多发性抽动症外周血中T淋巴细胞亚群CD45RA^＋、CD45RO^＋的表达及临床意义

目的观察多发性抽动症（Tourette’s syndrome，TS）患儿外周血中T淋巴细胞亚群CD4^＋CD45RA^＋、CD4^＋CD45RA^＋细胞的表达及临床意义。方法利用流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）检测34例TS患儿外周血中T淋巴细胞亚群CD4^＋CD45RA^＋、CD4^＋CD45RA^＋细胞的表达，同期检测35名年龄、性别无差异的健康儿童为对照。结果TS组外周血中CD4^＋CD45RA^＋细胞百分率（63．70±5．57）较正常对照组（45．39±7．70）高，t=10．29，P〈0．01；TS组外周血中CD4^＋CD45RO^＋细胞百分率（17．09±4．46）较正常对照组（41．99±8．47）低，t=11．11，P〈0．01；TS组CD4^＋CD45RA^＋／CD4^＋CD45RO^＋比值（4．32±1．51）较正常对照组（1．21±0．37）高，t=7．78，P〈0．01；TS组CD4^＋CD45RA^＋、CD4^＋CD45RO^＋双阳性率（14．63±7．56）较正常对照组（9．37±3．20）高，t=2．89，P〈0．05；均有显著统计学意义。结论TS患儿存在免疫功能紊乱，主要表现为外周血中CD4^＋CD45RA^＋细胞百分率明显增高，CD4^＋CD45RO^＋细胞百分率明显降低，TS患儿CD4^＋CD45RA^＋／CD4^＋CD45RO^＋失衡，TS患儿CD4^＋CD45RA^＋、CD4^＋CD45RO^＋双阳性率较高，这可能在TS发病机制中起着重要作用。     

SLE患者外周血调节性T细胞与IL-10,TGF—β1的检测

目的：研究SLE患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（regulation T cells，Tr细胞）及相关细胞因子的变化，分析它们在SLE发病机制中的作用。方法：收集SLE患者及健康对照组外周抗凝静脉血，分离纯化T淋巴细胞。PE标记的抗CD4单抗，FITC标记的抗CD25单抗，作双色流式细胞术，分析SLE患者外周血CD4＋CD25^＋调节性T细胞百分率，ELISA法检测调节性T细胞相关细胞因子的表达。结果：SLE患者外周血Tr细胞的数量明显低于正常对照组[（2．83±1．05）％vs（5．07±0．59）％，P〈0．05]；患者血清中IL-10、TGF—β1的含量均低于正常对照组，差异有显著性[IL-10：（29．48±13．69）pg／mlvs（43．10±14．95）pg／ml；TGF—β1：（170．04±91．58）pg／mlvs（254．75±130．41）pg／ml，P〈0．05]。患者外周血Tr细胞的比例与血清中IL-10、TGF—β1的含量呈正相关（r1=0．53，r2=0．64，P〈0．05）。结论：SLE患者外周血存在细胞免疫功能失调，CD4^＋CD25^＋调节性T细胞数量与功能状态发生改变，T淋巴细胞耐受机制的破坏可能与SLE的免疫学发病机制有关。     

调节性T细胞和共刺激通路阻断剂抑制大鼠肝移植急性排斥反应的研究

目的探讨CD4^＋CD25^＋调节性T细胞、共刺激通路阻断剂CD154单抗及两者联合应用在抑制大鼠肝移植急性排斥反应中的作用。方法48例原位肝移植大鼠（DA→Lewis）分为A组：对照组;B组：术前7d回输经DA大鼠脾细胞体外激活的Lewis大鼠CD4^＋CD25^＋细胞;C组1术后第1、2d腹腔注射CD154单抗（15m/kg）;D组：联合应用CD4^＋CD25^＋细胞和CD154单抗。术后7d各组处死6只受体,观察移植肝病理变化,检测移植肝内T细胞亚群和细胞因子白细胞介素之（IL-2）、IL4、IL-10和转化生长因子B1（TGFβ1）表达情况;分离脾淋巴细胞与供体行单向混合淋巴细胞反应观察刺激指数。余大鼠观察生存情况。结果D组平均存活时间（52．00±10．64）d明显长于其他各组（P〈0．01）;移植肝内淋巴细胞浸润数量（2．47±0．61）×10^6和CD8^＋细胞百分比（14．2±3．0）％明显低于B、C组（P〈0．05、P〈0．01）,而CD4^＋CD25^＋细胞比例（16．4±4．3）％高于B、C组（P〈0．05,P〈0．01）。移植物内IL-2mRNA表达A组最高,D组最弱;IL4mRNA各组均弱表达;IL-10mRNAB、D组高表达,A、C组未表达;TGFβ1mRNAB、D组表达明显强于A、C组。单向混合淋巴细胞反应D组刺激指数最低（P〈0．05）。结论CD4^＋CD25^＋调节性T细胞和共刺激通路阻断剂CD154单抗均能抑制大鼠肝移植急性排斥反应;联合应用CD154单抗明显增强CD4^＋CD25^＋调节性T细胞对急性排斥反应的抑制作用。     

中国东北地区成年人外周血自然杀伤细胞和自然杀伤T细胞绝对计数研究

目的 研究中国东北地区成人NK、NKT和T淋巴细胞绝对计数。方法 用流式细胞术单平台法检测130例健康成人外周血NK、NKT、CD3^＋T、CD3^＋CD4T、CD3^＋CD8^＋T细胞绝对计数及百分数。结果建立了中国东北地区成人外周血NK、NKT、CD3^＋T、CD，CD4^＋T、CD3^＋CD8T细胞绝对计数及百分数等参考范围；男性NK细胞数量和NK％高于女性，其余各指标男女无明显差别。35岁以下成人CD8^＋T细胞数量高于60岁以上成人（P〈0．05），CD8^＋T细胞数量与年龄呈负相关，r=-0．201，P〈0．05。结论 中国东北地区成年人NK细胞数量明显高于西方人群，且NK细胞数量和百分数与性别相关，而CD4^＋T细胞数量与国外参考范围相近。     

中国部分地区HIV感染者/艾滋病患者外周血单核/巨噬细胞功能与疾病的进展关系

目的 通过对中国HIV感染者／艾滋病（AIDS）患者外周血单核／巨噬细胞标志抗原CD14及其早期活化分子CD69的研究,探讨其外周血单核／巨噬细胞的功能状态与HIV感染者疾病进程的关系。方法采集57例未经抗病毒治疗的HIV感染者／AIDS患者及32例健康人抗凝全血,运用流式细胞分析技术对CD4^＋T淋巴细胞、CD14^＋细胞及其CD69抗原表达情况进行测定,并采用实时荧光定量RT-PCR技术检测患者血浆HIV-1载量。结果（1）HIV感染者／AIDS患者外周血CD14^＋细胞颗粒度SSC值为76±16,CD69分子在CD14^＋细胞的表达率为27％±4％,均明显高于对照组（P〈0．05）,其中AIDS组高于HIV慢性感染（HIV）组及长期不进展（LTNP）组,HIV组高于LTNP组（P〈0．05）,LTNP组与对照组比较差异无统计学意义;外周血CD14^＋细胞比例、CD14抗原水平与对照组相比差异无统计学意义。（2）HIV感染者／AIDS患者外周血CD69分子在CD14^＋细胞的表达率与CD4^＋T淋巴细胞绝对值呈明显负相关（r=-0．872,P〈0．01）,与HIV-1RNA病毒载量呈显著正相关（r=0．697,P〈0．01）。结论中国部分地区HIV／AIDS患者外周血单核／巨噬细胞的活化和吞噬功能较健康对照组有显著上升,且与疾病进展密切相关。     

CD4^＋CD25^＋Foxp^3＋Treg细胞在HBV感染所致慢加急性肝衰竭中作用

目的：探讨CD4^＋CD25^＋Foxp^3＋Treg细胞在HBV感染所致慢加急性肝衰竭发病过程中的表达。方法：采用流式细胞仪检测36例慢加急性肝衰竭患者、38例慢性乙型肝炎患者、40例无症状乙肝病毒携带者及40例健康对照者外周血CD4^＋CD25^＋Foxp^3＋Treg细胞水平,并追踪慢加急性肝衰竭组患者转归,评价好转组与未恢复组CD4^＋CD25^＋Foxp^3＋Treg细胞百分率差异。结果：慢加急性肝衰竭组、慢性乙型肝炎组、无症状乙肝病毒携带组及健康对照组外周血CD4^＋CD25^＋Foxp^3＋Treg细胞分别为（5．14±1．03）％、（9．86±1．72）％、（7．93±1．67）％及（7．06±1．61）％,慢加急肝衰竭组外周血Treg细胞百分率显著低于慢性乙型肝炎组、无症状乙肝病毒携带组和健康对照组（P〈0．01）。慢性乙型肝炎组外周血Treg百分率明显高于慢加急肝衰竭组及健康对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）,而无症状乙肝病毒携带组与健康对照组外周血Treg百分率比较差异无统计学意义（P〉0．05）。各组CD4^＋CD25^＋Foxp^3＋Treg细胞的百分率与患者血清HBVDNA呈正相关。慢加急性肝衰竭好转组与未恢复组CD4^＋CD25^＋Foxp^3＋Treg细胞水平比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：慢加急性肝衰竭患者发病可能与CD4^＋CD25^＋Foxp^3＋Treg细胞表达过低有关,Treg细胞表达水平不能预示慢加急性肝衰竭患者预后。     

慢性乙型重肝病人免疫与肝生化指标变化的意义

目的探讨慢性乙型重型肝炎早期、中期、晚期病人的免疫和肝生化指标变化与预后的关系。方法检测120例慢性重型肝炎病人（早期60例,中期40例,晚期20例）和120例慢性乙型肝炎病人的T细胞亚群、HBV DNA载量、免疫学及肝功能指标,并总结分析其临床意义。结果晚期慢性乙型重型肝炎病人细胞免疫状态最差,与慢性乙型肝炎病人相比差异显著,NK细胞分别为（7．47±4．19）％vs（13．29±4．68）％,P〈0．05;CD4／CD8比值为（0．39±0．16）vs（1．12±0．26）,P〈0．05;CD3^＋（73．11±13．16）％vs（56．12±9．54）％;P〈0．05;CD8^＋（56．74±13．91）％vs（34．26±10．58）％,P〈0．05;晚期慢性乙型重型肝炎的肝功能损害与慢性乙型肝炎相比同样有显著性差异：白蛋白分别为（20．82±3．46）g／L vs（43．11±5．74）g／L,P〈0．05;血清总胆红质（TB）（519．42±156．18）μmol／Lvs（25．91±17．38）μmol／L,P〈0．05;凝血酶元活动度（PTA）（15．21±6．38）％vs（92．45±10．56）％,P〈0．05。结论慢性乙型重型肝炎晚期病人的CD4／CD8、NK细胞显著下降,病人淋巴细胞亚群的失衡可加重肝脏的损伤。     

骨髓增生异常综合征患者骨髓CD4~+T细胞共刺激分子CD28/CTLA-4的变化

目的通过检测骨髓增生异常综合征（MDS）患者CD3^＋CD4^＋T细胞表面CD28^＋和CTLA-4^＋分子水平,探讨两者在MDS发病机制中的作用。方法用流式细胞技术检测38例初治MDS患者和11例正常对照组外周血CD3^＋CD4^＋T细胞表面CD28^＋和CTLA-4^＋表达率。结果（1）MDS组CD3^＋CD4^＋CD28^＋表达率为（79.82±8.99）%[难治性贫血（RA）（78.65±10.4）%、伴原始细胞增多性难治性贫血（RAEB）/转变中的原始细胞增多性难治性贫血（RAEB-t）（80.10±7.28%）],低于正常对照组的（89.56±3.06）%,差异有高度统计学意义（P﹤0.01）;（2）MDS组CD3^＋CD4^＋CTLA-4^＋表达率为（2.14±1.25）%[RA（1.51±0.80）%、RAEB/RAEB-t为（2.65±1.33）%],显著高于正常组的（0.11±0.12）%,差异有高度统计学意义（P﹤0.01）;随MDS疾病的进展,RAEB/RAEB-t组CD3^＋CD4^＋CTLA-4^＋的表达率与RA组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）;（3）CTLA-4/CD28免疫应答中相互拮抗的共刺激分子对比值在MDS-RA组中为2.14±0.97,RAEB/RAEB-t组为3.58±1.55,高于正常对照组的0.11±0.11,差异有高度统计学意义（P﹤0.01）;并且RA组和RAEB/RAEB-t组之间的差异亦有高度统计学意义（P﹤0.01）。结论（1）MDS患者骨髓的CD3^＋CD4^＋T细胞表面的共刺激分子表达异常,CD28下调,CTLA-4上调,T细胞处于抑制状态;（2）随着MDS骨髓中原始细胞的增多,CD28/CTLA-4比值增高,进一步说明CD28/CTLA-4异常与MDS疾病的发生及进展相关。     

rhG-CSF动员正常供者与恶性血液病患者外周血造血干细胞质量的比较

目的探讨正常供者与恶性血液病患者使用重组人粒细胞集落刺激因子（rhG—CSF）动员后,用血细胞分离机采集的外周血造血干细胞,通过形态学观察PBSC中淋巴细胞比例及单个核细胞活力。方法分别对15例正常供者和14例恶性血液病患者使用rhG—CSF动员剂,用血细胞分离机采集外周血中单核细胞（MNC）,观察有核细胞数、有核细胞分类、MNC计数及细胞活力。结果（1）正常供者组采集的PBSC有核细胞总数为（4．31±1．41）×10^8／kg,恶性血液病患者组有核细胞总数MNC数为（6．21±4．37）×10^8／kg。（2）恶性血液病组采集的PBSC有核细胞数高于供者组（P〈0．01）。（3）用淋巴细胞比值乘以有核细胞总数计算单个核细胞,正常供者组（2．82±1．03）×10^8／kg、恶性血液病患者组（2．58±1．79）×10^8／kg,正常供者组与恶性血液病组单个核细胞数比较差异无统计学意义（P〉0．05）。（4）正常供者组MNC计数为（96．7±5．1）％,其中淋巴细胞占（65．9±9．4）％、粒细胞占（16．3±8．7）％、单核细胞占（16．5±4．0）％;恶性血液病组MNC计数为（92．7±15．6）％,其中淋巴细胞占（55．3±16．7）％、粒细胞占（24．3±16．5）％、单核细胞占（14．9±9．1）％。（5）正常供者组冻存前后细胞活力分别为（91．5±4．3）％、（67．4±9．1）％,恶性血液病组冻存前后细胞活力分别为（82．9±11．1）％、（56．5±20．1）％;两组冻存前后细胞活力差异均有显著性（P〈0．01）。（6）rhG—CSF动员前后正常供者组及恶性血液病组T细胞在CD3单克隆抗体＋rhIL-2刺激下,外周血T淋巴细胞的增生能力在应用rhG—CSF后下降[（68．5±15．1）％vs（52．3±12．5）％（P〈0．05）。结论单用rhG—CSF或化疗联合rhG—CSF动员均可采集到足够数量的外周血造血干细胞,应用淋巴细胞乘以有核细胞数作为外周血造血于细胞移植时计算输入外周血造血干细胞数量的指标时简便、快捷,不失为一良好的临床检测方法。     

哮喘小鼠CD4^＋CD25^＋调节性T细胞与气道炎症反应的关系

目的 观察哮喘小鼠外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（CD4^＋CD25^＋Treg）数量的改变及其与气道炎症反应的关系。方法健康6周龄SPF级BALB/c小鼠20只,随机分为2组：正常对照组（A组）、哮喘模型组（B组）,B组以卵白蛋白（OVA）致敏激发方法建立小鼠哮喘模型;流式细胞术检测小鼠外周血CD4^＋CD25^＋Treg占淋巴细胞的比例;检测小鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）炎症细胞数;BALF炎症细胞总数、嗜酸性粒细胞数分别与外周血CD4^＋CD25^＋Treg作相关分析。结果A组、B组小鼠外周血CD4^＋CD25^＋Treg占淋巴细胞比例分别为（5．81±0．76）％、（3．21±0．74）％,差异有统计学意义（P〈0．05）BALF炎症细胞总数、嗜酸性粒细胞数与外周血CD4^＋CD25^＋Treg呈负相关,相关系数分别为-0．929和-0．920。差异有统计学意义（P〈0．001）结论哮喘小鼠外周血CD4^＋CD25^＋Treg占淋巴细胞比例较正常对照组显著减少。且与哮喘小鼠气道炎症反应密切相关。     

特发性血小板减少性紫癜患者自身血小板的细胞毒杀伤机制

目的研究细胞毒T细胞(CTL)、自然杀伤细胞(NK细胞)介导的针对自身血小板的细胞毒作用及其机制。方法(1)将血小板(靶细胞)与自身CD8+细胞或NK细胞(效应细胞)共同孵育后,流式细胞仪检测膜联蛋白V标记阳性血小板的比例。(2)流式细胞术检测特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者组与正常对照组CD8+细胞膜表面分子CD95配体(FasL)、肿瘤坏死因子(TNFα)和肿瘤坏死因子相关性凋亡诱导配体(TRAIL)的表达。(3)逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测ITP患者组与正常对照组CD8+细胞颗粒酶B和穿孔素mRNA的表达。结果(1)血小板单独孵育后,膜联蛋白V标记阳性率在ITP患者组(3.1%±0.9%)和正常对照组(3.2%±1.1%)间差异无统计学意义(P>0.05);(2)血小板与CD8+细胞共同孵育后,ITP患者组血小板的膜联蛋白V标记阳性率(7.6%±2.8%)明显高于正常对照组(3.6%±0.9%,P<0.01);(3)血小板与NK细胞共同孵育后,ITP患者组血小板的膜联蛋白V标记阳性率(3.5%±1.1%)与正常对照组(3.6%±1.0%)差异无统计学意义(P>0.05);(4)ITP患者组CD8+细胞膜表面分子FasL、TNFα表达(17.5%±4.4%、11.9%±4.9%)均高于正常对照组(8.9%±1.5%、6.4%±2.1%,均P<0.05);ITP患者组CD8+细胞膜表面分子TRAIL表达(16%±4%)与正常对照组(14%±3%)间差异无统计学意义(P>0.05);(5)ITP患者组CD8+细胞颗粒酶B、穿孔素mRNA的表达(2.20%±0.15%、2.47%±0.39%)均高于正常对照组(1.63%±0.22%、1.80%±0.31%,均P<0.05)。结论CTL参与了对ITP患者自身血小板的杀伤作用;NK细胞对自身血小板无明显的杀伤作用。凋亡机制和胞质颗粒依赖机制是CTL杀伤血小板的具体途径。     

CD3+CD16+CD56+自然杀伤T淋巴细胞与移植肾免疫状态的关系

目的 探讨肾移植患者CD3+CD16+CD56+自然杀伤T细胞(NKT)在外周血中的表达与移植肾免疫状态的关系,以及钙调磷酸酶抑制剂(CNI)不同的血药浓度下NKT细胞的水平。 方法 将92例肾移植患者根据CNI血药浓度水平及有无排斥反应分为3组：正常血药浓度的无排斥组（A组,58例）、低血药浓度的无排斥组（B组,8例）、排斥组(C组,26例),10例正常人群作为对照组(D组),采用流式细胞术检测各组外周血CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3-CD16+CD56+自然杀伤（NK）和CD3+CD16+CD56+NKT细胞及人白细胞抗原（HLA）抗体的水平。结果 A、B、C、D组CD3+CD16+CD56+NKT细胞的百分数分别是（4.29±2.57）%、（4.31±2.08）%、（1.23±1.06）%、（3.98±2.26）%。A、B组与D组比较,NKT细胞百分数、NK细胞百分数及CD4+/CD8+无差异,HLA抗体阳性比率无显著升高;C组NKT细胞的百分数与正常对照组相比降低(P＜0.05),NK细胞、CD4+/CD8+均显著高于D组(P＜0.05),HLA抗体阳性比率显著升高。结论 肾移植后排斥反应时NKT细胞低表达,出现HLA抗体;无排斥反应时NKT细胞表达正常,不受低血药浓度的影响。CD3+CD16+CD56+NKT细胞在抑制移植肾免疫激活中起着重要作用。     

慢性乙型重型肝炎患者外周血各亚群淋巴细胞绝对值的特点

目的:分析慢性乙型重型肝炎(以下简称慢重肝)患者外周血各亚群淋巴细胞绝对值的特点.方法:慢重肝患者61例,乙肝引起的肝硬化26例,慢性乙型肝炎21例,健康志愿者10例.采用流式细胞仪检测各自外周血淋巴细胞CD3 、CD4 、CD8 、NK细胞(CD3-/CD16 /CD56 )、NKT细胞(CD3 /CD16 CD56 )等亚群表达百分比,计算各淋巴细胞亚群绝对值,并进行统计学分析.结果:与乙肝引起的肝硬化、慢性乙型肝炎患者以及健康志愿者相比,慢重肝患者CD3 、CD4 及CD8 T淋巴细胞的绝对值均明显降低(P＜0.01或P＜0.05);与存活者相比,慢重肝死亡患者外周血淋巴细胞、CD3 、CD4 、CD8 、NK细胞、NKT细胞绝对值均有一种降低的趋势但尚未达到统计学意义.结论:慢重肝患者存在一定程度的细胞免疫功能紊乱,可能与其预后存在一定的相关性.     

体外扩增小鼠CD8^＋NK1.1^＋NKT细胞的研究

目的研究体外扩增小鼠CD8^＋NK1.1^＋NKT细胞的表面分子标志、分化途径及细胞属性。方法获取超抗原SEB活化后体外扩增的小鼠效应细胞,用抗CD3-PerCP、CD4-FITC、CD8-PE、NK1.1-APC、TcRVβ8-FITC和CD69-FITC荧光抗体染色后,用流式细胞仪（FCMCalibueBD,USA）鉴定CD8^＋NK1.1^＋NKT细胞的表面分子标志和分化途径。用逆转录聚合酶链反应测定细胞内各种细胞因子和Foxp3基因转录水平。结果体外扩增的细胞中91.92%是CD8^＋T细胞,其中22.75%的细胞是CD8^＋NN1.1＋NKT细胞,高于正常值（0.21±0.19,n=12）108倍以上。19.61%NKT细胞是TcRVβ8＋NN1.1＋NKT细胞。CD69分子的表达由原始0.11%增加到85.95%。CD4＋T、CD3＋T细胞亚群和CD4＋NKT、CD3＋NKT及CD4-CD8-NKT细胞亚群没有增加。扩增细胞TGF-β的mRNA表达呈阳性,不表达Foxp3和细胞因子IL-2、4、5、6、10及IFN-γ。CD8^＋NKT细胞直接由CD8^＋T细胞分化而来。结论 CD8^＋NK1.1^＋NKT细胞的分子特征为CD69＋Foxp3-TcRVβ8＋TGF-β＋CD8^＋NK1.1^＋;它们既不是CD8^＋T调节细胞（Treg.）,也不是CD4^＋NKT细胞,直接由CD8^＋T细胞分化而来,带有TCRVβ8受体,应属于T细胞亚群。     

胸腺五肽治疗慢性重型乙型病毒性肝炎的疗效评价

目的　评价胸腺五肽治疗慢性重型乙型肝炎的临床疗效。方法　将 70例慢性重型乙型肝炎患者按入院先后分为 2组 ,其中一组 3 5例患者仅用常规内科支持治疗 ,另一组 3 5例患者在常规内科支持治疗基础上加用胸腺五肽 ,比较两组患者治疗后肝功能状况与外周血CD4+ /CD8+ 比值及其存活率。结果　在重型肝炎早中期患者 ,胸腺五肽治疗组的存活率( 66.7%)显著高于对照组 ( 3 3 .3 %) ,P <0 .0 5 ;胸腺五肽治疗 2周后 ,40 0 %患者的肝功能开始好转 ,对照组肝功能开始好转者只有 10 .0 %,两者间相差显著 (P <0 0 5 ) ;与治疗前相比 ,胸腺五肽治疗组重型肝炎患者在治疗 2周与 4周后的外周血CD4+ /CD8+ 比值均增高非常显著 (P <0 0 1) ,且均显著高于对照组患者 (P <0 0 1) ;治疗 2周时重型肝炎患者外周血CD4+ /CD8+ 比值越大 ,其最终存活率也越高。结论　胸腺五肽治疗可能有助于改善慢性重型乙型肝炎早中期患者的预后     

CD4+CD25+调节性T细胞在儿童哮喘发病机制中的作用初探

目的探讨哮喘急性发作患儿CD4+CD25+调节性T(Tr)细胞数量变化及影响其发育成熟的因素.方法观察20例哮喘患儿及相同数量同龄对照组.用流式细胞术检测外周血单个核细胞(PBMC)CD4、CD25表面标志及CD4+CD25+细胞内白细胞介素(IL-10)和转化生长因子受体(TGF-β)表达.用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR) 和荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测PBMC Foxp3及SOCS1 mRNA表达.结果急性发作期哮喘患儿CD4+CD25+Tr细胞百分率(6.5%±1.9%)明显低于同龄对照组(12.0%±2.3%),P<0.01 ;CD4+CD25++IL-10及CD4+CD25++TGF-β分泌细胞亦明显低于对照组.Foxp3及SOCS1mRNA表达也显著降低( Foxp30.12±0.05 vs 1.71±0.58,P<0.001;SOCS10.38±0.19 vs 2.14±0.41,P<0.001).结论哮喘患儿CD4+CD25+Tr细胞明显降低可能参与哮喘发病,Foxp3及SOCS1表达降低可能是导致CD4+CD25+Tr细胞发育障碍的重要因素.     

不同类型肿瘤患者自体CIK细胞治疗对机体免疫状态及临床症状改善的影响

目的观察自体CIK细胞治疗肿瘤患者免疫功能的影响。方法采用流式细胞仪检测30例健康对照和50例不同类型肿瘤患者自体CIK细胞治疗前后机体免疫状态:包括Treg细胞、NKT细胞、NK细胞、CD4+/CD8+比值百分率,以及临床症状改善情况。结果自体CIK治疗前各组肿瘤和健康人相比较,患者Treg细胞、NKT细胞百分率上调,NKT细胞、CD4+/CD8+比值、NK细胞百分率均下降,其差异有统计学意义(P<0.05);自体CIK细胞治疗后和治疗前相比较,患者Treg百分率下调,NKT细胞、CD4+/CD8+比值、NK细胞百分率上升(P<0.05)。不同类型肿瘤患者治疗后Kamofsky评分均高于治疗前(P<0.05)。结论自体CIK细胞治疗后可明显增强肿瘤患者细胞免疫功能,提高了生活质量。     

肺结核患者外周血NKT细胞、NK细胞、T淋巴细胞亚群的变化及意义

目的了解肺结核患者外周血NKT细胞、NK细胞和T淋巴细胞亚群的变化及其意义。方法采用流式细胞仪抗体双标法检测472例肺结核和非结核患者外周血NKT细胞（CD3＋CD16＋CD56＋）、NK细胞（CD3-CD16＋CD56＋）及T淋巴细胞亚群（CD3、CD4、CD8及CD4/CD8）的表达率,并进行分析。结果肺结核患者的NK细胞和NKT细胞的表达水平显著低于非结核患者,T细胞亚群CD4在肺结核患者中的表达显著高于非结核患者。肺结核患者不耐药组NK细胞和NKT细胞的表达率明显高于耐药组（F值分别为7.926、5.689,P〈0.001）。初治病例CD4、CD4/CD8显著高于复治病例（t值为-2.179、-2.402;P值为0.030、0.017）,初治病例CD8低于复治病例（t=3.257,P=0.001）。NKT细胞、NK细胞在初治和复治病例中的分布差异无统计学意义。NKT细胞、NK细胞和T淋巴细胞亚群在不同病灶范围分组之间分布差异无统计学意义。NK细胞、NKT细胞、CD4、CD8以及CD4/CD8在肺部有无空洞及空洞数量分组之间分布差异有统计学意义,即NK细胞、NKT细胞数、CD4/CD8、CD8随着空洞累及范围的增加而降低,CD4则随空洞累及范围的增加而升高。结论肺结核患者NKT细胞和NK细胞的表达受到了抑制,且NK细胞和NKT细胞的表达率随着耐药及耐药程度的加重而降低,随着肺结核空洞累及范围的增加机体免疫进一步失衡,提示结核病尤其是耐药结核病采用免疫调节剂辅助治疗的必要性。     

哮喘气道炎症与Ⅰ型及Ⅱ型T辅助细胞的演变

目的　探讨T淋巴细胞的增殖和分化在哮喘气道炎症过程中的变化。方法　选择初治未经皮质激素治疗的中重度急性加重期哮喘患者 2 0例 ,缓解期患者 15例 ,正常对照组 10名。SD大鼠 16只 ,按随机表法分为实验组和对照组 ,每组 8只 ,实验组给予卵清蛋白致敏激发。采用流式细胞分析技术检测哮喘患者及大鼠外周血分泌干扰素γ(IFN γ)的CD4 、CD8 细胞及分泌白细胞介素 4(IL 4 )的CD4 细胞的百分数。结果　 (1)哮喘急性加重期患者外周血分泌IFN γ的CD4 细胞(30 %± 10 % )和CD8 细胞 (4 2 %± 15 % )均高于缓解期患者 (分别为 2 0 %± 8% ,P <0 0 1;30 %±10 % ,P <0 0 1)和正常人 (分别为 18%± 8% ,P <0 0 1;2 4 %± 9% ,P <0 0 1) ;分泌IL 4的CD4 细胞 (4 2 %± 1 6 % )也显著高于缓解期患者 (2 0 %± 0 8% ,P <0 0 1)及正常人 (1 9%± 0 9% ,P <0 0 0 1)。缓解期患者与正常人之间上述各参数差异无显著意义。 (2 )哮喘模型大鼠外周血分泌IFN γ的CD4 细胞在激发 2h后开始升高 (5 7%± 1 6 % ) ,并在 10h时达到高峰 (9 9%± 4 4 % ) ,以后逐渐下降 ;分泌IFN γ的CD8 细胞在激发后 2h开始增高 (11 5 %± 5 1% ) ,并于 10h达到高峰 (38 7%± 6 3% ) ,以后逐渐下降 ;分泌IL 4的CD4     

成人隐匿性自身免疫糖尿病CD4+调节性T细胞研究

目的 观察成人隐匿性自身免疫糖尿病(LADA)患者CD4+CD25+T细胞和CD4+ T细胞的FOXP3 mRNA表达,探讨其免疫学的发病机制.方法 LADA患者67例,2型糖尿病30例,正常对照30例,通过流式细胞术检测CD3+、CD4+、CD8+、CD4+ CD25+ T细胞阳性细胞百分率.采用磁珠分离CD4+T细胞,用实时-PCR方法,半定量检测CD4+T细胞的FOXP3 mRNA表达水平.结果 LADA患者比正常对照组,CD4+CD25+T细胞升高(4.1±1.9 vs 2.8±1.5,P＜0.01),CD4+CD25+T细胞占CD4+T细胞的比例升高(11.9±5.0 vs 8.2±3.7,P＜0.01).LADA患者CD4+T细胞FOXP3 mRNA的表达水平明显降低(0.52-fold,P＜0.01,n=10).结论 LADA患者存在调节性T细胞抑制功能缺陷.