鸟氨酸氨基甲酰转移酶速率法测定的初步探讨

目的 建立鸟氨酸氨基甲酰转移酶(OCT)自动化分析的方法.方法 在磷酸盐缓冲液(pH值7.2)条件下,以瓜氨酸为底物,经一系列酶偶联反应,尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH+H+)被氧化为氧化型辅酶Ⅰ(NAD+),340 nm处测定吸光度(A)变化值,A值下降的速率与待测样本中的OCT含量成正比关系,间接求出OCT的活性.结果 本法最适pH值为7.2,最适底物浓度为2.0 mmol/L.批内、批间平均变异系数(CV)分别为3.80%、4.08%.米氏常数(Km)值为0.16 mmol/L.回收率达91.56%.在320 U/L内线性良好.参考范围为0～18 U/L.结论本方法能够快速、简便、准确的测定OCT活性,适用于各类全自动生化分析仪.     

血清对氧磷脂酶活性连续检测方法的建立及临床意义

目的建立血清中对氧磷脂酶(PON)活性测定的方法,测定正常人和肝硬化患者血清中PON的活性,探讨该酶诊断肝硬化的意义。方法PON活性测定以乙酸苯酯为底物,在PON的作用下水解,生成苯酚,用分光光度计在37℃、270nm处连续监测3min测定苯酚特征性的紫外吸收,计算出酶促反应速度。结果本方法的最适的测定条件为37℃、270nm处连续监测3min,底物浓度为10mmol/L,最适pH值为8.0,激活剂Ca2+浓度为2mmol/L,批内变异系数(CV)可达4.3%,批间CV为5.0%。正常人组血清PON活性为(284.95±83.76)U/ml,参考范围为201.2～368.7U/ml,肝硬化患者组PON活性为(153.78±107.54)U/ml,两组差异有显著性(P<0.01)。结论本方法测定血清中PON的活性操作简便、精密度、线性良好。肝硬化患者血清PON活性与正常人组比较差异有显著性。     

血清对氧磷脂酶活性连续检测方法的建立及临床意义

目的建立血清中对氧磷脂酶(PON)活性测定的方法,测定正常人和肝硬化患者血清中PON的活性,探讨该酶诊断肝硬化的意义.方法 PON活性测定以乙酸苯酯为底物,在PON的作用下水解,生成苯酚,用分光光度计在37℃、270 nm处连续监测3 min测定苯酚特征性的紫外吸收,计算出酶促反应速度.结果本方法的最适的测定条件为37℃、270 nm处连续监测3 min,底物浓度为10 mmol/L,最适pH值为8.0,激活剂Ca2+浓度为2 mmol/L,批内变异系数(CV)可达4.3%,批间CV为5.0%.正常人组血清PON活性为(284.95±83.76)U/ml,参考范围为201.2～368.7 U/ml,肝硬化患者组PON活性为(153.78±107.54)U/ml,两组差异有显著性(P＜0.01).结论本方法测定血清中PON的活性操作简便、精密度、线性良好.肝硬化患者血清PON活性与正常人组比较差异有显著性.     

甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶的方法学研究

本文研究了甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶(GPDA)的最佳测定条件。最适pH8.6,Km 值为1.91±0.08mmol/L,选用158mmol/L Tris、64mmol/L 双甘氨肽、10 mmol/L 底物。酶促反应速度在70分钟内呈线性,酶活力在600U/L 内呈线性。高、中,低活力标本批内变异1.7～3.1%,批问变异3.8～6.7%,标本置4℃一周,结果无明显变化。168例健康者GPDA 为150.1±49.8(2SD)U/L,同时研究了测定管、底物空白、对硝基苯胺的光学吸收特性,观察了GPA 试剂在不同pH 和不同时间的变化规律。     

血管紧张肽(素)转化酶动力学测定方法的探讨及其初步临床应用

目的建立血管紧张肽(素)转化酶(ACE)自动化分析方法。方法 ACE能催化底物呋喃酰基-L-苯丙氨酰甘氨酰甘氨酸(FAPGG),产生呋喃酰基苯丙氨酸(FAP)及双甘氨肽(GG)。在pH值8.2的硼酸缓冲液下,在340 nm处测定产物吸光度值的下降速度可计算出ACE活性。采用本法测定50名正常对照者、30例慢性阻塞性肺部疾病加重期(AECOPD)患者、18例肺癌患者血清ACE的活性。结果本法缓冲液最适pH值为8.2,最适基质浓度为1.0 mmol/L,批内、批间平均变异系数(CV)分别为4.07%、5.50%,米氏常数(Km)为0.09 mmol/L。正常对照组ACE活性为(31.1±18.0)U/L;AECOPD患者ACE活性为(22.4±12.6)U/L,低于正常组(P<0.000 1);肺癌患者ACE活性为(28.7±11.4)U/L,稍低于正常对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论该法简便、快捷、精确,可用于自动化分析,适宜临床常规应用。ACE可作为评价肺部疾病的一项指标。     

以2-甲氧基-4-(2'-硝基乙烯基)酚-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷为底物测定尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活性

目的 评价以2-甲氧基-4-(2'-硝基乙烯基)酚-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(MNP-NAG)为底物的全液体试剂两点终点法测定尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)活性.方法 尿样中NAG作用于底物MNP-NAG水解产生游离MNP,其生成速率与酶活性在一定范围内成正比.结果 该法显色最大吸收波长为505 nm,试剂1和试剂2最适pH值分别为4.6和10.2,最适底物浓度为16 mmol/L,线性范围达198 U/L,批内变异系数(CV)和批间CV分别为2.2%和3.8%.166例健康体检者尿样NAG活性参考范围为:(6.21±4.53)U/gCr((x)±1.96 s).结论 MNP-NAG底物法测定尿NAG灵敏度高,操作简便,结果可靠,适合临床应用.     

甘氨酰脯氨酰二肽氨基肽酶动力学测定方法探讨及初步临床应用

目的建立甘氨酰脯氨酰二肽氨基肽酶(GPDA)自动化分析方法。方法用甘氨酰脯氨酰对硝基苯胺对甲苯磺酸盐为底物,在Tris-HCl-双甘肽缓冲系统下,在405nm处测定产物吸光度的变化,得出GPDA活性。结果最适pH值为8.6,基质浓度为2.0mmol/L。批内、批间平均变异系数分别为3.01%、5.04%。米氏常数(Km)为1.89mmol/L。标本存于4℃冰箱10d内稳定性良好。参考值为(102.8±26.0)U/L。肝癌组该酶范围为(139.9±71.8)U/L,与正常组比较差异有显著性(P<0.05)。胃癌组和慢性胃炎组该酶范围分别为(58.83±18.18)U/L和(61.5±15.8)U/L,与正常组比较差异均有显著性(P<0.001、P<0.005)。结论该法简便、快捷、精确,可用于自动化分析,并可作为评价肝癌、胃癌及慢性胃炎的血清学指标。     

连续监测法测定血清丙氨酸氨基肽酶

目的　建立血清丙氨酸氨基肽酶 (AAP)连续监测法。方法　以丙氨酰对硝基苯胺 (Ala pNA)为底物 ,研究AAP作用于此底物的动力学特征 ,选择最适反应条件 ,建立血清AAP测定速率法及参考值 ,同时观测肝胆疾病患者血清AAP作用于此底物的动力学特征 ,选择最适反应条件 ,建立血清AAP测定速率法及参考值 ,同时观测肝胆疾病患者血清AAP水平。结果　酶反应最适pH8 0 ,Tris HCl缓冲液的最佳浓度 15 0mmol/L ,Ala pNa浓度以 3mmol/L为宜 ,米氏常数 (Km) 0 74mmol/L ,在 8min观测时间内吸光度变化与时间成比例 ,线性范围可达 180 0U/L ,平均批内、批间CV分别为 1 0 4%和 2 0 2 %。 2 0mmol/L甘油三酯、2g/L血红蛋白、340 μmol/L胆红素对酶活力测定无干扰 ,正常成年人群参考范围 ( x± 2s) 4 1～ 77U/L。肝胆疾病组血清AAP明显高于健康对照组。结论　血清AAP活力是鉴别诊断肝胆疾病的一项特异、灵敏的指标 ;连续监测法适用于各种类型的自动化分析仪 ,便于临床推广     

血清胰弹性蛋白酶-I连续监测法实验探讨

目的　建立简便、快速、准确的方法检测血清胰弹性蛋白酶 I(pancreaticelastase I,PE I)。方法　选择高敏感底物琥珀酰 (L 丙氨酸 ) 3对 硝基苯胺 (Suc Ala 3pNA) ,在 4 0 5nm处测定产物吸光度的变化 ,得出PE I的活性。结果　最适底物浓度为5 .0mol/L ,Km为 0 .4 6mmol/L ,最适pH为 8.0 ,批内CV 2 .81 % ,批间CV 4 .5 9% ,线性可达 30 0U/L。 30例健康体检者此酶活性为 (1 3± 3)U/L ,2 6例临床已确诊轻型胰腺炎 (单纯水肿型 )和 1 8例重型胰腺炎 (出血坏死型 )此酶活性分别为 (78± 31 )U/L和(1 39± 4 5 )U/L ,胰腺炎各组与对照组比较均有显著性差异 (P <0 .0 1 ) ,单纯水肿型和出血坏死型胰腺炎比较有显著性差异 (P<0 .0 1 )。PE I诊断急性胰腺炎敏感性 85 % ,特异性 93% ,阳性预期值 94 % ,阴性预期值 85 %。结论　该方法简便、快速、准确、灵敏 ,可用于自动化分析     

甘氨酰脯氨酰二肽氨基肽酶动力学测定方法探讨及初步临床应用

目的建立甘氨酰脯氨酰二肽氨基肽酶(GPDA)自动化分析方法.方法用甘氨酰脯氨酰对硝基苯胺对甲苯磺酸盐为底物,在Tris-HCl-双甘肽缓冲系统下,在405 nm处测定产物吸光度的变化,得出GPDA活性.结果最适pH值为8.6,基质浓度为2.0 mmol/L.批内、批间平均变异系数分别为3.01%、5.04%.米氏常数(Km)为1.89 mmol/L.标本存于4 ℃冰箱10 d内稳定性良好.参考值为(102.8±26.0) U/L.肝癌组该酶范围为(139.9±71.8) U/L,与正常组比较差异有显著性(P<0.05).胃癌组和慢性胃炎组该酶范围分别为(58.83±18.18) U/L和(61.5±15.8) U/L,与正常组比较差异均有显著性(P<0.001、P<0.005).结论该法简便、快捷、精确,可用于自动化分析,并可作为评价肝癌、胃癌及慢性胃炎的血清学指标.     

血清尿素丙酮酸氧化酶测定新方法的研究及应用

目的建立一种血清尿素测定的新方法和临床应用。方法应用脲酶、丙酮酸氧化酶、丙酮酸激酶与色原系统2，4-二氯苯酚、4-氨基安替比林，进行血清尿素浓度的酶法测定。结果磷酸盐缓冲液最适浓度为50mmol、pH7．2，最大吸收峰为510nm，线性范围为0～42mmol／L，显色稳定。精密度：批内（n=20）CV为1．89％～3．21％，批间（n=20）CV为1．96％～3．45％，回收率为96．2％～104．2％，平均回收率为99．5％。与酶偶联速率法比较，相关系数r=0．995，回归方程Y=1．023x＋0．38，两法高度相关，正常参考值范围为儿童组2．20～8．50mmol／L，少年组2．60～8．60mmol／L，成人组2．85％～8．95mmol／L。结论本法具有高度的特异性和准确性，其操作简便、灵敏快速、标本用量少、结果稳定，适用于全自动、半自动生化分析仪，更适用于中小医院，有较大的推广使用价值。     

血清氯化物酶法测定

目的建立血清氯化物的α-淀粉酶及其底物2-氯-4-硝基苯-α-D-麦芽三糖苷(CNP-G3)直接测定方法。方法根据氯离子是α-淀粉酶的激动剂原理建立氯化物测定方法,并做方法学评价。结果测定结果的平均偏差率为0.46%;线性范围50~150mmol/L;平均回收率为100.62%;批内CV<1.24%,日间CV<1.86%,总CV1.45%~2.24%;加入高浓度的维生素C、葡萄糖、蔗糖、果糖、α-淀粉酶、三酰甘油、血红蛋白、胆红素、钙离子、溴离子、碘离子、氟离子、硫氰酸钾、对硝基酚、叠氮钠和硫酸铵均未显示干扰。与硫氰酸汞比色法(MTC)(x±s)比较:MTC法(x):(95.66±14.45)mrnol/L,酶法(Y):(95.62±14.93)mmol/L,t=0.078,P>0.5,Y=1.016X-1.587,r=0.984,n=93,P<0.001;与离子选择电极法(ISE)(x±s)比较:ISE法(X):(99.00±13.11)mmol/L,本法(Y)(98.61±12.70)mmol/L,t=0.140,P>0.5,Y=0.962X+3.375,r=0.993,n=44,P<0.001。溶解的工...     

脲酶结合邻甲酚酞络合剂显色检测血清及尿液尿素含量

目的　建立一种实用的血清和尿液中尿素含量的比色测定方法。方法　脲酶水解尿素产生氨(NH3),使溶液pH升高,以邻甲酚酞络合剂(OCPC)作为pH指示剂,波长570nm吸光度变化与尿素浓度成正相关。结果　该法线性范围血清1.00～200mmol/L,尿液10.0～1000mmol/L;检测界限血清0.36mmol/L,尿液2.19mmol/L。精密度分析血清批内CV1.13%～2.78%,批间CV1.81%～3.91%,总CV2.13%～4.80%。尿液批内CV0.68%～1.72%,批间CV0.96%～2.24%,总CV1.17%～2.82%。平均回收率血清100%,尿液102%。该法(Y)与酶速率法(X)比较相关性良好(血清Y＝1.048X+0.511,r＝0.998,S     

糖化血清蛋白测定的自动分析

目的建立双试剂测定糖化血清蛋白的自动分析方法.方法根据测定条件的优化实验采用双试剂酶法直接测定.结果该法180 s达反应终点,线性达1 306μmol/L(y=0.983 5X+0.124,r=0.999 7);批内CV＜1.45%,日间CV＜3.56%,总CV＜4.19%;平均回收率100.3%;加入TG＜7.6mmol/L,BIL＜456 μmol/L,Hb＜200g/L,UA＜1 240 μmol/L,GLU＜75.2 mmol/L时无显著干扰.结论该法适合全自动分析.     

血管紧张肽（素）转化酶动力学测定方法的探讨及其初步临床应用

目的建立血管紧张肽（素）转化酶（ACE）自动化分析方法。方法 ACE能催化底物呋喃酰基-L-苯丙氨酰甘氨酰甘氨酸（FAPGG）,产生呋喃酰基苯丙氨酸（FAP）及双甘氨肽（GG）。在pH值8.2的硼酸缓冲液下,在340 nm处测定产物吸光度值的下降速度可计算出ACE活性。采用本法测定50名正常对照者、30例慢性阻塞性肺部疾病加重期（AECOPD）患者、18例肺癌患者血清ACE的活性。结果本法缓冲液最适pH值为8.2,最适基质浓度为1.0 mmol/L,批内、批间平均变异系数（CV）分别为4.07%、5.50%,米氏常数（Km）为0.09 mmol/L。正常对照组ACE活性为（31.1±18.0）U/L;AECOPD患者ACE活性为（22.4±12.6）U/L,低于正常组（P〈0.000 1）;肺癌患者ACE活性为（28.7±11.4）U/L,稍低于正常对照组,但差异无统计学意义（P〉0.05）。结论该法简便、快捷、精确,可用于自动化分析,适宜临床常规应用。ACE可作为评价肺部疾病的一项指标。     

低密度脂蛋白胆固醇保护性试剂匀相测定法的临床评价

目的 对低密度脂蛋白胆固醇(LDT-C)保护性试剂匀相测定法进行临床评价。 方法 分析了保护性试剂匀相测定法的精密度、准确性、特异性和干扰因素.并随机选取了219份病人血清标本,比较分析用保护性试剂匀相测定法直接测定与Friedewald公式和Planella公式计算的LDL—C结果。 结果 保护性试剂匀相测定法具有较好的精密度(批内、批间CV和总CV均小于3％)。线性范围至10.4mmol/L,最低检测浓度为0.08mmol/L,平均同收率为101.2％:基本不受极低密度脂蛋白(VLDL)、高密度脂蛋白(HDL)和血红蛋白的影响。在TG<4.52mmol/L时,用匀相测定法与Friedewald公式和Planella公式的计算法结果之间相关性良好,两种公式计算法结果之间的也有较好相关性;而在TG>4.52mmoL/L时,匀相测定法与两种计算法之间的相关性差。结论 保护性试剂匀相测定法简便、快速、结果准确,易于自动分析,适合在临床实验室常规检测应用。     

Electrophoretic separation of high-density lipoprotein choelsterol evaluated and compared with the modified lipid research clinic procedure.

We evaluated a new agarose-gel-electrophoretic procedure (Corning) (I) for separating and quantitating of high-density lipoprotein cholesterol (HDLC), comparing it with the modified Lipid Research Clinics (LRC) procedure (heparin 183 kilounits/L, MnCl2 92 mmol/L) (II). Method I was insensitive to an HDLC concentration of 50 mg/L, but gave a linear dose-response curve between 130 and 1200 mg/L. Method II is sensitive to 50 mg/L and linear from 50--1200 mg/L. The within-plate CV for the Corning method varied from 26.2% for an HDLC of 168 mg/L to 6.8% for 580 mg/L. Within-day between-plate CV for the Corning method ranged from 22.1% at 155 mg/L to 8.0% at 651 mg/L, compared to 3.0 and 0.8% for the modified LRC procedure. Between-day CV for method I was 20, 12.6, 4.3, and 3.5% for HDLC concentrations of 175, 435, 542, and 678 mg/L, respectively; for method II it was 14, 5, 3.5, and 2.6%, respectively. Analysis of HDLC in 100 patients by both procedures showed mean HDLC values to be significantly lower (mean + SD, 27.8 +/- 1.7 mg/L; p less than 0.001) by method I. In 46 patients with HDLC less than 450 mg/L, this difference was accentuated (mean + SD = 40.5 +/- 2.6 mg/L) and clinically significant. Electrophoretic methods offer a promising further alternative method for HDLC separation and quantitation, but the negative bias, present limited sensitivity, and lack of precision at less than 450 mg/L indicate that they are not yet optimal for routine clinical use for patients with values less than 450 mg/L.     

Comparison of current methods for high-density lipoprotein cholesterol quantitation.

We compared six precipitation methods for high-density-lipoprotein cholesterol quantitation with an ultracentrifugation method, the accuracy of which was improved by correcting for 4% manipulative loss in the d greater than 1.063 fractions. For purposes of comparison, the apoprotein B-associated cholesterol (average 56 mg/L) measured by immunoassay in the d greater than 1.063 fractions was subtracted. In 65 plasma samples from men, women, and children, a heparin-Mn2+ procedure with Mn2+ at 46 mmol/L produced results slightly higher (+16 mg/L), while results with Mn2+ at 92 mmol/L averaged slightly lower (-8 mg/L) than the comparison ultracentrifuge method. Results that were about 5% low were obtained by the dextran sulfate 500-Mg2+ (-25 mg/L) and phosphotungstate-Mg2+ (-31 mg/L) methods. A heparin-Ca2+ method produced results 10% high (+58 mg/L). Results by a polyethylene glycol-6000 precipitation method were 12% low (-64 mg/L). Precision was better with the two heparin-Mn2+ and the dextran sulfate 500-Mg2+ procedures, with CVs of 4%, intermediate with phosphotungstate-Mg2+ and polyethylene glycol-6000 (CV 6-7%), and poorest with heparin-Ca2+ (CV 10%). Precipitation by phosphotungate-Mg2+ appeared more sensitive to reagent concentration and temperature variations than either the heparin-Mn2+ or dextran sulfate 500-Mg2+ methods. We conclude that these precipitation methods are not equivalent, but give rise to significant systematic differences in high-density-lipoprotein cholesterol quantitation.     

Creatine kinase: reassessment of optimal concentrations for adenosine-5'-diphosphate and magnesium

Whereas univariate studies led to an European agreement for the choice of optimal reagent concentrations of 2 mmol/L for ADP and 10 mmol/L for Mg2+ for determining creatine kinase (EC 2.7.3.2) activity in serum, whatever its isoenzyme pattern, the results of our bivariate study led us to recommend higher optimal concentrations: 4.1 to 4.7 mmol/L for ADP and 22 mmol/L for Mg2+. The zone of maximal activity was in fact a broad plateau such that more than 99% of maximal enzyme activity was attained at ADP concentrations between 3 and 5 mmol/L and Mg2+ concentrations between 17 and 26 mmol/L. Under these new conditions the maximum activity measured was modestly increased (about 10%) over the previously recommended method but the assay could be expected to be more resistant to the variations of ADP and Mg2+ concentrations. It may become necessary to modify the European recommended method.     

尿素酰基裂解酶酶偶联法测定血清总钙

目的 介绍尿素酰基裂解酶酶偶联测定血清总钙的方法。方法 双试剂两点法；缓冲液为三乙醇胺（TEA，pH8.0,200mmol/L）；试剂I：含NaHCO326.0mmol/L,NADPH 0.4mmol/L,α－酮戊二酸8.0mmol/L，尿素酰基裂解酶115U／L，GLDH43．0kU/L；试剂Ⅱ：含NaCO3 26.0mmol/L,ATP6.2mmol/L。结果 方法线性范围为0．5－5．0mmol/L，批内和批间平均变异系数分别为2．13％和2．69％。平均回收率为102．7％ 。本法（Y）与邻甲酚酞络合酮法（OCPC法，X1）比较：r＝0．981，Y1＝1．02X1－0．021，与偶氮胂Ⅲ法（X2）比较：r＝0．978，Y＝0．99X2＋0．03。血清胆红素高达300μmol/L，血红蛋白4g/L，镁2.5mmol/L，NH4^ 2.0mmol/L,Trig 8.0mmol/L对本法无明显干扰。结论 本法具有简便、准确、快速，适用于自动分析等特点。