D-半乳糖所致衰老小鼠抗原提呈细胞的改变及其意义

目的:研究D-半乳糖所致衰老小鼠专职性抗原提呈细胞的改变及其意义。方法:取健康昆明雌性小鼠,2月龄,运用D-半乳糖建立衰老小鼠模型并进行生物学鉴定后,采用免疫荧光和流式细胞术测定脾脏中巨噬细胞CD11b、树突状细胞CD11c、B淋巴细胞CD40的表达;采用免疫组化法测定脾脏组织Fas表达的改变。结果:模型组小鼠巨噬细胞CD11b+/MHC-Ⅱ+CD11b+的百分率为9.78±1.42,与对照组10.76±1.93相比下降(P<0.05);模型组小鼠树突状细胞CD11c+/MHC-Ⅱ+CD11c+、B淋巴细胞CD40+的百分率分别为5.34±0.74、43.60±8.06,与对照组7.88±1.73、56.70±10.97相比明显下降(P<0.01)。模型组小鼠脾脏组织Fas表达增加。结论:D-半乳糖所致衰老小鼠脾脏各种专职性抗原提呈细胞减少,脾脏组织Fas的表达出现渐进性增加。     

人β-防御素2联合乙肝疫苗对小鼠免疫效应的研究

目的:探讨人β-防御素2加强乙肝疫苗对小鼠免疫应答的作用。方法:采用乙肝疫苗2μg/次/只联合HBD2基因真核表达质粒pEGF-C1/HBD2 100μg/次/只,按间隔2周、共免疫3次的左后肢股四头肌肌肉接种方案免疫BALB/c小鼠,同时设立相应的对照。免疫后用双抗原夹心ELISA法测小鼠血清HBsAb水平。采用流式细胞仪检测脾脏CD4+T和CD8+T细胞百分率及CD4+/CD8+比值。应用CCK8试剂盒检测脾淋巴细胞在不同抗原刺激下的增殖反应。结果:pEGF-C1/HBD2质粒联合乙肝疫苗免疫小鼠抗体水平明显升高,CD4+T细胞百分率比其他免疫组都高,脾淋巴细胞体外增殖实验明显。与其他各免疫组相比,pEGF-C1空质粒联合乙肝疫苗免疫组抗体水平和淋巴细胞体外增殖情况及CD4+T细胞百分率都较低。结论:人β-防御素-2对乙肝疫苗在小鼠中的免疫功能有一定增强作用。     

NOD/SCID小鼠胎盘细胞内细胞因子表达及其与妊娠转归的关系

目的：研究Th1和Th2型细胞因子在胎盘淋巴细胞内的表达状况及其与NOD/SCID孕鼠妊娠转归的关系。 方法： 比较BALB/c和NOD/SCID小鼠孕13.5 d胚胎吸收率(RR), 采用4色流式细胞术检测胎盘淋巴细胞内Th1型(TNF-α和IL-2)和Th2型(IL-10)细胞因子表达率。 结果： 虽然NOD/SCID小鼠存在多重免疫缺陷，但BALB/c和NOD/SCID小鼠孕13.5 d RR无显著差异；NOD/SCID×NOD/SCID母-胎界面CD8+IL-10+/CD8+细胞百分率显著高于BALB/c×BALB/c妊娠模型(P<0.01), 而CD4和CD8阳性细胞内TNF-α和IL-2表达水平均无显著差异。 结论： 母-胎界面CD8+IL-10+/CD8+细胞百分率自发性升高可能与NOD/SCID小鼠基本正常的生育力有关。     

细粒棘球蚴感染中阻断TGF-β1受体对淋巴细胞的影响

目的:观察TGF-β1对细粒棘球蚴体外与BALB/c小鼠T淋巴细胞培养的影响。方法:阻断剂组:BALB/c小鼠脾细胞+细粒棘球蚴+SB525334共培养;对照组:BALB/c小鼠脾细胞+细粒棘球蚴+PBS共培养;空白对照:BALB/c小鼠脾细胞+RPMI-1640培养基+SB525334共培养。方法:48 h收集淋巴细胞,流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群、CD4+CD25+T细胞的数量、NK细胞的数量及其活性受体NKG2D的表达;乳酸脱氢酶法检测NK细胞的杀伤活性。结果:体外阻断TGF-β1受体后,引起细粒棘球蚴介导的CD4+T细胞数量升高、CD8+T细胞数量降低、CD4+/CD8+T细胞比值升高、CD4+CD25+T细胞数量减少、NK细胞活性受体NKG2D的表达增加、NK细胞对靶细胞Yac-1的裂解率增加和NK细胞活性及其活性受体NKG2D成正相关。结论:体外阻断TGF-β1受体可提高T淋巴细胞免疫,从而抵制细粒棘球蚴的感染。     

多聚次黄苷酸-胞苷酸诱发性小鼠流产模型CD200+CK7+滋养层细胞分析

目的：在多聚次黄苷酸-胞苷酸［poly (I∶C)］诱发性流产小鼠模型中研究CD200+CK7+细胞与胚胎吸收的关系。 方法:采用Balb/c×C57BL/6和Balb/c×Balb/c小鼠，在孕早期注射poly (I∶C)以建立诱发性流产模型，并采用流式细胞术检测胎盘CD200+CK7+/CK7+细胞百分率和CD200+CK7+细胞的绝对数，采用免疫组化法对CD200+细胞在母-胎界面的分布情况进行定位检测。 结果: 在每例检测104个细胞的情况下，poly (I∶C)处理组上述细胞百分率和绝对数均显著低于对照组(Balb/c×C57BL/6小鼠：6.3%±6.2% vs 36.1%±9.3%, P<0.01; 140±111 vs 1 941±809, P<0.01。Balb/c×Balb/c小鼠：8.5%±4.8% vs 26.1%±8.0%, P<0.01; 701±499 vs 1 886±1 112, P<0.05)。与此相应，poly (I∶C)处理组孕13.5 d的胚胎吸收率也显著增高(Balb/c×C57BL/6小鼠: 从9.1%升至37.0%, P<0.01; Balb/c×Balb/c小鼠: 从5.8%升至29.0%, P<0.01)。免疫组化法检测发现，这些CD200+细胞主要分布在胎盘和子宫交界处的胎盘组织中。 结论: 在母-胎界面CK7+细胞群中CD200分子适当水平的表达，对于维持小鼠妊娠免疫耐受过程可能具有重要意义。     

Balb/c小鼠脾脏B10细胞分析

目的分析年龄、性别和环境因素对Balb/c小鼠脾脏B10细胞的影响。方法以年龄、性别和不同环境对小鼠进行分组,流式细胞仪分析小鼠脾脏CD5+CD1dhiB细胞的比例。体外培养小鼠脾细胞,在不加任何刺激或LPS+PIM刺激5 h后,流式细胞仪分析CD19+IL-10+B细胞比例。结果 6月龄小鼠脾脏中CD5+CD1dhiB细胞比例平均为2.9%,明显高于2月龄小鼠的2.28%(P<0.05);在不加任何刺激的情况下,两组小鼠脾脏中IL-10+B细胞的比例均很低且无统计学差异(P>0.05);加入LPS+PIM刺激5 h后,6月龄小鼠脾脏中IL-10+B细胞的比例平均为1.93%,高于2月龄小鼠的1.25%(P<0.05)。细胞表型和细胞内IL-10染色分析均显示年龄匹配的雌性和雄性小鼠脾脏B10细胞的表达无明显差异(P>0.05)。普通级和SPF级小鼠CD5+CD1dhiB细胞和LPS+PIM诱导的IL-10+B细胞比例无明显差异(P>0.05),而在不加任何刺激的情况下,普通级小鼠脾脏IL-10+B细胞比例平均为0.87%,明显高于SPF小鼠的0.38%(P<0.01)。结论脾脏B10细胞可随Balb/c小鼠年龄增大而扩增,B10细胞的表达与性别差异无明显关系,微生物环境可促进B10细胞的活化,但对B10细胞总数无明显影响。     

卵清蛋白免疫耐受因子转移免疫耐受活性的研究

目的:探讨卵清蛋白免疫耐受因子(OVA immune tolerance factors,OVA ITFs)转移抗原特异性外周免疫耐受的特性.方法:分别从OVA耐受鼠或空白小鼠的脾淋巴细胞裂解液中分离分子量小于3 kD的组分,即为OVA ITFs或OVA ITFscontorol.试验BALB/c小鼠分成5组,A、B、C、D组经尾静脉分别注射OVA ITFs、OVA ITFs control、OVA耐受鼠脾淋巴细胞或PBS给正常BALB/c小鼠,E组不做任何处理.流式细胞术检测转移前后受体鼠脾脏CD4+CD25+T细胞亚群的比例变化,MTT法检测受体鼠OVA特异性T淋巴细胞的增殖情况,夹心ELISA法测定培养上清中IL-10、TGF-β1的水平.结果:转移OVA ITFs或OVA耐受鼠脾淋巴细胞后,受体鼠脾脏CD4+CD25+T细胞亚群在总CD4+T细胞的比例分别为(15.32±1.03)%和(15.35±0.62)%,与转移前(9.97±1.38)%相比显著上升(P＜0.05);OVA特异性淋巴细胞增殖刺激指数(Stimulation Index,SI)分别为0.699±0.05和0.704±0.03,与PBS对照组(1.356±0.07)相比明显受到抑制(P＜0.05);培养上清中TGF-β1的分泌量分别为129.15±6.14和106.71±2.89 pg/ml,显著高于PKS对照组(52.82±3.68 pg/ml,P＜0.01),IL-10分泌量未检出.转移OVA ITFscontrol后,受体小鼠的CD4+CD25+T细胞比例、OVA特异性淋巴细胞增殖及TGF-β1、IL-10分泌量均无显著变化.结论:OVAITFs具有将OVA特异性免疫耐受传递给正常受体小鼠的特性.     

CD3/CD46共刺激通路调控同种移植免疫反应的实验研究

目的:探讨CD3/CD46共刺激通路对同种移植免疫反应的调控作用及其机制.方法:分离转人CD46的C57BL/6小鼠的脾脏淋巴细胞,采用MACS免疫磁珠分选CD4+T细胞,以阴性对照组作为对照,体外检测CD3、ConA、CD3/CD28、CD3/cD46、CD3/CD28/CD46共刺激对CD4+T细胞增殖的作用效果,并检测其细胞上清液中白细胞介素2(IL-2),γ-干扰素(γ-IFN),白细胞介素10(IL-10)和转化生长因子β(TGFβ-p)的水平,并以BALB/c小鼠的脾细胞作为刺激细胞,以转人CD46的c57BL/6小鼠的淋巴细胞作为反应细胞进行同种混合淋巴细胞培养,MMT法检测淋巴细胞增殖活性.结果:与CD3组或阴性对照组相比.ConA、CD3/CD28、CD3/CD46和CD3/CD28/CD46共刺激后,CD4+T细胞均出现显著增殖反应(P<0.05),而且CD3/CD28/CD48共刺激组的增殖活性较CD3/CD28或CD3/CD46共刺激组显著增高(P<0.05).CD3/CD28共刺激后,IL-2和γ-IFN水平较阴性对照组和CD3组显著升高(P<0.05),CD3/CD46共刺激后,IL-10和TGF-β水平较阴性对照组、ConA组、CD3组和CD3/CD28共刺激组显著升高(P<0.05).CD3/CD46共刺激后可以显著地抑制同种混合淋巴细胞的增殖反应(P<0.05).结论:CD3/CD46共刺激通路可以诱导CD4+T细胞产生IL-10和TGF-β,抑制同种移植免疫反应的发生.     

不同类型HBV感染者外周血Treg/Th17细胞的变化及意义

目的:探讨不同类型HBV感染者外周血中CD4+ Foxp3+ Treg/Th17细胞的变化及意义.方法:选取15例急性乙型肝炎(Acute Hepatitis B,AHB)患者、40例慢性乙型肝炎(Chronic hepatitis B,CHB)患者、40例无症状携带者(Asymptomatic HBV carriers,AsC)及30例健康对照者,分别采用流式细胞术、RT-PCR和ELISA检测外周血CD4+ Foxp3+ Treg/Th17细胞百分率、核转录因子foxhead winged-helix box protein 3 (Foxp3)/retinoid-related orphan receptor gamma-t (RORγt) mRNA的表达以及血浆转化生长因子-β1(Transforming growth factor-31,TGF-β1)/IL-17的水平.结果:AHB组患者CD4+ Foxp3+ Treg/CD4+T细胞百分率、Foxp3 mRNA及TGF-β1水平与正常对照组相比无明显差异(P＞0.05);而CD4+ IL-17 +/CD4+T细胞百分率、RORγtmRNA及IL-17水平与正常对照组相比明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).CHB组患者CD4+ Foxp3+ Treg/CD4+T细胞百分率、Foxp3 mRNA、TGF-31水平及CD4+ IL-17 +/CD4+T细胞百分率、RORγt mRNA、IL-17水平与正常对照组相比均明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05);与正常对照组相比,AsC组患者CD4+ Foxp3+ Treg/CD4+T细胞百分率、Foxp3 mR-NA、TGF-β1水平及CD4+ IL-17 +/CD4+T细胞百分率、RORγt mRNA、IL-17水平无明显差异(P＞0.05).结论:在不同类型HBV感染者外周血中Treg/Th17细胞失衡,Treg/Th17细胞可能与HBV感染的状态有关.     

CD8+耗竭T细胞在致死型约氏疟原虫感染Balb/c和C57BL/6中的差异表达及意义

目的 探讨致死型约氏疟原虫(Plasmodium yoelii17XL,P.y 17XL)感染Balb/c和C57BL/6小鼠脾脏CD8+耗竭T细胞的差异表达及意义。方法 采用新鲜P.y 17XL感染红细胞(1×106)腹腔感染Balb/c和C57BL/6小鼠,动态检测红细胞感染率并观察小鼠生存率。研磨法分离脾脏淋巴细胞。流式细胞术检测CD8+T细胞效应和耗竭细胞亚群数量和分泌IFN-γ和颗粒酶B(GB)水平。结果 P.y 17XL感染后第4～8天,Balb/c组红细胞感染率显著性升高且明显高于C57BL/6组(P0.001),C57BL/6组生存率明显高于Balb/c组(53.8%vs 0,P0.001)。感染后第5天流式结果显示,C57BL/6组CD8+CD44+CD62L-T细胞(P0.01)、CD8+IFN-γ+T细胞(P0.05)和CD8+GB+T细胞(P0.001)含量均显著高于Balb/c组。与C57BL/6组相比,Balb/c组CD8+PD-1+Tim-3+T细胞数量明显升高(P0.001),且GB荧光强度显著性降低(P0.05)。结论 P.y 17XNL红内期感染诱导产生CD8+PD-1+Tim-3+耗竭T细胞,其IFN-γ和GB分泌水平下调,进而影响原虫血症的控制。     

香加皮杠柳苷对荷瘤小鼠的免疫调节作用

目的:研究香加皮杠柳苷(CPP)对荷瘤小鼠的免疫调节作用及其作用机制.方法:建立BALB/c小鼠H22皮下移植瘤,观察低、中、高剂量CPP(0.25、0.50、1.00 mg/kg)对荷瘤小鼠免疫器官的影响,应用流式细胞术检测各组小鼠脾T淋巴细胞亚群的分布,应用MTT法检测ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖活性,用ELISA试剂盒测定各组荷瘤小鼠血清中细胞因子TNF-α、IL-2和IL-12的含量.结果:对照组荷瘤小鼠的胸腺指数及脾脏指数均明显低于未荷瘤正常小鼠(P<0.05),而CPP组荷瘤小鼠的胸腺指数及脾脏指数较对照组明显增高,甚至高于正常对照组(P<0.05).CPP对荷瘤小鼠体内CD8+T细胞数量无影响,但可明显上调CD3+、CD4+T细胞数及CD4+/CD8+比值,其中CD3+、CD4+细胞百分率与正常小鼠无差别(P>0.05),CD4+/CD8+比值高于正常小鼠(P<0.05).CPP可明显增强ConA诱导的荷瘤小鼠脾淋巴细胞的增殖能力,SI甚至超过正常对照组(P<0.05).不同剂量CPP组小鼠血清中TNF-α、IL-2和IL-12水平均较对照组明显增高(P<0.05),并随剂量增加呈升高趋势,至接近或超过正常小鼠水平.结论:CPP可保护荷瘤小鼠的免疫器官不受损害,并可明显提高CD4+T细胞百分率和CD4+/CD8+比值,增强荷瘤小鼠T细胞增殖能力,促进细胞因子TNF-α、IL-2和IL-12的产生,表明CPP具有显著的免疫增强作用.     

瘦素对小鼠乳腺癌调节性T细胞的影响

目的探讨瘦素对小鼠乳腺癌调节性T细胞的影响及生物学意义。方法培养4T1乳腺癌细胞株并接种于Balb/c小鼠建立乳腺癌模型,将成瘤小鼠随机分为对照组和实验组,分别用等量生理盐水(normal saline,NS)和瘦素(leptin)处理,监测小鼠肿瘤的生长;流式细胞技术检测各组Balb/c荷瘤小鼠外周血、淋巴结、脾脏中调节性T淋巴细胞的数量及比例变化;ELISA检测各组荷瘤小鼠血清TGF-β1、IL-10含量。结果与NS组比较,实验组肿瘤生长速度随瘦素质量浓度的增加而加快;外周血和脾脏中调节性T细胞比例随瘦素质量浓度的增加而升高(P0.05),淋巴结中调节性T细胞比例变化不明显(P0.05),血清中TGF-β1、IL-10的含量随瘦素质量浓度的增加而升高(P0.05)。结论瘦素通过上调乳腺肿瘤微环境中调节性T细胞的数量比例,分泌抑制因子,抑制机体肿瘤免疫,进而促进小鼠乳腺肿瘤的生长。     

TGF-β1诱导的调节性T细胞体内输注延长小鼠皮肤移植物存活

目的 利用TGF-β1体外诱导naYve T细胞分化为凋节性T细胞(Treg),通过体内输注延长小鼠皮肤移植物存活时间,并研究其相关机制. 方法 根据诱导条件不同分为3组:对照组(加入IL-2培养的C57BL/6小鼠T细胞)、MLR组(即混合淋巴细胞反应组,经同种抗原刺激活化的C57BL/6小鼠T细胞)和TGF-β组(经同种抗原刺激活化的C57BL/6小鼠T细胞,同时加入5.0ng/ml TGF-β1诱导).利用FACS检测CD4+CD25+T细胞比例,并用RT-PCR检测Foxp3的表达水平.建立小鼠皮肤移植模型,并于第0、l、2和3天输注上述细胞,观察皮肤移植物存活时间.术后第9天,取部分受鼠行移植物病理检测,用FACS检测脾脏中THl、TH2和CD4+CD25+Treg比例,并用Alamar Blue法检测淋巴细胞增殖能力. 结果 TGF-β组中CD4+CD25+T细胞比例高于对照组和MLR组(P<0.05),且其高表达Foxp3.将培养的细胞输注给受鼠后发现,输注MLR组细胞的受鼠其移植物平均存活时间(mean survival time,MST)为(9.4±1.3)d,低于对照组(P<0.05);而输注TGF-13组细胞小鼠MST为(22.8±1.9)d,较对照组和MLR组明显延长(P<0.05).病理检测亦显示TGF-β组受鼠移植物结构完整,无明显淋巴细胞浸润.FACS结果显示TGF-β组小鼠体内TH1细胞(CD4+TIM-3+)比例低于对照组和MLR组(P0.05),但低于对照组(P<0.05);而且TGF-β组中CD4+CD25+Treg比例明显高于对照组和MLR组(P<0.05).用Alamar Blue法检测受鼠外周淋巴细胞增殖活性显示,TGF-β组受鼠淋巴细胞增殖能力被明显抑制,低于对照组(P<0.05). 结论 TGF-β1可诱导T细胞分化为具有抑制能力的Treg将诱导后的细胞进行过继输注可使小鼠体内CD4+CD25+Treg比例升高,同时抑制TH1和TH2细胞分化扩增,并使得外周淋巴细胞增殖能力减弱,从而延长小鼠皮肤移植物存活时间.     

羧胺三唑增强小鼠脾脏淋巴细胞促进结肠癌细胞系MC38和C26凋亡

目的探讨羧胺三唑(CAI)直接或通过小鼠脾脏淋巴细胞间接对小鼠结肠癌细胞系(MC38和C26)存活和凋亡的影响。方法体外培养结肠癌细胞系MC38和C26细胞,分离小鼠脾脏淋巴细胞,MC38和C26细胞分别与小鼠脾脏淋巴细胞共培养,不同浓度CAI处理细胞。CCK-8法检测细胞存活,流式细胞测量术检测细胞凋亡以及小鼠脾脏淋巴细胞中CD4~+CD3~+ T细胞和CD8~+CD3~+ T细胞的比例。结果不同浓度CAI处理MC38和C26细胞后,活细胞数目减少(P0.05、P0.01和P0.001),凋亡率升高(P0.01和P0.001);MC38和C26细胞分别与小鼠脾脏淋巴细胞共培养48 h后,MC38和C26细胞数目减少(P0.001),凋亡率升高(P0.001);不同浓度CAI处理小鼠脾脏淋巴细胞共培养条件下的MC38和C26细胞48 h,与单独小鼠脾脏淋巴细胞处理相比,MC38和C26细胞数目进一步减少(P0.001),凋亡率进一步升高(P0.05和P0.001);不同浓度CAI处理小鼠脾脏淋巴细胞48 h后,小鼠脾脏淋巴细胞中CD4~+CD3~+ T细胞和CD8~+CD3~+ T细胞的比例显著升高(P0.05和P0.01)。结论 CAI抑制MC38和C26细胞存活、促进细胞凋亡,并可能通过升高小鼠脾脏淋巴细胞中CD4~+CD3~+ T细胞和CD8~+CD3~+ T细胞的比例增强小鼠脾脏淋巴细胞抑制MC38和C26细胞存活、促进细胞凋亡。     

新生期小鼠接种Aβ42的免疫特性研究

目的 观察新生期小鼠接种Aβ42后诱发的T细胞免疫效应变化,为下一步研究接种Aβ42影响小鼠认知功能做基础.方法 新生24 h内的SPF级C57BL/6小鼠随机分2组,每组12只,新生24 h内皮下多点免疫接种Aβ42(80μg)加等体积量弗氏佐剂,对照组接种生理盐水加等体积量弗氏佐剂,于生后第1、2周末再加强免疫1次,4周末摘眼球采血,无菌取出小鼠脾脏.ELISA法检测抗体量,细胞流式分析CD4+/CD8+细胞的比值与Th1/Th2细胞的比值.结果 Aβ42组的抗体量是( 31.03 +4.15) μg/mL,高于对照组(P＜0.01);与对照组小鼠脾脏细胞中CD4+/CD8+细胞的比值(0.55±0.19)相比,Aβ42组CD4+/CD8+细胞的比值(0.89±0.28)较高,Aβ42组小鼠脾脏细胞Th1/Th2细胞的比值(6.54±1.16)低于对照组小鼠脾脏细胞Th1/Th2细胞的比值(8.92±1.77),差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 新生期接种AB42可以诱导小鼠产生抗Aβ42抗体,其免疫反应向Th2方向极化.     

哮喘大鼠淋巴液与血液CD4~+CD25~+Treg及IL-10、TGF-β水平比较和地塞米松干预的影响

目的:观察CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞、IL-10、TGF-β在哮喘大鼠淋巴液与血液中的水平,以及地塞米松干预的影响,探讨其与哮喘发病的关系。方法:建立大鼠哮喘模型,收集激发后0、24、48 h淋巴液、血液中淋巴细胞,采用流式细胞术(FCM)检测淋巴液及血液中CD4+CD25+Foxp3+T细胞百分率;采用ELISA方法检测血浆及淋巴液中IL-10、TGF-β水平。结果:哮喘组淋巴液和血液的CD4+CD25+Foxp3+T细胞百分率水平、血浆IL-10和TGF-β浓度在各时间点均低于对照组和治疗组(P0.05);哮喘组淋巴液中CD4+CD25+Foxp3+T细胞百分率水平、IL-10浓度在不同时间点均高于血液水平(P0.05),而TGF-β浓度则低于血液水平(P0.05);治疗组淋巴液和血液中CD4+CD25+Foxp3+T细胞百分率水平、血浆IL-10和TGF-β浓度与对照组相比无显著性差异(P0.05)。结论:哮喘大鼠淋巴液中存在CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞数量以及功能失调,且淋巴液中CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞水平显著高于其血液水平,地塞米松可能通过影响CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞数量以及功能而发挥治疗作用。     

自发性流产小鼠模型主动脉旁淋巴结CD45+CD86+细胞亚群分析

目的：检测主动脉旁淋巴结(PLN)CD45+CD86+细胞，用于间接分析小鼠母-胎界面局部免疫状况。 方法： CBA/J×DBA/2、未孕CBA/J雌鼠和CBA/J×BALB/c小鼠分别作为自发性流产模型（A组）、未孕对照（N组）和生育力正常对照（F组）。采用流式细胞术检测CD45+CD86+细胞在CD45+细胞中的百分率（简称CD45+CD86+百分率）和这些细胞的绝对数，其中单个核细胞从孕5.5、9.5和13.5 d小鼠PLN和孕13.5 d胎盘分离获得。为鉴定CD86+细胞所属类型，采用CD3、CD19和DX5分别作为T细胞、B细胞和NK细胞特异性标志物进行流式细胞检测。 结果： A组胚胎吸收率和绝对数(29.3%, 1.8±1.0)均显著高于F组(4.8%, 0.3±0.5, P<0.01)。相应地，A组孕13.5 d PLN CD45+CD86+细胞百分率和绝对数也均显著高于F组(分别为27.5%±14.0% vs 12.3%±7.1%和1 362±687 vs 615±353, P<0.01)。未孕CBA/J雌鼠PLN CD45+CD86+百分率为7.5%，与孕5.5 d A组小鼠相近(10.6%)，至孕9.5 d时显著升高至23.9%(与未孕鼠相比，P<0.01；与孕5.5 d小鼠相比，P<0.05)，并保持高水平直至13.5 d(27.5%)。相反，在CBA/J×BALB/c小鼠孕期未观察到这种趋势。 结论： CBA/J×DBA/2小鼠流产开始发生于孕9.5 d，此时CD45+CD86+细胞数增多，提示这些细胞与胚胎吸收相关。从PLN中分离淋巴细胞进行表型分析，有助于间接评价母-胎界面局部免疫状况。     

MRL/lpr小鼠中CD4~+CD25~+调节性T细胞对B细胞影响的研究

目的探讨MRL/lpr小鼠中CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg细胞)对B淋巴细胞的影响。方法磁珠分选法选出MRL/lpr小鼠及Balb/c小鼠脾脏中的Treg与效应性T细胞(Teff细胞),以尼龙毛柱法分离B细胞;用2种小鼠的Treg细胞分别与MRL/lpr小鼠的B淋巴细胞(加或不加Teff细胞)组成共培养体系,5 d后用酶联免疫吸附法检测上清液中IgA及IgG的水平,计算抑制率;将两种小鼠的Treg细胞注入MRL/lpr小鼠,对照组注入生理盐水,3周后流式细胞法检测小鼠脾脏中CD19+CD27++浆细胞含量。结果两种小鼠Treg细胞对B细胞分泌IgA及IgG均有直接抑制作用,与Teff细胞共培养也能对B细胞IgA及IgG的分泌起抑制作用(总抑制作用),两种小鼠Treg细胞的直接抑制率无显著性差异,总抑制率均大于直接抑制率,且MRL/lpr小鼠的Treg细胞总抑制率显著降低;输注同系Treg细胞的MRL/lpr小鼠,3周后浆细胞的含量显著低于对照组及输入Balb/c小鼠Treg细胞组。结论 Treg细胞可直接或间接抑制MRL/lpr小鼠的B细胞分泌IgA和IgG,MRL/lpr小鼠体内Treg细胞对B细胞的抑制力低于正常对照。输注同系Treg细胞可减少MRL/lpr小鼠浆细胞的生成。     

GM-CSF与TGF-β联合处理小鼠供体骨髓细胞诱导特异性免疫耐受

目的:观察用GM-CSF和TGF-β在体外处理供体骨髓细胞(BM)后,输给受体鼠,观察能否诱导受体鼠对供体鼠淋巴细胞的特异性耐受。方法:体外用GM-CSF与TGF-β联合处理供体BM细胞诱导非成熟树突状细胞(iDC),并检测其成熟度。将BALB/c受体鼠随机分为3组,进行不同的预处理:(1)BM预免疫组:经尾静脉输入体外诱导的iDC,1×105细胞/只;(2)脾细胞预免疫组:经尾静脉输入C57BL/6供体鼠脾细胞,1×105/只;(3)阴性对照组:经尾静脉输入同体积的PBS。每组小鼠均需经过2次预免疫,每次间隔1周。第2次处理后1周,所有组的小鼠均接受相同剂量的C57BL/6来源的脾细胞腹腔注射,1×105/只。脾细胞攻击后3d,检测各组小鼠对C57BL/6小鼠脾细胞的同种异体反应水平,检测指标包括:采用单向混合淋巴细胞培养方法检测受体鼠淋巴细胞对供体鼠淋巴细胞的增殖指数;采用双抗体夹心ELISA检测受体鼠血清中IFN-γ和IL-10水平、FCM检测脾脏CD4+CD25highTreg细胞含量、及NK细胞抑制性受体KLRG1的表达、采用乳酸脱氢酶释放法检测NK细胞杀伤功能。结果:经GM-CSF和TGF-β体外处理的供体BM细胞能够抵抗脂多糖(LPS)促成熟的作用;与脾细胞预免疫组相比,经此BM细胞预处理的小鼠,再次遭遇供体小鼠淋巴细胞时,血清IL-10的含量降低(P0.05)、脾脏中CD4+CD25highTreg细胞的比例明显升高、对C57BL/6小鼠淋巴细胞增殖反应减弱(P0.01);NK细胞杀伤率降低。结论:用GM-CSF与TGF-β联合处理供体小鼠BM细胞在一定程度上能够诱导小鼠对供体小鼠脾细胞的免疫耐受,除Treg外,NK细胞可能也参与了诱导免疫耐受。     

NOD/SCID小鼠胎盘DX5~+CD25~+细胞水平

为了研究胎盘DX5+CD25+细胞在维持母-胎耐受状态中的潜在作用。采用流式细胞术检测免疫功能正常的BALB/c和免疫缺陷的NOD/SCID小鼠外周血和胎盘DX5+CD25+细胞,评价这些细胞与小鼠妊娠预后的关系。结果:虽然NOD/SCID小鼠存在严重的免疫缺陷,但是其胚胎吸收率和平均每窝产仔数等生育力指标均基本正常,并且其孕13 d胎盘DX5+CD25+/DX5+细胞百分率与免疫功能正常小鼠相比无显著性差异,并均呈高百分率分布特征(约占DX5+细胞总数的90%)。NOD/SCID小鼠胎盘中高百分率的DX5+CD25+细胞可能是正常生育力预后的免疫学基础。