头颈部鳞癌微卫生多态标记的分析

目的 探讨中国人头颈部鳞状细胞癌（SCCHN）多染色体上等位基因的杂合性丢失（LOH）和微卫星不稳定（MI）的频率。方法 采用聚合酶链反应结合二核苷酸酸的重复序列多态性方法,选取6对染色体（3p,4q,7q,9p,17p和18q）上18个微卫星位点对30例SCCHN手术配对组织进行分析。结果 30例SCCHN组织中有12例（40％）组织至少有一个微卫生位点发生LOH,多数位点LOH的频率谱普遍比已报道的文献低。有7个位点（D7S480、D7S522、D9S162、D9S168、D9S304、D9S171和D17S520）具有统计学意义（P＜0．05）,然而这些位点的LOH与肿瘤病理学类型、肿瘤大小及转移性无显著相关性。此外,MI仅在4例患者中发现,没有1例患者符合MI的判定标准,即需两个或两个以上的微卫星多态位点的异常。结论 主要发生在D7S480、D7S522、D9S162、D9S168、D9S304、D9S171和D17S520位点的LOH可能存在与部分SCCHN有关的潜在的肿瘤抑制基因,而微卫星不稳定性与SCCHN发生的关系不大。     

胃癌组织p16基因微卫星DNA的不稳定性

目的 :检测胃癌组织中p16基因D9s171、D9s16 0 4微卫星位点杂合性缺失 (LOH) ,探讨p16基因微卫星不稳定性 (MI)与胃癌发生发展的关系。方法 :采用PCR 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 银染技术对 2 0例胃癌和癌旁组织LOH进行分析。结果 :癌组织D9s171和D9s16 0 4的LOH分别为 3例和 10例 ,癌旁组织分别为 2例和 4例。两位点LOH发生率差异无显著性 (P >0 .0 5 )。胃癌组织较癌旁组织LOH发生率明显增高 (P <0 .0 5 ) ;早期胃癌与进展期胃癌两个微卫星位点LOH的发生率分别为 5 0 % (4/ 8)和 5 8.3% (7/ 12 ) (P >0 0 5 ) ;两位点LOH发生存在相关性(P <0 0 5 )。结论 :D9s171,D9s16 0 4微卫星位点的LOH与胃癌的发生发展有关 ,而与癌细胞的分化程度或胃癌的临床分期无显著相关性     

散发性大肠癌p53基因突变与微卫星不稳定的关系研究

目的　观察散发性大肠癌 p5 3突变及其与微卫星不稳定 (MI) /复制差错 (RER)的相关性。方法　选择BAT 2 6 ,D2S119、D2S12 3、D3S12 93、D8S2 82、D13S16 0和D18S5 8等 7个微卫星位点 ,采用PCR银染法或ABI373自动序列分析仪检测MI/RER ;自动序列分析仪直接测序确立p5 3基因外显子 (E) 5 8突变 ;免疫组织化学法测定P5 3蛋白表达。结果　 5 5例散发性结直肠癌中 ,P5 3E5 8突变率为 38 2 % (2 1/5 5 ) ,蛋白阳性表达率 6 0 % (33/5 5 ) ,两者符合率 4 2 %。MI阳性率为 2 7 2 %(15 /5 5 ) ,RER为 14 5 % (8/5 5 )。MI/RER阳性肿瘤较阴性者 p5 3基因总突变率和点突变率高 (MI组分别为 5 3 3%对 32 5 %和 5 3 3%对 30 % ;RER组为 6 2 5 %对 34%和 6 2 5 %对 30 2 % ,均P >0 0 5 ) ;但P5 3蛋白表达率则低 (MI组为 4 6 7%对 6 5 % ;RER组为 5 0 %对 6 2 % ,均P >0 0 5 ) ;而错义突变率和突变在CpG位点分布未见差异 (40 %对 30 %和 2 0 %对 12 5 % ,均P >0 0 5 ) ;另不同(CA)n位点MI对p5 3突变 /表达无明显影响。结论　MI/RER对p5 3E5 8突变无明显影响 ,MI/RER +肿瘤 p5 3突变倾向于高发 ,蛋白表达则呈低发 ,而错义突变率和突变在CpG位点的分布则相似。     

FHIT基因与宫颈癌的相关性研究

目的　探讨 FHIT基因在宫颈癌发生中的作用及与宫颈癌的临床分期和组织分化程度间的关系。方法　选择 FHIT基因的 2个微卫星多态标记对 4 2例宫颈癌进行杂合性丢失 (L OH)和微卫星不稳定性 (MI)分析。结果　在 D3S12 34和 D3S130 0座位上 ,L OH频率分别为 5 2 .5 % (2 1/ 4 0 )、70 .8% (17/ 2 4 ) ,MI频率分别为2 2 .5 % (9/ 4 0 )、2 0 .83% (5 / 2 4 )。FHIT基因改变与宫颈癌的临床分期和组织分化程度无关。结论　 FHIT基因参与了宫颈癌的发生。对于宫颈癌的诊断和筛查可能具有实用价值     

宫颈鳞癌和食管鳞癌共同相关的抑癌基因的研究

目的 比较食管鳞癌和宫颈鳞癌组织中9号染色体相同区域相同位点等位基因杂合性缺失(LOH)率,探索与二者共同相关的抑癌基因.方法 采用显微切割、PCR、变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、AgNO3,染色等技术,检测45例食管鳞癌和46例宫颈鳞癌组织中的9号染色体上7个微卫星位点的LOH.结果 食管鳞癌总LOH率为25.8%(55/213),7个微卫星位点的LOH率从大到小依次为D9S753(42.9%)、D9S303(38.5%)、D9S171(35.7%)、D9S162(36.4%)、D9S242(16.7%)、D9S1748(16.7%)、D9S43(0).宫颈鳞癌中总LOH率为25.2%(54/214),7个微卫星位点的LOH率从大到小依次为D9S171(40.7%)、D9S43(33.3%)、D9S162(3114%)、D9S242(23.7%)、D9s303(17.2%)、D9s753(16.7%)、D9S1748(12.9%).结论 食管鳞癌和官颈鳞癌中存在相同的高频率的LOH位点,9号染色体上可能存在与二者发生发展共同相关的抑癌基因.     

Detailed deletion mapping on chromosome region 9p21 in human periampullary neoplasms

目的　进一步限定壶腹周围肿瘤染色体 9p2 1区域缺失范围。方法　选择染色体 9p2 1区域 5个微卫星多态性标记 ,通过聚合酶链反应、聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染法 ,检测 35例壶腹周围肿瘤组织及其外周血杂合性丢失 (LOH)状况。结果　 50 % ( 4 /8)胰腺癌有至少一个微卫星位点的LOH ,其中D9S974 ( 37 5% )和D9S94 2 ( 2 8 6% )丢失频率较高 ,并且有连续性丢失现象。 62 5% ( 5/8)壶腹癌在部分或全部位点出现LOH ,其中D9S94 2 ( 4 2 9% )丢失频率最高 ,其次为IFNA( 37 5% )和D9S171( 37 5% )。 14 2 % ( 1/7)胰岛素瘤有一个位点LOH。结论　壶腹周围肿瘤染色体 9p2 1最小共同缺失区位于D9S974和D9S94 2位点之间 ,距离小于 15kb ,其中可能存在一个新的涉及该肿瘤发生的相关抑癌基因。     

胃癌组织p16基因微卫星DNA的不稳定性

目的：检测胃癌组织中p16基因D9s171、D9s1604微卫星位点杂合性缺失（LOH）,探讨p16基因微卫星不稳定性（MI）与胃癌发生发展的关系。方法：采用PCR－变性聚丙烯酰胺凝胶电泳－银染技术对20例胃癌和癌旁组织LOH进行分析。结果：癌组织D9s171和D9s1604的LOH分别为3例和10例,癌旁组织分别为2例和4例。两位点LOH发生率差异无显著性（P＞0．05）。胃癌组织较癌旁组织LOH发生率明显增高（P＜0．05）;早期胃癌与进展期胃癌两个微卫星位点LOH的发生率分别为50％（4／8）和58．3％（7／12）（P＞0．05）;两位点LOH发生存在相关性（P＜0．05）。结论：D9s171,D9s1604微卫星位点的LOH与胃癌的发生发展有关,而与癌细胞的分化程度或胃癌的临床分期无显著相关性。     

3p、9p微卫星DNA异常与肺癌的早期诊断

目的研究3p、9p微卫星DNA异常在肺癌早期诊断中的价值。方法应用PCR-银染法从外周血检测105例原发性肺癌及9例肺部良性疾病3p14、3p21、9p21上的3个微卫星位点（D3S1228、D3S1029、D9S171）的异常表现。结果肺癌患者血清中DNA含量多于良性病变患者。肺癌组各微卫星位点的微卫星不稳症（MSI）或微卫星杂合性缺失（LOH）异常的阳性率为43％。50％,以D3S1029最高,达49．6％,3个位点中至少1个位点出现微卫星异常者占76．2％．其中45．7％呈多位点改变,同肺良性病变组比较有显著性差异（P〈0．05）。肺癌组中各微卫星位点的异常表现与肺癌临床分期和临床病理类型之间无显著相关性沪〉0．05）。结论3p、9p微卫星DNA异常和肺癌分期无关,可以作为一项肺癌早期基因检测的新途径。不同微卫星位点出现异常表现的具体形式有所不同,多位点联合检测可以提高诊断的敏感性和特异性。     

壶腹周围肿瘤染色体9p21缺失图谱的构建

目的:进一步限定壶腹周围肿瘤染色体9p21区域的缺失范围.方法:选择染色体9p21区域5个微卫星多态性标记,通过聚合酶链反应、聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染法,检测35例壶腹周围肿瘤及其外周血杂合性丢失(LOH)状况.结果:50%(4/8)胰腺癌有至少一个微卫星位点的LOH,其中D9S974(37.5%)和D9S942(28.6%)丢失频率较高,并且有连续性丢失现象.62.5%(5/8)壶腹癌在部分或全部位点出现LOH,其中D9S942(42.9%)丢失频率最高,其次为IFNA(37.5%)和D9S171(37.5%).14.2%(1/7)胰岛素瘤有一个位点LOH.结论:壶腹周围肿瘤染色体9p21最小共同缺失区位于D9S974和D9S942位点之间,其中可能存在一个新的涉及该肿瘤发生的相关抑癌基因.     

急性白血病9号染色体微卫星复制错误的研究

目的 研究急性白血病(AL)9号染色体微卫星复制错误(RER)现象,探讨微卫星在白血病发病过程中的作用和用于检测染色体微小缺失的意义.方法 选取AL病人53例,其中急性髓细胞白血病(AML)33例,急性淋巴细胞白血病(ALL)20例.在9号染色体共选择5个微卫星位点,对骨髓细胞DNA及作为对照的自身口腔黏膜细胞DNA进行多重PCR扩增,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染,观察微卫星不稳定性(MSI)和杂合性缺失(LOH)的发生情况.结果 53例AL中,共36例发生了至少1个位点的MSI,AML中有15例发生了MSI,10例发生了LOH;ALL中有5例发生了MSI, 4例发生了LOH.其中位于9p21上的D9Sl62、D9S1748、D9S171 微卫星位点LOH发生率分别为0(0/53)、5.7%(3/53)和7.5%(4/53), MSI发生率分别为15.1%(8/53)、7.6%(4/53)和11.3%(6/53);位于9q34上的D9S61和D9S67位点在AL中LOH发生率分别为11.3%(6/53)和5.6%(3/53),MSI发生率分别为5.6%(3/53)和9.4%(5/53).其中D9S61位点LOH均发生于AML,发生率为18.1%,显著高于ALL,差异有显著性(P=0.046).至少发生2个位点MSI即RER 的有6例,占11.3%.结论 AL 较高的RER 表达率提示,广泛的MSI与AL的发生发展有关;AML在D9S61上检测出较高的LOH提示,该区域可能存在与AML发生有关的基因改变;微卫星标记技术为研究AL一种新的、有价值的方法.     

Detailed deletion mapping of loss of heterozygosity on 9p13-23 in laryngeal squamous cell carcinoma by microsatellite analysis

Background This study was designed to investigate the hot spots of microsatellite loss of heterozygosity (LOH) on 9p13-23 in laryngeal squamous cell carcinoma and to find out the correlation between the incidence of microsatellite LOH and the clinicopathological parameters.Methods Tumor tissues were obtained from paraffin embedded sections with microdissection. Genomic DNA was extracted from tumor tissues and peripheral blood lymphocytes with the phenol-chloroform. Polymerase chain reaction (PCR) amplification and denaturing gel electrophoresis were carried out in a set of 42 squamous cell carcinoma (SCC) of larynx and corresponding peripheral blood lymphocytes using 13 highly polymorphic microsatellite markers on 9p13-23. The correlation was analyzed between microsatellite LOH at the high frequency on 9p13-23 and clinicopathological parameters in the patients with squamous cell carcinoma of larynx.Results Of the 42 laryngeal cancers, 41 (97.6%) showed LOH in at least one of the microsatellite markers tested on 9p13-23. The most frequently deleted marker was D9S162 in 17 of the 19 (89.5%) informative samples. The marker D9S171, which is located on 9p21, had LOH detected in 12 of the 15 informative cases (80.0%). LOH at the D9S1748 marker (closest to the p16 gene locus) was detected in 18 of the 36 informative cases (50.0%). Allelic deletion mapping revealed two minimal regions of LOH encompassing markers D9S161-D9S171 on 9p21 and IFNA-D9S162 on 9p22-23. Multiple LOH (≥4) on 9p21-23 was found more frequently in the patients under 60 years, with supraglottic SCC or cervical lymph node metastasis than those over 60 years, with glottic SCC or without cervical lymph node metastasis (P&lt;0.01 or 0.01, 0.05, respectively). On the contrary, there was no correlation between T stages or pathologic classification and the frequency of LOH on 9p21-23 in 42 SCC of Larynx.Conclusions These findings imply the presence of at least two putative tumor suppressor genes on 9p13-23 in laryngeal SCC. Multiple genetic alterations are probably implicated in supraglottic SCC with cervical lymph node metastasis in younger patients.     

膀胱移行细胞癌3号染色体短臂上抑癌基因杂合性缺失的研究

目的 探讨位于3号染色体短臂的候选抑癌基因FHIT、hMLH和VHL在中国人膀胱移行细胞癌（TCC）发生中的可能作用。方法 选取6个位于上述基因内含子或与上述基因紧密连锁的微卫星多态标记对40例膀胱TCC组织进行杂合性缺失（LOH）分析。结果 位于FHIT基因内含子内的两个微卫星多态标记（D2S1234和D3S1300）中至少有一个为杂合子的杂合率为95．0％（38／40）,至少有一个发生LOH的频率为57．8％（22／38）。与hMLH1基因连锁的两处微卫星多态标记（D3S1561和D3S1612）中至少有一个为杂合子的杂合率为55．0％（22／40）,至少有一个发生LOH的频率为59．1％（13／22）。与VHL基因连锁的两个微卫星多态标记（D3S1038和D3S1284）中至少有一个为杂合子的杂合率为90．0％（36／40）,至少有一个发生LOH的频率为47．2％（17／36）。在所检测微卫星多态标记中仅D3S1284的LOH与膀胱TCC的病理分期正相关（P＜0．01）,余微卫星多态标记的LOH与膀胱移行细胞癌病理分级及病理分期均不相关（P＞0．05）。结论 上述3个基因在膀胱TCC中存在高频率LOH,提示它们可能在膀胱TCC的发生发展中起重要作用。FHIT基因和hMLH1基因的缺失作为分子标志有可能为膀胱TCC的早期诊断提供新的途径和依据,而VHL基因的缺失可能是膀胱TCC发生的晚期事件。     

Deletion of chromosomes 9p and 17 associated with abnormal expression of p53, p16/MTS1 and p15/MTS2 gene protein in hepatocellular carcinomas

Ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ (ＨＣＣ)ｒａｎｋｓｔｈｉｒｄａｍｏｎｇｔｈｅｃａｕｓｅｓｏｆｃａｎｃｅｒｍｏｒｔａｌｉｔｙｉｎＣｈｉｎａ ,ａｎｄａｂｏｕｔ4 2 5%ｏｆｔｈｅｗｏｒｌｄ’ｓｎｅｗｃａｓｅｓｏｆＨＣＣｅａｃｈｙｅａｒｏｃｃｕｒｉｎＣｈｉｎａ 1ＥｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｉｃｓｔｕｄｉｅｓｐｒｏｖｉｄｅｅｖｉｄｅｎｃｅｔｈａｔｉｎｆｅｃｔｉｏｎｗｉｔｈｈｅｐａｔｉｔｉｓＢ (ＨＢＶ )ａｎｄ/ｏｒｈｅｐａｔｉｔｉｓＣ (ＨＣＶ ) ,ａｎｄｉｎｇｅｓｔｉｏｎｏｆａｆｌａｔｏｘｉｎＢｃｏｎ…     

食管鳞癌组织中9 pter～p21区域的杂合性缺失及其意义

目的 探讨在原发性食管鳞癌组织中染色体９ｐｔｅｒ～ｐ２１区域内的杂合性缺失及其意义。方法 采用微卫星序列ＰＣＲ银染方法，检测９ｐｔｅｒ～ｐ２１区域内３个位点的ＤＮＡ微卫星多态标记，并对４３例散发性原发食管鳞癌标本及其癌旁正常组织杂合性缺失分析。结果 ９ｐｔｅｒ～ｐ２１区域内３个ＤＮＡ微卫星多态标记的杂合性缺失率均大于５０％，有显著意义。结论 在染色体９ｐｔｅｒ～ｐ２１区域内存在与食管鳞癌密切相关的     

国人9号和17号染色体膀胱移行细胞癌相关微卫星位点的杂合性丢失

目的 探讨国人9号和17号染色体微卫星位点的杂合性丢失(LOH)与膀胱移行细胞癌(TCC)发生、发展的关系。方法 选取微卫星位点D9S156、D9S157、D17S786和TP53，对24例TCC组织和外周静脉血提取的DNA用特异引物进行PCR扩增，扩增产物进行6％变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染，并进行LOH分析。结果 至少有1个位点出现LOH的TCC组织为58．3％(14／24)，同一组织2个位点同时出现LOH的肿瘤为12．5％(3／24)。X^2检验和Fisher精确概率检验(P＞O．05)，4个位点LOH的发生在浅表性和浸润性TCC之间无显著性差异。结论 国人9号染色体上肿瘤抑制基因(TSG)的失活与TCC的发生有关，与TCC的浸润性生长无关。17号染色体上TSG的失活可能与TCC的浸润性生长有关。     

食管癌组织中 9p21 的杂合性缺失

目的探讨食管癌组织中９ｐ２１（Ｄ９Ｓ１７１）杂合性丢失在食管癌发生中的作用。方法抽提正常和肿瘤组织中的ＤＮＡ，应用９ｐ染色体微卫星标志，经聚合酶链反应，检测食管癌组织中９ｐ２１的杂合性丢失。结果３２例食管癌组织，１４例出现９ｐ２１位点条带的缺失，杂合性丢失率为４３．７％。杂合性丢失与临床病理之间无明显关系。结论杂合性丢失在高发区食管癌病人中有较高的检出率，表明杂合性缺失与食管癌的形成密切相关。     

中国南方食管鳞癌D5S107和D5S408杂合性丢失与微卫星不稳定性

 【目的】研究中国南方食管癌高发地区（潮汕地区）食管鳞癌5号染色体长臂（5q）部分微卫星标记的杂合性丢失（LOH）和微卫星不稳定（MSI），为食管鳞癌相关抑癌基因的定位提供依据。【方法】采用PCR银染技术，检测58例配对食管鳞状细胞癌标本多个微卫星标记（D5S107；SHGS31088；D5S816；D5S625和D5S408）的杂合性丢失和微卫星不稳定。【结果】SHGS31088，D5S816和D5S625杂合性丢失率和微卫星不稳定都较低；而D5S107和D5S408的杂合性丢失率分别为48.5%和34.3％，微卫星不稳定率分别为9.1％和5.7％。【结论】中国南方食管鳞癌D5S107和D5S408的杂合性丢失率较高，提示在D5S107和D5S408附近可能存在食管癌相关基因。5q区域5个微卫星标记的微卫星不稳定发生率都较低，提示微卫星不稳定在中国南方食管癌发生过程中可能不占主导地位。