肾康注射液对慢性马兜铃酸肾病模型大鼠肾间质纤维化的拮抗作用

目的 研究肾康注射液对慢性马兜铃酸肾病 (CAAN) 模型大鼠肾间质纤维化的拮抗效应。方法 雄性 SD 大鼠随机分为对照组、模型组和干预组，每组6只。于 0、1、4、8、12 周末分别检测体质量、尿糖、24 h 尿蛋白定量和肌酐清除率 (Ccr)；第12周末处死大鼠留取肾组织，行 Masson 染色观察肾间质纤维化程度；并用逆转录实时定量聚合酶链反应和免疫组织化学方法检测肾组织中转化生长因子-β₁ (TGF-β₁)、结缔组织生长因子 (CTGF)、纤溶酶原激活物抑制物-1 (PAI-1)、金属蛋白酶组织抑制物-1 (TIMP-1) 和Ⅰ型胶原 (Col I) mRNA 及蛋白表达。结果 与对照组比较，模型组和干预组大鼠体质量明显减轻 (P＜0.01)，但干预组大鼠体质量明显高于模型组，12周末时存在显著差异 (P＜0.05)。与对照组相比，模型组大鼠 24 h 尿蛋白定量显著上升 (P＜0.01)，Ccr 显著下降 (P＜0.01)；12 周时肾间质纤维化面积显著增加 (P＜0.01)；肾组织内上述各检测指标的 mRNA 及蛋白表达均显著上调 (P＜0.01)。与模型组相比，干预组大鼠各时间点 Ccr 均显著升高 (P＜0.01)；第12周时 24 h 尿蛋白定量及肾间质纤维化面积均显著降低 (P＜0.05、0.01)；上述高表达的 mRNA 及蛋白指标均被显著抑制 (P＜0.05)。结论 肾康注射液可能通过抑制肾组织促细胞外基质 (ECM) 合成因子 (TFG-β₁、CTGF) 及抗 ECM 降解因子 (TIMP-1、PAI-1) 生成，而改善 CAAN 的肾间质纤维化及肾功能。     

强的松对大鼠马兜铃酸肾病肾组织纤维化的影响

目的观察强的松对马兜铃酸肾病大鼠肾组织纤维化的影响。方法予大鼠关木通水煎剂灌胃12周,制备大鼠马兜铃酸肾病模型20只并随机分为治疗组和非治疗组,治疗组予强的松10mg/（kg·d）水溶液灌胃4周,非治疗组不予治疗,观察4周时未治疗组和治疗组肾组织转化生长因子-β1（TGF-β1）、结缔组织生长因子（CTGF）和纤维连接蛋白（FN）表达。结果4周时治疗组较未治疗组血尿素氮（BUN）和肌酐（Scr）明显下降（P〈0.05）,血红蛋白明显升高（P〈0.01）;治疗组较未治疗组肾组织TGF-β1、CTGF和FN光密度值明显下降（P〈0.05）。结论强的松治疗马兜铃酸肾病可能具有一定作用。     

慢性马兜铃酸肾病动物模型的建立及其意义

目的探讨建立马兜铃酸引起的大鼠慢性肾间质纤维化动物模型.方法将雌性wistar大鼠分为马兜铃酸组与对照组.马兜铃酸组大鼠腹膜内注射马兜铃酸5mg@kg-1@d-1共16周,开始用药后8、12、16、20、24周分别处死6只大鼠.对照组大鼠(5只)腹膜内注射生理盐水2ml/d,共16周,24周时处死.两组动物处死时分别留取血、尿、肾组织标本,分别作生化、病理(光镜,免疫荧光,电镜)等方面的检查及应用电脑软件测定肾小管-间质面积.结果马兜铃酸组大鼠用药后16、20、24周体重明显低于对照组;用药后16周血尿素氮、血清肌酐明显高于对照组,24周时肾功能损伤进一步加重.光镜检查可见马兜铃酸组大鼠有明显肾小管-间质损伤,16周时肾小管面积明显增加,管腔面积明显小于对照组;24周时出现明显肾小管萎缩,肾小管面积明显缩小,而肾间质面积明显增加,肾间质呈多灶性纤维化.电镜检查16周时肾小管上皮细胞胞质内初级溶酶体、次级溶酶体明显增加,部分肾小管上皮细胞刷状缘消失;20、24周时可见胞质内次级溶酶体和髓样小体堆积.结论建立了慢性马兜铃酸肾病动物模型.马兜铃酸具有慢性肾毒性作用,可引起大鼠慢性肾间质纤维化.     

管周毛细血管损害引起的低氧对大鼠慢性马兜铃酸肾病进展的影响

目的研究慢性马兜铃酸肾病(CAAN)管周毛细血管(PTC)的损害特点以及PTC损害引起的低氧对CAAN进展的影响。方法将54只Wistar大鼠随机分为2组关木通组(30只)大鼠予关木通水煎剂灌胃连续用药8周,在第8、12、16周分别处死10只大鼠;对照组(24只)大鼠予饮用水灌胃,连续8周,在第8、12、16周分别处死8只大鼠。留取血、尿、肾组织标本分别作生化、病理、免疫组织化学、免疫印迹等检查。结果关木通组大鼠从第8周开始,肾功能逐渐恶化、尿蛋白增加,PTC损害加重,PTC密度减少,血管内皮生长因子(VEGF)表达逐渐减少,但低氧诱导因子1α(HIF-1α)表达逐渐增加。第16周时两组比较(1)对照组HIF-1α-IOD值为(0·49±0·06)×103,关木通组HIF-1α-IOD值为(7·11±1·20)×103(P<0·01);(2)对照组PTC密度为(42·80±4·49)/0·13mm2,关木通组PTC密度为(8·10±2·28)/0·13mm2(P<0·01);(3)对照组VEGF-IOD值为(26·94±9·34)×103,关木通组VEGF-IOD值为(2·78±0·78)×103(P<0·01)。肾间质面积第8周较对照组减小,第12周开始逐渐增大,第16周明显增大。结论CAAN大鼠存在严重的PTC损害和低氧,缺血、缺氧与CAAN的进展有关。     

冬虫夏草对马兜铃酸肾病大鼠模型肾纤维化的保护作用与机制研究

目的 探讨冬虫夏草对马兜铃酸肾病(aristolochic acid nephropathy,AAN)大鼠模型肾纤维化的保护作用.方法 将30只SD大鼠随机分为正常组、模型组和治疗组,每组均为10只.治疗组给予冬虫夏草进行干预,30 d后比较各组大鼠肾功能,并通过Masson染色观察各组大鼠肾脏病理变化,RT-PCR法测定各组大鼠肾组织Ⅰ型胶原(collagen Ⅰ)mRNA的表达.结果 模型组大鼠肾脏明显纤维化,其collagen Ⅰ mRNA的表达亦显著升高.冬虫夏草可下调AAN大鼠BUN、SCr水平及collagenⅠmRNA的表达及肾脏胶原面积百分比.结论 冬虫夏草可有效抑制AAN大鼠模型肾纤维化,其机制可能与下调collagen Ⅰ mRNA的表达、阻断胶原沉积相关.     

慢性马兜铃酸肾病肾间质纤维化的实验研究

近 10年来 ,国内外学者对慢性马兜铃酸肾病 (CAAN)的临床和病理特征已有了较深入认识 ,但其发病机制仍不十分清楚 ,我们用关木通浸膏水溶液间断灌胃的方法 ,已成功制作成大鼠CAAN动物模型 ,本文即利用这一模型来探讨CAAN肾间质纤维化的发病机制。一、材料与方法1.试剂 :总RNA提取试剂盒及引物 ,实时定量RT PCR试剂盒 ,兔抗大鼠Ⅰ型胶原 (ColⅠ )多克隆抗体 ,兔抗大鼠转化生长因子 (TGF) β1多克隆抗体 ,山羊抗人结缔组织生长因子 (CTGF)多克隆抗体 ,兔抗大鼠纤溶酶原激活物抑制物 (PAI) 1多克隆抗体 ,兔抗人金属蛋白酶组织抑…     

曲尼司特对马兜铃酸肾病大鼠肾纤维化防治作用的初步研究

目的观察曲尼司特干预治疗对马兜铃酸肾病大鼠肾纤维化防治作用,以探讨其可能的机制。方法雄性SD大鼠24只,随机分为4组。对照组予灌服饮用水10mL.kg-1.d-1,模型组、曲尼司特治疗组及安博维治疗组均予关木通水煎剂灌胃共12周建立马兜铃酸肾病模型。12周时观察各组大鼠血红蛋白(Hb)、肌酐(Cr)、转化生长因子β1(TGF-β1)、肝细胞生长因子(HGF)和原位杂交骨成形蛋白7(BMP-7)的表达。结果曲尼司特能延缓血红蛋白降低及血清肌酐(Scr)上升;减轻肾小管上皮细胞空泡变性、小管萎缩及间质纤维化;曲尼司特能下调马兜铃酸肾病大鼠肾组织中的TGF-β1,上调HGF、BMP-7的表达。结论曲尼司特可能通过下调马兜铃酸肾病大鼠肾组织中TGF-β1,上调HGF、BMP-7的表达以抑制肾小管上皮细胞表型转分化,从而减轻肾纤维化,发挥其肾脏保护作用。     

马兜铃酸肾病的临床与病理表现

目的 总结马兜铃酸肾病病人的临床及病理表现,进行分型,以提高对此病的认识。方法 对经中日友好医院治疗的58例马兜铃酸肾病病人进行了肾功能、电解质、尿酸化功能检查,并做肾穿刺进行了光镜、免疫荧光及电镜检查。并对部分病人所服药物的马兜铃酸成分及含量进行检测（薄层析扫描法）。结果 根据临床－病理表现特点,马兜铃酸肾病可分为3型：（1）急性型（4例）：病理呈急性肾小管坏死,临床出现急性肾衰竭;（2）肾小管功能障碍型（7例）：病理呈肾小管变性及萎缩,临床出现肾小管酸中毒和／或Fanconi综合征;（3）慢性型（47例）：病理呈寡细胞性肾间质纤维化,临床出现慢性进行性肾衰竭,部分病例肾损害进展迅速。用类固醇激素对本病部分病人进行治疗,前二型个别病例病情好转。药物分析已证实马兜铃酸存在。结论 含马兜铃酸成分的中草药确可引起肾小管－间质肾病,此病至少可分为3种临床－病理类型,各项预后不同。类固醇激素是否对此病确具疗效尚需进一步探讨。     

葛根及虫草菌粉对肝纤维化大鼠肝脏的保护作用

目的:研究葛根及虫草菌粉对肝纤维化大鼠肝功能和肝纤维化指标及肝脏指数的影响.方法:将50只SD大鼠随机分为正常组、模型组、葛根组、虫草组及联合组,采用40％四氯化碳(CCl4)每周2次皮下注射6周制作大鼠肝纤维化模型,各治疗组经灌胃给药6周后在麻醉状态下采血并检测血清肝功能和肝纤维化指标,分离肝脏,称湿重并计算肝脏指数.结果:与模型组比较各治疗组肝纤维化程度明显减轻,葛根能非常显著改善肝纤四项指标、白蛋白(ALB)和谷草转氨酶(AST)(P＜0.01或0.05),但谷丙转氨酶(ALT)降低及肝脏指数增加不明显(P＞0.05);虫草组肝纤四项亦有非常显著的降低(P＜0.01),肝功能有改善的趋势,肝脏指数明显增加(P＜0.05).结论:葛根及虫草菌粉对肝纤维化大鼠肝脏具有一定的保护作用.     

银杏叶提取物对马兜铃酸肾病管周毛细血管病变的治疗作用

目的研究马兜铃酸肾病管周毛细血管（peritubular capillaries，PTCs）损害以及银杏叶提取物（EGB）对其治疗作用。方法将20只雌性Wister大鼠先用关木通煎剂灌胃8周，然后随机分为治疗组（10只）和未治疗组（10只）。治疗组再予EGB灌胃治疗8周；未治疗组予饮用水灌胃8周。另设正常对照组8只。第16周处死全部大鼠，留取尿、血和肾组织标本，分别作病理、免疫组化CD34抗体标记、生化等检查。结果与正常对照组和治疗组相比，未治疗组大鼠问质微血管病变严重，PTCs密度明显减少（P〈0．01），肾功能明显损害（P〈0．01），肾小管萎缩明显，肾小管面积明显缩小（P〈0．01），肾间质面积明显增加（P〈0．01），肾间质严重纤维化。EGB能明显延缓马兜铃酸肾病的进展，减轻微血管病变，改善肾小管萎缩程度，保护肾功能。PTCs密度与血肌酐（Scr）水平、肾问质面积呈负相关（P〈0．001），与近端小管面积呈正相关（P〈0．001）。结论马兜铃酸肾病PTCs损伤严重，EGB治疗能明显改善PTCs损伤程度，保护肾功能。     

骨髓间充质干细胞在慢性马兜铃酸肾病大鼠肾脏中向肾小管周毛细血管丛内皮细胞的分化

目的 探讨Wistar大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)是否具有在慢性马兜铃酸肾病(CAAN)大鼠肾脏向肾小管周毛细血管丛(PTC)血管内皮细胞(EC)的分化潜能.观察MSC对CAAN的治疗作用.方法 经密度梯度离心分离和贴壁培养相结合的方法,从大鼠骨髓中提纯单核细胞,体外扩增、鉴定为MSC.将30只雌性大鼠随机分为3组:①非移植组;②MSC移植组;③正常对照组,每组10只大鼠.非移植组和MSC移植组经关木通水煎剂灌胃12周制作CAAN大鼠模型.第12周,MSC移植组经尾静脉输入1 ml MSC悬液;非移植组和正常对照组经尾静脉输入1 ml生理盐水.第16周留取血、尿、肾组织标本.肾组织连续切片,应用Y染色体荧光原位杂交、免疫荧光染色等技术并作生化、病理、免疫组织化学、RT-PCR等检查.结果 第16周,MSC移植组肾脏可加Y染色体和EC标志抗原CD34双阳性细胞.非移植组与MSC移植组比较结果分别为:PTC密度(5.3±0.8)/0.13 mm2、(26.5±1.6)/0.13 mm2(P＜0.01),血管内皮细胞生长因子(VEGF)积分光密度值为(2.8±0.4)×103、(14.7±1.7)×103(P＜0.01).MSC移植组VEGF mRNA表达高于MSC移植组,肾间质纤维化相对面积小,生化指标明显低(均P＜0.01).结论 MSC可分化为EC,对PTC具有修复作用,对CAAN具有治疗作用.     

波生坦及缬沙坦对马兜铃酸肾病大鼠肾间质纤维化的影响

目的研究非选择性内皮素受体拮抗剂(波生坦)及血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂(缬沙坦)能否抑制慢性马兜铃酸肾病(CAAN)大鼠模型肾间质纤维化的进程。方法雄性SD大鼠予关木通浸膏水溶液灌胃致成CAAN模型,并分为模型组,波生坦组(100mg·kg-1·d-1灌胃)和缬沙坦组(30mg·kg-1·d-1灌胃)。对照组予自来水灌胃。每组动物6只。检测大鼠体重、24h尿蛋白定量、β2微球蛋白(β2mG)、血清肌酐(SCr);于第16周处死大鼠,取肾组织切片做Masson染色;用RTPCR及免疫组化方法检测肾组织中转化生长因子β1(TGFβ1)、结缔组织生长因子(CTGF)、纤溶酶原激活物抑制物1(PAI1)、金属蛋白酶组织抑制物1(TIMP1)和Ⅰ型胶原(ColⅠ)mRNA及蛋白质的表达。结果与对照组相比,CAAN模型组大鼠24h尿蛋白定量、尿β2mG、SCr到实验后期均显著上升(P<0.05或0.01);肾间质纤维化面积显著性扩大(P<0.01);肾组织内TGFβ1、CTGF、PAI1、TIMP1及ColⅠ各指标的mRNA及蛋白质表达均显著上调(P<0.01)。在波生坦及缬沙坦干预组上述上调指标均被显著抑制(P<0.05或0.01),而两干预组间无明显差异(P>0.05)。结论波生坦及缬沙坦能抑制CAAN大鼠肾间质纤维化进程,延缓肾损害进展,此作用可能是通过抑制促细胞外基质合成因子(TGFβ1、CTGF)及抑制抗细胞外基质降解因子(PAI1、TIMP1)而获得。     

重组转化生长因子β3基因对大鼠肝纤维化细胞模型胶原合成及沉积的影响

目的 观察重组转化生长因子β3(TGF-β3)基因对大鼠肝纤维化细胞模型胶原合成及沉积的影响.方法 (1)构建质粒pcDNA3.1(+)-TGF-β3和pcDNA3.1(+)-TGF-β1.(2)将pcDNA3.1(+)-TGF-β1转染大鼠肝星状细胞(HSC)-T6,经G418筛选建立稳定高表达TGF-β1的HSC-T6细胞阳性克隆.(3)pcDNA3.1(+)-TGF-B3转染HSC-T6阳性细胞克隆,荧光实时定量PCR法检测TGF-β3mRNA的表达;荧光实时定量PCR法及Western印迹法分别检测TGF-β3、Ⅰ型胶原、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9及TIMP-1的mRNA和蛋白表达情况.结果 (1)pcDNA3.1(+)-TGF-β3和pcDNA3.1(+)-TGF-β3质粒均可转染HSC-T6细胞,以转染48 h时转染效率最高,达28.2%.(2)pcDNA3.1(+)-TGF-β3转染HSC-T6细胞阳性克隆后,与单纯阳性克隆组相比,TGF-β1mRNA表达无明显改变,而蛋白表达明显低(0.48±0.07 vs 0.66±0.14,P=0.023);Ⅰ型胶原mRNA及蛋白的表达明显低(mRNA:7.2±1.0 vs 13.7±0.4,P=0.010,蛋白:0.45±0.21 vs 0.82±0.13,P=0.041),MMP-2 mRNA及蛋白较低,但差异无统计学意义(均P>0.05),MMP-9 mRNA及蛋白表达明显多(均P<0.05),TIMP-1 mRNA及蛋白表达明显低(均P<0.05).结论 (1)重组TGF-β3真核表达载体构建正确,在转染阳性克隆细胞48 h后获得高效表达;(2)稳定高表达TGF-B1的HSC-T6细胞阳性克隆可作为肝纤维化细胞模型;(3)pcDNA3.1(+)-TGF-β3转染阳性克隆能减少胶原合成,并通过调节基质金属蛋白酶及其抑制剂的表达对胶原沉积起抑制作用.     

甘草酸二胺联合前列地尔对大鼠肾间质纤维化的影响

目的 观察甘草酸二胺联合前列地尔对大鼠肾间质纤维化的影响.方法 建立单侧输尿管梗阻(UUO)动物模型,将120只大鼠随机分为假手术组、模型组、甘草酸二胺组、前列地尔组、甘草酸二胺加前列地尔组,每组24只.术后第7、14、21天每组各处死8只大鼠,测定其血清肌酐(CREA)水平,HE染色后观察肾间质变化,免疫组化法观察肾间质转化生长因子-β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)的表达,酶联法测定血清TGF-β1、CTGF浓度.结果 模型组在术后第14、21天时血清CREA、TGF-β1、CTGF浓度及TGF-β1、CTGF在肾组织的表达较假手术组均显著增加(P均＜0.01);甘草酸二胺加前列地尔组的肾间质损伤指数及TGF-β1、CTGF在肾间质的表达和血清中TGF-β1、CTGF的浓度均明显低于其他治疗组(P均＜0.01).结论 甘草酸二胺联合前列地尔能改善UUO所致的肾间质纤维化,其机制可能与下调肾组织的TGF-β1、CTGF表达有关.     

吡非尼酮对大鼠肾间质纤维化的防治作用研究

目的研究吡非尼酮（PFD）对大鼠肾间质纤维化的作用及其作用机制,为临床使用吡非尼酮提供理论依据。方法24 只标准雄性SD 大鼠,随机分为3 组：正常组（NC 组）、模型组（M 组）及吡非尼酮治疗组（S组）。M组及S 组行左侧输尿管结扎术,复制肾间质纤维化模型。S 组予吡非尼酮250 mg/（kg·d）灌胃,NC 组及M 组大鼠予等量1%羧甲基纤维素钠溶液灌胃。分别于手术后第1、3、5、7 天处死各组大鼠各2 只,取梗阻侧肾脏。HE 染色观察各组肾组织病理变化,实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测结缔组织生长因子（CTGF）mRNA 表达水平,Western blot 检测转化生长因子-β（TGF-β）及α- 平滑肌激动蛋白（α-SMA）的蛋白表达水平。结果NC 组未显示肾纤维化,M 组显示大鼠肾间质纤维化及炎症细胞浸润。NC 组TGF-β、α-SMA 蛋白表达均较低,M 组TGF-β、α-SMA 蛋白及CTGF mRNA 表达较NC 组均升高,差异有统计学意义（p <0.05）,且随着梗阻时间延长,各物质表达量增高,但第7 天M 组及S 组上述物质表达量较第5 天减少,且M 组与S 组之间表达差异无统计学意义（p >0.05）;S 组上述物质各时间点表达则较M 组均减少,差异有统计学意义（p <0.05）。结论吡非尼酮可能通过抑制大鼠肾组织TGF-β和CTGF 的表达进而减少成纤维细胞转化为肌成纤维细胞,减少细胞外基质（ECM）的沉积,发挥抗肾纤维化作用。     

黄芩苷对UUO大鼠肾间质纤维化的影响及可能机制

目的 探讨黄芩苷对单侧输尿管梗阻(UUO)模型肾间质纤维化(RIF)的影响及可能机制.方法 40只雄性SD大鼠分为假手术组、模型组、黄芩苷组、贝那普利组及黄芩苷+贝那普利组,每组各8只.黄芩苷组给予黄芩苷溶液灌胃40 mg·kg-1·d-1,贝那普利组给予贝那普利混悬液灌胃10 mg·kg-1·d-1,黄芩苷+贝那普利组给予黄芩苷溶液40 mg·kg-1·d-1和贝那普利混悬液10 mg·kg-1·d-1灌胃,假手术组与模型组大鼠给予等量生理盐水灌胃.在造模第14、21和28天处死动物,取肾脏标本,免疫组化法检测肾组织转化生长因子-β1 (TGF-β1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达.结果 与假手术组相比,模型组大鼠在造模第14、21和28天,肾组织内TGF-β1、α-SMA的表达均明显升高(P＜0.05).与模型组相比,黄芩苷组、贝那普利组及黄芩苷+贝那普利组大鼠在造模第14、21和28天,肾组织内TGF-β1、α-SMA的表达均不同程度降低(P＜0.05).而黄芩苷组、贝那普利组和黄芩苷+贝那普利组3组之间各时间点肾组织内TGF-β1、α-SMA的表达两两比较差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 黄芩苷可能通过下调TGF-β1、减少α-SMA表达,从而延缓UUO大鼠RIF的进展.     

促红细胞生成素对慢性马兜铃酸肾病大鼠的肾脏保护作用

目的 观察促红细胞生成素（EPO）对慢性马兜铃酸肾病（CAAN）大鼠血管性假血友病因子（vWF）表达的影响,探讨促红细胞生成素对慢性马兜铃酸肾病大鼠的肾脏保护作用.方法 雌性Wistar大鼠30只,随机分三组：①CAAN模型组,②EPO治疗组,③正常对照组,每组各10只,关木通水煎剂灌胃12周制备CAAN大鼠模型.从第13周起,治疗组大鼠给予皮下注射重组人EPO每次50 IU/kg,每周3次,共6周.第19周检测各组大鼠血尿素氮（BUN）、血肌酐（SCr）、尿蛋白、血红蛋白（Hb）、血vWF水平;免疫组化法检测肾组织vWF的表达.结果 与CAAN组比较,EPO治疗组BUN、SCr、尿蛋白水平、vWF水平下降,Hb水平升高（均P＜0.05）.同时EPO治疗组大鼠肾组织vWF的表达减少（P＜0.05）.结论 EPO治疗可以改善CAAN大鼠的肾功能,可能与其下调vWF,减轻内皮损伤有关.