哮喘的病理生理过程。