微泵耳蜗灌注碱性成纤维生长因子对庆大霉素致聋豚鼠的作用

目的 :应用微量渗透泵 (MOP)向豚鼠耳蜗灌注碱性成纤维生长因子 (bFGF) ,观察其对庆大霉素中毒所致耳聋的保护作用。方法 :10只豚鼠分成庆大霉素致耳聋组及正常组 ,于 2组豚鼠右耳耳蜗植入MOP灌注bFGF ,分别于灌注前 ,灌注后 1周、2周测ABR阈值 ,扫描电镜观察耳蜗组织形态。结果 :耳聋组在灌注bFGF后 1周、2周ABR阈值较灌注前降低 (P <0 .0 5 ) ,耳蜗毛细胞形态得以恢复 ;正常组ABR阈值及形态均无明显改变。结论 :MOP持续恒速耳蜗灌注bFGF对耳蜗中毒的毛细胞有修复作用 ,对正常耳蜗功能和形态无影响     

腺伴随病毒携带神经营养因子-3对庆大霉素致聋豚鼠耳蜗的保护作用

目的 探讨采用腺伴随病毒(AAV)携带神经营养因子-3(NT-3)对庆大霉素(GM)致聋豚鼠的局部基因治疗及其对耳蜗功能及形态的保护作用.方法 选用18只杂色健康豚鼠,用GM按80 mg/kg·d连续肌肉注射4 d后随机分为3组:AAV-NT-3治疗组(A组)7只,AAV对照组(B组)7只,GM对照组(C组)4只.A、B组动物在埋植微量渗透泵后继续肌肉注射GM 10 d,C组动物继续注射GM 10 d.AAV-NT-3及空白AAV载体滴度均为1.1×1010pfu/ml.对A、B两组注射GM前及术后10 d、C组注射GM后14 d进行听性脑干反应测听(ABR)及畸变产物耳声发射(DPOAE)测定.而后将动物麻醉处死取听泡,行基底膜铺片和毛细胞计数,计算外毛细胞损失率.结果 实验组与对照组相比听功能(ABR及DPOAE)及耳蜗毛细胞生存率均有显著性差异(P＜0.05).结论 腺伴随病毒介导NT-3转基因治疗可用于保护受氨基甙类药物损害的豚鼠听功能和耳蜗毛细胞;在行局部耳蜗转基因治疗中应严格遵循无菌原则.     

爆震后豚鼠耳蜗毛细胞和螺旋神经节细胞定量观察

目的 :观察爆震后耳蜗毛细胞和螺旋神经节细胞的变化。 方法 :复制强脉冲噪声致聋豚鼠模型 ,以脑干听觉诱发电位测试仪测定听神经脑干反应 (ABR)阈值 ,通过耳蜗铺片计算机图像分析行毛细胞计数 ,耳蜗病理切片螺旋神经节细胞计数。结果 :正常对照组和噪声暴露后 2 1d的实验组耳蜗钩回、第 1和第 2回毛细胞总数分别为 3 5 99± 15 9.6个 ,6 0 2 2± 98.4个 ;二下螺旋神经节细胞计数分别为 (5 1± 4.72 )个 ,(2 7± 6 .94)个 ,以上均数各组间相差显著。结论 :爆震后不仅 ABR阈值升高 ,毛细胞数减少 ,而且耳蜗螺旋神经节细胞数也明显减少     

丁胺卡那霉素对豚鼠耳蜗毛细胞凋亡及听力阈值的影响

目的探讨丁胺卡那霉素作用于耳蜗系统时毛细胞凋亡现象及其在听力损伤中的作用。方法15只豚鼠随机分为3组,各组肌内注射丁胺卡那霉素400mg·kg-1·d-1,分别于用药1d,3d,6d后处死。处死前检测其听脑于反应(auditorybrainstemresponses,ABR)的变化,并利用光镜和TUNEL标记技术检测耳蜗毛细胞发生凋亡的情况。结果①豚鼠肌内注射丁胺卡那霉素1d后耳蜗毛细胞即出现凋亡现象,连续用药3～6d,毛细胞凋亡呈强阳性表达;②耳蜗毛细胞凋亡出现的早期豚鼠听力阈值无明显改变,连续用药6d后听力阈值则明显提高。结论①丁胺卡那霉素作用于耳蜗毛细胞可引起毛细胞凋亡,细胞凋亡是豚鼠耳蜗毛细胞损伤的一条途径;②丁胺卡那霉素耳毒性作用机制可能与其引起耳蜗毛细胞凋亡有关。     

豚鼠耳蜗外毛细胞凋亡时听力变化的实验研究

目的：观察耳蜗外毛细胞发生凋亡时听力改变情况。方法：对20只豚鼠药物造模,诱发耳蜗外毛细胞发生凋亡。应用TUNEL技术观察凋亡表达,测试ABR阈值观察听力变化。结果：应用丁胺卡那霉素1天即可诱发豚鼠耳蜗外毛细胞发生凋亡,连续应用3d,耳蜗外毛细胞凋亡呈强阳性表达,但ABR阈值无明显改变;随着用药时间延长,凋亡细胞数目增加,甚至出现部分毛细胞缺失现象,此时ABR阈值明显升高。结论：耳蜗外毛细胞发生凋亡早期对豚鼠听力无明显影响,随着耳毒性药物应用时间延长,豚鼠ABR阈值升高可能存在两种原因：毛细胞凋亡或毛细胞坏死。     

经圆窗膜导入ADNF-9基因防治卡那霉素耳毒性的实验研究

目的:探讨腺伴随病毒(AAV)介导活性依赖性神经营养因子-9(ADNF-9)基因转染对卡那霉素致豚鼠耳毒性的拮抗作用。方法:选用80只白色红目豚鼠,听功能正常,随机分为四组,每组20只,A组(ADNF-9保护组):左耳经圆窗注入ADNF-9后肌注卡那霉素;B组(空载体组):左耳经圆窗注入AAV,后肌注卡那霉素;C组(人工淋巴液组):左耳经圆窗注入人工淋巴液后肌注卡那霉素;D组(空白对照组):仅肌注卡那霉素。卡那霉素均经大腿内侧注射400 mg/(kg·d),共给药6d;停药后6、14d各组均行听性脑干反应(ABR)检测,停药14d后各组处死动物,行耳蜗石蜡病理切片及耳蜗基底膜铺片观察各组豚鼠耳蜗基底膜毛细胞形态学。结果:实验前所有豚鼠的听功能均正常;停药后6、14d的ABR阈值A组为(32.54±5.28)dB和(33.52±2.26)dB;B组为(77.56±4.18)dB和(78.00±5.48)dB;C组为(75.24±6.72)dB和(77.25±4.65)dB;D组为(78.00±3.32)dB和(78.25±3.26)dB。A组停药后6、14d与B组、C组及D组比较有统计学差异(P<0.05)。耳蜗病理切片及基底膜铺片均提示:A组耳蜗螺旋器细胞损害较轻,基底膜板基本完整;其余三组,耳蜗螺旋器毛细胞损害严重,基底膜有不同程度的损害。结论:ADNF-9基因转染可以有效拮抗氨基糖苷类所致豚鼠耳毒性。     

豚鼠耳蜗外毛细胞凋亡时听力变化的实验观察

目的观察耳蜗外毛细胞发生凋亡时听力改变情况.方法对20只豚鼠药物造模,诱发耳蜗外毛细胞发凋亡.应用TUNEL技术观察凋亡表达,测试ABR阈值观察听力变化.结果应用丁胺卡那霉素1天即可诱发豚鼠耳蜗外毛细胞发生凋亡,连续应用3d,耳蜗外毛细胞凋亡呈强阳性表达,但ABR阈值无明显改变;随着用药时间延长,凋亡细胞数目增加,甚至出现部分毛细胞缺失现黎,此时ABR阈值明显升高.结论耳蜗外毛细胞发生凋亡早期对豚鼠听力无明显影响,随着耳毒性药物应用时间延长,豚鼠ABR阈值升高可能存在两种原因毛细胞凋亡或毛细胞坏死.     

卡那霉素对豚鼠耳蜗外毛细胞数量及乙酰胆碱酯酶表达的影响

【目的】观察卡那霉素对豚鼠耳蜗外毛细胞损害及乙酰胆碱酯酶表达的影响。【方法】24只豚鼠随机分为3组：正常对照组、卡那霉素给药3d组和卡那霉素给药6d组。应用耳蜗基底膜铺片AgNO3染色检测外毛细胞,耳蜗免疫组化染色观察乙酰胆碱酯酶表达,并结合听觉脑于反应监测耳毒性损伤的发生。【结果】给药3d组ABR阈值无明显改变,外毛细胞数量无明显减少,乙酰胆碱酯酶表达增加;给药6d组ABR阈值升高,外毛细胞数量明显减少,乙酰胆碱酯酶表达进一步增加。【结论】卡那霉素可损伤外毛细胞并影响乙酰胆碱酯酶的表达。     

应用顺铂建立C57小鼠感音神经性聋模型的实验研究

目的探讨顺铂诱发C57小鼠感音神经性聋模型的制备方法。方法将C57BL／6J小鼠随机分成4组,A组：耳蜗圆窗龛生理盐水给药5μL;B组：耳蜗圆窗龛顺铂给药5μL（1mg／mL）;C组：经鼓膜中耳腔顺铂给药10μL／d×5d（1mg／mL）;D组：腹腔注射顺铂6mg／（kg·d）×5d。用全频程脑干听觉诱发电位（ABR）检测4个组动物的听觉反应阈为指标,以动物各频率听觉反应阈上升≥10dB定为听力减退,并通过异硫氰酸荧光素（FITC）标记的鬼笔环肽染色观察用药后毛细胞的形态学变化。结果A、C、D组ABR反应阈用药前后无明显变化（P〉0．05）;B组小鼠顺铂用药后48h全频程ABR反应阈均升高（P〈0．05）,且毛细胞出现损伤、脱落,其损伤从顶回到底回有逐渐加重的趋势,外毛细胞较内毛细胞损伤严重。结论圆窗龛给药途径是建立顺铂诱发C57小鼠耳聋模型的有效途径。     

2型糖尿病小鼠内质网应激对耳蜗毛细胞退行性变的影响

目的：探讨内质网应激（ERS）对1%链脲佐菌素（STZ）诱导的糖尿病小鼠耳蜗毛细胞退行性变的影响,阐明其作用机制。方法：选取清洁级1月龄雄性昆明小鼠20只,随机分为对照组和模型组,模型组小鼠采用腹腔注射40 mg·kg^-1STZ建立2型糖尿病模型。尾静脉采血测定小鼠空腹血糖,通过听觉脑干反应（ABR）检测小鼠的ABR阈值,耳声发射测试（OAE）实验检测OAE阈值,应用小鼠耳蜗铺片技术计算小鼠耳蜗外毛细胞的缺损率,采用Western blotting法检测小鼠耳蜗毛细胞中GRP78、caspase-12、p-ERK和Nrf2蛋白表达水平。结果：与对照组比较,第2次注射STZ后7和14 d模型组小鼠空腹血糖差异无统计学意义（P>0.05）,21、28和35 d空腹血糖明显升高（P<0.05）,35 d达到最高值。与对照组比较,模型组小鼠在8、12和24 kHz各个频率的ABR阈值明显升高（P<0.05）。与对照组比较,低频刺激下模型组小鼠OAE阈值无明显变化（P>0.05）,在中频和高频刺激下模型组小鼠OAE阈值明显升高（P<0.05）。小鼠耳蜗外毛细胞缺损主要集中在底回端,耳蜗中回和顶回外毛细胞缺损较少;与对照组比较,模型组小鼠耳蜗中的底回外毛细胞缺损率明显升高（P<0.05）,中回和顶回外毛细胞缺损率略有升高,但差异无统计学意义（P>0.05）。与对照组比较,模型组小鼠耳蜗毛细胞中GRP78和caspase-12蛋白表达水平升高（P<0.05）,p-ERK和Nrf2蛋白表达水平降低（P<0.05）。结论：ERS能够引起糖尿病小鼠耳蜗外毛细胞缺损率和ABR脑干听力阈值升高,并降低p-ERK和Nrf2的蛋白表达水平,提示ERS可促进2型糖尿病小鼠耳蜗毛细胞的退行性病变。     

腺病毒介导GDNF的过表达对药物耳毒性损害后的保护作用

目的 确定腺病毒编码GDNF(glia1 cell line—derived neurotrophic factor)是否能挽救损伤后耳蜗毛细胞的缺失，寻求一种治疗药物性耳聋的行之有效的方法。方法 15只杂色豚鼠，研究组A注入带有GDNF基因的腺病毒(Ad—GDNF)而研究组B注入带有GFP基因的腺病毒(Ad—GFP)。空白对照组C经圆窗注入人工外淋巴液(AP)，11d后15只杂色豚鼠双侧耳蜗行听性脑干反应(ABR)检查，然后处死取材，耳蜗标本经硝酸银染色后铺片。结果 研究组听阈值与庆大霉素组和空载体组差异有显著性，结果表明Ad—GDNF可能保护庆大霉素损伤后内耳结构和功能。结论 这些数据提示腺病毒介导GDNF可以用于保护受氨基苷类药物毒害的感觉毛细胞和耳蜗听功能。     

二氧化碳激光鼓膜切开术的实验研究

目的：研究CO2激光鼓膜切开术的治疗能力及鼓膜的组织学变化。方法：25只豚鼠随机分为3组行鼓膜紧张部穿孔，前2组各10只分别为圆形或肾形穿孔，左耳用CO2激光，右耳用鼓膜切开刀，比较穿孔愈合时间，并观察鼓膜穿孔愈合过程的组织学变化，第3组5只用不同功率的CO2激光，左耳直接照射，右耳鼓室内注射生理盐水后再照射。结果：CO2激光组穿孔愈合时间较鼓膜切开刀组明显延长（P〈0．01）；肾形穿孔愈合时间更长（P〈0．01）。CO2激光组穿孔边缘出现炎症反应。小剂量激光对内耳无影响，鼓室内注水可以避免或减轻对耳蜗的损伤。结论：CO2激光鼓膜切开术可用于治疗分泌性中耳炎。     

环磷酰胺预处理后再免疫豚鼠听功能的变化

目的建立高阳性率自身免疫性内耳病动物模型,以供圆窗给药治疗内耳病的研究.方法白色红目豚鼠97只,其中32只用于制备内耳抗原,其余分为试验组(n=47)和对照组(n=18).试验组环磷酰胺腹腔注射进行预处理,2 d后用粗制内耳抗原行皮下多点接种,接种后4、6、8、10、12、14、20 d,接受听性脑干诱发电位(ABR)检测.对照组I不行任何处理,组Ⅱ仅行环磷酰胺预处理,不行粗制内耳抗原接种.结果接种后4 d时,试验组ABR阈值提高10 dB以上的动物占67%;接种后8 d时为86%,14 d时仍为60%,至接种后20 d时,所有动物ABR阈值恢复正常.结论将豚鼠用环磷酰胺预处理后,粗制内耳抗原只需单次接种,即可建立听力损害高发生率的自身免疫性内耳病动物模型.     

透明质酸—链霉素圆窗灌注对正常豚鼠内耳功能和形态学的影响

采用膜迷路铺片、火棉胶切片、透射电镜及内耳电生理检测技术，观察正常豚鼠透明质酸－链霉素（ＨＡ－ＳＭ）圆窗灌注后内耳功能和形态学变化，为临床应用提供实验依据。灌注后眼震时间明显缩短（Ｐ〈０．０１），而耳蜗电图无明显变化（Ｐ〉０．０５）；形态学观察示前庭感觉细胞严重破坏，而Ｃｏｒｔｉ器无明显损害。结果表明：ＨＡ－ＳＭ圆窗灌注可选择破坏前庭功能，而耳蜗功能得以保存。     

豚鼠颞骨的显微解剖学研究

目的 观察豚鼠显微镜下的颞骨结构,为豚鼠耳科学实验提供解剖学依据.方法 制作16只健康成年豚鼠的颞骨标本模型,对其中耳、内耳进行显微解剖并观察.结果 在豚鼠的颞骨标本上准确定位出中耳及内耳的相关结构,其中中耳结构包括鼓膜、听骨链、卵圆窗、圆窗、咽鼓管咽口、面神经管等,内耳结构包括耳蜗、3个半规管、椭圆囊、球囊、乙状窦、内听道、内淋巴囊、前庭导水管、蜗水管等.结论 豚鼠颞骨结构与人体颞骨结构有很大相似性,但亦有一定区别.     

新疆地区255例重度-极重度感音神经性耳聋患儿的内耳畸形临床分析

目的 探讨重度-极重度感音神经性耳聋患儿的内耳畸形的影像及手术特点,从而更好地为人工耳蜗植入提供临床指导。方法 调取新疆维吾尔自治区人民医院2020年1月—2021年12月筛查并行人工耳蜗植入术的内耳畸形患儿的颞骨高分辨率CT资料,根据Sennaroglu的分类方法对其进行分类,依次为Michel畸形、耳蜗未发育、共同腔畸形、耳蜗发育不良(Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型)、不完全分隔Ⅰ型(IP-Ⅰ)、Ⅱ型(IP-Ⅱ)、Ⅲ型(IP-Ⅲ)、前庭及半规管畸形、前庭导水管扩大及内听道狭窄等,并记录人工耳蜗植入径路、电极类型及并发症,分别分析各类畸形的影像特点及手术注意事项。结果 255例重度-极重度感音神经性耳聋患者中有66例(125耳)内耳畸形患者,其中,IP-Ⅱ型占内耳畸形的30.30%(20例/66例),单纯前庭导水管扩大占19.70%(13例/66例),其他类型比例较低。共55例(57耳)内耳畸形患儿接受了人工耳蜗植入手术,双侧植入2例。所有畸形病例均鼓阶开窗或圆窗植入电极。耳蜗发育不良(Ⅱ型、Ⅲ型)、IP-Ⅰ和IP-Ⅲ型选择短的直电极,IP-Ⅱ型、前庭导水管扩大、内听道扩大者选择标准电极。1例IP...     

Nd:YAG激光照射鼓膜对听觉功能影响的实验研究

目的 :探讨不同功率Nd :YAG激光照射鼓膜对内耳结构和功能的影响。方法 :应用光纤末端功率为 8W、6W、4W的Nd :YAG激光针对豚鼠作鼓膜照射 2s。采用听性脑干反应、耳蜗基底膜铺片及扫描电镜技术 ,观察激光照射前后 (分即刻及饲养 2周后 )ABR阈值及形态学变化。结果 :所用激光功率与内耳损伤程度成正相关 ,3组ABR阈值在即刻和饲养 2周后均升高 ,8W、6W组均较 4W组升高明显 ,8W、6W组照射后 2周ABR阈值较照射前差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,但 4W组 2周后恢复明显 ,与照射前差异无显著性。照射后立即取材的耳蜗毛细胞形态改变的结果 :即刻 8W、6W组耳蜗外毛细胞出现肿胀 ,硝酸银浓染 ,血管纹血管扩张 ,4W组无明显改变。饲养 2周后 ,8W组外毛细胞平均损失达 45 % ,6W组平均损失 2 0 % ,以上两组内毛细胞亦有少量缺失 ,4W组内、外毛细胞形态基本正常。结论 :本实验提示 :采用Nd :YAG激光治疗中耳疾病时 ,其光纤末端输出功率应控制在 4W ,时间为 2s为宜 ,否则可能会导致不可逆的听力下降。     

免疫性内耳病模型的建立及地塞米松圆窗和全身给药的疗效

目的建立免疫性内耳病模型,并初步比较地塞米松圆窗局部给药和全身给药治疗的效果。方法先用钥孔嘁血蓝蛋白(KLH)加完全弗氏佐剂在豚鼠背部多点皮内注射,2周后用KLH加不完全弗氏佐剂加强,同日通过手术将浸满KLH的小块明胶海绵置于圆窗上制作免疫诱导的内耳病模型。在此基础上使用微渗透泵(同时设PBS对照组)圆窗给药,以腹腔注射全身给药治疗免疫性内耳病,给药前后听性脑干反应(ABR)测试比较治疗效果。结果①动物模型ABR听阈:6只对照组豚鼠无明显听力损失,39只实验组豚鼠听力损失在10 dB以上的有22只;②治疗效果比较:17只听力损失≥15 dB的豚鼠模型随机分为三组:圆窗局部给药6只动物,治疗全部有效,ABR听阈平均下降13.3 dB;全身给药6只动物,4只有效,ABR听阈平均下降13.7 dB;PBS组全部无效。结论KLH经圆窗诱导的免疫性内耳病模型的成功率较高;地塞米松跨圆窗给药的有效性不亚于全身给药。     

镫骨切除术对豚鼠听力的影响

目的 研究镫骨切除术对豚鼠听功能及形态学的影响,探讨镫骨切除术对听功能改变的影响因素.方法 24只(48耳)豚鼠随机分为两组,每组12只.选定左耳为手术耳,分别进行暴露砧镫关节手术(手术对照、1组),镫骨切除、人工镫骨植入术(镫骨切除术组、2组);行听性脑干反应(ABR)测试并分别于术后1 h、术后1 d各组随机抽出4只豚鼠进行耳蜗中轴切片及扫描电镜检查.结果 手术对照组除波?潜伏期较术前延长外,其余各波潜伏期及波间期、反应阈均无明显改变;镫骨切除术后1 h反应阈明显提高(23.75±3.77 dBSPL);Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ波和Ⅰ～Ⅲ波间期较术前延长.镫骨切除术后Ⅰ、Ⅲ波潜伏期较手术对照组延长,而各波间期无明显差异;各组术后1 d与术后1 h各听力指标无显著性差异.两组耳蜗结构完整,各转螺旋神经节细胞数无显著性差异.镫骨切除术组仅第3排外毛细胞静纤毛部分略有紊乱(术后1 d恢复正常),手术对照组毛细胞形态正常.结论 镫骨切除术可引起豚鼠听力轻度损失,对耳蜗功能的影响小.