核因子-κB对TNF-α诱导的脂肪细胞葡萄糖转运蛋白4表达的影响

【目的】观察TNF-α对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）mRNA与蛋白表达的作用,并探讨核因子-κB（NF-κB）对上述作用的影响。【方法】成熟的3T3-L1脂肪细胞分成3组：A组正常对照组,B组肿瘤坏死因子α（TNF-α）组,C组吡咯烷二硫基甲酸酯（NF-κB活性抑制剂）＋TNF-α组。各组干预48h后检测phospho-NF-κBp65（Ser536）的蛋白水平、GLUT4mRNA及蛋白水平。蛋白检测采用Western法,mRNA检测采用RT-PCR法。【结果】B组phospho-NF-κBp65蛋白水平（71.1±5.9）高于A组（41.3±1.7,P〈0.001）和C组（25.4±4.7,P〈0.001）。B组GLUT4的mRNA水平（0.86±0.14,P〈0.001）与蛋白水平（31.6±7.2,P〈0.001）低于A组（2.01±0.65;60.7±8.4）,C组mRNA水平（0.46±0.12）与B组比较有下降趋势但无统计学意义（P=0.100）,C组蛋白水平（9.5±3.0）低于B组（P=0.001）。【结论】TNF-α下调3T3-L1脂肪细胞的GLUT4表达,抑制NF-κB活性后GLUT4表达进一步下调。这提示了TNF-α可能不是通过激活NF-κB而使GLUT4的表达下调。     

高血糖对老年急性心肌梗死患者临床和预后的影响

目的：观察血糖升高对老年急性心肌梗死（AMI）患者临床和预后的影响。方法：选取老年AMI患者223例，根据入院第一次随机血糖分为3组，A组〈7．8mmol／L，B组7．8～11．0mmol／L，C组≥11．0mmol／L。A组为血糖正常组，B、C组为血糖升高组。结果：入院随机血糖高的患者，平均年龄较大[（68．8±7．5）岁比（71．6±7．3）岁、（74．3±7．1）岁，P〈0．05]，C组与A组相比血甘油三酯[（1．57±0．83）mmol／L比（1．31±0．63）mmol／L，P〈0．051、尿酸[（360．2±172．3）μmmol／L比（273±86．3）μmmol／L，P〈0．05]、肌酐[（125．2±90．5）μmmol／L比（85．7±23．6）μmmol／L，P〈0．05]浓度较高。与A组比较，B、C组复合壁心肌梗死多见（38．9％比59．7％、66．7％，P〈0．05）。C组与A组相比左室射血分数[（43．5±6．37）％比（58．5±8．36）％，P〈0．05]较低。与A组比较，B、c组患者溶栓再通率低（54．8％比40．6％、28．6％，P〈0．05），冠脉造影提示多支血管病变多见（51．6％比73．7％、69．2％，P〈0．05），C组比A组并发心力衰竭多见（35．4％比15．9％，P〈0．05），住院病死率（20．8％比4．5％．P〈0．05）增加。结论：老年A加患者入院随机帆糖升高．提示病情蘑、梗死面积大、并发症多、预后蓁及病死率高。     

无生长追赶出生低体重幼鼠生长激素/胰岛素样生长因子1轴抵抗与胰岛素抵抗的相关研究

目的探讨生后无生长追赶的出生低体重（NCU—SGA）幼鼠的胰岛素抵抗对生长激素（GH）抵抗的影响及其受体后信号转导机制。方法以母鼠孕期限制饮食法建立雄性NCU．SGA模型研究：（1）GH和胰岛素抵抗的关系：测定4周龄时24h尿GH排泄率（24hU—GH）,血胰岛素样生长因子（IGF）-1、空腹胰岛素（FINS）、血糖以及肝组织IGF-1mRNA和STATS信号表达;（2）胰岛素抵抗对生长轴的影响：3周龄时注射P13K阻断剂1周后（设溶剂对照组）,测定大鼠体格生长,血IGF-1、FINS水平及肝IGF-1mRNA和STATS信号表达。结果（1）NCU—SGA鼠血清IGF-1浓度、肝IGF-1mRNA表达以及磷酸化与总STAT蛋白表达水平的比率均显著低于健康对照组（C组）,分别为（248±58）ng／ml,（6．1±0．3）拷贝和（61±22）％;C组为（383±62）ng／ml,（6．6±0．4）拷贝和（91±29）％（均P〈0．01）;NCU—SGA组与C组的24hU-GH差异无统计学意义（P〉0．05）;NCU—SGA组FINS及空腹血糖为（24．7±9．6）mU／ml和（5．4±0．3）mmol／L显著高于C组的（9．8±2．8）mmol／L和（4．5±1．7）mmol／L（均P〈0．05）。24hU—GH与FINS显著正相关（r=0．680,P=0．000）。（2）PBK阻断后NCU．SGA鼠胰岛素抵抗加重,体重下降,血清IGF-1及肝IGF-1mRNA为（218±60）ng／ml及（6．1±0．3）拷贝,显著低于溶剂对照组的（286±45）ng／ml及（6．3±0．3）拷贝,均P〈0．05。但两组间肝组织总的及磷酸化STATS信号表达水平差异无统计学意义。结论NCU—SGA幼鼠的胰岛素抵抗与GH抵抗密切相关。生后无追赶与GH受体后JAK2-STATS通路受损所致的GH抵抗有关。胰岛素抵抗可能经非STATS依赖途径加重了GH抵抗及生长障碍。     

植物血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体介导氧化型低密度脂蛋白对内皮祖细胞存活和功能的影响

目的 研究植物血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体（LOX—1）是否介导氧化型低密度脂蛋白（oxLDL）对内皮祖细胞（EPC）的存活及功能产生影响。方法 分选脐血CD34^＋细胞,培养于内皮细胞生长培养基（EGM-2）中。培养14d后,部分EPC与10、25、50μg/ml的oxLDL孵育48h;部分EPC先与LOX-1单克隆抗体（LOX—1mAb）预处理24h,再与50μg／ml oxLDL孵育48h;对照组不作处理。检测EPC存活率及EPC迁移、黏附和管状结构形成能力,并检测LOX-1的蛋白及mRNA表达。结果oxLDL浓度为25和50μg／ml时,凋亡率分别为（15．8±1．0）％和（18．8±2．0）％,显著高于对照组的（9．0±1．2）％（P〈0．05）;迁移率分别为（5．7±1．0）％和（5．1±0．8）％,显著低于对照组的（9．5±0．8）％,（P〈0．05）;黏附细胞数分别为（33±2）和（30±3）个,显著少于对照组的（37±5）个（P〈0．05）;形成的管状结构分别为（2．9±0．5）和（1．8±0．5）mm,显著短于对照组的（5．0±0．6）mm（P〈0．05）。OxLDL可增加LOX—1mRNA及蛋白的表达,oxLDL浓度为50μg／ml时,LOX—1mRNA表达由100％增加为（174±39）％,蛋白表达由100％增加为（172±8）％。OxLDL的上述作用能被LOX1mAb所阻断。结论OxLDL可降低EPC存活,抑制EPC功能,其作用是由LOX—1介导的。     

冠心病患者妊娠相关血浆蛋白A含量与血管内皮功能关系探讨

【目的】探讨冠心病患者血循环妊娠相关血浆蛋白A（PAPP—A）水平与内皮功能的关系。【方法】64例冠心病患者，其中稳定型心绞痛组34例，急性冠脉综合征组30例，分别检测其相关内皮功能，包括肱动脉血流介导的血管舒张反应（FMD）和高敏C-反应蛋白（hs—CRP）、内皮素（ET）、一氧化氮（NO）水平，并用酶联免疫法检测血清PAPP—A。【结果】稳定型心绞痛组患者同急性冠脉综合征组相比PAPP—A[（6×10^-3±5×10^-1U／L与（19×10^-3±13×10^-3）U／L，P〈0．05]、hs-CRP[（0．5±0．3）mg／L与（3．6±2．2）mg／L，P〈0．01]、NO[（57±4）μmol／L与（45±5）μmol／L，P〈0．05]和FMD（6．0％±0．8％与3-3％±1．2％，P〈0．05）的差异有统计学意义。逐步选择多重回归分析，按α=0．10水准，发现PAPP—A与hs—CRP和FMD存在直线关系，Lnhs—CRP的偏相关系数为0．333（95％置信区间：0．138-0．527，P〈0．01），FMD的偏相关系数为-0．623（95％CI：-1．144—0．102，P〈0．051，其中常数项为5．570。高PAPP—A（〉11．094×10^-3U／L）患者hs—CRP明显增高[（5．3±4．2）mg／L与（1．3±0．6）mg／L，P〈0．01），FMD则降低（3.3％±2．4％与6．2％±3．6％，P〈0．05）。【结论】PAPP-A可作为间接评估冠心病患者血管内皮功能的指标之一。     

综合干预对老干部血脂情况的影响

目的：分析近5年来，药物使用、合理膳食及适当运动等干预方式对老干部血脂达标情况的影响。方法：与南京军区南京总医院保健科合作。对辖区内9个干休所476名离休干部5年来的体检资料进行回顾性调查，并对部分老干部进行问卷调查。结果：①本研究人群血脂的基线水平为：TC（5．57±1．45）mmol／L、LDL—C（3．61±1．15）mmol／L、TG（2．06±1．07）mmol／L。经5年综合干预后，三者分别下降为（4．65±1．02）、（2．76±1．07）、（1．78±0．68）mmol／L，下降显著。其中．TG的变化显著（P〈0．05），TC及LDL-C的变化非常显著（P〈0．01）。②人群血脂达标的基线水平为：TC31.3％、LDL—C44．8％、TG56．7％，经干预后分别上升为56．8％、63.3％、68．6％，上升非常显著（P〈0．01）。结论：他汀类药物的服用及合理膳食教育等综合干预，能够使血脂显著下降，达标率显著提高。     

伊贝沙坦对糖尿病大鼠肾氧化应激、NF-kB活性和ICAM-1 mRNA表达的影响

【目的】探讨伊贝沙坦对糖尿病大鼠肾脏氧化应激、NF—kB活性和ICAM-1mRNA表达水平的影响。【方法】将33只SD大鼠随机分为3组：正常对照组（C）、糖尿病组（D）和伊贝沙坦组（I）。糖尿病大鼠模型用链脲佐菌素诱导。大鼠饲养12周后,观察24h尿微量白蛋白排泄率（UAER）,取出肾脏作肾组织病理检查,测定肾组织中丙二醛（MDA）含量与超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱苷肽过氧化物酶（GSH—PX）活性变化。逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）法检测肾组织中细胞间粘附因子-1（ICAM-1）mRNA的表达。凝胶电泳迁移率变动分析（EMSA）检测核因子（NF）-kB的活性。【结果】UAER在D组（3784-100）及I组（149±58）均显著高于C组（30±13）．P〈0．01;I组UAER较D组显著降低,P〈0．01。与C组大鼠比较,D组大鼠肾组织MDA含量显著增高（5．8±0．9 vs 3．5±0．2）,P〈0．01;SOD、CAT及GSH—PX活性均显著降低（22．3±3．1,11,7±0．7,11．3±1．7vs39．2±2．0,18．2±0．5,23．2±3．9）,P〈0．01;I组肾组织MDA含量（4．3±0．6）明显低于D组．P〈0．01;SOD、CAT及GSH—PX活性（30．7±1．6,13．3±0．4,15．8±2．8）明显高于D组,均P〈0．01。NF-kB活性在D组大鼠肾组织（44．3±0．4）明显高于C组（14．6±0．8）,P〈0．01;I组（37．7±0．3）明显低于D组,P〈0．01。D组肾组织ICAM-1mRNA表达（2．14±0．2）明显高于C组（0．36±0．1）,P〈0．01;I组肾组织ICAM-1mRNA（1．37±0．1）表达明显低于D组,P〈0．01。【结论】伊贝沙坦可能部分通过减轻氧化应激反应以及下调糖尿病大鼠肾组织中NF—kB的活性,降低ICAM-1mRNA的表达水平实现对糖尿病大鼠肾脏的保护作用。     

血管内皮生长因子C促进HeLa宫颈癌细胞粘着斑激酶活性的研究

目的探讨粘着斑激酶（focal adhesion kinase,FAK）介导血管内皮细胞生长因子C（vascular endothelial growth factor C,VEGF—C）促宫颈癌恶性进展的作用。方法提取不同病理分期的宫颈癌组织标本蛋白．采用Western-blot检测VEGF．C及FAK蛋白的表达情况。在体外培养宫颈癌细胞株HeLa细胞,采用Western—blot测定VEGF—C对FAK蛋白的表达和磷酸化的调控作用。结果随着宫颈癌恶性程度的增高,VEGF-C、FAK蛋白及磷酸化FAK蛋白表达水平均随之增加。与正常宫颈组织比较,宫颈原位癌（CIN）组织中VEGF．C、FAK、磷酸化FAK蛋白表达分别增加了（48±10）％、（78±14）％、（83±15）％,P〈0．05;宫颈鳞癌Ⅰ期各蛋白增高幅度分别为（104±22）％、（121±28）％、（143±30）％（P〈0．01）;宫颈鳞癌Ⅱ期（未放疗、化疗）各蛋白表达增高更为显著,其幅度分别为（195±28）％、（186±22）％、（204±31）％,P〈0．001。在培养的宫颈癌细胞株HeLa细胞上,VEGF—C（100μg／L）处理24h后,可显著增高FAK蛋白、磷酸化FAK蛋白的表达,该作用可被VEGF—C单克隆抗体明显抑制。结论VEGF—C、FAK蛋白表达与宫颈癌恶性程度密切相关,VEGF—C可能通过上调FAK表扶殛苴磷酪化水平而但讲宫颈癌的熏忡讲犀     

葡萄糖转运蛋白在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的：探讨葡萄糖转运蛋白（Glucose transporter，Glut）的两种异构体Glutl、Glut3及缺氧诱导因子-1（Hypoxia induciblefactor-1，HIF-1）的亚基HIF—1α，在非小细胞肺癌中的表达及临床意义。方法：选取34例手术切除非小细胞肺癌（包括癌组织和癌旁组织）和17例肺良性病变标本，用免疫组织化学法测定Glutl、Glut3及HIF-1α在肺组织中的表达；用RT—PCR半定量检测Glutl、Glut3及HIF-1α的mRNA表达；用Western Blot检测Glutl、Glut3及HIF-1α蛋白的表达，并测两者相关性。结果：Glutl、Glut3及HIF-1α在肺癌组织中mRNA相对含量为0．689±0．245、0．506±0．246、0．693±0．248，对应癌旁组织为0．338±0．157、0．482±0．238、0．351±0．184，Glutl和HIF-1α在肺癌组织中显著升高（P〈0．001），而Glut3差别无显著性（P〉0．05）。Glutl、Glut3、HIF—1α在癌组织中蛋白相对含量为0．582±0．247、0．551±0．251、0．525±0．246，癌旁组织为0．288±0．151、0．436±0．224、0．261±0．135，在肺良性病变中为0．291±0．142、0．402±0．206、0．271±0．176，Glutl和HIF-1α在癌组织中的表达均明显高于癌旁组织（P〈0．001）和肺良性病变组织（P〈0．001）；而Glut3差别无显著性（P〉0．05）。Glutl和HIF-1α在低分化组明显高于中高分化组（P〈0．05），Ⅲ期明显高于Ⅰ和Ⅱ期（P〈0．05），且HIF-1α的表达与Glutl明显相关（r=0．854，P〈0．01）。结论：在非小细胞肺癌中，Glutl和HIF-1a存在高表达，其表达与细胞分化程度、TNM分期密切相关，且Glutl和HIF-1α具有相关性。     

严重烧伤患者外周血树突状细胞表型测定及其意义

目的了解严重烧伤患者外周血树突状细胞（DC）功能变化。方法对12例烧伤面积60％～99％的烧伤患者,分别于伤后第1、2,3、4周取外周静脉血分离培养DC,单克隆抗体标记后,采用流式细胞仪测定DC表型组织相容性抗原（HLA）-DR、CD80、CD83、CD86、CD14、CD11C的表达水平。10例健康志愿者外周血DC作为对照组。结果在伤后1、2、3、4周烧伤患者外周血DC表面标记表达的HLA—DR分别为62．1％±8．4％、65．0％±6．2％、68．4％±5．7％、75．4％±8．4％,对照组为93．9％±2．2％（均P〈0．05）;CD80为12．9％±3．7％、14．7％±2．5％、16．1％±4．2％、16．2％±4．8％,对照组24．3％±11．6％（均P〈0．001）;CD83为15．1％±4．2％、15．1％±4．0％、22．2％±7．7％、21．3％±7．0％,对照组28．1％±5．1％（均P〈0．001）;CD86为69．2％±7．1％、70．5％±5．4％、75．1％±6．1％、79．6％±6．4％,对照组84．3％±8．2％（P〈0．001）,它们较对照组阳性表达率明显下降。CD14的阳性表达率为12．7％±1．9％,12．0％±1．5％,11．3％±1．3％,9．3％±1．7％,较对照组（7．3％±1．5％）则显著升高（P〈0．001）;CD11c的阳性表达率为86．8％±6．1％、89．5％±5．1％、91．3％±2．8％、89．4％±4．0％,较对照组（92．6％±3．8％）虽有降低,但差异无统计学意义（均P〉0．05）。HLA—DR阳性表达率从伤后第4周始有升高趋势,但仍明显低于正常对照组（P〈0．05）。结论严重烧伤患者伤后外周血树突状细胞功能下降,是机体免疫系统功能抑制的重要部分,也是烧伤后引起全身感染的一个重要原因。     

Effects of fatty acid regulation on visfatin gene expression in adipocytes

Background The levels of long-term elevated serum or intracellular free fatty acid （FFA） induce insulin resistance associated with central obesity. The insulin-mimetic protein visfatin is preferentially produced by visceral adipose tissues and has been implicated in obesity and insulin resistance. To identify that FFA is capable of inducing insulin resistance and to clarify the role of FFA on visfatin, we examined the effect of monounsaturated FFA oleate （C 18： 1） and saturated FFA palmitate （C 16：0） on glucose transport and visfatin gene expression in cultured 3T3-L1 adipocytes or preadipocytes. Methods FFA-free DMEM/F12, 0.125 mmol/L, 0.5 mmol/1 and 1.0 mmol/L oleate or palmitate was added to cultured 3T3-L1 adipocytes or preadipocytes and incubated overnight. Glucose transport was assessed as 3H- 2-deoxy-glucose uptake. Total RNA was extracted and subjected to RT-PCR for the measurement of visfatin mRNA levels. Statistical comparisons between control group and other groups were performed with the two-tailed paired t test, and one-way ANOVA was used to compare the mean values among the groups. Results Insulin increased specific membrane glucose transport in 3T3-L1 preadipocytes. Upregulation was evident from 15 minutes to 1 hour exposure to insulin. However, after 6-hour exposure to insulin, there was a downregulation in the response to insulin. Dose response studies demonstrated that 2-deoxy glucose transport was increased by 336% at 50 nmol/L insulin （P〈0.01）, and reached a maximal effect at 100 nmol/L insulin （P〈0.01）. Oleate and palmitate treatment did not influence basal glucose transport （without insulin stimulation）, whereas insulin-stimulated glucose transport was inhibited after overnight oleate and palmitate treatment in preadipocytes and adipocytes. In 3T3-L1 preadipocytes, insulin resistance could be achieved at 0.125 mmol/L oleate or palmitate （P〈0.05, respectively）, and the inhibition was dose dependent. In adipocytes, the inhibition was noted at 0.5 mmol/L oleate or 1.0 mmol/L palmitate. Visfatin mRNA expression increased during differentiation more than 1.5-fold. Bovine serum albumin （BSA） did not influence visfatin mRNA expression compared with the control group. Dose-response studies demonstrated that addition of 0.125 mmol/L oleate and palmitate to 3T3-L1 adipocytes decreased visfatin mRNA expression significantly （78%, 77%, respectively, relative to untreated control, P〈0.05）, and further to 65% （relative to untreated control, P〈0.05） and 55% （relative to untreated control, P〈0.01） at 1.0 mmol/L FFA. Furthermore, the suppression on preadipocytes was similar to that of adipocytes, which reached a maximal reduction of 44% （oleate, P〈0.05） and 47% （palmitate, P〈0.05） at 1.0 mmol/L FFA. Conclusions Oleic acid and palmitic acid may induce insulin resistance in 3T3-L1 adipocytes and preadipocytes. Downregulation of visfatin mRNA may contribute to impair insulin sensitivity caused by oleate and palmitate.     

孕酮对脂肪细胞促酰化蛋白受体和下游信号蛋白表达的作用

目的 观察孕酮对3T3-L1(前)脂肪细胞促酰化蛋白(ASP)受体C5L2 mRNA和细胞表面C5L2蛋白表达的影响,以及孕酮对ASP下游信号蛋白的作用.方法 体外培养3T3-L1细胞,诱导细胞分化,不同浓度孕酮作用于3T3-L1(前)脂肪细胞,孵育过夜后收获细胞,分别采用RT-PCR和流式细胞仪检测ASP受体mRNA和蛋白表达情况;采用Western印迹法检测基础状态和ASP激发后Gαq/11,Gβ,p-PKCα和p-PKCζ蛋白表达.结果 孕酮最大抑制成熟脂肪细胞14% C5L2 mRNA (P＞0.05)和蛋白表达22%(36%±15%vs 46%±12%,P＜0.01),高浓度孕酮(1 × 10-6 mol/L)能显著性抑制前脂肪细胞66%C5L2 mRNA(0.17±0.11 vs 0.50±0.18,P＜0.01)和29%C5L2蛋白表达(36%±16%vs 51%±20%,P＜0.05).高浓度孕酮在一定程度上抑制ASP激发后成熟脂肪细胞Gαq/11,Gβ,p-PKCα和p-PKCζ的表达,各蛋白表达分别减少了41%(0.71±0.21 vs 1.20 ±0.24,P＜0.05),63%(0.55±0.32 vs 1.48±0.40,P＜0.05),49%(0.53±0.20 vs 1.04 ±0.19,P＜0.01)和32%(0.36 ±0.10 vs 0.53 ±0.20,P＞0.05).在前脂肪细胞,高浓度孕酮显著性抑制ASP刺激的59%Gαq/11(0.42 ±0.18 vs 1.04±0.28,P＜0.01),43%Gβ(0.77 ±0.09 vs 1.35 ±0.27,P＜0.05),51%p-PKCα(0.44 ±0.15 vs 0.90 ±0.25,P＜0.05)和30%p-PKCζ(0.27±0.08vs 0.39±0.12,P＜0.05)蛋白表达.结论 孕酮诱导ASP抵抗的发生,ASP抵抗参与了高浓度孕酮引起的脂肪细胞胰岛素抵抗状态的病理生理过程.     

游离脂肪酸对大鼠肝细胞瘦素受体基因、蛋白表达及酪氨酸磷酸化的影响

目的 :探讨游离脂肪酸 (FFA)是否会对大鼠肝细胞瘦素 (leptin)受体的基因、蛋白表达及酪氨酸磷酸化产生一定的影响。　方法 :分离、培养新生Sprague Dawley大鼠肝细胞 ,分别与软脂酸 (0 .2 5mmol/L)或油酸 (0 .12 5mmol/L)孵育 12、2 4和 36h ,提取蛋白后用Western印迹法检测瘦素受体的蛋白水平。用RT PCR检测肝细胞内瘦素受体RNA含量的变化。应用免疫沉淀法检测瘦素受体的酪氨酸磷酸化程度。　结果 :软脂酸和油酸孵育后大鼠肝细胞瘦素受体的蛋白表达水平在孵育 12和 2 4h后无显著变化 ,在孵育 36h后显著下调 (P <0 .0 5 ) ;瘦素受体的RNA水平在孵育 12h后无显著变化 ,孵育 2 4和 36h后显著下调 (P <0 .0 5 ) ;瘦素受体的酪氨酸磷酸化程度在孵育 12h后无显著变化 ,孵育 2 4和 36h后显著下调 (P <0 .0 5 )。　结论 :FFA可对大鼠肝细胞瘦素受体的基因、蛋白表达水平及磷酸化程度产生一定的抑制作用 ,这可能是FFA导致胰岛素抵抗的机制之一。     

小檗碱对脂肪细胞分化的影响

目的 探讨小檗碱对脂肪细胞分化的影响和其机制。方法 培养3T3-L1前脂肪细胞。以四甲基偶氮唑盐(MTT)方法检测3T3-L1前脂肪细胞的增殖,以油红O染色检测3T3-L1脂肪细胞分化过程中胞浆脂肪的堆积,同时采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质免疫印迹技术检测小檗碱对过氧化脂质体增殖激活受体γ2(PPARγ2)mRNA和蛋白质表达的影响。结果 10μmol/L小檗碱使3T3-L1前脂肪细胞的MTT值增加36%(P<0.001),小檗碱处理的脂肪细胞胞浆中,脂肪的堆积明显少于对照组,仅10％～20％的细胞出现较大脂滴。RT-PCR结果显示,在3T3-L1脂肪细胞分化过程中,小檗碱组脂肪细胞的PPARγ2 mRNR较对照组低48％(P<0.01),蛋白质免疫印迹结果也显示小檗碱抑制PPARγ2蛋白质的表达。结论 小檗碱促进前脂肪细胞的增殖,小檗碱减少脂肪细胞分化过程中脂质的堆积、抑制脂肪细胞的分化,可能与其降低PPARγ2mRNA和蛋白质的表达有关,这提示小檗碱在临床上可能适合于治疗肥胖的2型糖尿病患者。     

葛根素对凝血酶诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的观察葛根素对凝血酶诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响,对原癌基因c-fos和bc l-2蛋白质以及凝血酶受体(TR)mRNA表达的作用。方法以细胞计数法,流式细胞仪测定DNA含量,细胞周期分析法观察凝血酶及葛根素对VSMC增殖和DNA合成的影响。在凝血酶及葛根素作用24 h后,用W estern印迹法检测c-fos和bc l-2蛋白表达,以半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测TR mRNA的表达。结果凝血酶对VSMC有明显促增殖作用,促增殖效应在24 h末达峰值(细胞计数凝血酶组8.64×104/m l±0.12×104/m l,对照组4.20×104/m l±0.11×104/m l,P<0.05),且凝血酶浓度在0.1~1.0 U/L之间呈剂量依赖关系;葛根素呈剂量依赖性地抑制凝血酶诱导的细胞增殖、DNA合成以及VSMC c-fos和bc l-2蛋白的表达(葛根素浓度为1.5×10-3mol/L时,抑制率分别为42.6%±5.2%、58.2%±7.9%、44.5%±7.5%和39.6%±6.4%,均P<0.05);高浓度(1.5×10-3mol/L)的葛根素可显著抑制凝血酶诱导的TR mRNA上调(抑制率为17.6%±1.7%,P<0.05)。结论葛根素能抑制凝血酶诱导的VSMC增殖,这可能与其抑制c-fos和bc l-2蛋白有关,并部分与其抑制TR mRNA表达有关。     

高渗液对大鼠胸膜间皮细胞水通道蛋白1表达的影响

目的 观察高渗液对胸膜间皮细胞水通道蛋白1（AQP1）表达的影响。方法 体外培养Wistar大鼠胸膜间皮细胞,鉴定后将细胞随机分为对照组和高渗组,对照组以D-MEM／F-12培养液培养,高渗组以含不同浓度NaCl的高渗培养液培养,100mmol／LNaCl组分为6、12、18及24h4个时间组,应用Western印迹、RT-PCR方法检测细胞中AQP1表达变化。结果含25、50、75、100、150mmol／LNaCl的高渗培养液作用细胞24h后,AQP1蛋白表达量（A值）分别为24．0±1．8、27．8±2．4、31．7±2．5、89．7±6．2及107．7±9．3,均高于对照组（10．8±1．5）（t值分别为16．1、17．1、20．2、35．1、29．0,均P〈0．01）;含100mmol／LNaCl高渗液培养细胞6、12、18及24h后,AQP1表达量（A值）分别为42．1±2．6、78．9±3．6、109．6±7．6及123．4±8．6,均高于对照组（12．9±1．9）（t值分别为25．7、45．5、34．8、35．3,均P〈0．01）。结论高渗液能上调胸膜间皮细胞AQP1的表达,AQP1可能参与胸水的转运。     

睾酮对3T3-L1脂肪细胞促酰化蛋白受体及下游信号蛋白的影响

目的:观察睾酮对3T3-L1(前)脂肪细胞促酰化蛋白(ASP)受体C5L2-mRNA和细胞表面C5L2蛋白表达的影响,以及睾酮对3T3-L1(前)脂肪细胞Gαq/11,Gβ,p-PKCα和p-PKCζ蛋白以及ASP刺激的Gαq/11,Gβ,p-PKCα和p-PKCζ蛋白表达的影响。方法:体外培养3T3-L1细胞,诱导细胞分化,用不同浓度睾酮作用于3T3-L1(前)脂肪细胞,孵育过夜后收获细胞,采用RT-PCR和流式细胞仪检测ASP受体mRNA和蛋白表达情况;采用Western Blot法检测基础状态和ASP刺激的Gαq/11,Gβ,p-PKCα和p-PKCζ蛋白表达。结果:睾酮呈浓度依赖性均抑制3T3-L1成熟脂肪细胞C5L2-mRNA和蛋白的表达,10-6mol/L时mRNA和蛋白分别减少了60%(P<0.01)和27%(P<0.01)。但前脂肪细胞C5L2-mRNA和蛋白表达水平均无显著性差异。高浓度(10-6mol/L)睾酮在一定程度上抑制ASP刺激的成熟脂肪细胞Gαq/11,Gβ,p-PKCα和p-PKCζ的表达,分别减少了52%(P<0.05),27%(P>0.05),50%(P<0.01)和57%(P<0.05);在前脂肪细胞,ASP-C5L2下游信号分子Gαq/11,Gβ,p-PKCα和p-PKCζ表达无明显抑制作用。结论:睾酮抑制成熟脂肪细胞ASP信号分子表达,睾酮诱导ASP抵抗的发生机制与下调脂肪细胞表面ASP受体功能有关,与干扰ASP-C5L2信号转导途径有关。ASP抵抗参与了高睾酮引起的胰岛素抵抗状态的病理生理过程,ASP抵抗可能参与多囊卵巢综合征(PCOS)、肥胖症等多种疾病的病理生理过程。     

睾酮对胰岛素敏感细胞胰岛素受体底物1和葡萄糖转运载体4表达的影响

目的探讨雄激素对胰岛素敏感性影响的可能的分子机制。方法诱导3T3-L1前脂肪细胞系和C2C12成肌细胞系分别分化为3T3-L1脂肪细胞和C2C12骨骼肌细胞,然后对这两种细胞分别以10-9mol/L睾酮处理4、8、12、24及48h,并以不同浓度(10-12~10-5mol/L)的睾酮处理24h,用Western印迹的方法检测两种细胞在以两种方法处理后胰岛素受体底物1(IRS-1)和葡萄糖转运载体4(GLUT4)表达的变化。结果随着10-9mol/L浓度的睾酮处理时间的延长,IRS-1和GLUT4在两种细胞的表达逐渐增加,IRS-1于12h达峰后下降。3T3-L1脂肪细胞及C2C12骨骼肌细胞中12h峰值分别是0h对照的(1·42±0·42)倍和(1·53±0·14)倍,均P<0·05;GLUT4于24h达峰后表达下降[3T3-L1脂肪细胞及C2C12骨骼肌细胞中24h峰值分别是0h的(3·22±0·10)倍和(5·17±1·06)倍,均P<0·05]。当睾酮处理浓度从10-12mol/L逐渐增加时,IRS-1在两种细胞的表达逐渐增加,于10-9mol/L达峰值后表达逐渐下降[在3T3-L1脂肪细胞和C2C12骨骼肌细胞,10-9mol/L睾酮处理后的峰值较空白对照分别增加(4·23±0·27)倍和(3·16±0·15)倍,均P<0·05]。GLUT4在C2C12骨骼肌细胞的表达随着睾酮浓度的升高有增加的趋势[经10-7mol/L睾酮处理后的表达量是空白对照的(2·99±0·15)倍,P<0·05,于10-7mol/L后增加趋势不明显。在3T3-L1脂肪细胞中,GLUT4的表达于10-11mol/L达峰值[较空白对照增加(2·58±0·02)倍,P<0·05],然后随着睾酮浓度的升高表达下降。结论睾酮影响胰岛素信号转导分子的表达存在剂量和时间上的双向作用。