不同培养基上空肠弯曲菌生长特性及外膜蛋白表达差异的初步研究

目的 探讨不同培养基对空肠弯曲菌(CJ)的生物学特性和外膜蛋白表达的影响.方法 采用改良布氏、改良布氏血、改良卵黄等3种培养基培养CJ,48 h后进行菌落观察、菌体观察、动力学试验、生物化学检验、间接荧光检测等初步确定生物学特性,比较3种培养基上CJ生长特性的差别.采用0.2 mol/L、pH 2.2甘氨酸-HCl缓冲液抽提CJ外膜蛋白,SDS-PAGE电泳后,灰度扫描观察比较不同培养基上CJ的28 000～31000外膜蛋白表达差异.结果 改良卵黄培养基上CJ的生长特性典型,并且其菌体形态较另外两种培养基粗壮,繁殖速度更为快速,改良卵黄培养基来源的CJ的28000～31 000外膜蛋白的表达较改良布氏血培养基丰富.结论 改良卵黄培养基培养CJ是一种生长特性典型、28000-31000外膜蛋白表达丰富的培养基,该培养基的选择和使用将为该类蛋白的CJ亚单位疫苗大规模制备、CJ的流行病学检验、食品安全卫生检验检疫奠定重要基础.

Abstract：

Objective To evaluate the biological characteristics of Campylobacter Jejuni (CJ) cultured on different culture media and their expression abundance of outer membrane proteins (OMPs). Methods CJ was cultured on the improved Bull's medium yolk agar, improved Bull's blood agar or improved Bull's agar for 48 h. The biological characteristics of the bacteria, including the colony feature, morphology, motility, biochemistry, and results of indirect fluorescence test were observed and compared. OMP of the cultured CJ was extracted using 0.2 mol/L and glycine-hydrochloride buffered solution (pH 2.2) and identified by SDS-PAGE to compare the expression abundance of the OMPs with molecular weight of 28-31 kD. Results CJ exhibited typical biological characteristics with larger cell body and more rapid growth on improved Bull's medium yolk agar than those on improved Bull's blood agar and improved Bull's agar. The bacteria grown on improved Bull's medium yolk agar showed also greater expression abundance of the OMPs with molecule mass between 28 kD and 31 kD. Conclusion Improved Bull's medium yolk agar allows rapid growth of CJ with typical biological characteristics and enhanced expression of the OMPs with molecular weight of 28 -31 kD, and can be widely used in CJ subunit vaccine development, CJ epidemiological survey, CJ food safety examination, and CJ quarantine.     

空肠弯曲菌和幽门弯曲菌感染

一、空肠弯曲菌空肠弯曲菌属弯曲菌属,近年来证实它可对人类致病,故受到重视,弯曲菌属从1984年分为三个种。即胎儿弯曲菌、唾液弯曲菌和粪弯曲菌。对人致病的主要为胎儿弯曲菌,胎儿弯曲菌又包括三个亚种,即胎儿亚种、肠道亚种、空肠亚种,空肠亚种是人类急性腹泻的主要病原菌之一,简称空肠弯曲菌。空肠弯曲菌和结肠弯曲菌均能引起肠炎,而生物学特性相似,故合称为空肠-结肠弯曲菌性肠     

幽门弯曲菌和空肠弯曲菌的电子显微镜对比观察

Specimens were made by preparing the ultrathin sections after negative staining and ruthenium red staining. The specimens were observed under electron microscope. Results revealed that the shapes of Campylobacter pyloridis (Cp) and C. jejuni (Cj) were similar, but distinctive differences in their structures were observed. Cp had one to five sheathed flagella at one end with bulbous tips. Cj had only one unsheathed flagellum on each end without a bulbous tip. The cell body of Cp was longer than that of Cj. A layer of thick and dense delicate filament-like substance was attached to the surface of the cell body of Cp in the ultrathin sections with ruthenium red staining, in the case of Cj only a little of such a substance could be noted.     

空肠弯曲菌致病机理的初步探讨

The invasiveness and heat-labile enterotoxin of 11 human strains of C. jejuni were detected in NIH mice inoculated with the C. jejuni strains; the methods of plate immunological hemolysin test and SPA-coagglutination test were employed. Ten strains of the bacteria invaded the intestine; 7 strains (45.46%) were positive in SPA-coagglutination test; and 4 (36.36%) produced enterotoxin. C. jejuni in Chengdu area possess multiple pathogenicity, e.g invasiveness and heat-labile enterotoxin, but we did not find definitive correlations between the clinical manifestation and resource of strains.     

空肠弯曲菌口服全菌佐剂疫苗研究

目的采用明胶为空肠弯曲菌死疫苗的佐剂,灌胃免疫小鼠,评价佐剂全菌死疫苗的免疫原性。方法采用空肠弯曲菌全菌死疫苗肌肉注射(A组),用明胶为佐剂全菌死疫苗(B组),全菌死疫苗(C组)及PBS(正常对照组)灌胃免疫Balb/c小鼠;接种3次,间隔7d,末次接种1周后收集小鼠血清和小肠粘液。采用ELISA间接法检测各组血清抗体IgGI、gAI、gM和肠道粘液抗体SIgA水平。结果A、B、C组血清抗体IgGI、gAI、gM和肠道粘液抗体SIgA水平均高于正常对照组,B组明显高于C组有统计学差异(P<0.05),A组与B组间没有统计学差异(P>0.05)。结论明胶作佐剂的全菌死疫苗口服具有良好的免疫原性,可作为口服疫苗佐剂后选。     

空肠,结肠弯曲菌感染

空肠/结肠弯曲菌主要引起人类急性肠炎,它已成为世界范围内腹泻的重要病原菌。本文报道了1988年1～10月在西德汉诺威地区对9845份肠道感染患者大便标本的弯曲菌检查,共分离出271株弯曲菌(2.8％)。对其中115株用马尿酸水解试验鉴定亚种,空肠弯曲菌为73株,结肠弯曲菌为42株,检出率仅次于沙门氏菌感染。发病年龄以21～30岁为主。儿童感染症状较重,主要症状为腹痛、腹泻及含有大量白细胞的粘液血便。用微量稀释法对100株空肠/结肠弯曲菌的抗生素药敏测定,结果是多数菌株对青霉素、半合成青霉素耐药,对红霉素、四环素,氯霉素均敏感。     

空肠弯曲菌致病机理的初步探讨

作者通过NIH种小鼠模型和平板免疫溶血试验(PIH)及SPA协同凝集试验检测了11株空肠弯曲菌产生侵袭和肠毒素的能力。经光镜及电镜观察,10株菌能侵入小鼠肠壁组织内。7株菌SPA协同凝集试验阳性,即能产不耐热肠毒素(CJT)的占63.6％,而PIH阳性的4株,占36.4％。表明:①成都地区的空肠弯曲菌既有侵袭力又能产生肠毒素,具有多重致病力。②患儿临床表现与菌株致病机理无确切关系。     

卵母细胞体外成熟培养液的改良及研究

目的探讨卵母细胞体外成熟培养液的改良及研究。方法选取昆明小鼠50只作为研究对象,根据培养液的不同将50只小鼠分为A组和B组,每组各25只。A组采用低糖细胞培养基（DMEM）培养,B组采用含15％～20％胎牛血清的人类输卵管液培养,两组在相同条件下进行培养,比较两组的体外受精率、正常受精率、卵裂率、优质胚胎率、可移植胚胎率、妊娠率及活产率。结果A组小鼠的体外受精率（71．4％）、正常受精率（65．7％）及卵裂率（89．1％）与B组（67．6％、68．1％、85．1％）比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;A组小鼠的优质胚胎率（31．7％）和可移植胚胎率（56．1％）均优于B组（25．0％、42．5％）,差异有统计学意义（X2=8．26、10．17,P〈0．05）。A组小鼠的妊娠率（23.3％）低于B组（32．6％）,差异有统计学意义（X2=7．58,P〈0．05）;但A组小鼠的活产率（17．8％）稍低于B组（18．9％）比较,差异无统计学意义（P〉O．05）。结论低糖DMEM培养液具有较好的应用效果,但仍需进一步的研奔．     

子宫内膜异位症患者在位内膜细胞的异常生物学特性

目的:探讨子宫内膜异位症(EM)患者在位子宫内膜细胞在侵袭、新生血管形成、增殖、凋亡诸多方面是否有别于正常内膜细胞。方法:1.应用ELISA方法对离体培养的人EM在位内膜细胞及正常子宫内膜细胞的培养基中血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的浓度进行测定。2.应用逆转录聚合酶链反应对离体培养的人EM在位内膜细胞及正常子宫内膜细胞VEGF、MMP-9、TIMP-1和Bax的mRNA表达进行观察。3.应用流式细胞技术对离体培养的人EM在位内膜细胞及正常子宫内膜细胞的增殖和凋亡状况进行观察。结果:EM体外培养的在位内膜细胞分泌的VEGF和MMP-3均显著高于对照组(P<0.01,P<0.05);TIMP-1显著低于对照组(P<0.01);VEGF mRNA、MMP-9 mRNA表达显著高于对照组(P<0.01,P<0.05);TIMP-1 mRNA和Bax mRNA的表达均低于对照组(均P<0.05);增殖指数显著高于对照组(P<0.05);凋亡指数显著低于对照组(P<0.05)。结论:EM在位内膜细胞在表达分泌VEGF、MMP-3、MMP-9、TIMP-1、Bax,PI、ApI等诸多方面均有别于正常对照内膜细胞,进一步支持了"在位内膜决定论"。     

长期无血清传代培养瘤细胞的某些生物学特性观察

本文对长期在无血清培养基内传代培养的亲本瘤和杂交瘤细胞的某些生物学特性进行了监测。结果显示,长期(三个月以上)在DMI传代的瘤细胞,贴壁能力明显减弱,个别瘤系完全呈悬浮型生长,但重新置回含血清常规培养基培养,贴壁能力大部分可恢复到原来状态:诱发BALB/c小鼠腹水和皮下实体瘤的能力保持不变;在HAT选择培养基中培养,瘤细胞的死亡时间在DMI和RPS15对照两种培养基内基本一致;4个亲本瘤系8-氮鸟嘌呤筛选结果与含血清培养的瘤细胞相似;经DMI长期传代的杂交瘤系分泌抗体的能力基本保持不变。     

一阶导数分光光度法测定复方蛋黄乳膏中VitB-2的含量

目的:建立复方蛋黄乳膏中VitB2的含量测定方法。方法:采用一阶导数分光光度法测定复方蛋黄乳膏中的VitB2含量,VitB2的检测波长范围为386~554 nm。结果:浓度范围为0.011 9~0.023 8 mg/ml,测定振幅D与浓度呈良好的线性关系(γ=0.999 2),回收率为99.4%,RSD为0.4%。结论:本法可消除其它组分的干扰,简便、易行、准确,适合医院制剂的质量控制。     

中枢神经系统疾病脑脊液中分子物质含量的测定及其临床意义

研究目的探讨中枢神经系统疾病患者脑脊液中分子物质(MMS)含量的变化及其临床意义。处理方法采用经第一军医大学改进的厂a6pH3nHH氏紫外吸收法。测定结果中枢神经系统疾病患者与正常人相比,脑脊液MMS含量均有不同程度的升高(P<0.01),且随着病情的好转逐渐下降,并与脑脊液中蛋白含量、细胞计数呈正相关。结论中枢神经系统疾病患者脑脊液MMS含量均有不同程度的升高,且随着病情的好转逐渐下降,并与脑脊液中蛋白含量、细胞计数呈正相关。脑脊液MMS含量均有助于中枢神经系统疾病的诊断及预后判断。     

空肠弯曲菌脂多糖在格林巴利综合征发病中的分子模拟机制研究

目的：分析空肠弯曲菌脂多糖（LPS）与格林巴利综合征（GBS）患者神经组织之间是否存在分子模拟现象以及探讨空肠弯曲菌LPS在GBS发病中的作用机制。方法：首先从GBS患者粪便中分离培养出空肠弯曲菌，经鉴定后提取其LPS，用空肠弯曲菌LPS制备出GBS动物模型（实验性变态反应性神经炎），最后利用噬菌体肽库筛选技术分析空肠弯曲菌和GBS患者神经组织之间是否存在相似性抗原表位。结果：空肠弯曲菌LPS、牛髓鞘碱性蛋白以及GBS患者外周神经成分之间存在相似抗原表位。结论：空肠弯曲菌LPS和GBS患者外周神经神经节苷脂成分之间存在分子模拟现象，GBS的发病是由于机体针对感染原的免疫应答通过交叉反应导致外周神经组织损伤所致。     

液体-固体联合培养法检测泌尿生殖道支原体的临床研究

目的 通过对比液体培养法、固体培养法、液体-固体联合培养法的支原体检测结果,探讨支原体检测的优化方法。 方法 收集2016年10月至2017年8月宫颈分泌物标本1 642份,采用液体培养法、固体培养法和液体-固体联合培养法平行检测支原体,于24、48 h分别判读解脲支原体(Uu)和人型支原体(Mh)液体培养结果,48 h判读固体培养结果,根据检测结果计算阳性率和假阳性率,用χ²检验分析数据。 结果 液体培养法总阳性率为40.38%,其中Uu、Mh及混合感染阳性率分别为 30.09%、5.42%、4.87%,假阳性率为5.67%;固体培养法总阳性率为39.46%,其中Uu、Mh及混合感染阳性率分别为32.22%、2.80%、4.44%,假阳性率为0.37%;液体-固体联合培养法的阳性率为32.70%,其中Uu、Mh及混合感染阳性率分别为25.70%、2.74%、4.26%,假阳性率为0.12%。液体-固体联合培养法与固体培养法/液体培养法在支原体阳性率上差异有统计学意义(P<0.05),液体培养法与固体培养法/液体-固体联合培养法在假阳性率上差异有统计学意义(P<0.05)。 结论 液体-固体联合培养法能够准确培养鉴定Uu和Mh,既能排除女性生殖道支原体的正常定植,同时又能够显著降低由于细菌或真菌污染所导致液体培养法产生假阳性结果的情况。     

改良式B—Lynch缝扎术在剖宫产术中宫缩乏力性出血的应用

目的探讨改良式B—Lynch缝扎术在治疗剖宫产术中、产后出血中的应用价值。方法改良式B—Lynch缝扎术治疗48例剖宫产术中宫缩乏力性出血为研究组,随机选择30例剖宫产术中宫缩乏力性出血病例作为对照组（采用出血部位“8”字缝扎、结扎双侧子宫动脉、官腔填塞纱条等方法治疗）,在手术时间、产后出血量、产褥病率以及治疗效果等方面对比两组的临床疗效。结果B—Lynch缝扎术治疗组手术时间、产后出血量、产褥病率以及有效率与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。2组术后子宫缩复、恶露排出正常,未见官腔粘连。结论改良式B—Lynch缝扎术具有操作简单、止血迅速、安全易行等优点,治疗剖宫产产后出血效果显著。     

改良硬膜外镇痛用于预防膝周围骨折术后膝关节僵硬的临床研究

目的 探讨长时间硬膜外镇痛辅助术后膝关节功能锻炼对康复效果的影响. 方法 将100例膝周围骨折术后患者采用双盲法随机分为两组：传统组50例,术后连续硬膜外镇痛2d,其后以口服药镇痛;改良组50例,皮下埋置硬膜外导管,术后连续硬膜外镇痛10 d.采用相同的功能锻炼方法,观察两组不同时点的VAS疼痛评分和下肢运动阻滞评分,追加口服或肌注镇痛药的比例,不同时点患肢被动活动度（PROM）、自主活动度（AROM）情况,自主活动度（AROM）达到90°,110°,130°的比例,评价两组膝关节功能康复效果. 结果 术后1 d VAS疼痛评分两组间差异无统计学意义,术后3,4,6,8,10 d改良组显著低于传统组（P＜ 0.01）;两组均无明显下肢运动阻滞;追加口服或者肌注镇痛药的比例改良组显著低于传统组（P＜0.01）;术后6,8,10,15,30 d时被动活动度（PROM）及自主活动度（AROM）改良组均明显高于传统组（P＜0.05或P＜0.01）;术后8,10,15,30 d时患肢自主活动度（AROM）达到90°,110°,130°比例改良组均显著高于传统组（P＜0.05或P＜0.01）.结论 改良硬膜外镇痛模式,辅助膝关节功能锻炼,能显著提高锻炼效果,加快康复进程,有效预防膝关节僵硬.