补锌糖尿病大鼠差异显示新基因片段的克隆鉴定及组织表达

目的克隆补锌糖尿病大鼠差异显示的新基因片段并检测其在各组织中的表达分布。方法对前期研究中分离到的与补锌有关的糖尿病大鼠差异显示的基因片段进行克隆、测序,同源性分析,对发现的2条新基因(2#差异显示片段及6#差异显示片段)设计特异性引物,进行RT-PCR检测,以观察新基因在各组大鼠肝脏中的表达变化,并检测新基因在不同组织中的表达情况。结果经克隆、测序、同源性分析,在GenBank中未找到与2#差异显示片段及6#差异显示片段高同源性的序列,确定2#及6#差异显示片段为新的基因片段;2#及6#新基因片段在糖尿病对照组、糖尿病补锌组的表达量均低于正常对照组,糖尿病补锌组的表达量高于糖尿病对照组(P<0.05);2#新基因片段在大脑及胰腺中表达量较高,在肾脏中表达量较低,在心肌、骨骼肌、胸腺中无表达。6#新基因片段在心肌、骨骼肌、大脑、肾脏、胰腺中均有表达,但在胸腺中无表达;2#及6#新基因片段被GenBank收录,接收号分别为AY952968、AY952970。结论分离并克隆了2条与补锌有关的糖尿病大鼠差异显示的新基因片段,经RT-PCR检测其在各组大鼠肝脏及其它各组织中表达分布后,在GenBank上成功登录。     

补硒糖尿病大鼠新基因片段的鉴定及组织表达

目的:克隆补硒糖尿病大鼠差异显示的新基因片段并检测其在各组织中的表达水平。方法:对前期研究中分离到的补硒糖尿病大鼠与糖尿病对照组之间差异显示的基因片段进行克隆、测序、同源性分析,对发现的5条新基因(Se-2、Se-6、Se-10、Se-14、Se-18)设计特异性引物,进行RT-PCR检测,以排除假阳性并观察其在各组大鼠肝脏中的表达水平及在不同组织中的表达分布。结果:经克隆、测序、同源性分析,发现有5个基因片段(Se-2、Se-6、Se-10、Se-14、Se-18)在GenBank中未找到高同源性的序列,为新的EST片段。其中4个基因片段(Se-2、Se-10、Se-14、Se-18)在糖尿病对照组、糖尿病补硒组肝脏中的表达量均低于正常对照组,糖尿病补硒组的表达量高于糖尿病对照组(P<0.05);在大鼠多种组织中表达水平也不甚相同。4个新基因片段被GenBank收录,接收号分别为AY952968、DQ351839、DQ351838、DQ351840。结论:分离并克隆的4条与补硒有关的糖尿病大鼠差异显示的新基因片段,可能与硒改善糖尿病糖脂代谢紊乱有一定关系。     

补锌糖尿病大鼠肝脏糖脂代谢相关基因表达

目的探讨补锌对糖尿病大鼠肝脏糖脂代谢相关基因蛋白磷酸酶2A(PP2A)和磷脂酶D(PLD)表达的调控。方法对补锌糖尿病大鼠差异显示的基因片段进行克隆、测序及同源性分析;设计基因序列引物,RT-PCR检测观察各组大鼠肝脏中基因表达的变化。结果结果显示,片段Zn-4、Zn-8的碱基序列分别与PLD、PP2A同源性为100%,99%。糖尿病对照组PP2A mRNA表达量(0.5072±0.0574)低于正常对照组(1.3303±0.1855),P<0.05;糖尿病补锌组PP2A mRNA的表达量(0.7005±0.1563)与糖尿病对照组比较有所恢复(P<0.05)。糖尿病对照组PLD mRNA表达量(1.0754±0.0312)和糖尿病补锌组PLD mRNA的表达量(1.0130±0.0992)均高于正常对照组(0.7995±0.1040),P<0.05;糖尿病补锌组PLD mRNA的表达量与糖尿病对照组比较无变化(P>0.05)。结论补锌对糖尿病大鼠肝脏PP2A mRNA表达有上调作用,这可能是锌改善糖尿病糖、脂代谢紊乱的分子机制之一。     

硒对糖尿病大鼠肝脏磷脂酶D基因表达的影响

目的:研究硒对糖尿病大鼠代谢相关基因表达的调控作用。方法:对前期研究分离到的与补硒50μg/kgbwd有关的糖尿病大鼠差异显示的基因片段进行克隆、测序及同源性分析,选择目的基因进行RT-PCR验证,以观察各组大鼠之间肝脏中基因表达的变化。结果:差异显示基因片段Se-4的碱基序列与磷脂酶D(PLD)基因片段的同源性为100%。RT-PCR验证结果显示:PLDmRNA在糖尿病对照组、糖尿病补硒组大鼠肝脏中的表达水平较正常对照组明显增高,但糖尿病补硒组PLDmRNA的表达较糖尿病对照组有所降低(P<0.05)。结论:硒可抑制糖尿病大鼠肝脏中PLDmRMA的表达,这可能是硒改善糖尿病糖、脂代谢紊乱的分子机制之一。     

硒对糖尿病大鼠肝脏蛋白磷酸酶基因表达影响

目的研究补硒对糖尿病大鼠肝脏代谢相关基因表达的影响。方法通过对前期研究分离到的与补硒有关的糖尿病大鼠差异显示的基因片段进行克隆、测序,并进行同源性分析。根据待检测的基因序列设计引物,进行RT-PCR检测,以观察各组大鼠之间肝脏中基因表达的变化。结果经过克隆、测序、同源性比较,差异显示片段Se-8的碱基序列与蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)的同源性为99%。糖尿病对照组(0.507 2±0.057 4)、糖尿病补硒组(0.698 2±0.039 6)PP2A表达量低于正常对照组(1.330 3±0.185 5)(P<0.05);糖尿病补硒组PP2A的表达量(0.698 2±0.039 6)高于糖尿病对照组(0.507 2±0.057 4)(P<0.05)。结论补硒对糖尿病大鼠肝脏PP2AmRNA表达有上调作用,这可能是硒改善糖尿病糖、脂代谢紊乱的分子机制之一。     

补硒糖尿病大鼠ABCa5基因克隆鉴定与表达

目的 克隆补硒糖尿病大鼠三磷酸腺苷(ATP)结合盒(ABC)转运蛋白A亚族的成员之一-ABCa5基因片段并检测其在肝脏中的表达水平.方法 将前期分离到与补硒有关的糖尿病大鼠差异显示的基因片段(简称差显片段)进行克隆、测序和同源性分析,并对ABCa5基因片段重新设计特异性引物,进行半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测,观察其在各组大鼠肝脏组织中表达的变化.结果 发现差显片段Se-12的碱基序列与ABCa5基因的同源性为99%.RT-PCR结果表明,与正常对照组(NC)(0.572 9±0.024 1)相比,糖尿病对照组(DM)(0.160 6±0.007 5)和糖尿病补硒组(DM Se)(0.385 7±0.019 4)中ABCa5基因mRNA的表达水平明显降低,但DM Se组中的该mRNA表达水平较DM组有所升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 ABCa5在糖尿病的发病及代谢过程中起着一定的调节作用;补硒可以上调糖尿病大鼠肝脏中ABCa5 mRNA的表达水平,这可能是硒改善糖尿病糖、脂代谢紊乱的分子机制之一.     

铬对糖尿病大鼠骨骼肌组织基因表达的调控作用

目的　研究铬对糖尿病大鼠代谢相关基因表达的调控作用。方法　雄性Wistar大鼠随机分成 3组 :正常对照组、糖尿病对照组、糖尿病补铬组。糖尿病补铬组每日以 2 0 0 μg kgbw的铬连续灌胃 6 0天。采用mRNA差异显示技术、基因片段的克隆、测序、同源性分析等观察各组大鼠之间骨骼肌中基因表达的变化。结果　分离到糖尿病补铬组与糖尿病对照组之间出现明显差异的 4 0 0bp以上的cDNA片段 11条 ,其中在糖尿病补铬组中高表达的cDNA片段 4条 ;在糖尿病对照组中高表达的cDNA片段 7条。同源性比较结果显示Cr 3与GLUT4 (葡萄糖转运体 4 )的同源性为 98% ;Cr 5与IRS 1(胰岛素受体底物 1)的同源性为 10 0 % ,RT PCR验证结果显示GLUT4表达量在糖尿病补铬组高于糖尿病对照组。结论　铬可诱导糖尿病大鼠骨骼肌中GLUT4mRMA的表达 ,这可能是铬改善糖尿病糖、脂代谢紊乱的分子机制之一。     

补铬对糖尿病大鼠骨骼肌IRS-1基因表达的影响

目的研究补铬对糖尿病大鼠骨骼肌代谢相关基因表达的影响。方法对前期研究分离到的与补铬有关的糖尿病大鼠差异显示的基因片段进行克隆、测序,并进行同源性分析。根据待检测的基因序列进行引物设计,进行RTPCR检测。用激光密度扫描仪进行光密度扫描分析,以目的基因与参考基因的灰度比值反映其表达水平。结果经过克隆、测序、同源性比较,差显片段Cr5的碱基序列与IRS1同源性为100%。糖尿病对照组IRS1mRNA表达量(0791±0038)低于正常对照组(0892±0053,P<005),糖尿病补铬组IRS1mRNA的表达量(0822±0066)与糖尿病对照组相比有所恢复,但尚未恢复到正常水平(P>005)。结论补铬对糖尿病大鼠骨骼肌IRS1mRNA表达有上调趋势,Cr5将作为候选基因有待于进一步研究。     

锌、硒对糖尿病大鼠糖、脂代谢紊乱的调节及其分子机制的研究

目的　为研究锌、硒对糖尿病大鼠糖、脂代谢的影响及其分子机制。方法　于补充锌、硒前后检测各组大鼠空腹血糖、血清胰岛素及血脂 ;运用mRNA差异显示技术观察各组大鼠之间肝脏中基因表达的变化。结果　糖尿病补锌组 (DM +Zn)、糖尿病补硒组 (DM +Se)大鼠血糖水平较实验前明显降低 ;血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、动脉硬化指数明显低于糖尿病对照组 (DM) ,高密度脂蛋白胆固醇高于糖尿病对照组 ;血清胰岛素水平明显改善。分离到糖尿病补锌组、补硒组与糖尿病对照组之间出现明显差异的 4 0 0bp以上的cDNA片段 31条 ,其中在补锌组、补硒组中高表达的cDNA片段 19条 ;在糖尿病对照组中高表达的cDNA片段 12条。结论　锌、硒对糖尿病大鼠糖、脂代谢紊乱具有一定的改善作用 ;对其某些基因的表达产生了诱导或抑制作用。锌、硒对糖尿病大鼠代谢紊乱的调节作用可能与这些基因表达水平的变化有关。     

铬对糖尿病大鼠骨骼肌GLUT4基因表达的影响

目的:探讨补铬对糖尿病大鼠糖代谢相关基因表达的影响。方法:对前期研究分离到的与补铬200μg/(kgbw?d)有关的糖尿病大鼠差异显示的基因片段进行克隆、测序及同源性分析,根据待检测的基因序列进行引物设计,进行RT-PCR检测。以激光密度扫描仪进行光密度扫描分析,以目的基因与参考基因的灰度比值反映其表达水平。结果:差显片段Cr-3的碱基序列与GLUT4同源性为98%。各组大鼠骨骼肌组织中GLUT4mRNA的表达:糖尿病补铬组GLUT4表达量低于正常对照组(P<0.05),高于糖尿病对照组(P<0.05)。结论:给糖尿病大鼠补充微量元素铬可以上调骨骼肌组织中GLUT4mRNA的表达,进而使骨骼肌组织中GLUT4含量增加,这可能是铬改善糖尿病大鼠糖、脂代谢紊乱的分子机制之一。