SYBR-GreenⅠ实时荧光聚合酶链反应结合融解曲线分析技术在α-珠蛋白生成障碍性贫血基因诊断中的应用

目的探讨SYBR-GreenⅠ实时荧光PCR（SYBR-PCR）结合融解曲线分析（D.C）技术进行α-珠蛋白生成障碍性贫血（α-地贫）基因诊断的价值。方法对22个家系中的37份样品采用4管SYBR-PCR结合D.C进行--^SEA、-α^3.7,-α^4.2及非缺失型（αα）4个等位基因型的检测,进而作出基因诊断。同时运用单管多重PCR（mPCR）结合凝胶电泳技术进行基因检测加以对照确认。结果22个家系中6个家系检出有--^SEA或-α^3.7携带者,其中东南亚型缺失携带者（--^SEA/αα）7例,右侧缺失携带者（-α^3.7/αα）3例,东南亚型缺失与右侧缺失双重杂合子（--SEA/-α3.7）1例。2例为胎儿产前诊断。其中1例为Bart′s水肿胎儿（--^SEA/--^SEA）,另1例为东南亚型缺失携带者（--^SEA/αα）。用mPCR凝胶电泳技术得出的基因诊断结果与上述结果一致。结论SYBR-PCR结合D.C技术在α-地贫的基因诊断、携带者检出及产前诊断方面具有实用价值。     

广州地区儿童α地中海贫血的发生率及缺失基因检测结果分析

目的调查广州地区儿童α地中海贫血(α地贫)的发生率及其常见缺失型基因的分布特征。方法对4990例广州地区儿童进行以全自动凝胶电泳为主的α地贫血液学检查,并利用以缺口PCR(gap—PCR)为原理的单管多重PCR方法对筛查出的其中103例患儿进行常见的三种缺失型基因诊断分析。结果在4990人中检出α地贫427人,发生率为8.56%,其中,H病68人,发生率为1.36%,占α地贫的17.53%,通过HbBarts诊断的α地贫128人,占α地贫的32.99%。进行基因分析的103例全部都是缺失型,其中东南亚缺失型(--SEA)占72.87%,右侧缺失型(-α3.7)占18.60%,左侧缺失型(-α4.2)占8.53%;具体基因型分布为:--SEA/αα70例,--SEA/-α3.719例,--SEA/-α4.2和α/-α3.7各5例,αα/-α4.2和-α4.2/-α4.2各2例。结论在α地贫高发区,应加强对儿童人群进行α地贫的血液学筛查和常见基因的诊断。     

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目的调查广西地区平均红细胞体积(MCV)<80fL儿童中3种缺失型α地中海贫血基因(即--SEA、-α3.7和-α4.2)的携带率及基因型.方法 2004年6～12月,广西医科大学第一附属医院优化前人建立的单管多重聚合酶链反应(mPCR)技术,并用22例已知基因型的α地中海贫血DNA标本加以验证,运用此方法检测78例MCV<80fL的儿童.结果经单管mPCR方法检测的22例α地中海贫血,所得基因型与已知基因型一致.78例MCV<80fL儿童中共检出37例缺失型α地中海贫血基因携带者,检出率为47.4%其中--SEA缺失型杂合子(--SEA/αα)29例,-α3.7缺失型纯合子(-α3.7/-α3.7)6例,-α3.7和-α4.2缺失型双重杂合子(-α3.7/-α4.2)1例,HbH病(--SEA/-α3.7)1例.--SEA缺失型等位基因检出最多,在78例受检者156条染色单体中,其携带频率为19.2%(30/156),-α3.7和-α4.2缺失型分别为9.0%和0.6%.结论单管mPCR技术能快速、准确地检测--SEA、-α3.7和-α4.2基因,经优化后,可使该技术更为简便.缺失型α地中海贫血是广西地区儿童MCV降低的主要原因之一.     

广州地区疑诊地中海贫血患儿α-地中海贫血基因突变型研究

目的了解广州地区高风险儿童α-地中海贫血(α-地贫)的发病率和3种主要的基因型分布情况。方法应用单管四重Gap-PCR法对广州地区高风险地贫儿童5 099例进行α-地贫基因分析。结果共检出α-地贫患儿1 792例,总检出率为35.14%。其中--SEA/αα1326例(26%),-α3.7/αα179例(3.51%),-α3.7/-α3.75例(0.10%),-α4.2/αα60例(1.18%),-α4.2/-α4.22例(0.04%),-α3.7/-α4.23例(0.06%),-α3.7/--SEA151例(2.96%),-α4.2/--SEA66例(1.29%)。患儿的基因构成比分别为1543例携带--SEA,占76.42%;343例携带-α3.7,占16.99%;133例携带-α4.2,占6.59%。--SEA为主导缺失型。结论广州地区高风险儿童具有高α-地贫发病率和携带率,--SEA是主要的α-地贫缺失型,是重症α-地贫和HbH致病的主要风险因素。     

471例儿童α地中海贫血缺失型基因谱分析

目的：探讨儿童α地中海贫血（α地贫）常见缺失型基因谱的分布特征。方法：在佛山市妇幼保健院就诊和体检的儿童中,血细胞分析检测红细胞体积（MCV）＜82 fl 者抽取静脉血2 mL（EDTA抗凝）,采用 GAP-PCR 法进行α地贫基因分析。结果：血细胞分析 MCV＜82 fl 者 1341 例,检出α地贫 471 人,检出率为 35.1%,且随年龄增长而增高。基因缺失以东南亚缺失型（--SEA）为主,占75.3%;其次为右侧缺失型（-а3.7）,占17.0%;左侧缺失型（-а4.2）占7.7%。基因型分布前3位分别是：--SEA/аа（73.2%）,аа/-а3.7（12.5%）和 -SEA/-а3.7（5.5%）。结论：对MCV＜82 fl 儿童进行α地贫的基因诊断是必要的。该资料中α地贫患儿基因缺失以东南亚缺失型（--SEA）占主导地位,基因型以 --SEA/aa多见。     

广州地区儿童α地中海贫血的发生率及缺失基因检测结果分析

目的 调查广州地区儿童α地中海贫血（α地贫）的发生率及其常见缺失型基因的分布特征。方法 对4990例广州地区儿童进行以全自动凝胶电泳为主的α地贫血液学检查，并利用以缺口PCR（gap-PCR）为原理的单管多重PCR方法对筛查出的其中103例患儿进行常见的三种缺失型基因诊断分析。结果 在4990人中检出α地贫427人，发生率为8．56％，其中，H病68人，发生率为1．36％，占α地贫的17．53％，通过Hb Bart’s诊断的α地贫128人，占α地贫的32．99％。进行基因分析的103例全部都是缺失型，其中东南亚缺失型（--SEA）占72．87％，右侧缺失型（-α^3,7）占18．60％，左侧缺失型（-α^4,2）占8．53％；具体基因型分布为：--SEA／αα70例，--SEA／-α^3,719例，--SEA／-α^4.2和α／-α^3.7各5例，αα／-α^4.2和-α^4.2／-α^4.2各2例。结论 在α地贫高发区，应加强对儿童人群进行α地贫的血液学筛查和常见基因的诊断。     

广西地区595例HbH病患儿基因型与临床检验特点分析

目的 探讨广西地区HbH 病患儿的基因类型及其临床特点。方法 采用单管多重PCR 结合琼脂糖凝胶电泳和反向斑点杂交确定595 例患儿地贫基因型,并分析不同基因型的贫血程度。结果 595 例HbH 病患儿中包括--SEA/-α3.7 232 例,--SEA/αCSα 174 例,--SEA/-α4.2 122 例,--SEA/αWSα 35例,--SEA/αQSα 24 例,检出罕见泰国缺失型复合α 地贫-2 型HbH 病8 例,其中合并CD41-42、CD17-28、CD26、IVS-Ⅱ -654、IVS-Ⅰ -1和CD27-28 等轻型β地贫23 例。其中HbH-CS 患儿贫血程度最重,HbH-WS 最轻,均为小细胞低色素贫血。结论 广西地区HbH 病患儿基因型以缺失型为主,有一定的轻型β 地贫合并率,非缺失型HbH 病患儿多较缺失型贫血重。     

桂林地区中重型β珠蛋白生成障碍贫血患儿基因型与临床分析

目的探讨桂林地区儿童中间型和重型β珠蛋白生成障碍贫血(地贫)的基因型特点及其与临床的关系。方法运用PCR-反向斑点杂交法及多重PCR法确定患儿地贫基因型。结果共检出8种β和2种α地贫基因突变,患儿基因型包括4种β地贫纯合子、10种β地贫双重杂合子组合及αβ杂合子,除-28/-28、CD41-42/IVS-Ⅱ-654复合αα/--SEA、CD41-42/CD41-42复合αα/-α3.7、CD41-42/-28复合αα/--SEA表现为中间型β地贫外,余基因型均表现为重型地贫。结论β地贫临床症状轻重由其基因型决定,本组CD41-42(-TTCT)I、VS--Ⅱ654(C→T)、CD17(A→T)、-28(A→G)为桂林地区常见的β地贫基因突变类型。实用儿科临床杂志,2006,21(3):151-153     

昆明地区儿童地中海贫血筛查和基因诊断分析

目的：调查云南省昆明地区儿童地中海贫血（地贫）基因突变类型和频率。方法对昆明地区1338例儿童进行RBC脆性、MCV、血红蛋白电泳生化筛查。对筛查阳性的α-地贫患儿用gap-PCR方法、β-地贫用PCR-RDB方法进行基因诊断。结果地贫生化筛查阳性率为11.36%(152 例),基因诊断阳性率为8.59% (115 例)。115例经基因诊断确诊为地贫的样本中,α-地贫43例,β-地贫68例,α合并β地贫4例;43例α-地贫中,--SEA/αα型占47%,-α4.2 /αα型占21%,HbH病占14%;68例β-地贫共检测出6个基因位点发生突变,突变频率依次为βE（32%）、CD41-42（24%）、CD17（23%）、IVS-II654（10%）、CD71-72（10%）、-28（1%）。结论 昆明地区儿童地贫基因突变率较高,开展婚检及产检生化筛查和基因诊断十分必要。     

改良单管多重PCR检测低平均红细胞体积儿童3种缺失型α地中海贫血基因

目的调查广西地区平均红细胞体积(MCV)<80fL儿童中3种缺失型α地中海贫血基因(即SEA、α3.7和α4.2)的携带率及基因型。 方法2004年6~12月,广西医科大学第一附属医院优化前人建立的单管多重聚合酶链反应(mPCR)技术,并用22例已知基因型的α地中海贫血DNA标本加以验证,运用此方法检测78例MCV<80fL的儿童。 结果经单管mPCR方法检测的22例α地中海贫血,所得基因型与已知基因型一致。78例MCV<80fL儿童中共检出37例缺失型α地中海贫血基因携带者,检出率为47.4%其中SEA缺失型杂合子(SEA/αα)29例,α3.7缺失型纯合子(α3.7/α3.7)6例,α3.7和α4.2缺失型双重杂合子(α3.7/α4.2)1例,HbH病(SEA/α3.7)1例。SEA缺失型等位基因检出最多,在78例受检者156条染色单体中,其携带频率为19.2%(30/156),α3.7和α4.2缺失型分别为9.0%和0.6%。 结论单管mPCR技术能快速、准确地检测SEA、α3.7和α4.2基因,经优化后,可使该技术更为简便。缺失型α地中海贫血是广西地区儿童MCV降低的主要原因之一。     

非缺失型α珠蛋白生成障碍性贫血杂合子及纯合子基因型与表型分析

目的对非缺失型α珠蛋白生成障碍性贫血(简称地贫)杂合子及纯合子的基因型和表型进行分析,并与缺失型α地贫作比较。方法对检测标本采用血常规、血红蛋白电泳、Multi-PCR法检测--SEA、-α3.7、-α4.2,PCR-反向斑点杂交法检测αCS、αQS、αWS。将非缺失型α地贫杂合子设为A组,α地贫2(-α3.7或-α4.2杂合子)设为B组,α地贫1(--SEA杂合子)设为C组,将3组平均红细胞容积(MCV)、平均红细胞血红蛋白(MCH)水平进行统计学分析。结果确诊的28例非缺失型α地贫中,24例为杂合子,临床表现为静止型-轻型,3例为αCSα/αQSα,1例为αCSα/αWSα,临床表现为轻型-中间型;B组、C组分别为53例和51例。共检出32条非缺失型α地贫的等位基因,其中αCS15条,αQS15条,αWS2条。3组MCV比较:A组与B组t=4.700 8,P=0.000 0;A组与C组t=8.333 2,P=0.000 0;B组与C组,t=16.189 7,P=0.000 0。3组MCH比较:A组与B组t=3.810 2,P=0.000 3;A组与C组t=7.610 2,P=0.000 0;B组与C组,t=15.759 2,P=0.000 0。结论αCS、αQS、αWS是桂林地区常见的非缺失型α地贫基因突变类型,其表型较α地贫2明显,在临床诊断和遗传咨询中应加以重视。     

深圳地区小儿地中海贫血实验室检查结果分析

本文对来自门诊403例有不同程度贫血或黄疸的儿童进行了地中海贫血筛查,检出各种地贫231例,占57.32%。对部分病例进行基因分析,α-地贫以缺失型(α1杂合子)为常见,β-地贫以CD41-42(-CTTT)和IVS-2nt654(C→型T)突变比例最高。重型地贫患儿家系调查发现其父母均为地贫基因携带者,因此在地贫高发区对婚检或产检人群中进行地贫筛查和遗传咨询是控制和减少重型地贫患儿出生的唯一有效途径     

桂北地区166例HbH病患儿血液学参数和基因谱分析

目的：研究桂北地区HbH病患儿的基因谱特点及不同基因型HbH病的血液学参数特点。方法：根据临床表现、血细胞学检测、血红蛋白电泳确诊HbH病患儿166例,均来自桂北地区。Multi-PCR和PCR-反向斑点杂交确定基因型,对于经常规基因检测不能确诊的基因突变,采用直接DNA测序法。结果：166例确诊为HbH病的患儿中,共检出8种基因型,其中 --SEA/-α3.7 82例,--SEA/-α4.2 40例,--SEA/αCSα 38例,--SEA/αQSα 1例,--SEA/αWSα 1例,--SEA/αCD43/44（-C）α 1例,--SEA/-α3.7 复合CD17 （A→T）1例,--SEA/-α4.2 复合CD41-42（-TTCT）1例,另有1例为 --SEA与未知基因突变的双重杂合子。实际可分析血液学参数的HbH病患儿有134例,其中2例Hb在正常范围,36例轻度贫血,90例中度贫血,6例 --SEA/αCSα因合并感染而呈重度贫血;69例 --SEA/-α3.7患儿Hb为 62~120 g/L,31例 --SEA/-α4.2患儿Hb为 69~127 g/L,34例 --SEA/αCSα患儿Hb 为34~110 g/L。非缺失型HbH病组（基因型 --SEA/αCSα）Hb低于缺失型HbH病组（基因型 --SEA/-α 3.7和 --SEA/-α4.2）（P＜0.05）,MCV含量高于缺失型HbH病组（P＜0.05）。结论：桂北地区HbH病患儿基因谱丰富,以缺失型HbH病为主,并有明显的遗传异质性;非缺失型HbH病患儿的贫血程度较缺失型HbH病组重,但MCV值较缺失型HbH病组高。     

实时荧光聚合酶链反应技术用于Bart水肿胎儿产前诊断

α-地中海贫血（α-地贫）是一种常染色体隐性遗传性贫血病,在我国主要由α-珠蛋白基因3种严重缺失造成,即--^SEA、-α^3.7、-α^4.2。患者基因型不同,临床症状轻重不一。其中症状最重的为Bart水肿胎儿综合征,通常为死胎。其次为血红蛋白H病（HbH）,患儿能成活,但贫血、甚至肝脾肿大。上述缺陷基因的携带者用一般实验室检查方法不能发现;运用基因诊断技术能够检出。[第一段]     

基因诊断珠蛋白生成障碍贫血35例

目的探讨昆明市珠蛋白生成障碍贫血（地贫）的基因突变类型。方法对63例高度疑诊为地贫的患儿采用多聚酶链反应（PCR）、反向斑点杂交法（RDB）进行基因检测。结果疑诊患者63例经基因检测确诊地贫35例。其中4例为α地贫,30例为β地贫,1例为α复合β地贫。35例标本中共检出基因突变9种类型15种组合,α地贫以东南亚缺失型（--SEA）为主,β地贫基因突变检测出6种类型11种组合,其中17位点突变发病率最高,17位点纯合子、杂合子、双重杂合子均有发病。结论云南地贫发病有其自身特点。出现1例α地贫和β地贫同时集中于同一患者现象,提示在进行地贫基因诊断时应二者同时检测,以免漏诊。     

中间型β珠蛋白生成障碍贫血患儿基因型及临床特点

目的分析广西地区儿童中间型β珠蛋白生成障碍贫血(地贫)基因型和临床特点。方法采用PCR检测β及α地贫基因、Gγ珠蛋白基因启动子-158(G-γ158)位点单核苷酸多态性(SNP)和β类珠蛋白基因簇位点控制区Dnase I酶高敏位点基序2(-βLCR-HS2)AT重复序列多态性,并分析临床资料。结果基因型:1)7例为nt-28纯合子或双重杂合子,其中2例nt-28纯合子,1例βE/nt-28,2例β0/nt-28,1例β0/nt-28复合G-γ158(T),另1例β0/nt-28同时复合G-γ158(T)和--SEA型α地贫1基因;2)各有3例β0/β0并遗传G-γ158(T)或--SEA型α地贫1基因;3)1例β0/β0同时遗传--SEA型α地贫1基因和G-γ158(T);4)6个携带G-γ158(T)的病例其-βLCR-HS2均检出(AT)9N12(AT)10序列。临床表现:14例Hb(75.9±9.7)g/L,平均红细胞体积为(68.9±5.9)fL,Hb F均值66.9%±16.3%。除2例nt-28纯合子和1例βE/nt-28杂合子未输过血外,余病例均有较明显症状和不定期输血史。结论广西地区中间型β地贫主要基因修饰因素依次为nt-28(A→G)突变,G-γ158(T)和--SEA型α地贫1基因。-βLCR-HS2(AT)9N12(AT)10多态性形式在本组多见。nt-28纯合子和与βE构成的双重杂合子临床表现较轻。     

地中海贫血的基因诊断与产前诊断

地中海贫血(地贫)是我国南方最常见和危害最大的遗传病之一,主要分为α地贫和β地贫两大类。重型α地贫胎儿(Barts水肿胎)多在妊娠末期胎死腹中或产下即死;重型β地贫患儿,一般在出生后3～6个月出现症状,要靠输血维持生命,多在童年期夭折。目前尚缺少有效治疗方法,因此,对夫妇双方均为地贫基因携带者的孕妇,在妊娠早期或中期进行产前诊断,防止重型地贫儿出生,是最积极有效的预防措施。下面概述α地贫和β地贫及其基因诊断和产前诊断相关内容。α地中海贫血1分子缺陷类型概述α地贫是由于α珠蛋白基因缺失或点突变导致α珠蛋白肽链合成障碍…     

铁缺乏对轻型β-珠蛋白生成障碍性贫血血红蛋白A2水平的影响

目的 研究铁缺乏对β-珠蛋白生成障碍性贫血(β-地贫)患者血红蛋白A2(HbA2)的影响.方法 标本来自2008年5月-2010年5月在桂林医学院附属医院儿科、产科门诊及重型β-地贫家系,对所有标本进行血常规检查、血红蛋白电泳并定量测定HbA2值、免疫荧光法测定血清铁蛋白(SF)、Multi-PCR法确定3种缺失型α-地贫基因突变、PCR结合反向斑点杂交法确定17种β-地贫基因突变.结果 408份标本中,A组304例,B组26例,C组56例,D组22例,将各组进行计量资料两样本均数的比较,其中A组与B组比较q=5.074 7,P<0.05,A组与C组比较q=37.650 8,P<0.05,A组与D组比较q=16.043 0,P<0.05,C组与D组比较q=7.682 9,P<0.05,B组与D组比较q=15.806 6,P<0.05.4组的SF和HbA2的相关性检测均无显著性差异.结论 1.铁缺乏会使健康人和轻型β-地贫患者血红蛋白电泳时HbA2值下降;2.轻型β-地贫合并铁缺乏时HbA2值较单纯轻型β-地贫下降显著,但仍较健康人群高,差异有统计学意义,可见即使合并铁缺乏,HbA2仍可以作为临床诊断轻型β-地贫的可靠指标.     

基因芯片诊断地中海贫血的研究

目的探讨基因芯片用于地中海贫血(简称地贫)检测的应用价值。方法应用基因芯片技术对62例初筛诊断为α地贫;93例初筛诊断为β地贫(轻型60例,重型33例)的患儿血样标本进行d及B珠蛋白的基因分析。结果(1)成功检测出中国人中常见的3种缺失型α地贫(-^SEA,-α^3.7,-α^4.2),2种非缺失型α地贫(HbCS,HbQS)的杂合子、纯合子及双重杂合子。(2)在60例轻型β地贫,33例重型β地贫126条染色体中共检测到8种突变类型,其中CD41-42占33．5％,IVS-Ⅱ-654占23．9％,TATAbox-28占15．0％,CD17占15．0％,CD71-CD72( A)占4．8%,βE^26占2．4％,CD27-CD28( C)占2．4％,CD71-CD72( T)占1．5％。(3)在60例β地贫杂合子中检测到8例(13．3％),在33例重型β地贫中检测到2例(6％)同时复合有α地贫基因。结论基因芯片技术具有简便、省时等特点,其无需接触放射性同位素,可同时检测α与β地贫,便于推广应用。     

三亚市儿童地中海贫血筛查及基因分析

目的调查三亚市儿童地中海贫血的发病率和基因突变类型。方法对938例儿童进行血常规、CRP检测和血红蛋白电泳试验,筛查地中海贫血发生情况及其所属类型;对α-地中海贫血患儿用gap-PCR法、β-地中海贫血患儿用PCR-RDB法进行基因诊断。结果地中海贫血筛查阳性率为13.65%(128/938),基因诊断阳性率为11.41%(107/938)。在107例经基因诊断确诊为地中海贫血的患儿中,α-地中海贫血59例,β-地中海贫血46例,α合并β地中海贫血2例。59例α-地中海贫血患儿中,-SEA/αα型31例,-α4.2/αα型13例,Hb H病为6例;46例β-地中海贫血患儿中共检出6个基因位点发生突变,突变频率依次为CD41-42(-CTTT)21例,TATAbox-28(A→G)13例,CDs14/15(+G)5例,IVS-Int 654(C→T)4例,CD17(A→T)2例,27-28(+C)1例。结论三亚市儿童地中海贫血发病率较高,开展遗传咨询、婚前检查及产前诊断等对优生优育十分必要。