人类线粒体tRNAs基因在CagA阳性Hp培养滤液诱导转化的胃上皮细胞中表达

目的 研究CagA阳性Hp培养滤液对人胃粘膜上皮细胞（GES－1）作用的机制。方法 将CagA阳性Hp培养滤液诱导恶性转化的GES－1细胞与CagA阴性Hp培养滤液处理的GES－1细胞进行mRNA差异显示,以寻找Hp致胃癌发病的相关基因。结果 mRNA差异显示片断之一命名为PFN2,仅在Hp(CagA^ )培养滤液处理的GES－1细胞中表达,斑点杂交结果与之一致。与Gene Bank资料序列同源性比较分析提示PFN2与人类线粒体tRNAs同源性100％,即为人类线粒体tRNAs基因的一部分。结论 人类线粒体tRNAs基因可能参与了Hp的CagA诱导的胃上皮细胞恶性转化过程。     

CagA基因阳性Hp培养滤液对人胃粘膜上皮细胞系DNA损伤作用

目的 研究 CagA阳性幽门螺杆菌（Hp）培养滤液对人胃粘膜上皮细胞（GES－1）DNA的损伤作用。方法 制备Hp培养滤液,PCR鉴定CagA基因。采用单细胞微凝胶电泳观察Hp（CagA＋）培养滤液对GES－1细胞DNA的损伤作用。结果 Hp（CagA＋）培养滤流可使GES－1细胞形成彗星现象。结论 Hp（CagA＋）培养滤液可以导致GES－1细胞的DNA损伤。DNA损伤可能是CagA诱导GES－1细胞恶性转化的机制之一。     

腺病毒E1A基因对吸烟所致肺泡上皮细胞IL-8表达的影响

目的 探讨腺病毒E1A基因对吸烟所致肺泡上皮细胞IL-8表达的影响。方法 通过脂质体转染的方法，将腺病毒E1A基因转染肺泡上皮细胞(A549细胞)，经G418筛选、Western blot鉴定E1A阳性表达A549细胞单克隆，不同浓度的香烟提取物(CSE)活化，测定细胞IL-8 mRNA表达和上清液中IL-8浓度。结果 与未转染和对照质粒转染A549细胞相比较，经CSE活化后E1A阳性表达A549细胞IL-8 mRNA表达和蛋白释放显著增加。结论 腺病毒E1A基因显著增加吸烟所致的肺泡上皮细胞IL-8表达，提示腺病毒潜伏感染可能通过放大吸烟所致的气道炎症反应在慢性阻塞性肺疾病的发病中发挥重要作用。     

mRNA差异显示技术在紫杉醇诱导的表达基因克隆中的应用

作者应用mRNA差异显示、DNA序列分析和Northern杂交技术，对紫杉醇处理人乳癌细胞诱导的表达基困进行cDNA克隆研究，12个克隆有明确的mRNA水平表达改变，其中6个cDNA克隆核旮酸序列与已知的cDNA序列有较高的同源性，其余6个尚无同源性基因。克隆C3P3与人腺苷基蛋氨酸合成酶基因序列同源性达99％，紫杉醇诱导该酶基因转录活动和基因产物活性增高。提示mRNA差异显示技术在筛选mRNA水平表达差异的基因cDNA克隆研究中是可行的和有效的。     

腺病毒E1A基因对吸烟所致肺泡上皮细胞IL-8表达的影响

目的探讨腺病毒E1A基因对吸烟所致肺泡上皮细胞IL-8表达的影响.方法通过脂质体转染的方法,将腺病毒E1A基因转染肺泡上皮细胞(A549细胞),经G418筛选、Western blot鉴定E1A阳性表达A549细胞单克隆,不同浓度的香烟提取物(CSE)活化,测定细胞IL-8 mRNA表达和上清液中IL-8浓度.结果与未转染和对照质粒转染A549细胞相比较,经CSE活化后E1A阳性表达A549细胞IL-8mRNA表达和蛋白释放显著增加.结论腺病毒E1A基因显著增加吸烟所致的肺泡上皮细胞IL-8表达,提示腺病毒潜伏感染可能通过放大吸烟所致的气道炎症反应在慢性阻塞性肺疾病的发病中发挥重要作用.     

幽门螺杆菌cagA基因片段原核表达载体的构建及其cagA基因和CagA蛋白及感染者血清抗体的检测

目的:构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)cagA基因片段的原核表达系统,建立ELISA检测CagA及其抗体,了解表达CagA的Hp菌株(CagA Hp)感染与所致疾病种类的关系.方法:从快速尿素酶试验阳性的156例患者胃黏膜活检标本中分离Hp.采用PCR检测109株Hp cagA基因,并从临床菌株Y06中扩增2 148 bp的cagA基因片段(cagA1).构建cagA1原核表达系统,用SDS-PAGE检查目的重组蛋白(rCagA1)的表达情况,用Western blot和免疫双扩散试验鉴定rCagA1的免疫反应性和抗原性.建立ELISA,检测109株Hp CagA表达和相应患者血清中CagA抗体.分析CagA Hp感染与胃炎和消化性溃疡的关系.结果:80.8%胃黏膜活检标本中分离出Hp(126/156),97.2%的Hp菌株(106/109)cagA基因阳性.与文献报道比较,所克隆的cagA1片段核苷酸和氨基酸序列同源性分别为94.83%和93.30%.所构建的原核表达系统表达的rCagA1量约为细菌总蛋白的30.0%.rCagA1能与Hp全菌抗体发生结合反应,免疫家兔产生双扩散效价为1∶4的抗体.92.6%菌株(101/109)可表达CagA,88.1% 患者(96/109)血清CagA抗体阳性.消化性溃疡标本中CagA Hp菌株分离阳性率(97.9%)高于胃炎标本(88.5%),但无统计学差异(χ2=3.48,P>0.05).结论:本实验构建的原核表达系统表达的rCagA1有良好的免疫反应性和抗原性,建立的ELISA可用于Hp CagA及其抗体的检测,分离的Hp菌株cagA基因携带率和CagA表达率均很高.消化性溃疡和胃炎与其感染的Hp是否表达CagA无明显关系.     

幽门螺杆菌及其CagA基因感染与胃癌关系的研究

目的:通过检测胃癌和浅表性胃炎组织幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)和细胞毒素相关蛋白基因(CagA),探讨Hp 及CagA基因与胃癌相关性及Hp形成胃癌的可能机制.方法:应用快速尿素酶试验和组织切片革兰染色和血清Hp CagA抗体检测Hp,用PCR检测Hp CagA基因.结果:慢性浅表性胃炎、胃癌组织中Hp检出率分别为45.9%和54.8%,两者差异无显著性(P>0.05),两种组织中Hp CagA检出率分别为35.3%和77.5%,两者差异有显著性(P<0.005).结论:胃癌组织与浅表性胃炎组Hp感染相比差异无显著性,胃癌组织中Hp CagA基因检出率明显高于浅表性胃炎组,Hp CagA基因与胃癌有一定相关性,Hp CagA基因可能涉及胃癌的形成机制.     

幽门螺杆菌CagA及其致病作用的研究进展

CagA是幽门螺杆菌最重要的毒力因子之一，CagA阳性的Hp菌株同胃炎、萎缩性胃炎、十二指肠疾病和胃癌等消化道疾病相关。本文综述了Hp的毒力因子CagA的基因组、CagA定植于胃上皮细胞、CagA酪氨酸磷酸化位点、CagA入胞的靶向以及CagA多态性、毒性与胃癌的关系的近年研究状况。     

六亚甲基二乙酰胺体外诱导HL-60 细胞分化的机制

目的探讨六亚甲基二乙酰胺(HMBA)体外诱导急性早幼粒细胞白血病细胞株HL-60细胞分化的分子机制。方法HL-60细胞与HMBA体外培养3d；运用流式细胞仪测定细胞分化抗原CD11b、CD14及细胞内Cyclin D、Cyclin E、p27抗原；半定量PT-PCR分析c-myc、Rb基因 mRNA的表达。结果HL-60细胞经HMBA处理后显示CD11b表达显著增高；胞内抗原Cyclin E表达显著下降，Cyclin D、p27表达显著增高，并呈剂量依赖关系；RT-PCR反应显示c-myc mRNA表达显著下调，Rb mRNA表达显著增高。结论HMBA能体外诱导HL-60细胞分化，其机制可能是通过下调Cyclin E、上调p27；同时使得增殖分化相关基因c-myc mRNA表达下调、Rb mRNA表达上调而使细胞阻滞于G1期，抑制细胞增殖，诱导细胞分化。     

应用PCR技术检测胃炎患者Hp的Ure基因和CagA基因

目的：探讨浅表性胃炎、胃溃疡，萎缩性胃炎与幽门螺杆菌（Hp)的尿素酶（Ure）基因和细胞毒素蛋白（CagA）基因的关系。方法：应用PCR技术，选择与Hp的Ure基因和CagA基因3’末端核苷酸互补的两对引物，进行PCR扩增，检测不同胃炎患者的Ure基因和CagA基因。结果：胃溃疡患者Ure阳性率45．7％，CagA阳性率28．5％，浅表性胃炎Ure阳性率31．4％，CagA阳性率20．0％，萎缩性胃炎Ure阳性率20．0％，CagA阳性率53．3％，结论：幽门螺杆菌的不同菌株会引起胃炎的不同临床表现。     

幽门螺杆菌对胃黏膜上皮细胞自噬和凋亡的影响

目的：探讨幽门螺杆菌（Hp）对胃黏膜上皮细胞（GES-1）自噬和凋亡的影响。方法：Hp与GES-1体外共培养,同时设立雷帕霉素（RAPA）、3-甲基腺嘌呤（3-MA）干预组及空白对照组,于2、4、6、12及24 h终止感染,通过免疫蛋白印迹、荧光染色、透射电镜、流式细胞术及细胞内活菌计数等方法观察Hp对GES-1自噬和凋亡的影响。结果：Hp＋GES-1组在2 h出现自噬标志蛋白LC3-Ⅱ表达及细胞内荧光自噬颗粒,透射电镜观察到细胞内出现双层或多层膜包裹的自噬小体样结构,细胞自噬在4 h达高峰,感染中后期逐渐减弱并消失;RAPA＋Hp＋GES-1组细胞自噬程度进一步增强,细胞凋亡率及细胞内活菌数均降低（P〈0.05-P〈0.01）;3-MA＋Hp＋GES-1组细胞自噬强度显著降低,而其细胞凋亡率和细胞内活菌数均明显升高（P 〈0.01）。结论：Hp可在感染早期诱导GES-1自噬;RAPA和3-MA可增强或降低自噬发生程度,从而减轻或促进细胞损伤。     

幽门螺杆菌CagA蛋白肽段的基因克隆、表达及抗原性检测

目的 克隆幽门螺杆菌CagA蛋白肽段的基因，确定CagA蛋白与相应抗体亲和力最强的肽段。方法 根据幽门螺杆菌cagA全基因序列以DNAMAN软件设计5对引物，采用PCR方法扩增出5条门螺杆菌cagA基因片段。将PCR扩增产物插入原核表达载体pGEX－3X并转化至大脉杆菌Top10中，形成5种重组质粒。经PCR、双酶切和测序鉴定后，以异丙硫半乳糖苷（IPTG）诱导其表达CagA蛋白肽段。包涵体经8mol/L尿素初步纯化后，运用ELISA方法检测其抗原性并确定相应抗体亲和力量强的CagA蛋白肽段。结果 5条cagA基因片段在大肠杆菌中都得到了表达，表达的蛋白均具有强弱不等的抗原性，其中66kD的蛋白肽段与抗CagA抗体亲和力最强。结论 66kD的蛋白肽段与抗CagA抗体亲和力最强。     

Effects of broth culture filtrate protein of VacA+ Helicobacter pylori on the proliferation and apoptosis of gastric epithelial cells

Background Infection with Helicobacterpylori (H.pylori) may lead to chronic inflammation of the stomach epithelium,mucosal atrophy,imbalance of proliferation and apoptosis of epithelial cells; resultin...     

EB病毒BARF1基因对人胃上皮细胞恶性转化的作用

目的 探讨EB病毒编码BARF1基因在人胃上皮细胞恶性转化中的作用.方法 用携带BARF1基因的真核载体PIRES2-EGFP/BARF1,转染人胃上皮细胞系GES-1,通过G418筛选,获得稳定表达BARF1基因的人胃上皮细胞株.GES-1细胞被分为4组,包括1个转染BARF1基因的细胞组,1个转染BARF1基因并...     

EB病毒转化人胃上皮细胞GES-1中bcl-2基因的表达

目的 研究EBV感染人胃上皮细胞系GES-1后bcl-2基因的表达状况,探讨6cl-2基因在EBV相关胃癌发生中所起的作用.方法 采用携带新霉素抗性(NEOr)基因的重组EBV产生细胞系Akata 1061以密切接触法感染人胃上皮细胞系GES-1,经有限稀释法克隆和G418筛选获得感染和转染细胞克隆,用pcDNA3空载体质粒转染的人胃上皮细胞系GES-1细胞作对照:采用免疫细胞化学染色(ICC)法测定EBNA1基因的表达以鉴定EBV感染细胞克隆及测定EBV感染细胞中Bcl-2蛋白的表达.结果 与对照相比较,感染细胞中Bcl-2蛋白的表达阳性.结论 EBV感染可使人胃上皮细胞Bcl-2蛋白表达增高,EBv对人胃上皮细胞的转化作用可能与bcl-2基因的过度表达有关.     

Study of the relationship between the Helicobacter pylori and CagA gene in patients with gastric carcinomaG2

目的:通过检测胃癌和浅表性胃炎组织幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)和细胞毒素相关蛋白基因(CagA),探讨Hp及CagA基因与胃癌相关性及Hp形成胃癌的可能机制。方法:应用快速尿素酶试验和组织切片革兰染色和血清HpCagA抗体检测Hp,用PCR检测HpCagA基因。结果:慢性浅表性胃炎、胃癌组织中Hp检出率分别为45.9%和54.8%,两者差异无显著性(P>0.05),两种组织中HpCagA检出率分别为35.3%和77.5%,两者差异有显著性(P<0.005)。结论:胃癌组织与浅表性胃炎组Hp感染相比差异无显著性,胃癌组织中HpCagA基因检出率明显高于浅表性胃炎组,HpCagA基因与胃癌有一定相关性,HpCagA基因可能涉及胃癌的形成机制。     

幽门螺杆菌对CCAAT增强子结合蛋白α和Cx43表达的影响及其在胃癌发生中的作用

目的：探讨CCAAT增强子结合蛋白α(CCAAT enhancer binding protein α,C/EBPα)和间隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)表达改变在H. pylori致胃癌中的作用。方法：扩大培养不同胃黏膜上皮细胞株(GES-1细胞、AGS细胞、SGC-7901细胞);胃镜下采集H. pylori感染慢性非萎缩性胃炎患者6例、胃癌前病变和胃癌患者各12例胃黏膜组织;采用real-time PCR法检测上述细胞和组织中C/EBPα和Cx43 mRNA的表达;同时将东亚型CagA+H. pylori与GES-1细胞共培养24和48 h为实验组,以不加H. pylori的GES-1细胞株为对照组,培养24和48 h;采用real-time PCR法和Western印迹检测C/EBPα和Cx43 mRNA和蛋白的表达。结果：C/EBPα和Cx43 mRNA在AGS细胞、SGC-7901细胞中的表达均显著低于GES-1细胞(均P<0.05),且两者在SGC-7901细胞中的表达量较AGS细胞更低(均P<0.05);C/EBPα和Cx43 mRNA在胃癌胃黏膜组织中的表达明显低于慢性非萎缩性胃炎(均P<0.05)和胃癌前病变(均P<0.05),C/EBPα与Cx43表达呈正相关(胃癌前病变：r=0.679;胃癌：r=0.792,均P<0.05);实验组24,48 h的 C/EBPα和CX43表达量在转录及蛋白水平均低于对照组(均P<0.05),且48 h表达量均低于24 h(均P<0.05)。结论：H. pylori感染可下调胃黏膜上皮细胞C/EBPα和CX43的表达,这可能与胃癌发生有关。     

不同类型幽门螺杆菌对GES-1细胞GJIC功能的影响

目的:观察不同类型幽门螺杆茵(Helicobacter pylori,H.pylori)对GES-1细胞间隙连接通讯功能(gap junction intercellular communication,GJIC)的影响,探讨与GJIC功能异常有关的H.pylori菌株类型.方法:将临床培养分离的不同H.pylori茵...