内皮抑素对ACHN RCC中缺氧诱导因子和血管内皮生长因子表达的影响

目的将已构建的带有内皮抑素基因真核表达载体质粒导入裸鼠ACHN肾细胞癌（renalcellcarcinoma,RCC）细胞中,研究内皮抑素基因对缺氧诱导因子（hypoxia-induciblefactor,HIF）和血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法荷瘤裸鼠随机分为3组,每组8只。干预组每只裸鼠瘤内3点注射复合物100μl,内含30μl梭华-SofastTM和30μgpSecES质粒;对照组每只裸鼠瘤内3点注射复合物100μl,内含30μl梭华-SofastTM和30μgpcDNA3.1质粒;空白组每只裸鼠瘤内3点注射生理盐水100μl。各组每只裸鼠间隔3d注射1次,连续注射3次。接种后第34天处死裸鼠,取肿瘤组织按SP法进行免疫组化染色,检测HIF-2α和VEGF的表达。结果干预组的ACHNRCC的生长较对照组和空白组明显受到抑制,干预组的HIF-2α和VEGF的表达较对照组和空白组低。HIF-2α和VEGF之间呈正相关（r=0.462,P〈0.05）。结论内皮抑素基因导入可以抑制荷瘤裸鼠ACHNRCC的生长,而且HIF-2α和VEGF在ACHNRCC的表达减少。HIF和VEGF二者之间存在正相关性。     

重组腺病毒Ad-Endo对人脐静脉内皮细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究人内皮抑素(endostatin,Endo)对人脐静脉内皮细胞增殖和凋亡的影响.方法:利用腺病毒载体系统AdEasy-1及AAV 293细胞构建并包装出携带Endo基因的重组腺病毒Ad.Endo,感染人脐静脉内皮细胞ECV 304,Western-blot检测Endo蛋白表达,流式细胞术及Hochest 33258染色检测ECV 304细胞凋亡情况,并绘制细胞生长曲线.结果:病毒感染48 h后检测到Endo蛋白表达,ECV 304细胞在Ad-Endo感染后细胞增殖受到抑制.流式细胞术及Hochest 33258染色均检测到细胞凋亡增加.结论:重组腺病毒Ad-Endo在体外可抑制ECV 304细胞的增殖并诱导细胞凋亡.这可能是Endo抑制血管生成的重要机制.     

体外培养和冷冻保存对微囊化细胞生长和内皮抑素表达的影响

背景：微囊化基因工程细胞移植治疗需要制备大量的细胞活性良好、重组蛋白表达量高的生物微胶囊，体外培养和冷冻保存足生物微胶囊制备过程中两个重要的环节。目的：考察体外培养时间和冷冻保存对微囊化细胞在动物体内生长和内皮抑素表达的影响及体外培养时间对微囊化细胞冷冻保存的影响。设计、时间及地点：于2006—04／10在大连化学物理研究所生物医用材料实验室完成实验。材料：海藻酸钠与聚赖氨酸为美困Sigma公司产品。方法：将微囊化的重组内皮抑素绌胞分装于24孔板中；每孔分装0．1mL微胶囊，加入DMEM／F12培养液2mL。微囊化细胞在37℃、体积分数为0．05的CO2培养箱中培养。每2d采用MTT法测微囊内的活细胞密度，并收集培养上清测内皮抑素表达量。主要观察指标：微囊化细胞生长情况和内皮抑素表达量。结果：体外培养时阃对微囊化细胞在动物体内生长、内皮抑素表达和微囊稳定性具有较大的影响，体外不培养和培养4d的微囊化细胞在小鼠腹腔内生长良好、内皮抑素表达量高，并且微囊稳定性好，而体外培养8d的微囊化细胞在移植后的第26天破裂。体外培养时问对微囊化细胞冷冻保存也具有较大的影响，体外培养4和8d的微囊化细胞存液氮中冷冻保存40d，复蓐后细胞生长良好、内皮抑素表达量高，而冻存前未经过体外培养的微囊化细胞，复苏后细胞几乎全部死亡。结论：生物微胶囊在体外比较适宜的培养时间为4d。并且冷冻保存对微囊化细胞在动物体内生长、内皮抑素表达和微囊稳定性没有显著的影响。     

重组人血管内皮抑素体外抗多发性骨髓瘤的初步研究

本研究旨在探索重组人血管内皮抑素（recombinant human endostatin,rhES）体外对多发性骨髓瘤（MM）细胞生长的抑制作用及其机制。采用台盼蓝拒染法、MTT法检测rhES对MM细胞的增殖抑制作用,用透射电子显微镜及Annexin V—PI双标记流式细胞术检测rhES对MM细胞的凋亡诱导作用。结果表明：rhES在体外浓度为50、100和200μg／ml时,与多发性骨髓瘤细胞株CZ-1细胞作用72小时,抑制率分别为10．5％、17．9％和23．5％,其抑制CZ-1细胞增殖作用呈浓度及时间依赖性;rhES体外浓度为0—400μg／ml时对正常人骨髓单个核细胞的生长活性无明显抑制作用;而体外浓度为50—200μg／ml时rhES对多发性骨髓瘤原代细胞生长活性有抑制的作用,并且其抑制作用呈浓度及时间依赖性。rhES在体外浓度为100μg/ml时,与CZ-1细胞作用72小时,在透射电子显微镜检测可见典型的细胞凋亡的表现,流式细胞术检测其凋亡率为21．37％。结论：rhEs在体外有抑制多发性骨髓瘤细胞生长的作用,其作用机制是诱导细胞凋亡。rhES可能是用于治疗多发性骨髓瘤的潜在药物。     

重组人血管内皮抑素抗白血病作用的初步研究

目的 探索重组人血管内皮抑素(rhES,商品名恩度)体外对急性白血病细胞生长的抑制作用.方法 应用锥虫蓝拒染法、MTT法、透射电子显微镜(电镜)及Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术等方法 检测rhES体外对正常人及急性白血病患者骨髓原代细胞增殖和凋亡的影响.结果 50、100和200μg/ml rhEs作用HL-60细胞72 h,细胞增殖抑制率分别为11.6%、30.4%和33.5%;100和200μg/ml rhES作用NB4细胞72 h,细胞增殖抑制率分别为12.4%和16.4%,其抑制急性白血病细胞株增殖作用呈浓度及时间依赖性;rhES体外浓度0～400μg/ml对正常人骨髓单个核细胞的生长活性无明显抑制作用;50～200 μg/ml rhES对急性白血病患者原代细胞有抑制生长活性的作用,并且其抑制作用呈浓度及时间依赖性.rhES在体外浓度为100 μg/ml时,与HL-60和NB4细胞作用72 h,透射电镜观察可见典型的细胞凋亡的表现,流式细胞术检测凋亡率分别为19.6%和20.8%.结论 rhES在体外有抑制急性白血病细胞增殖和诱导凋亡的作用,是治疗急性白血病潜在的有效药物.     

导入针对survivin基因的siRNA对大肠癌Lovo细胞凋亡和增殖的影响

目的：向大肠癌离体LOVO细胞中导入针对survivin基因的siRNA，并研究其对LOVO细胞凋亡的影响。方法：设计2条特异性针对survivin基因的siRNA，并体外转录法合成，利用脂质体导入LOVO细胞并检测转染后细胞的凋亡和增殖情况。结果：RTPCR检测survivin mRNA表达水平发现两RNA干扰组细胞内survivin mRNA表达量明显低于正常LOVO细胞；细胞凋亡检测结果发现两干扰组细胞凋亡率分别为21、5％和26、28％明显高于正常Lovo细胞；细胞增殖结果显示：两干扰组细胞增殖能力比正常Lovo细胞减弱。结论：针对survivin基因的siRNA能有效降低目的基因的mRNA表达，抑制LOVO细胞生长，细胞凋亡率明显增高。为大肠癌基因治疗的可行性提供了有力的证据。     

内皮抑素研究进展及在抗肿瘤中的应用

内皮抑素是一种新的能强烈抑制血管形成的抑制因子,内皮抑素水平与肿瘤具有明显的相关性,其水平可以作为肿瘤的临床预后指标。内皮抑素的基因治疗与化疗、放疗、免疫治疗联合应用不仅显著增强其他治疗抗肿瘤效应,而且可减少其他治疗毒副反应,为肿瘤的抗血管生成治疗开辟了新途径。内皮抑素的临床研究在肿瘤防治中将有积极的意义。     

转染人livinα基因对Jurkat细胞增殖及凋亡的影响

目的：研究人livinα基因表达对Jurkat细胞增殖、凋亡的影响。方法基因转染获得稳定表达livinα的Jurkat细胞克隆（Jurkat/livinα）;MTT法测定细胞增殖,流式细胞仪分析细胞凋亡率,通过观察细胞生长和凋亡情况,探讨livinα对Jurkat细胞增殖及凋亡的影响;RT-PCR检测细胞中livinα和caspase-3 mRNA的表达。结果Jurkat/livinα组livinαmRNA表达高于对照组（Jurkat细胞组）（P＜0.05）,转染后caspase-3 mRNA受到抑制,表达减弱,细胞生长曲线显示Jurkat/livinα组细胞生长速度增快,倍增时间缩短9-10 h（P＜0.05）,细胞凋亡率计算显示Jurkat/livinα组细胞凋亡率较Jurkat细胞组明显减少（P＜0.01）。结论 livin α基因能促进Jurkat细胞生长,可能通过抑制细胞凋亡而在急性T淋巴细胞白血病发生发展中起重要作用,有望成为白血病治疗的新分子靶点。     

锌指基因1对脑胶质瘤细胞增殖及凋亡能力的影响

目的:研究过锌指基因1(JAZF1)对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡能的影响及其信号通路。方法:体外培养脑胶质瘤细胞株,分为对照组、空载组和过表达组;分别于无血清的RPMI 1640培养基中,加入AdvJAZF1-GFP或空载体Adv-GFP,对照组不予转染腺病毒。MTT法检测细胞活力,使用流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot法检测糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、β-连环蛋白(β-catenin)、腺瘤性结肠息肉病相关基因(APC)、Bax和Bcl-2蛋白表达量。结果:对照组和空载组细胞活力和凋亡率差异无统计学意义(P>0.05),过表达组细胞活力低于其他2组、细胞的凋亡率高于其他2组(均P<0.05);对照组和空载组β-actenin、GSK-3β、APC、Bax和Bcl-2蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05),过表达组β-actenin、GSK-3β、APC和Bax蛋白表达低于其他2组,Bcl-2蛋白表达高于其他2组(P<0.05)。结论:过表达JAZF1可能可通过作用于Wnt/β-catenin信号通路,调控β-catenin、GSK-3β、B...     

miRNA-592在肾细胞癌进展中作用及其与预后关系研究

目的 探讨miRNA-592在肾细胞癌(RCC)中的作用及其与预后的关系.方法 逆转录-聚合酶链反应检测110例RCC组织及其配对的癌旁组织、正常人肾上皮细胞系(HK-2)和人RCC细胞系(786-O、ACHN、Caki-1和769-P)中miRNA-592的表达.分析miRNA-592与RCC临床病理特征及生存预后的...     

沙利霉素逆转P-gp介导的肾癌ACHN细胞多药耐药的实验研究

目的探讨沙利霉素对肾癌ACHN细胞多药耐药的逆转及其机制。方法实验分为对照组、阿霉素组、沙利霉素组及阿霉素和沙利霉素联合用药组,药物作用24h后,CCK-8方法检测肾癌细胞的生长活性,免疫细胞化学法检测肾癌细胞P-糖蛋白（P-gp）的表达情况。结果 10μg/ml阿霉素对肾癌ACHN细胞的生长抑制率仅为4.758%。沙利霉素组对肾癌ACHN细胞生长抑制率呈剂量依赖性,并高于阿霉素组（P〈0.05）,其中以10μmol/L组抑制率最高（达17.555%）。联合用药组的生长抑制率高于沙利霉素组及阿霉素组（P〈0.05）,以10μmol/L沙利霉素＋10μg/ml阿霉素组的抑制率最高（达45.447%）。与阿霉素组比较,经沙利霉素处理过的肾癌ACHN细胞中的P-gp蛋白表达下降（P〈0.05）。结论沙利霉素增强了肾癌ACHN细胞对阿霉素的敏感性,耐药性逆转的机制之一可能与沙利霉素下调癌细胞中P-gp的表达有关。     

硼中子俘获疗法治疗裸鼠ACHN肾透明细胞癌的疗效观察

目的探讨硼中子俘获疗法(BNCT)治疗ACHN肾透明细胞癌的临床效果。方法建立ACHN肾透明细胞癌的荷瘤裸鼠模型。将荷瘤裸鼠随机分为5组,未注药对照组、未照射对照组、BNCT-I组、BNCT-II组和BNCT-III组,于腹腔注射二羟基硼苯丙氨酸(BPA)2.5 h后进行中子辐射。15 d后观察测量裸鼠肿瘤的大小,评价BNCT的治疗效果。结果辐射治疗后第15天,测得肿瘤体积的平均值分别为:未注药对照组(358.40±18.15)m3,未照射对照组(352.87±23.79)m3,BNCT-I组(277.11±42.33)m3,BNCT-II组(90.04±39.56)m3,BNCT-III组(212.70±52.61)m3。结论 BNCT治疗对ACHN肾透明细胞癌有明显的疗效,其效果与BPA浓度和辐射剂量有关。     

抗菌肽LL-37对口腔鳞癌SCC-090细胞增殖、侵袭和凋亡影响的体外实验研究

目的 研究抗菌肽LL-37对口腔鳞癌SCC-090细胞的增殖、侵袭和凋亡的影响.方法 体外培养口腔鳞癌SCC-090细胞,设置空白对照组(抗菌肽LL-37为0μg/mL)、不同浓度的抗菌肽LL-37(25、50、100、150、200μg/mL),分别培养细胞24、48、72 h后,细胞增殖-毒性法检测细胞的增殖情况,...     

Endostatin neoadjuvant gene therapy extends survival in an orthotopic metastatic mouse model of renal cell carcinoma

Despite recent advances in targeted therapy, renal cell carcinoma (RCC) remains one of the most lethal urologic malignancies. Approximately 30% of patients with localised RCC will develop metastases after curative surgery. Presurgical therapy has been explored for treatment of localised RCC. Endostatin (ES) is a fragment of collagen XVIII that possesses antiangiogenic activity. In this study, we examined the potential use of an antiangiogenic agent as a neoadjuvant therapy in an orthotopic metastatic mouse model of RCC. BALB/c mice bearing Renca cells were treated before nephrectomy with NIH/3T3-LendSN cells. At the end of the experiment, ES serum levels were measured. Primary and metastatic tumour area and microvascular area were determined. In the survival studies, mice were monitored daily until they died. ES serum levels in treated mice were higher in the control group (P < 0.05). The median primary tumour area and the mean microvascular area were significantly lower in the ES-treated group compared to control group (P < 0.05). The proliferation of Renca cells in the ES-treated group was significantly reduced compared with the control group (P < 0.01). ES therapy led to a significant reduction in the number of pulmonary metastatic nodules compared with the control group (P < 0.01). Kaplan–Meier survival curves showed that the probability of survival was significantly higher in mice receiving ES therapy (P = 0.0243, Log-Rank test). Our results indicated that neoadjuvant ES gene therapy has the potential to decrease tumour burden, extend survival, and may have clinical benefit in the management of RCC.     

Pro-apoptotic effects of Amblyomin-X in murine renal cell carcinoma “in vitro”

Renal cell carcinoma (RCC) is one of the most lethal urologic cancers and is highly resistant to both radiotherapy and chemotherapy. The recombinant protein Amblyomin-X, characterized as a Kunitz-type protease inhibitor, was obtained from a cDNA library from the salivary glands of the Amblyomma cajennense tick. This paper reports the biological effect of Amblyomin-X on inducing cell death by apoptotic process in vitro. For this purpose, the changes in morphological aspects of cells, the phosphatidylserine exposition and DNA degradation were evaluated after treatment with Amblyomin-X. We found that Amblyomin-X was able to induce apoptosis in Renca cells in a dose-dependent manner. So, the results presented here open perspectives for new researches and developing for Amblyomin-X in the treatment of RCC.     

细胞周期蛋白依赖激酶对肝癌细胞增殖及凋亡的影响

目的：探讨细胞周期蛋白依赖激酶（cyclin dependent kinase,CDK）对原发性肝癌（肝癌）细胞增殖及凋亡的影响。方法：对体外培养的肝癌细胞株SMMC-7721分别予浓度为0μmol／L、2μmol／L、4μmol／L、8μmol／L、16μmol／L、32μmol／LCDK抑制剂rosco-vitine干预72h,分别通过倒置显微镜、四甲基偶氮唑蓝法、流式细胞仪、逆转录PCR法观察SMMC-7721细胞的生长、增殖,细胞周期时相的分布、凋亡以及CDK2、半胱氨酸蛋白酶-3和BCL-2mRNA的表达。结果：予roscovitine干预72h后,光镜下可见随着roscovitine浓度的增加,部分细胞核固缩、胞体折光性减弱、胞浆内可见有颗粒和核碎片形成,其中以32μmol／L组的改变最为明显。四甲基偶氮唑蓝法结果显示,不同浓度的roscovitine对细胞生长均有一定的抑制作用,roscovitine对细胞的抑制作用呈剂量依赖性和时间依赖性。流式细胞仪检测发现,经roscovitine干预后肝癌细胞G0期、G1期及凋亡细胞的比例增加。逆转录PCR发现,随着roscovitine浓度的增加．CDK2mRNA及凋亡相关基因BCL-2mRNA水平降低,半胱氨酸蛋白酶-3mRNA表达升高。结论：CDK表达降低可抑制增殖期肝癌细胞的增殖,诱导细胞的凋亡,凋亡机制可能与BCL-2、半胱氨酸蛋白酶．3的表达改变有关。CDK在肝癌细胞增殖及凋亡中起着重要作用。     

热化疗对人胆管癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨表阿霉素(EADM)热化疗对人胆管癌细胞(QBC939)的增殖和凋亡的作用。方法以体外培养的人胆管癌细胞株为研究对象,采用水浴加热法进行体外细胞毒实验(MTT)、透射电镜观察及流式细胞仪检测,观察热疗、化疗、热化疗对人胆管癌细胞的生长抑制和凋亡的影响。结果42℃以上单纯热疗对QBC939细胞有明显杀伤作用(P<0.01),42℃以上热化疗对QBC939细胞有明显的协同或相加作用(P<0.01)。透射电镜和流式细胞术均观察到热疗、化疗、热化疗诱导细胞凋亡的作用(P<0.01);热化疗有协同作用(P<0.01)。结论热疗、化疗、热化疗均抑制QBC939细胞增殖;热疗、化疗、热化疗诱导细胞凋亡为其抗癌机制之一;热疗提高化疗药物的细胞毒作用。     

Lobaplatin suppresses proliferation and induces apoptosis in the human colorectal carcinoma cell Line LOVO in vitro

Lobaplatin, as the third-generation platinum antineoplastic agent, showed promising antineoplastic effects in variety of preclinical test tumor models. We investigated the inhibition effect of lobaplatin on the colorectal carcinoma cell line LOVO in vitro, and explored its mechanism of action. The MTT assay was used to determine the inhibitory effect and inhibition ratio of lobaplatin on LOVO at various lobaplatin concentrations (500 μM, 1000 μM, 2000 μM). Apoptosis was detected by terminal deoxynucleotide transferase-mediated dUTP nickend labelling (TUNEL). The cell cycle and apoptotic rate were analyzed by flow cytometry (FCM) and the expression of caspase-3,8,9 in cells was detected by chromometry. The results of MTT assay showed that proliferation of LOVO cells was inhibited by lobaplatin in a concentration-dependent manner. Apoptosis was detected in LOVO cells by TUNEL. The FCM assay indicated that lobaplatin altered the cell cycle and induced apoptosis of the LOVO cells when treated for 24 h, the percentages of cells in the S phase transition were increased, whereas the percentages of cells in the G₂ transition were decreased. The expressions of caspase-389 is higher than the control group after LOVO cells were treated by lobaplatin. Lobaplatin can inhibit the proliferation of colorectal carcinoma cell line LOVO by inducing apoptosis in vitro. The mechanism may be related to the “S” cycle arrest in cell cycle distribution and the up-regulated expression of caspase-8 and caspase-9 which up-regulated the expression of caspase-3.