骨组织脱钙方法的改良

骨组织必须经过脱钙才能制作切片。选择适当的脱钙液、脱钙方法以及脱钙时间与骨组织的制片质量有密切关系。我们运用超声波技术及两种传统的脱钙方法对不同的骨性组织分组进行脱钙制片,并进行比较,发现该方法在不破坏组织结构及影响染色的同时,缩短了诊断时间,保证了切片质量。现将方法介绍如下。     

三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响

目的探讨三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响。方法选择12例骨组织,随机分为3组。A组用14%硝酸脱钙液进行处理,B、C组分别用EDTA脱钙液、PLANK脱钙液进行处理,同时对CD3、CD68、Ki-67和TTF-1染色。结果室温条件下,硝酸脱钙液的脱钙时间最短,但对组织损伤最大。PLANK脱钙液和EDTA脱钙液脱钙效果较好,组织结构完整,形态清晰,免疫组化染色较好。结论室温条件下,三种脱钙液中PLANK脱钙液和EDTA脱钙液对骨组织脱钙及免疫组化染色效果较好。但由于EDTA脱钙液脱钙时间过长,PLANK脱钙液脱钙均匀,速度快,更适合用于临床病理检查。硝酸脱钙液脱钙最快,但是免疫组化染色效果较差。     

应用微波辐射脱钙技术改善骨组织免疫组化染色效果

应用微波辐射EDTA脱钙技术，革新传统的强酸脱钙法，缩短了脱钙时间，达到了完全保存骨组织形态结构及抗原物质的传统方法难以达到目的，增哟了免疫组化染色效果。     

不同脱钙方法对骨组织切片细胞内mRNA原位杂交表达效果的影响

目的探讨不同脱钙方法对骨组织切片细胞内mRNA原位杂交表达效果的影响,为研究骨细胞内胶原蛋白等基因的表达效果与骨细胞发育以及骨质疏松的关系提供部分理论依据.方法胶原蛋白-Ⅱ-DNA制备mRNA探针,原位杂交骨组织生长板细胞,观察胶原蛋白-Ⅱ原位杂交表达效果.结果几种不同脱钙方法中,10?TA ATM溶液对骨组织切片细胞内RNA酶的抑制效果最好,胶原蛋白-Ⅱ原位杂交表达效果最强.结论应用10?TA ATM溶液脱钙能有效防止骨组织细胞内RNA的降解也是提高原位杂交表达效果的方法之一.     

两种组织脱钙法对免疫组织化学染色影响比较

目的：了解1%（体积分数）盐酸和10%（体积分数）硝酸脱钙液对多种抗原免疫组织化学染色效果的影响。方法：选择伴有灶状钙化的软组织标本包括甲状腺乳头状癌、乳腺癌、前列腺癌、结肠癌和淋巴结各3例,骨组织标本包括活检和尸检病例共9例,将样本分为3组,一组分别用10%（体积分数）硝酸处理24、42和48 h, 另一组分别用1%（体积分数）盐酸处理1、2和3 h,还有一组不用酸处理作为对照组,同时进行多种抗原免疫组织化学染色,其中乳腺癌组织作ER、PR和Ki-67染色,甲状腺癌组织作TTF-1染色, 前列腺癌作34βE12和P504s染色,结肠癌作AE1/AE3、P504s和Ki 67染色,淋巴结作CD3、CD20和Ki-67染色,骨组织作CD3、CD20、CD68、CD235a、MPO、Ki-67、AE1/AE3和TTF-1染色。结果：伴有钙化的软组织和骨组织内多种抗原免疫组织化学染色阳性程度均随酸处理时间的延长而有不同程度的下降,骨组织对酸处理的耐受力比软组织强;不同抗原对酸处理的敏感性不同,TTF-1和Ki-67最为敏感,ER、CD3、和CD20耐受性较好。结论：大多数情况下,盐酸和硝酸处理都会降低组织免疫组织化学染色的敏感性,但是对不同抗原的影响程度不同。大块骨组织可以采用10%（体积分数）硝酸脱钙,软组织比例较高的骨组织和骨髓活检组织尽可能使用1%（体积分数）盐酸脱钙。     

光波-微波辐射技术在骨组织快速脱钙与免疫组化染色中的应用

目的探讨光波．微波辐射技术在骨组织快速脱钙与免疫组化染色中的作用。方法用8％硝酸分别在单纯微波、单纯光波、光波,微波组合Ⅰ和光波-微波组合Ⅱ的条件下脱钙，同时以室温脱钙作为对照；应用光波-微波-LSAB免疫组织化学染色技术检测不同脱钙条件下ANP、CD31、CD34、5-HT、S-100、NF、GFAP和Vimentin的表达。结果8％硝酸室温脱钙时间最长，光波．微波组合脱钙时间最短；微波组、光波组、光波．微波组合Ⅰ组、Ⅱ组脱钙的免疫组化染色均明显比对照组好；光波．微波组合Ⅰ组、Ⅱ组脱钙的免疫组化染色均明显优于单纯微波、单纯光波法；光波-微波组合Ⅱ-LSAB免疫组织化学染色技术比常规免疫组织化学染色所用时间短、染色效果好。结论光波．微波辐射脱钙及免疫组化染色所用的时间明显缩短，染色效果好。     

EDTA微波脱钙骨的免疫组化染色

目的：改进传统骨组织的脱钙方法，改善免疫组化效果。方法：采用20％EDTA微波脱钙法对兔骨组织进行脱钙。结果：EDTA微波脱钙法能够更好的保持骨组织结构和组织中的抗原物质，得到更好的免疫组化切片。结论：EDTA微波脱钙法优于传统脱钙法，更适合于骨组织脱钙和免疫组化制片。     

骨组织快速脱钙法

在外检、教学、科研工作中,对骨组织进行镜下观察,必须脱去钙盐,才能制成切片进行镜检。一般使用的脱钙剂为强酸(如硝酸、盐酸)、有机酸(如甲酸、三氯醋酸等)或为混合液。但是不管使用何种脱钙剂,都必须保证彻底脱钙,如有钙盐残留,会影响切片的完整和损伤切片刀刃。一般骨组织脱钙法需时间较长,酸液致细胞核结构破坏,因而影响病理诊断,所以改进常规脱钙方法,缩短骨组织     

骨组织标本脱钙法的改进

骨组织是一种坚硬的结缔组织，骨基质中有机成分和无机盐紧密结合，使骨组织十分坚硬。因此，在制作骨组织切片时，必须经过脱除钙盐的过程，就是通常说的“脱钙”。传统的脱钙方法常常使用硝酸、盐酸等强酸溶液，尽管脱钙效果好，但能引起组织结构的严重破坏，     

骨组织脱钙技术及在免疫组化染色中的应用

与一般的软组织不同 ,骨组织石蜡切片在脱水、透明等制片前需要使用脱钙剂除去骨组织中的钙盐才能制备成 4～ 5 μm厚的切片。为了更好地了解脱钙技术对骨组织免疫组织化学染色质量的影响 ,本文根据骨组织及其免疫组织化学染色的特点 ,结合文献对影响骨组织免疫组织化学染色质量的组织的固定、常用的脱钙方法及脱钙液、低温 微波快速脱钙技术及注意事项等方面进展进行了综合分析。     

骨组织病理制片三种脱钙液的比较

目的比较三种文献报道的改良脱钙液的效果,获得简单、便捷、适用于临床病理制片的脱钙液。方法考察在常温及37℃恒温条件下,三种改良脱钙液对骨组织的脱钙及染色效果。结果常温条件下,三种改良脱钙液的脱钙时间为72h左右,组织结构损伤小,改良脱钙液Ⅰ、Ⅲ染色效果佳;37℃恒温条件下,三种改良脱钙液的脱钙时间为8—14h,改良脱钙液Ⅰ镜下组织结构破坏,改良脱钙液Ⅱ组织结构破坏且染色效果不佳,改良脱钙液Ⅲ组织结构损伤小,染色效果佳。结论37℃恒温条件下,改良脱钙液Ⅲ是较适合于临床病理制片的脱钙溶液。     

组织芯片检测磷酸化AKT蛋白在不同胃组织中的表达

目的探讨磷酸化AKT蛋白在不同胃组织中的表达意义。方法采用免疫组织化学染色,检测胃组织芯片（包括对照组正常胃黏膜、癌旁、非典型增生、原发癌及淋巴结转移癌组织）中磷酸化AKT蛋白表达。结果与正常胃黏膜、癌旁和非典型增生组织相比,AKT蛋白磷酸化在原发癌、淋巴结转移癌中表达升高（P〈0．01）;与正常胃黏膜组织比较,磷酸化AKT蛋白在非典型增生组织中表达上调（P=0．26）。结论磷酸化AKT蛋白表达与胃癌的发生发展有关。     

鼻内窥镜下微波治疗隐匿性鼻出血

目的：探讨鼻内窥镜下微波治疗隐匿性鼻出血的效果。方法：在鼻内窥镜直视下行微波组织凝固术治疗隐匿性鼻出血36例。结果：治愈28例(77．8％)，好转5例(13．9％)，无效3例(8．3％)，总有效率为91．7％，无并发症发生。结论：鼻内窥镜下微波治疗隐匿性鼻出血具有以下优点：可以发现隐匿性出血灶，可以准确地对出血灶进行凝固。起效迅速、疗效确切、操作安全、方法简便、术后反应轻，避免了前、后鼻孔填塞给患者所造成的痛苦以及可能引起的并发症。     

鼻内窥镜下微波治疗慢性肥厚性鼻炎

目的：探讨鼻内窥镜下微波治疗慢性肥厚性鼻炎的疗效。方法：在鼻内窥镜直视下行微波组织凝固术治疗慢性肥厚性鼻炎58例。结果：治愈12例(20．7％)，显效19例(32．8％)，改善22例(37．9％)，无效5例(8．6％)，总有效率为91．4％，无并发症发生。结论：与中、下鼻甲部分切除术以及前鼻镜下微波治疗相比，本治疗手术创面小，出血少，术野清晰，操作方便，术后反应轻，且无须住院，时间省，花费少，痛苦小，患者乐于接受。     

不同牙周状态下龈沟液组织型纤溶酶原激活剂及其抑制剂活性的比较

目的　检测牙周健康者、慢性龈炎及慢性牙周炎患者龈沟液中组织型纤溶酶原激活剂及其抑制剂的活性 ,为牙周病分型及活动期诊断提供客观指标。　方法　选择牙周健康、慢性龈炎及慢性牙周炎患牙 3组 ,治疗前收集龈沟液并记录临床指标 ,用发色底物法测定组织型纤溶酶原激活剂及其抑制剂的活性。　结果　 3组中组织型纤溶酶原激活剂活性互相比较差异均无显著性 ,纤溶酶原激活剂抑制剂活性则慢性龈炎组、慢性牙周炎组与牙周健康组相比较差异均有显著性 (P<0 .0 5 ) ,而慢性龈炎组与慢性牙周炎组比较差异无显著性 (P>0 .0 5 ) ;纤溶酶原激活剂抑制剂活性与临床指标 BI(P<0 .0 1 ,r=0 .77) ,PI(P<0 .0 1 ,r=0 .6 7)有较好的相关性 ;组织型纤溶酶原激活剂活性则仅与 BI有相关性 (P<0 .0 5 ,r=0 .1 9)。　结论　纤溶酶原激活剂抑制剂活性可能抑制了组织型纤溶酶原激活剂的活性 ,提示纤溶酶原激活剂抑制剂活性可做为判断牙龈炎症程度较为客观的指标 ,组织型纤溶酶原激活剂活性在判断牙周炎活动期的价值仍需进一步研究     

组织芯片结合免疫组化检测人结肠癌组织中PTEN/p-Akt1的表达及其临床意义

目的 研究结肠癌、腺瘤和相应癌旁正常结肠黏膜组织中PTEN、p-Akt1的表达及其临床意义.方法 取85例结肠癌、18例结肠腺瘤和9例癌旁结肠黏膜组织分别制成72点和104点两块组织芯片,采用免疫组化法检测结肠组织芯片中PTEN、p-Akt1的表达.结果 PTEN、p-Akt1在结肠癌、结肠腺瘤和正常结肠黏膜组织中的表达差异无统计学意义(P>0.05),在不同分化程度的大肠癌组织中PTEN的表达差异有统计学意义(P<0.05).与其他临床病理资料无关;p-Akt1的表达与大肠癌组织学分化程度及淋巴结转移有关(分别P<0.001和<0.05),与其他临床病理资料无关.结论 PTEN、p-Akt1畸变可能未参与正常大肠细胞早期恶性转化的过程,但在结肠癌发生、发展中可能起一定作用.     

高效液相色谱测定大鼠早孕组织多胺的含量

建立大鼠早孕组织中多胺含量HPLC测定的方法。方法：大鼠早孕组织中多胺用10％三氯乙酸提取，苯甲酰氯柱前衍生，反相HPLC测定。结果：多胺中腐胺、精脒和精胺能较好分离；腐胺检测限可达1nmol、精脒和精胺可达5nmol；腐胺在1～1000nmol、精脒和精胺在5～1000nmol范围内线性良好；腐胺、精脒和精胺平均生物样本回收率分别为95．8％、92．8％和81．7％，日内变异系数（CV％）分别为2．46％、1．35％和1．94％，日间变异系数分别为3．49％、1．48％和3．27％。结论：该方法简便、灵敏，完全能满足大鼠早孕组织中多胺含量测定的需要。