鼻咽癌细胞鸡胚绒毛尿囊膜移植瘤模型的建立

目的研究鼻咽癌鸡胚绒毛尿囊膜移植瘤模型的建立。方法接种梯度递增的鼻咽癌细胞及对照组于鸡胚,对生长出的移植瘤行原位数码摄影,体积测量,组织切片观察。结果鼻咽癌细胞可在鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)形成移植瘤;该移植瘤可模拟鼻咽癌人体内生长模式;鼻咽癌细胞在CAM上适宜成瘤接种细胞数是0.5～1×106。结论成功地建立了鼻咽癌CAM移植瘤模型,为开展鼻咽癌生物学行为研究奠定又一个技术平台。     

鸡胚神经管缺陷模型的建立

目的 鸡胚胎内注射氨甲喋呤（ＭＴＸ）,制作鸡胚神经管缺陷动物模型。方法 选用上海农业科学院“杭”鸡的受精蛋５５２枚,分成３组,分别为药物（ＭＴＸ）注射组、生理盐水注射对照组及正常对照组。药物注射时间选择在鸡胚孵化第２￣７ｄ,ＭＴＸ剂量分别为０．０１、０．０２、０．０５、０．１及０．２５ｍｇ／ｋｇ。孵化３周后观察结果。结果 孵育第３￣６ｄ注药的鸡（剂量为０．０１、０．０２、０．０５、及０．１ｍｇ／ｋ     

人胚甲状旁腺细胞移植供体胎龄的选择

目的：研究人胚甲状旁腺细胞移植治疗甲状旁腺功能低下（HPT）中供体最佳胎龄段。方法：将12周－32周龄水囊引产的死胎（死亡时间＜2h）的甲状旁腺切取后进行体外培养，定期测量培养液中甲状旁腺激素（PTH）水平，同时对甲状旁腺细胞进行光镜电镜,紧确定最适合甲状腺移植的供体胎龄段，结果：16周－24周龄供体的旁腺细胞经体外培养后，其分泌PTH功能良好，其细胞形态及其超微结构保持良好，结论：16周－24周龄的供体最适合作甲状旁腺细胞移植。     

人胚甲状旁腺细胞移植供体胎龄的选择

目的研究人胚甲状旁腺细胞移植治疗甲状旁腺功能低下(HPI)中供体最佳胎龄段.方法将12周～32周龄水囊引产的死胎(死亡时间＜2h)的甲状旁腺切取后进行体外培养,定期测量培养液中甲状旁腺激素(PIH)水平,同时对甲状旁腺细胞进行光镜电镜检查,以确定最适合甲状旁腺细胞移植的供体胎龄段.结果16周～24周龄供体的甲状旁腺细胞经体外培养后,其分泌Pm功能良好,其细胞形态及其超微结构保持良好.结论16用～24周龄的供体最适合作甲状旁腺细胞移植.     

人胚胎干细胞及其潜在应用

人胚胎干细胞在体外给予特殊的生长因子刺激，可以控制其向特定的细胞分化，这些分化成特定的细胞可以用于治疗性移植、检测药物或潜在毒素的筛选、探索胚胎早期发育中染色体的异常、及遗传工程的新开发。     

鸡胚神经管缺陷模型的建立

目的　鸡胚胎内注射氨甲喋呤(MTX),制作鸡胚神经管缺陷动物模型。方法　选用上海农业科学院“菜杭”鸡的受精蛋552枚，分成3组，分别为药物(MTX)注射组、生理盐水注射对照组及正常对照组。药物注射时间选择在鸡胚孵化第2～7d,MTX剂量分别为0.01、0.02、0.05、0.1及0.25mg/kg。孵化3周后观察结果。结果　孵育第3～6d注药的鸡(剂量为0.01、0.02、0.05及0.1mg/kg)有神经管缺陷畸形产生，为脑膜脑膨出、骶尾骨退化等。结论　MTX能够制作出神经管缺陷鸡胚模型。     

鸡胚胎干细胞饲养层培养体系的建立

采用孵化 8～ 1 2 d鸡胚 ,用胰酶消化 ,以含 1 0 % NBS的 DMEM溶液为培养液 ,分离获得鸡胚成纤维细胞 (CEF) ,建立了培养鸡 ES细胞的饲养层细胞。经过 CEF酶活力法筛选 ,建立了 ES细胞的条件培养基 ,其组成配方为 1 0 % NBS、5 % FBS、 2 .5 %的鸡胚提取物 ,1× 1 0 6/ L m L IF,1 0μg/ L人 b FGF,40μg/ L伴白蛋白 ,0 .1 4mmolβ-ME的高糖DMEM。鸡类 ES细胞 (AKP阳性细胞 ,因未经遗传学和免疫组织化学鉴定 ,故称类 ES细胞 )在经丝裂霉素 -C处理的饲养层细胞上和条件培养基中可传至 9代仍保持良好的增殖能力和未分化状态。     

人胚胎干细胞系的初步建立

目的：探讨人受精卵建立人胚胎干细胞系。方法：将体外受精获得的人受精卵发育至胚胎泡期,用机械法去除胚泡透明带后,取出内细胞团,分散后接种在小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上,进行传代培养。通过碱性磷酸酶染色、胚胎干细胞特异性表面标志物检测、染色体核型分析和严重联合免疫缺陷（SCD）小鼠体内畸胎瘤形成实验,对连续传代的细胞进行鉴定。结果：9枚受精卵在体外培养5-7d后,5个存活并发育为胚泡,取出的内细胞团经接种培养,3个内细胞团存活,呈克隆性生长,发育为胚胎干细胞,并连续体外传代7个月保持未分化状态,建系成功。3个细胞系分别命名为CHE1、CHE3和CHE3。取3个细胞系第5、15和30代的细胞进行碱性磷酸酶染色,均为阳性。对CHE3第25、30、40代、CHE1和CHE2第21、22、30代的细胞检测人胚胎干细胞表面标志SSEA-4、SSEA-3、TRA-1-60和GCTM-2,结果均为阳性;检测小鼠胚胎干细胞表面标志SSEA-1,结果为阴性。染色体核型分析为二倍体核型。将连续传代5个月后（30代左右）的3个细胞系接种到SCID小鼠体内,6周后均形成畸胎瘤,组织病理学检查显示含有3个胚层的组织结构。结论：使用5个人受精卵来源的胚泡,成功地在体外建立了3个胚胎干细胞系,长期传代后仍保持胚胎干性和多向分化的能力。     

人胚神经干细胞的冻存与复苏

目的：研究神经干细胞浆存复苏后的成活率及再培养生长情况。方法：利用无血清培养基短期体外培养胚胎来源的神经干细胞后，以冻存液（体积分数为70％DMEM／F12，体积分数为20％胎牛血清，10％DMSO）进行冻存，于1周，4周，8周，12周，16周，20周，24周分别复苏，计活细胞比例并进行再培养。结果：复苏后神经干细胞的成活比例分别为68％、65％、65％、62％、61％、60％、60％，再培养生长良好。结论：本实验对神经干细胞成功地进行了冻存，复苏和再培养，对临床择期进行神经干细胞移植手术和建立“神经干细胞库”具有重要的意义。     

人胚胃粘膜裸小鼠中移植后的生长特征观察

将１２例水囊引产人胚胃粘膜移植于裸小鼠腹腔，分别于移植后１、２、３和４个月取材检查。移植物存活率为７７．７％，存活期达４个月以上。移植的胃粘膜上皮早期出现变化、坯死、脱落，其后生长分化经历细胞再生－→单层立方上皮－→单层柱状上皮－→幽门腺和胃上凹样结构。其上皮细胞ＡＢ／ＰＡＳ梁色和ＰＮＡ、ＲＣＡ－１梁色亦明显其移植的胃粘膜与正常人胃粘膜在功能上的一致性。这一方法的建立对于研究人胃疾病的病因、发病机     

异基因造血干细胞移植后慢性移植物抗宿主病小鼠模型的建立和评价

目的 采用化疗药物预处理方案建立异基因造血干细胞移植的慢性移植物抗宿主病小鼠模型,并进行评价.方法 以BALB/cH-2kd小鼠作为供鼠,C57BL/6H-2kd小鼠为受鼠.对受鼠使用不同的化疗药物进行预处理[方案1:白消安20mg/(kg·d)×4d+环磷酰胺150mg/(kg·d)×2 d;方案2:白消安20mg/(kg·d)×4 d+环磷酰胺100mg/(kg·d)×2 d],然后经尾静脉注射不同剂量的供鼠脾细胞(6×107或4×107个)和(或)相同剂量的骨髓细胞(2×107个),建立慢性移植物抗宿主病小鼠模型;采用嵌合体分析、临床评分、组织病理学等进行评价.结果 采用白消安20mg/(kg·d)×4d-+环磷酰胺150mg/(kg·d)×2d的方案进行预处理、2×107个骨髓单个核细胞+6×107个脾单个核细胞进行移植可形成较高水平的供受者混合嵌合体.移植物抗宿主病发生时间多集中在供鼠脾细胞输注后30～90 d,化疗药物剂量大的预处理方案及移植细胞数高的移植组小鼠的临床评分和慢性移植物抗宿主病的发生率高于化疗药物剂量小的预处理方案及移植细胞数少的移植组(P＜0.05).模型小鼠肠、肝脏、皮肤、脾脏等器官出现细胞和结构异常、炎症细胞浸润等病理改变.结论 采用白消安和环磷酰胺预处理、给予2×107个骨髓单个核细胞+6×107或4×107个脾单个核细胞可形成较稳定的慢性移植物抗宿主病小鼠模型,为进一步指导临床治疗慢性移植物抗宿主病奠定了实验基础.     

血瘀证动物细胞损伤模型的研制

[目的]探索建立血瘀证细胞损伤模型的方法。[方法]用两种方法,即用血瘀证兔模型血管内皮细胞直接培养的方法和用血瘀证兔模型血清损伤培养的血管内皮细胞方法,研制血瘀证细胞损伤模型。[结果]第一种方法原代培养物血管内皮细胞出现了病理性损伤及内分泌功能的改变,初步表明能直接反映体内的病理状态,但其病理特征并未随细胞传代得以保留;第二种方法培养的细胞同样体现了类似前者的病理状态,且更易于复制。[结论]初步表明所建立的细胞损伤模型从功能和结构上都反映了务大辩论辛整体动物模型及部分临床病人的病理特征,可应用于探讨血瘀证实质和活血化瘀作用机理的研究。     

电离辐射诱导神经干细胞衰老的模型研究

目的 研究神经干细胞在不同强度电离辐射(ionizing radiation, IR)处理下的衰老表型变化,建立电离辐射诱导神经干细胞衰老的方法。方法 对成年鼠来源的神经干细胞进行不同剂量的连续多次电离辐射,细胞分为照射组(0Gy组),低剂量连续辐照组(0.5Gy组),中等剂量的隔代辐照组(2Gy组),高剂量的每隔3代辐照组(8Gy组),分别在短期处理和长期处理后,收集细胞样本,提取RNA,检测神经干细胞衰老相关基因(p16、Bmi1)的表达,并用Ki67免疫荧光染色检测细胞的增殖,用SA-β-Gal检测细胞的衰老状态。结果 在长期处理后,p16在0.5Gy、8Gy组细胞中有20倍的表达升高,在2Gy组细胞中有2倍的表达升高;Bmi1在3组细胞中表达都降低,并随着剂量增加降低幅度增加;Ki67免疫荧光染色结果显示3个处理组的细胞增殖速率都降低,但在长期处理后2Gy组细胞增殖加快;SA-β-Gal检测结果显示,0.5Gy组细胞衰老程度不变,8Gy组衰老加重,2Gy组衰老程度降低。结论对神经干细胞长期高剂量的每隔3代辐照处理可以诱导神经干细胞衰老,作为研究干细胞衰老的模型。     

骨髓间质干细胞移植后大鼠缺血心肌的超微结构观察

目的 观察骨髓间质干细胞(MSCs)移植后大鼠缺血心肌组织的超微结构改变。方法 体外培养、纯化SD大鼠的骨髓MSCs,4’6-二脒-2-苯基吲哚(DAPI)标记,经尾静脉注射移植治疗大鼠急性心肌缺血,移植后1周和8周荧光显微镜下检测心肌组织中DAPI阳性细胞,透射电镜观察心肌组织的超微结构改变。结果 MSCs经传代培养至第3代后,均一性好。细胞移植后1周和8周,移植组的心肌组织中可见呈蓝色细胞核的DAPI阳性细胞,而对照组未发现阳性细胞。移植后1周,心肌组织的超微结构观察发现移植组的心肌梗死周边区域可见少量细胞,其形态类似于体外培养的骨髓MSCs;移植后8周,移植组梗死周边可见大量的毛细血管,其内皮细胞细胞“芽生”分割管腔开始形成新的血管,还可见少量“不成熟”的心肌细胞。结论 骨髓MSCs通过血液循环可向缺血心肌组织归巢并促进血管和心肌组织的再生。     

骨髓间质干细胞移植后大鼠缺血心肌的超微结构观察

目的观察骨髓间质干细胞（MSCs）移植后大鼠缺血心肌组织的超微结构改变。方法体外培养、纯化SD大鼠的骨髓MSCs，4’6-二脒-2-苯基吲哚（DAPI）标记，经尾静脉注射移植治疗大鼠急性心肌缺血，移植后1周和8周荧光显微镜下检测心肌组织中DAPI阳性细胞，透射电镜观察心肌组织的超微结构改变。结果MSCs经传代培养至第3代后，均一性好．细胞移植后1周和8周，移植组的心肌组织中可见呈蓝色细胞核的DAPI阳性细胞．而对照组未发现阳性细胞．移植后1周，心肌组织的超微结构观察发现移植组的心肌梗死周边区域可见少量细胞．其形态类似于体外培养的骨髓MSCs；移植后8周，移植组梗死周边可见大量的毛细血管，其内皮细胞细胞“芽生”分割管腔开始形成新的血管，还可见少量“不成熟”的心肌细胞。结论骨髓MSCs通过血液循环可向缺血心肌组织归巢并促进血管和心肌组织的再生。     

骨髓基质干细胞移植于皮肤全层缺损创面的动物模型

目的 探讨建立适合骨髓基质干细胞移植于创面的动物模型,以研究骨髓基质干细胞在损伤修复中的作用机制.方法 分离、培养、鉴定骨髓基质干细胞;在大鼠背部形成-4 cm×4cm皮肤全层缺损创面;36只大鼠分3组(同种异体皮、脱细胞异种真皮、凡士林纱布)覆盖创面,将标记的P5代细胞移植于创面,观察覆盖物脱落时间、移植成活细胞数量.结果 同种异体皮作为创面覆盖物比其他两组覆盖物脱落时间延长、成活细胞数量多;而脱细胞异种真皮覆盖物组又优于凡士林纱布覆盖物组.结论 应用同种异体皮作为创面覆盖物能够较好地保护移植骨髓基质干细胞,成功构建一个创伤皮肤缺损模型用于研究骨髓基质干细胞的移植.     

人胚神经干细胞体外培养体系的成功建立

本研究通过体外的无血清培养技术和免疫细胞化学技术,成功地从临床流产的胚胎中建立起人中枢神经系统的神经干细胞培养体系,培养出人胚神经干细胞系,并初步比较了人神经干细胞和小鼠神经干细胞的体外生长特性。为进一步探讨有关神经干细胞的细胞学特性提供了一个良好的模型。这也是国内首次成功建立的人神经干细胞体外培养模型。     

Establishment of human embryonic stem cell line from gamete donors

Background Human embryonic stem (HES) cell derived from human blastocyst can be propagated indefinitely in the primitive undifferentiated state while remaining pluripotent. It has exciting potential in human developmental biology, drug discovery, and transplantation medicine. But there are insufficient HES cell lines for further study. Methods Three oocyte donors were studied, and 3 in vitro fertilization (IVF) cycles were carried out to get blastocysts for the establishment of HES cell line. Isolated from blastocysts immunosurgically, inner cell mass (ICM) was cultured and propagated on mouse embryonic fibroblasts (MEFs). Once established, morphology, cell surface markers, karyotype and differentiating ability of the cell line were thoroughly analyzed. Results Four ICMs from 7 blastocysts were cultured on MEFs. After culture, one cell line ( criES-1 ) was established and met the criteria for defining human pluripotent stem cells including a series of markers used to identify pluripotent stem cells, morphological similarity to primate embryonic stem cells and HES reported else where. Normal and stable karyotype maintained over 60 passages, and demonstrated ability to differentiate into a wide variety of cell types. Conclusions HES cell lines can be established from gamete donors at a relatively highly efficient rate. The establishment will exert a widesoread impact on biomedical research.     

非小细胞肺癌鸡胚绒毛膜移植瘤模型的建立

目的建立非小细胞肺癌的鸡胚绒毛膜(CAM)模型。方法以梯度递增的肺癌细胞株A549接种鸡胚,并对生长出的移植瘤行原位解剖学显微镜摄影,体积测量,切片显微观察。结果细胞数为(0.6~2.5)×106的A549细胞株可在CAM上形成移植瘤,该移植瘤与人体肺癌的形态学一致。结论成功建立非小细胞肺癌鸡胚绒毛膜移植瘤模型,为非小细胞肺癌的研究打开一个新的技术平台。