检测人肝癌单克隆抗体的改良ELISA法

用硫酸和鱼精蛋白依次处理微量滴定板,使靶细胞易吸附于滴定板,经适当浓度戊二醛固定,使靶细胞在检测过程中不易脱落,也减少抗原受破坏的可能。以此为基础的ELISA法,用于筛选人肝癌单克隆抗体(单抗),敏感性、特异性及重复性均较好;所得结果与免疫荧光法检测结果有可比性;是大量筛选抗肿瘤单抗的有效手段。     

氧氟沙星ELISA检测方法的建立

目的:建立氧氟沙星(OFL)的ELISA快速检测方法。方法:在制备抗OFL单克隆抗体基础上,采用间接竞争酶联免疫吸附方法(ciELISA)检测OFL的含量。结果:筛选得到特异性分泌抗OFL的单克隆抗体细胞株3G3和3D9,应用3G3所制备腹水建立的ciELISA工作曲线的线性范围为0.5-128 ng/mL(r2=0.985 8),最低检出浓度为0.5 ng/mL,半数抑制浓度IC50为7.0 ng/mL,样品加样回收率为84%~120%,批内变异系数和批间变异系数均小于15%。结论:本文建立的氧氟沙星ELISA检测法可满足OFL残留检测的需要。     

敏感、特异的人血清甲状腺球蛋白单克隆抗体ELISA法

应用自制的3株鼠抗人甲状腺球蛋白(HTg)单克隆抗体(McAb)建立了快速敏感和特异的3位抗体夹心的ELISA法。本法的标准曲线是用TG标准品连续稀释所得。其检测TG最低浓度为1. 25ng/ml。216各本院健康献血队员中有81. 6%含有TG。     

单克隆抗体ELISA间接夹心法检测HFRS病人血清IgM和IgG抗体的研究

肾综合征出血热(HFRS)早期临床症状不典型,因此在病人血清中检出特异性抗体,特别是IgM抗体,对辅助临床早期诊断和流行病学监测均有重要意义。间接免疫荧光法(IFAT )和免疫酶染色法,虽已被广泛用于上述目的,但尚存在需用荧光显微镜或判定结果有一定主观性等不足之处。血凝抑制试验测出的则主要是IgG抗体。本文采用抗HFRS病毒单克隆抗体(McAb)和粗纯抗原建立了一种ELISA间接夹心法,以检测HFRS病人血清中IgM和lgG抗体,并与IFAT进行了比较。     

双单克隆抗体ELISA间接夹心法检测HFRS病毒抗原的实验研究

间接荧光抗体技术(IFAT)已广泛用于肾综合征出血热(HFRS)病毒抗原的检测,其不足之处是需用荧光显微镜,有一定主观性及不能检测可溶性抗原。本文建立了以同样的抗HFRS病毒单克隆抗体(McAb)作为包被和第二抗体,以酶标葡萄球菌A蛋白(SpA)作指示抗体的双McAb ELISA间接夹心法,初步用于感染细胞培养上清及组织标本中HFRS病毒抗原的检测,获得较满意结果。     

人源性单克隆抗体识别的血清卵巢癌相关抗原

应用体外致敏和ＤＮＡ转染技术构建的永生化Ｂ淋巴细胞系所产生的抗卵巢癌人源性单克隆抗体ＡＴ４为探针，所建立的夹心ＥＬＩＳＡ法测定了人血清卵巢癌相关抗原ＣＡＴ４。以２０例正常妇女血清的Ａ４９０均值加３个标准差（Ｘ±３Ｓ）之和（０．１９Ａ４９０Ｕ）为阳性阈值，对２０例卵巢癌和１２例卵巢囊肿病人的血清进行了检测，结果发现，卵巢癌为１５／２０阳性，卵巢囊肿２／１２阳性；此外，２例卵巢癌腹水及卵巢癌细胞ａｏ１０／１７培养上清液均为阳性。经统计学分析，ＡＴ４识别的卵巢癌相关抗原ＣＡＴ４存在于卵巢癌病人血清中，其敏感性为７５％，特异性为８３．３３％。因此，ＡＴ４－ＥＬＩＳＡ对于人血清卵巢癌相关抗原的测定，具有较好临床应用前景。     

单克隆抗体ELISA测定血浆富组氨酸糖蛋白的方法

建立用单克隆抗体（ＭｃＡｂ）酶联免疫吸附测定法（ＥＬＩＳＡ）测定血浆富组氨酸糖蛋白（ＨＲＧ）的方法。结果显示：ＭｃＡｂ３Ｃ６Ｆ３包被浓度为１０μｇ·ｍｌ－１，单抗酶标结合物（ＭｃＡｂ９Ｅ７Ｃ９ＨＲＰ）作１∶２００稀释时标准曲线最理想；最低检出限为１ｎｇ·ｍｌ－１，批内ＣＶ８２％，批间ＣＶ１１５％，回收率为８９１％，测定范围为２５～８０ｎｇ·ｍｌ－１；用该法测定４０例正常人血浆ＨＲＧ为（１１０３±９７）ｍｇ·Ｌ－１，２４例肝硬化患者血浆ＨＲＧ为（７９５±１２６）ｍｇ·Ｌ－１。该法的特异性强，且方便而准确。     

抗赭曲霉毒素A单克隆抗体的制备及其ELISA检测方法的建立

目的制备抗赭曲霉毒素A（OA）的单克隆抗体（McAb）并对其进行初步鉴定,在此基础上建立竞争抑制酶联免疫吸附试验（ELISA）用于OA的检测。方法采用小剂量长周期的免疫方案,以OA 牛血清白蛋白（BSA）偶联物免疫雌性BALB/c小鼠,采用细胞融合法获得分泌抗OA的McAb的杂交瘤细胞株,用竞争抑制ELISA法进一步检测McAb的特异性,腹水诱生法大量制备McAb,以OA为竞争抗原,建立检测OA的竞争抑制ELISA。结果OA BSA免疫的BALB/c小鼠血清效价为1:512?000,与BSA有强烈的交叉反应。细胞融合后,ELISA筛选抗体分泌阳性的杂交瘤细胞株,抗OA BSA的McAb与BSA的交叉反应率仅为3.5%,对分泌抗OA BSA特异的McAb的细胞株经3轮克隆化,抗体分泌阳性率达到100%,建立了1株能稳定分泌抗OA BSA McAb的杂交瘤细胞株,竞争抑制法进一步证明了该抗体是特异针对OA的,腹水诱生法制备了大量的McAb。竞争抑制ELISA线性范围为0.24～125?ng/mL,线性方程y=-0.113?2logx+0.901?6,相关系数r=0.98,最低检出浓度为0.24?ng/mL。样品的加标回收率为97.07%～107.83%。结论获得了分泌抗OA的McAb的杂交瘤细胞株,建立了OA检测的简单、灵敏、高效的ELISA检测方法。     

抗人C1q单克隆抗体检测方法——C1q-ELISA的建立

为检测抗人C1q单克隆抗体,我们建立了固相C1q-ELISA。经取代试验、阻断试验及交叉试验证明本法具有特异性;同时用C1q-ELISA及双向免疫扩散试验检测15份鼠抗人C1q血清抗体滴度,表明C1q-ELISA法较双向免疫扩散法高20156倍,用6份血清试验批内及批间的变异系数范围,分别为1.8～6.5％及6.2～16.5％,说明有较好的重现性。因而,本法适用于杂交瘤细胞上清中抗人C1q单克隆抗体的检测。     

神经系统疾病患者血清和脑脊液髓鞘碱性蛋白及其抗体的ELISA定量研究

用简易的髓鞘碱性蛋白（ＭＢＰ）及其抗体（Ａｎｔｉ－ＭＢＰ）酶联免疫吸附定量测定（ＥＬＩＳＡ）法对６组共３３７例神经系统疾病患者进行检测，其中脊髓压迫症（ＣＭＰ）３６例，多发性硬化（ＭＳ）３３例，脑血管疾病（ＣＶＤ）３４例，中枢神经系统感染性疾病（ＩＤ）３１例，癫痫（ＥＰ）１６１例和其他神经系统疾病（ＯＮＤ）４２例。结果显示：ＣＭＰ、ＭＳ．ＣＶＤ、ＩＤ和ＥＰ５组血清ＭＢＰ均值明显高于ＯＮＤ组（Ｐ＜０．０１），其中又以急性外伤所致脊柱骨折伴截瘫为主（３３例）的ＣＭＰ患者血清ＭＢＰ值最高，与ＭＳ组比较Ｐ＜０．０５，与ＣＶＤ、ＩＤ和ＥＰ组比较Ｐ＜０．０１。ＣＶＤ患者ＣＳＦＭＢＰ均值也明显高于ＯＮＤ组（Ｐ＜０．０５）。本法检测６组血清和ＣＳＦ的Ａｎｔｉ－ＭＢＰ含量差异不显著（Ｐ＞０．０５）。     

竞争性ELISA方法检测小鼠血清中的P53蛋白

目的建立动物组织内P53蛋白的免疫检测分析方法,为P53生物药物的代谢分布研究提供检测手段.方法辣根过氧化物酶(HRP)标记抗P53蛋白单克隆抗体3P40,应用标记后的抗体及重组P53蛋白的检测,建立竞争性ELISA检测方法;应用此方法建立血清样品中P53蛋白标准曲线,测定腹腔注射P53后不同时间小鼠血清中P53浓度....     

抗人AFP单克隆抗体酶联免疫检测法的建立

本文报道用抗人甲胎蛋白单克隆抗体标记辣根过氧化物酶以纯化之兔抗人ＡＦＰ多克隆抗体包被微孔条板，建立用于检测血清中ＡＦＰ的酶酶免疫法。结果表明：该方法具有特异、敏感、重复性好（变异系数〈１０％）和检测范围宽的优点。在８６例临床血清标本的检测中，本方法与放射免疫法的结果相结合。     

ELISA法检测TORCH的研究

目的:为临床医生监控妊娠受TORCH感染的风险,提供了有效的、可靠的检测手段。方法:酶联免疫法。在微孔板上包被有抗人IGM抗体,在加入样本后,进行孵育,样本中含有的IGM抗体就会被微孔上包被的抗人IGM单克隆抗体所捕获。经洗涤将样品中所有其它成分去除后,加入抗原与辣根过氧化物酶标记的特异性抗体形成的免疫复合物。孵育后,清洗微孔以除去未结合的复合物,然后加入色原/底物。在有结合复合物存在下,无色底物被水解为可检测其光密度值、并与样品中存在的抗体数量成比例的有色终产物。结果:临界值(C ut-off,co)=NC+0.250 S/Co<1.0阴性S/Co 1.0-1.2灰区S/Co>1.2阳性。结论:用ELISA法检测TORCH特异性IgM抗体用于诊断急性/原发病毒具有重要价值。     

髓系单克隆抗体临床应用的研究

使用一组髓系、淋系MoAb_(?)和APAAP免疫酶标法,检测16例初发AML和9例FAB难以分类AL免疫表型。结果显示:某些单抗表型与AML亚型和临床参数(WBC≥50×10~9/L,脾浸润)相关;但表达DR和CD_(13)的AML完全缓解率低;Ly~+AML M_4或M_s可能是1组临床预后更不良的亚型。应用髓系单抗诊断AML特殊亚型(M_0,K_3,M_7)较其它方法方便,迅速。     

血清肿瘤标志物检测的临床意义

目的　研究肿瘤标志物单独检测或联合检测以及监测复发或转移的意义。方法　应用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清肿瘤标志物CEA、CA153、CA199。结果　CA199、CEA联合检测在肺癌、肝胰癌组并不比单独检测有意义,而CA199对肝胰癌特异性较高,阳性检出率达80%以上。CEA、CA153联合检测在肺、乳癌、胃肠癌组同样并不比单独检测有意义。CEA单独检测对胃癌有辅助作用,CA153对肺、乳腺癌有辅助作用。结论　虽然血清肿瘤标志物单独检测对某些肿瘤有显著意义,但是联合检测应该是临床应用的方向,这对肿瘤患者的监控、及时治疗起到重要作用。     

ELISA法检测人血清抗牛血白蛋白抗体

青少年胰岛素依赖型糖尿病是一种自身免疫住疾病。并且有文献报道，青少年糖尿病患者与其在婴儿期饮用牛奶有关，新疆地区牛奶供应充足，婴幼儿饮用牛奶方便，可能产生抗牛血白蛋白抗体。为此我们设计了酶联免疫法（ＥＬＩＳＡ）检测人血清抗牛血白蛋白抗体，经检测５００例年龄在出生后２个月～３０岁的婴幼儿及青少年血清样品，检出３０例阳性样品，占６％。抗牛血白蛋白抗体与青少年糖尿病的关系有待进一步研究。     

单克隆抗体AU14—1—ELISA测定可溶性宫颈癌抗原方法的建立

用过碘酸钠氧化改良法，将辣根过氧化物酶（HRP）标记抗宫颈癌单克隆抗体AU14-1。用该酶结合物及AU14-1建立测定可溶性宫颈癌抗原的夹心ELISA，并对其进行方法学评价。包括直线相关性、灵敏度，重复性和特异性试验，评价结果表明AU14-1ELISA符合临床应用的要求。     

高亲和力抗乙型肝炎表面抗原单克隆抗体制备及检测变异HBsAg方法的建立

目的制备抗乙型肝炎表面抗原(HBsAg)单克隆抗体,建立检测变异HBsAg的方法。方法用血源HB-sAg免疫BALB/c小鼠,制备可以识别变异HBsAg的抗-HBs单抗。筛选出可以较好识别变异HBsAg的单抗mAb1,优化该抗体ELISA检测HBsAg的方法,与2种HBsAg检测试剂比较检测变异HBsAg的能力。对6份临床样品进行检测及序列分析,以证实方法的可靠性。结果经过筛选,得到1种可以较好识别包括G145R在内的大多数变异HB-sAg的单抗。检测变异HBsAg的能力优于市售HBsAg诊断试剂。结论制备的单抗可以用于ELISA检测变异HB-sAg,减少HBsAg变异株的漏检率。