马洛替酯抗肝纤维化的组织学及超微结构研究

目的研究马洛替酯治疗肝纤维化的组织学及超微结构改变。方法取雄性 Wistar 大鼠120只,随机分为3组,每组40只。模型组:CCl_4维0.25ml/100mg 皮下注射,每周三次;马洛替酯组:CCl_4油注射的同时予以马洛替酯50mg·kg~(-1)·d~(-1)灌胃,1次/日;对照组:橄榄油皮下注射。光镜及电镜下动态观察组织学改变,图象分析仪测量胶原面积。结果第四、六、八、十周,马洛替酯组肝纤维化分级、胶原面积低于模型组(P<0.05)。结论马洛替酯具有显著的抗肝纤维化作用。     

丰富生存环境通过调节IL-22信号通路抑制小鼠肝纤维化

目的旨在观察丰富生存环境(Enriched environment,EE)诱导的良性心理应激对小鼠肝纤维化及肝内IL-22信号通路的影响,探讨其对四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl_4)诱导的肝纤维化的作用及可能的机制。方法将C57BL/6小鼠随机分为标准环境(Standard environment,SE)组、EE组,分别饲养3周后行行为学实验检测小鼠焦虑水平,之后采用腹腔注射四氯化碳(CCl_4)方式建立肝纤维化模型,每周2次,并记录小鼠一般情况,于第6周最后一次注射CCl_4后1 d和5 d处死小鼠,分别行ALT血清学检测,石蜡切片HE染色、Sirius Red染色,ELISA法检测肝内IL-22的表达差异,real-time PCR法检测肝内IL-22受体IL-22RA1和IL-10RA2的表达差异。结果与SE相比,EE明显降低了小鼠焦虑水平(P0.05); EE组小鼠CCl_4注射前体重轻于SE组,CCl_4注射后期体重重于SE组(P0.05);血清ALT水平明显降低(P0.001);组织切片示EE组细胞坏死程度和细胞排列紊乱程度较SE组减轻,并且肝脏胶原纤维沉积程度显著减轻(1 d,P0.001;5 d,P0.01);ELISA结果示EE组IL-22表达量显著增加(P0.01),RT-PCR结果示IL-22RA1和IL-10RA2表达量均增多(分别P0.05、P0.01)。结论 EE可能通过激活肝内IL-22信号通路抑制CCl_4诱导的小鼠肝脏纤维化进程,本研究支持了良性心理应激对肝纤维化的发生发展具有重要的调控作用。     

肝脏表达CYP11B2与安体舒通抗实验性肝纤维化的作用

目的探索 CYP_(11)B_2在正常与肝纤维化大鼠肝组织中的表达,评价安体舒通的治疗作用。方法取雄性 Wistar 大鼠160只,随机分为4组,每组40只。模型组:CCl_4油0.25ml/100mg 皮下注射,每周三次;安体舒通组:CCl_4油注射的同时予以安体舒通20mg·kg~(-1)·d~(-1)灌胃,1次/日;马洛替酯组:CCl_4油注射的同时予以马洛替酯50mg·kg~(-1)·d~(-1)灌胃,1次/日;对照组:橄榄油皮下注射:光镜下动态观察组织学改变,图象分析仪测量胶原面积。RT-PCR 检测 CYP_(11)B_2的表达。结果 RT-PCR 显示 CYP_(11)B_2在肝纤维化形成时表达增强。第四、六周,安体舒通组肝纤维化分级、胶原面积低于模型组(P<0.05)。第八、十周,安体舒通组与模型组相比差异无显著性意义(P>0.05)。结论 CYP_(11)B_2在肝纤维化形成时表达增强。安体舒通对早期肝纤维化具有一定的治疗作用。     

四氯化碳诱发大鼠肝纤维化自发逆转中库普弗细胞与星状细胞的分布

目的:探讨四氯化碳(CCl_4)诱发大鼠肝纤维化自发逆转过程中肝库普弗细胞与星状细胞的分布和意义.方法:500 mL/L CCl_4腹腔注射8 wk诱发大鼠肝纤维化模型,实验第8,12周末检测血清生化指标,观察肝组织的病理变化,采用免疫组化SP法观察单核巨噬细胞抗原(ED1),α-平滑肌动蛋白(α-SMA)阳性表达的肝库普弗细胞(kupffer cell,KC)和肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)的分布结果:第8周末模型组大鼠与对照组比较,血清ALT和AST活性(568.18±630.46 nkat/L vs 472.26±167.37 nkat/L.P<0.05:5845.84±1353.27 nkat/L vs 1698.51±663.30 nkat/L.P<0.01),肝/体质比(3.90±0.85 vs 2.56±0.24,P<0.001)及胶原纤维面密度(5.87±1.13 vs 0.52±0.30,P<0.001)明显增高;大量ED1和α-SMA阳性的KC和HSC主要分布在汇管区增生的纤维组织及纤维间隔内.第12周末模型组与第8周比较大鼠血清ALT活性(1020.70±306.73 nkat/L vs 376.74±304.06 nkat/L.P<0.05)仍较高外,胶原纤维面密度减少,汇管区增生的纤维组织及纤维间隔内ED1阳性的KC减少,α-SMA阳性的HSC消失.结论:腹腔注射CCl_48 wk后大鼠肝功能明显损伤,形成肝硬化,KCs激活和HSCs活化相关,停止注射CCl_4 4 wk后大鼠肝纤维化发生自发逆转.     

肝微循环障碍是病毒性肝炎发病原理的病理生理基础的实验及临床研究

用小剂量CCl_4制成小鼠肝微循环障碍LMCO(高度纤维化)模型。至270天,给CCl_450次即可制成各期LMCO(包括肝硬化及癌变)模型。三七可对抗CCl_4所致小鼠LMCO;可对抗DGalN所致大鼠肝血流量减少和家兔的急性肝损伤,能使中央静脉下成纤维细胞     

脂肪肝与肝纤维化关系的实验研究

为探讨脂肪肝与肝纤维化的关系及其机制,建立Wistar大鼠高脂饮食和/或酒精、CCl_4性脂肪肝模型。结果表明,脂肪肝和肝纤维化是两种并无因果关系的病理学改变,致病因素的强度和作用时间共同决定肝纤维化的显型表达,并非肝组织脂肪本身,而是肝脂质过氧化终产物丙二醛含量与肝纤维化时x-SMA阳性细胞数以及肝胶原蛋白含量之间呈显著正相关,但肝内脂肪沉积可通过增强酒精、CCl_4等对肝脏脂质过氧化反应。促进肝纤维化的发生和发展。     

PTEN在CCl_4诱导肝纤维化大鼠模型中的作用及益气活血方对其的影响

目的探讨第10号染色体缺失性磷酸酶张力蛋白同原物基因(PTEN)在CCl_4诱导肝纤维化大鼠模型中的作用,阐明益气活血方调节PTEN阻止肝纤维化的分子机制。方法选用27只Wistar雄性大鼠,随机分为3组,每组9只。其中肝纤维化组以CCl_4诱导建立肝纤维化模型;益气活血方组在CCl_4造模同时自拟以黄芪、丹参、云苓等中药为主的益气活血方进行干预实验;对照组以橄榄油腹腔注射。HE染色、Masson染色及胶原(Col1A1和Col4)免疫组化染色观察不同组别大鼠肝纤维化及胶原沉积程度;qRT-PCR、免疫组化及Western Blot检测TGFβ1、PTEN及其下游基因AKT、mTOR及p70S6K表达。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果肝纤维化组大鼠肝组织病理学可见窦周纤维化、汇管区纤维组织增生及胶原沉积、纤维间隔形成,伴随促肝纤维化基因TGFβ1 mRNA及蛋白表达上调,PTEN表达下调,而PTEN下游信号因子AKT、mTOR、p70S6K mRNA及磷酸化蛋白表达上调,与对照组比较差异均有统计学意义(P值均0.01)。应用益气活血方组大鼠肝纤维化显著改善,PTEN表达较肝纤维化组明显增加(P0.01),TGFβ1 mRNA及蛋白表达明显抑制(P值均0.05),AKT、mTOR及p70S6K的mRNA及磷酸化蛋白表达较肝纤维化组明显减少(P值均0.05)。结论益气活血方可能通过调节PTEN及其下游信号因子的表达,阻止及逆转肝纤维化。     

过表达Prx5对四氯化碳诱导的肝纤维化模型大鼠的作用及机制研究

目的探究过氧化物酶5(Prx5)对由四氯化碳(CCl_4)诱导的肝纤维化模型大鼠的作用及机制。方法采用腹腔注射含CCl_4的橄榄油溶液方法构建肝纤维化大鼠模型。将40只大鼠随机分为对照组(腹腔注射橄榄油溶液)、模型组(腹腔注射含CCl_4的橄榄油溶液)、空载体组(腹腔注射含CCl_4的橄榄油溶液+尾静脉注射含空载质粒的慢病毒)和过表达Prx5组(腹腔注射含CCl_4的橄榄油溶液+尾静脉注射含过表达Prx5质粒的慢病毒),每组各10只。采用ELISA法检测各组肝脏组织中羟脯氨酸水平。采用实时荧光定量PCR法检测Prx5 mRNA、转化生长因子-β1(TGF-β1) mRNA、信号转导与转录激活因子3(STAT3) mRNA的表达水平。采用蛋白质印迹法检测Prx5、TGF-β1和STAT3的蛋白水平。结果与对照组比较,模型组肝脏组织中羟脯氨酸水平,以及TGF-β1和STAT3的mRNA及蛋白水平均较高,而Prx5 mRNA及蛋白水平均较低,差异均有统计学意义(P均0.05)。与模型组和空载体组比较,过表达Prx5组肝脏组织中羟脯氨酸水平,以及TGF-β1和STAT3的mRNA及蛋白水平均较低,而Prx5 mRNA及蛋白水平均较高,差异均有统计学意义(P均0.05)。结论过表达Prx5可抑制由CCl_4诱导的肝纤维化模型大鼠的炎性反应,其机制可能与调控TGF-β1/STAT3信号转导通路有关。     

虫草菌丝抗肝纤维化的实验研究

目的:观察人工虫草菌丝对CCl_4中毒性肝纤维化的预防作用。方法:复制大鼠CCl_4中毒性肝纤维化模型,并以秋水仙碱作为阳性治疗对照,采用光镜、电镜观察肝脏组织学改变,测定血清ALT、Alb、G、HA、LN、肝组织Hyp含量。结果:虫草菌丝组肝细胞损害、肝脏脂肪变性、炎性细胞浸润的程度均较模型组轻,但再生肝细胞较多,有假小叶形成;其对肝功能、肝纤维化指标也有明显改善,但秋水仙碱的抗肝纤维化作用优于虫草菌丝。结论:虫草菌丝对肝脏CCl_4损伤具有一定保护作用,有较强促进肝细胞再生修复作用,同时在损伤肝组织中成纤维细胞及胶原纤维也明显增生,其与活血化瘀药有机伍用,可能是防治肝纤维化较理想的组合。     

白藜芦醇抑制巨噬细胞中NF-κB通路发挥抗肝纤维化作用

目的探讨白藜芦醇(Resveratrol)改善肝纤维化的机制是否通过抑制NF-κB通路来调节巨噬细胞活性实现。方法将实验小鼠随机分为3组,分别给予橄榄油、橄榄油+四氯化碳(CCl_4)、橄榄油+CCl_4+白藜芦醇腹腔注射,用Masson三重染色法评估肝纤维化严重程度,NF-κBmRNA及蛋白表达水平用RT-PCR和Westernblotting法测定;用RAW264.7巨噬细胞分别建立M0型、M1型和白藜芦醇干预的M1型巨噬细胞模型,再测定各组模型中NF-κBmRNA和蛋白表达水平。结果 Masson染色结果提示,白藜芦醇有改善小鼠肝纤维化的作用。RT-PCR和Westernblotting方法显示肝纤维化组织中NF-κBmRNA和蛋白表达水平升高,而白藜芦醇干预后表达水平下降。NF-κBmRNA和蛋白质的表达量在M1型巨噬细胞中较M0型明显升高,其表达水平在白藜芦醇干预M1型巨噬细胞模型后下降。结论 NF-κB通路活性在纤维化的肝组织及M1型巨噬细胞中明显增高,白藜芦醇可通过降低两者中NF-κB通路活性达到抗肝纤维化的作用。     

维生素E对肝纤维化大鼠肝脏病变及血型胶原表达的影响

为了解补充维生素E(VE)对肝纤维化的影响,以四氯化碳(CCl_4)诱导大鼠肝纤维化模型,对VE(100mg/kg,2次/周,连续10～20周)抗肝纤维化的作用进行了研究。于治疗后10周、20周取肝组织作病理检查及Ⅲ型胶原免疫组化染色,同时设溶剂对照组及盐水对照组。结果表明,经VE治疗后,肝纤维化大鼠肝脏胶原纤维及网状纤维由粗大变纤细并有缩短及断裂;免疫组化染色发现肝纤维化大鼠肝内Ⅲ型胶原主要位于肝细胞浆,呈弥漫性分布,VE治疗组含量较对照组减少,经真彩色图像系统分析与对照组差异显著(P<0.01)。提示VE治疗有助于实验性肝纤维化的恢复。     

CCl4诱导肝纤维化小鼠模型中肝脏巨噬细胞及淋巴细胞亚群变化的初步分析

目的研究CCl_4诱导肝纤维化小鼠模型中肝脏免疫细胞包括巨噬细胞、淋巴细胞亚群的变化。方法 C57BL/6小鼠给予CCl_4腹腔注射建立肝纤维化模型,通过HE和Masson染色评价小鼠肝损伤及纤维化程度。采集小鼠外周血清,检测肝功能指标和血脂水平。取小鼠肝脏制备单个核细胞悬液,用多色流式细胞术检测肝脏免疫细胞亚群的分布。结果实验组小鼠ALT、AST明显高于对照组,TG、LDL-C显著性升高,平均病理评分达到F3级。实验组小鼠库普弗细胞比例(13.33±1.91)%显著高于对照组(8.17±2.00)%,其中以CD11c+标记M1型库普弗细胞比例明显升高,而以CD206+标记M2型库普弗细胞无显著变化。实验组小鼠淋巴细胞中T细胞比例(20.17±4.07)%显著低于对照组(36.00±4.61)%;NKT细胞比例(8.71±1.37)%较对照组(23.41±3.38)%明显降低;而两组间NK细胞和B细胞比例均无明显变化。结论 CCl_4诱导小鼠肝纤维化模型中,肝脏内库普弗细胞的明显增加是以具有促炎效应的M1型巨噬细胞为主,而NKT细胞和T细胞比例则明显减少。M1型巨噬细胞对肝纤维化发展的作用需进一步深入探讨。     

钙拮抗剂治疗肝纤维化的亚细胞学研究

目的 从亚细胞水平评价钙拮抗剂(Ca-A)抗鼠肝纤维化的作用。 方法 用40％CCl_4 0.5ml/只,SC,1次/3d,共15次,诱发Wistar大鼠肝纤维化。用不同剂量的4种Ca-A汉防已甲素(Tet)、维拉帕米(Ver)、硝苯啶(Nif)及脑益嗪(Cin)分别进行早、晚期治疗。分离制备线粒体及其内膜,检测单胺氧化酶(MAO)、N-乙酰β-D氨基葡萄糖苷酶(NAG)的活性和线粒体内膜表层及脂双层中心处的流动性。 结果 小剂量Tet能明显降低早期和晚期MAO及NAG活性,并增加线粒体内膜表层及脂双层中心处的流动性,与CCl_4造型组比较差异显著(P<0.05-0.01)。其它3种Ca-A的效果不尽一致。 结论 小剂量Tet具有良好的抗肝纤维化作用。     

缩肝丸对四氯化碳致大鼠肝纤维化的影响

目的:观察缩肝丸对CCl_4致大鼠肝纤维化的防治作用。方法:采用CCl_4诱导大鼠肝纤维动物模型。SD雄性大鼠50只,随机分为正常组、CCl_4模型组、安络化纤丸组、缩肝丸大剂量组、缩肝丸小剂量组,灌胃给药。用药第10周末处死全部大鼠,留取血清测生化指标,肝组织样本病理切片HE染色及Masson胶原纤维染色镜下观察。结果:缩肝丸可使CCl_4造模大鼠血清中ALT、AST、HA、LN、PCⅢ含量降低;HE染色显示缩肝丸可降低炎性细胞浸润程度,减少假小叶的形成和脂质空泡的数量;Masson胶原纤维染色显示缩肝丸可降低胶原纤维增生程度。结论:缩肝丸具有较好的保肝及延缓肝纤维化进程的作用。     

大黄素对肝纤维化大鼠血清透明质酸的影响

目的:研究大黄素对肝纤维化大鼠血清透明质酸的影响。方法:采用40％四氯化碳(CCl_4)给大鼠皮下注射制备肝纤维化模型,并以小、中和大剂量大黄素治疗,通过放射免疫法测定大鼠血清透明质酸。结果:大黄素组血清透明质酸显著低于模型组。结论:大黄素能降低肝纤维化大鼠血清透明质酸。     

强肝胶囊对CCl_4诱导的肝纤维化大鼠肝组织TGF-β1和PDGF-BB的影响

目的:利用四氯化碳(CCl_4)诱导大鼠肝纤维化模型探讨强肝胶囊对转化生长因子-β1(TGF-β1)和血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)的影响。方法:36只Wistar雄性大鼠随机分为对照组、模型组和治疗组,每组12只,模型组和治疗组大鼠腹腔注射40%CCl_4(2 ml/kg),对照组大鼠腹腔注射等量0.9%氯化钠溶液,每周2次,共6周。从建模的第4周开始,治疗组大鼠用强肝胶囊溶液(浓度为0.1 g/ml, 5 ml/kg)灌胃,其他两组大鼠用等量的0.9%氯化钠溶液灌胃,每天1次,共6周。第3周末和第6周末各组6只大鼠采血,第9周末全部大鼠采血,检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平。第9周末时采集肝组织,经HE染色、Masson染色和α-SMA免疫组织化学染色后进行病理诊断;用荧光定量PCR和蛋白印迹方法检测肝组织目的因子mRNA和蛋白表达水平。结果:强肝胶囊治疗3周后,治疗组大鼠ALT和AST分别较模型组下降27.90%和22.94%。强肝胶囊治疗6周后,治疗组大鼠的纤维化程度较模型组显著改善(P0.05),肝星状细胞(HSC)激活程度较模型组显著降低(P0.05)。治疗组大鼠TGF-β1 mRNA和蛋白表达水平显著低于模型组(P0.05),TGF-β1相关信号通路中Smad2和Smad3 mRNA表达水平也显著低于模型组(P0.05)。同时,治疗组大鼠PDGF-BB mRNA和蛋白表达水平亦显著低于模型组(P0.05)。结论:强肝胶囊能显著抑制CCl_4诱导的大鼠肝纤维化,其可能作用机制为下调细胞因子TGF-β1/Smads信号通路和PDGF-BB表达,从而抑制HSC激活、增殖,发挥抗纤维化作用。     

肝纤维化的治疗

肝脏慢性疾病往往伴有纤维化的病理改变,如不积极治疗便可能进展为肝硬变。本文就近年来对肝纤维化机理研究及相应治疗对策作一综述。 一、肝纤维化的可逆性 一般认为肝细胞损伤或坏死后发生纤维化,就像身体其它组织一样,导致疤痕形成,其结果是不可逆的。但是,在慢性乙型肝炎患者肝组织活检随访及动物实验(如CCl_4造成的大鼠肝硬变模型)中发现如能控制病因,已形成的纤     

不同剂量美洲大蠊提取物抗小鼠肝纤维化的作用

美洲大蠊提取物(APA)对实验性肝损伤有较好的保护作用,能抑制雏鸭体内鸭乙型肝炎病毒的复制[1].为探讨APA对肝纤维化的防治效果,本研究用CCl_4复制小鼠肝纤维化模型,观察不同剂量APA抗肝纤维化的作用及各剂量问疗效的差异.     

丹参提取物抗CCl_4诱导大鼠肝纤维化的作用(摘要)

目的:研究丹参水溶性提取物抗肝纤维化的作用。方法:采用CCl_4大鼠肝纤维化模型,设立低、中二种不同剂量的丹参提取物组,以秋水仙碱和丹参原生药为对照。观察项目包括:肝脏的病理组织学变化;肝组织羟脯氨酸(Hyp)、一氧化氮(NO)含量;血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性和白蛋白(A1b)含量。结果:①各丹参提取物组肝纤维化病理     

扶正化瘀方药物血清对原代培养纤维肝细胞胶原生成及分泌白蛋白功能的影响

目的:研究扶正化瘀方对原代培养CCl_4纤维肝细胞胶原生成率及白蛋白(A1b)分泌功能的影响。方法:制备CCl_4肝纤维化模型,胶原酶原位灌流法分离纤维肝细胞,以~3H-TdR掺入、~3H-Proline掺入胶原酶消化、ELISA等方法研究扶正化瘀方的血清药理学作用。结果:纤维肝细胞其增殖功能、A1b分泌功能均较正常肝细胞低下,而胶原生成率则显著上升;扶正化瘀方药物血清能明显抑制纤维肝细胞增殖及其胶原生成率,促进纤维肝细胞A1b分泌量。结论:上述结果可能是该方抗肝纤维化的作用机制之一,并在一定程度上体现了该方扶正(促进白蛋白合成)与化瘀(抑制胶原生成)的双重作用。