RNA干扰抑制胸膜间皮细胞水通道蛋白1表达的实验研究

目的 研究RNA干扰技术对大鼠胸膜间皮细胞水通道蛋白1（AQP1）基因表达的影响,探讨应用该技术治疗胸腔积液的可行性。方法体外培养大鼠胸膜间皮细胞,细胞鉴定后,采用免疫细胞化学、逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测AQP1表达;设计并构建2个靶向大鼠AQP1基因的短发夹RNA（shRNA）重组质粒,脂质体转染大鼠胸膜间皮细胞48h后,采用RT—PCR及Western印迹方法分别在mRNA和蛋白质水平检测AQP1基因表达的抑制效果。结果胸膜间皮细胞存在AQP1表达,所设计的2个AQP1-siRNA重组质粒可不同程度地抑制AQP1在胸膜间皮细胞中的表达,在mRNA水平抑制率分别为83．5％和90．9％;在蛋白质水平抑制率分别为41．2％和67．6％,与空白对照组和阴性对照组比较,其差异有统计学意义（P〈0．01）。结论质粒介导的RNA干扰可明显抑制大鼠胸膜间皮细胞AQP1基因的表达,且抑制率具有序列相关性,是潜在的胸腔积液基因治疗新方法。     

葡萄糖对大鼠胸膜间皮细胞水通道蛋白1表达的影响

目的 观察葡萄糖对胸膜间皮细胞水通道蛋白1(AQP-1)表达的影响.方法 体外原代培养Wistar大鼠胸膜间皮细胞,鉴定后将细胞随机分为对照组和葡萄糖组,对照组以D-MEM/F-12培养液培养细胞,葡萄糖组以含不同浓度葡萄糖(50、100及200 mmoL/L)培养液培养细胞24 h;100 mmol/L葡萄糖组分为6、12、18及24 h四个时间组,应用Western印迹、RT-PCR方法 检测细胞中AQP-1表达变化.结果 含50、100及200 mmoL/L的葡萄糖培养液作用细胞24 h后,AQP-1蛋白表达量(积分吸光度)分别为54.02±4.61、127.84±9.41和231.62±22.63,分别为对照组(22.45±2.16)的2.41、5.69和10.32倍(P<0.01),AQP-1表达与葡萄糖浓度相关;以含100 mmoL/L葡萄糖培养液培养细胞6、12、18及24 h后,AQP-1蛋白表达量分别为24.68±2.56、58.68±3.67、89.61±6.62和113.41±7.65,分别为对照组(11.81±1.45)的2.09、4.97、7.59和9.60倍,差异均有统计学意义(P<0.01),AQP-1表达与作用时间相关.AQP-1在mRNA水平表达与蛋白水平表达相一致.结论 葡萄糖上调胸膜间皮细胞AQP-1的表达,具有浓度和时间相关性,AQP-1可能参与胸水的转运.     

角叉菜胶致炎症性胸腔积液大鼠胸膜上水通道蛋白1的表达

目的探讨水通道蛋白1（AQP-1）在炎症性胸腔积液大鼠胸膜上的表达及其与胸水形成的关系。方法56只健康Wistar大鼠随机分为对照组（8只）和胸膜炎组（48只）。采用角叉菜胶胸腔内注射复制炎症性胸腔积液大鼠模型。胸膜炎组根据注入角叉菜胶后处理时间再分为6、12、24、36、48和72h组,每组8只。测定各组大鼠胸腔积液量,对胸腔积液进行细胞计数和分类,采用HE染色观察脏、壁层胸膜的病理变化,采用免疫组化染色检测AQP-1在大鼠胸膜上的分布,分别采用RT-PCR和Westernblot方法检测脏、壁层胸膜AQP-1的mRNA和蛋白表达。结果胸膜炎各时相组胸水量分别为（2.10±0.22）mL、（4.10±0.15）mL、（4.40±0.36）mL、（3.20±0.27）mL、（2.60±0.18）mL和（0.12±0.02）mL。AQP-1主要表达在脏、壁层胸膜的间皮细胞和毛细血管内皮细胞。胸膜炎各时相组脏、壁层胸膜AQP-1表达均增强。胸膜炎组AQP-1mRNA在壁层胸膜的表达于6h开始升高,24h达高峰;在脏层胸膜的表达于12h开始升高,24h达高峰。AQP-1蛋白表达的变化趋势与mRNA表达一致。12h和24h组壁层胸膜AQP-1表达与胸腔积液量呈正相关（r=0.857,r=0.846,P均〈0.01）;24h脏层胸膜AQP-1表达与胸腔积液量呈正相关（r=0.725,P〈0.05）。结论胸膜炎胸腔积液时胸膜AQP-1表达增强,AQP-1可能参与炎症性胸腔积液的转运过程。     

水通道蛋白1与胸腔积液发生机制的体内研究

目的 探讨水通道蛋白1(AQP1)在胸腔积液发生机制中的作用.方法 SD大鼠按实验设计分为5组(n=24):地塞米松组、内毒素组、红霉素组、高渗盐水组及对照组,通过免疫组织化学染色测定AQP1在胸膜上的表达和定位;采用Real-time RT-PCR方法对不同刺激因子作用下不同时间胸膜组织AQP1的基因表达进行定量分析.结果 大鼠脏、壁层胸膜间皮细胞及壁层胸膜下毛细血管内皮上均存在AQP1的表达,脏层胸膜间皮细胞上AQP1的表达较壁层胸膜明显[(7.43±2.02)×104>copy/μg比(4.14±1.12)×104>copy/μg,P<0.05].地塞米松、高渗盐水上调大鼠胸膜组织AQP1的表达(P<0.05);红霉素、内毒素下调胸膜组织上AQP1的表达(P<0.05).结论 地塞米松、内毒素、红霉素和高渗盐水刺激下胸膜组织AQP1表达的改变,提示存在炎症因子和渗透梯度下调控AQP1的途径,胸膜绀织上AQP1可能参与了炎症性胸腔积液的分泌和吸收.     

大鼠眼内组织水通道蛋白1的表达

目的：观察水通道蛋白1（AQP1）在正常大鼠眼内组织的表达部位.方法：雄性Wistar大鼠断头放血取出眼球,4%多聚甲醛固定,石蜡包埋.做矢状面5μm连续切片,每个标本切3张,分别用于AQP1免疫组化染色、阴性对照和HE染色,用已知有AQP1表达的大鼠肾脏肾小管切片为阳性对照.结果：光镜下观察AQP1免疫组化染色切片,细胞中出现棕色粗大颗粒为阳性,反之为阴性.大鼠眼内组织AQP1阳性表达部位有：（1）角膜内皮细胞;（2）虹膜上皮细胞;（3）晶状体上皮细胞;（4）睫状体非色素上皮（NPE）细胞;（5）视网膜神经节细胞层、内核层;（6）视神经胶质细胞.结论：AQP1在眼内与水代谢有关的多个部位呈阳性表达.     

温阳消饮法对胸腔积液豚鼠胸膜间皮细胞水通道蛋白1表达的影响

目的:研究温阳消饮法消除胸液与调节水通道蛋白表达的相关性。方法:将健康非纯种短毛成年豚鼠随机分为A-温阳消饮组、B-模型+生理盐水组、C-模型组、D-空白组,各实验组再根据造模后第1、2、3、5、7、10、14 d随机分为7个小组。1%角叉菜胶胸腔注射建立胸腔积液模型。造模后2h给药,连续14 d。分别于造模后第1、2、3、5、7、10、14 d处死各组豚鼠。计量胸液,并用免疫组化法检测脏层与壁层胸膜间皮细胞水通道蛋白1(AQP1)表达。结果:①A5组较B5、C5组,A7组较B7、C7组胸液量减少(P0.05);②A7组脏层胸膜间皮细胞AQP1表达较B7、C7组增强(P0.05);③A2、A3、A5、A7、A10、A14组分别与B2、B3、B5、B7、B10、B14组及C2、C3、C5、C7、C10、C14组比较,其壁层胸膜间皮细胞AQP1表达减弱,差异有统计学意义(P0.05);④A2、A3、A5、A7、A10、A14各组脏层胸膜间皮细胞AQP1表达强于壁层胸膜(P0.05),B7、B10、B14组及C7、C10、C14组脏层胸膜间皮细胞AQP1表达弱于壁层胸膜(P0.05)。结论:温阳消饮法能减少胸腔积液模型豚鼠胸液量,其作用机理可能是:①上调脏层胸膜间皮细胞AQP1表达,有助于胸液转运;②下调壁层胸膜间皮细胞AQP1表达,减少胸液形成。     

水通道蛋白1在大鼠挫伤肺损伤中的表达变化

目的建立大鼠肺挫伤模型,在此基础上检测水通道蛋白1(AQP1)表达变化及其与肺水肿的关系。方法将20只SD大鼠随机分为对照组和实验组,实验组制备肺挫伤模型,测定肺湿干比值(W/D)及观察病理变化,采用免疫组化方法检测AQP1的分布和表达变化。结果与对照组相比,实验组肺W/D显著增高(P<0.05),肺组织AQP1表达显著下降(P<0.05)。结论 AQP1在肺挫伤时表达降低,并参与肺挫伤早期肺水肿的形成过程。     

胆红素对内毒素致急性肺损伤大鼠水通道蛋白1、5表达的影响

目的探讨胆红素对脂多糖所致急性肺损伤大鼠的水通道蛋白1、5是否存在调节作用,探讨其保护作用机制。方法雄性Wistar大鼠18只,随机分为生理盐水对照组（C组）、脂多糖模型组（L组）和胆红素预处理组（B组）,每组各6只。每组于造模后4h处死大鼠。测定每组肺湿／干重比值,ELISA法测血清中IL-8含量,肺组织中cAMP含量,免疫组化法测定每组水通道蛋白1、5的表达变化。观察各组肺组织病理改变。结果与模型组（L组）比较,胆红素干预组（B组）的W／D值下降,IL-8含量明显降低,cAMP含量表达上升（P〈0．05）,水通道蛋白1、5表达增强（P〈0．05）,肺水肿病理改变明显减轻。结论胆红素可能是通过cAMP信号途径调节水通道蛋白1、5表达改善水代谢,减轻肺水肿状态,从而对急性肺损伤具有保护作用。     

糖尿病性白内障晶状体上皮细胞水通道蛋白-1表达变化

目的研究大鼠糖尿病性白内障（diabetic cataract，DC）晶状体上皮细胞（lens epithelial cells，LECs）水通道蛋白-1（aquaporin-1，AQP1）表达水平的变化。方法链脲佐菌素（streptozotocin，STZ）60mg／kg体重一次性尾静脉注射制作大鼠糖尿病模型，分别在造模后不同时间点摘取模型组及对照组大鼠的眼球，制作石蜡切片，应用免疫组织化学方法和计算机图像分析技术对晶状体囊膜下上皮细胞AQP1进行检测。结果透明晶状体和DC各期晶状体囊膜下上皮细胞膜均有AQP1阳性表达。图像分析显示：在造模2周糖尿病大鼠晶状体尚透明，LECs的AQP1平均吸光度（A）值即下降，与对照组比较差异有显著性意义（P〈0.05）；DC各期LECs的AQP1表达均显著低于对照组（均P〈0.01），随着白内障的发展，A值逐渐下降。除DCⅡ期与Ⅲ期之间A值差异无显著性意义外，其余DC各期之间差异均有极显著性意义（均P〈0.01）。结论LECs胞膜AQP1表达量减少先于DC的发生，DC早期AQP1的表达量显著下降，AQP1表达改变可能在DC发生发展中起一定作用。     

镇眩汤对大鼠梅尼埃模型水通道蛋白1表达的影响

目的探讨中药复方镇眩汤治疗梅尼埃病的机制。方法采用阻塞前庭导水管的传统方法造模,分为镇眩高、中、低剂量组,西药组、模型组和假手术组,观察大鼠用药前后听觉诱发电位听觉阈值的变化及大鼠内耳水通蛋白1表达的影响。结果模型组与假手术组用药前听阈值分别为(54.21±7.91)和(40.03±6.75)dBL,差异有统学意义(P<0.05);用药后镇眩汤高剂量组听阈值为(41.27±6.58)dBL,模型组为(56.31±7.64)dBL,两组比较差异统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,西药组、镇眩汤高剂量组、中剂量组、假手术组水通道蛋白1表达差异均统计学意义(P<0.05);与假手术组比较,低、中剂量组水通道蛋白1差异有统计学意义(P<0.05),而高剂量组与药组差异无统计学意义(P>0.05)。结论镇眩汤对大鼠内耳水通道蛋白1的调节作用可能是治疗梅尼埃病的制之一。     

高渗盐溶液抗休克的实验研究和临床应用进展

20多年来国内外相继开展了高渗盐水治疗休克的研究，特别是7．5％氯化钠的抗休克作用有了很多的报道，高渗盐溶液在失血性休克液体复苏中的应用越来越广泛，其抗休克效果在动物实验和临床应用中都得到了肯定，但也存在输入过程中出现血压下降，尿量减少的报道，对抗休克时所使用的剂量也存在一些争议。笔者就近年来应用高渗盐水抗休克的基础和临床研究进行如下综述，着重阐明高渗盐水抗休克的主要机制及临床应用的一些方法.     

高渗高胶溶液降低颅脑肿瘤患者颅内压的疗效观察

目的观察高渗氯化钠羟乙基淀粉40溶液（HSS40）对颅脑肿瘤手术患者颅内压及循环稳定的影响。方法择期颅脑肿瘤手术患者26例,随机分为HSS40组和20％甘露醇组（M组）,每组13例,局麻下经L3～4椎间隙穿刺置管监测脑脊液压(CSFP)。两组均采用静吸复合全麻,在15?min内静脉输注HSS40注射液200?mL和20％甘露醇250?mL,分别于输注前（T0）、输注完即刻（T1）、输注完15?min（T2）、30?min（T3）、60?min（T4）和120?min（T5）记录平均动脉压（MAP）、心率（HR）、中心静脉压（CVP）、CSFP及尿量,计算脑灌注压（CPP）。结果两组患者各时点MAP、HR比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。与T0比较,HSS40组CVP在T2～T4时升高, M组在T4、T5时降低;HSS40组CSFP在T2～T5时降低,M组在T3～T5时降低;HSS40组CPP在T3时升高,M组在T4时升高（P＜0.05）;与M组比较,HSS40组CSFP在T3时点降低,CVP在T4、T5时升高;HSS40组尿量在T2 3、T3 4、T4 5时段减少（P＜0.05）。结论在颅脑肿瘤手术中,HSS40溶液降低颅内压的作用优于20%甘露醇,并且有助于术中循环稳定。     

水通道蛋白-1 在肝硬化腹水大鼠腹膜上的表达

目的探讨腹膜上水通道蛋白-1(AQP-1)的表达与肝硬化大鼠腹水形成之间的相互关系.方法 32只健康SD大鼠分为肝硬化组(20只)和正常对照组(12只),采用苯巴比妥钠诱导加皮下注射CCl4制造细胞毒性肝硬化大鼠伴腹水模型;免疫组织化学检测 AQP-1 在大鼠腹膜上的分布及蛋白质的表达.RT-PCR方法检测各组大鼠AQP-1在肝硬化腹水形成前后腹膜上 mRNA的表达,并以3-磷酸甘油醛脱氢酶相对定量.结果腹膜免疫组化显示,AQP-1 主要表达在腹膜毛细血管及小静脉的内皮细胞上,同时,间皮细胞上也有 AQP-1 的表达.在肝硬化早期(第6周末)两组AQP-1蛋白质[相对积分光密度正常对照组(23±10),肝硬化组(21±13)]和 mRNA[正常对照组(0.63±0.11) μg/μl,肝硬化组(0.67±0.15) μg/μl]的表达量差异均无统计学意义.在肝硬化晚期 (第12周末)AQP-1 蛋白质[相对积分光密度正常对照组(23±9),肝硬化组(15±8)]和 mRNA[正常对照组(0.58±0.15) μg/μl,肝硬化组(0.43±0.16) μg/μl]的表达均下调. 结论在肝硬化伴腹水模型大鼠腹膜的毛细血管及小静脉的内皮细胞上AQP-1表达减少, AQP-1 的减少可能参与了腹水的形成.     

促红细胞生成素对缺血再灌注损伤大鼠肾脏水通道蛋白2表达的影响

目的 观察促红细胞生成素(EPO)对缺血再灌注损伤(IR)大鼠肾脏水通道蛋白(AQP2)表达的影响,以探讨EPO对IR的保护作用.方法 制备大鼠肾IR模型,将Wistar大鼠随机分为假手术组、肾IR组及EPO治疗组,通过免疫组化、聚合酶链反应及Wostem印迹等方法 ,检测肾组织中AQP2及其mRNA的变化,同时检测肾功能及尿量、尿渗透压的改变和肾组织形态学变化.结果 EPO治疗组肾脏中AQP2及其mRNA的变化、肾功能[血肌酐(51±5)μmol/L]及尿量[(26.0±2.3)μl·min-1·kg-1]、尿渗透压[(1508±121)mOsm/kg H2O]和肾组织形态学变化与肾IR组[血肌酐(141±5)μmol/L、尿量(59.1±1.3)μl·min-1·kg-1,尿渗透压(235±99)mOsm/kg H2O]相比均有明显改善(均P<0.05).结论 EPO可以促进IR大鼠肾脏AQP2表达,EPO具有改善大鼠肾脏IR的作用,EPO促进AQP2表达这一机制可能参与了其改善大鼠肾脏IR作用.     

3%高渗盐水在择期颅脑外科手术中对脑氧供需平衡的影响

目的探讨3％高渗盐水(HTS)在择期颅脑外科手术中对脑氧供需平衡的影响。方法选择40例择期行大脑半球胶质瘤切除术的患者,全麻诱导前行L3-4穿插置管测脑脊液压力(CSFP)。采用静吸复合麻醉,异氟醚呼出浓度达最低肺泡有效浓度(1 MAC)后,15 min内输注完毕3％HTS。分别检测输注前及输注后30、60、120 min的颅内压、平均动脉压、颈静脉球部和桡动脉血气分析,计算脑灌注压(CPP)、动-静脉氧含量差(Da-jvO2)、脑氧摄取率(OER)。结果输注3％HTS后30 min,CSFP为(11.00±2．31)mm Hg(1 mm Hg= 0．133 kPa),较输注前的(15．57±2．76)mm Hg显著降低(P<0．05);CPP为(69．57±3．78)mm Hg,虽有下降趋势,但与输注前的(72．71±5．09)mm Hg差异无显著性(P>0．05);Da-jvO2和OER与输注前比较均有下降趋势,但仅输注后60、120 min与输注前的差异有显著性(P值均<0.05)。结论3％HTS具有降颅内压的作用,并可改善脑血流代谢耦联,可安全地应用于择期颅脑外科手术。     

甘露醇和高渗盐水缓解家兔颅内高压的效果比较

目的:比较等渗透摩尔浓度的20%甘露醇和7.5%NaCl溶液降低颅内高压的效果,以及比较等体积量的高渗盐水7.5%NaCl溶液和23.4%NaCl溶液降低颅内高压的效果。方法:通过侧脑室插管灌注恒定压力的人工脑脊液建立家兔颅内高压模型,观察一定剂量的上述三种高渗溶液,分别对颅内高压家兔的平均动脉压、呼吸频率、潮气量、人工脑脊液灌流速度和脑含水率的影响。结果:当颅内压力从15 cmH2O升高到75 cmH2O时,家兔的平均动脉压升高,潮气量降低;经上述三种高渗溶液分别治疗后,家兔的平均动脉压,呼吸频率和潮气量在颅内高压前后的变化率与对照模型组比均无显著差异;经20%甘露醇5 ml/kg体重治疗或23.4%NaCl溶液2.2 ml/kg体重治疗后,颅内高压家兔的人工脑脊液灌流速度显著增加,脑含水率显著地降低,但两高渗溶液之间没有效应的差异;与对照组相比,7.5%NaCl溶液不能明显改变脑脊液的灌流速度和脑含水率。结论:在等渗透摩尔浓度下,20%甘露醇降颅内高压的效果要优于7.5%NaCl溶液;使用更高渗透摩尔浓度的高渗盐水23.4%NaCl溶液,能有效地降低颅内高压,可以替代甘露醇。     

高渗盐水对急性胰腺炎IL-6、IL-8及血流动力学变化的影响

目的:研究高渗盐水重复用于手术胰腺炎病人对IL-6、IL-8及血流动力学变化的影响,以探讨其可能的作用机制,为临床应用HS治疗AP提供理论依据。方法:48例重症胰腺炎手术病人随机分为A组(24例)和B组(24例),A组在术前及术后24 h时输7.5%高渗盐水4 m l/kg,B组则在同时点输复方氯化钠溶液,分别于术后1 d、3d、5 d、7 d、10 d、15 d进行血尿淀粉酶及白细胞计数的变化;并分别于入手术室时(T0)、术后4 h(T1)、24 h(T2)、36小时(T3)、48 h(T4)分别测定IL-6和IL-8。结果:T1、T3时A组MAP、CVP明显高于B组(P<0.05),HR组间比较无差异(P>0.05);T2时A组HR较B组低(P<0.05),MAP、CVP组间无差异(P>0.05);T2、T3、T4时A组IL-6、IL-8明显低于B组(P<0.05),且均低于T0时。血淀粉酶在术后15d内、尿淀粉酶在术后1周内组间无显著性差异(P>0.05),但10 d、15 d时A组明显低于B组(P<0.05);WBC则自3d起A组明显低于B组(P<0.05)。结论:高渗盐水可降低胰腺炎围手术期间的血浆IL-6、IL-8水平,抑制全身性炎症反应,对胰腺炎伴随的全身炎性反应有肯定治疗作用。