白细胞介素—6在心脏成纤维细胞增殖及心肌纤维化过程中的作用

目的：观察白细胞介素—6(interleukin—6，IL—6)对心脏成纤维细胞(cardiac fibroblasts，CFs)增殖及p27蛋白表达的影响，探讨IL—6促CFs增殖的细胞分子生物学机制。方法：以培养的新生SD大鼠CFs为实验模型，采用四氮唑盐比色法检测细胞增殖，流式细胞分析仪技术测定细胞周期及p27蛋白表达的阳性率。结果：①1&;#215;10^7U／L IL—6作用48h，四氮唑盐比色法测定的CFs的A值为0．38&;#177;0．01，明显高于基础状态组(0．32&;#177;0．01)，差异有显著性意义(t=-15．983，P=0．000)。②IL—6作用组CFs的S期细胞百分率(13．00&;#177;3．53)％和细胞增殖指数(PI)(29．43&;#177;1.94)％均高于基础状态组[(7．45&;#177;0．97)％和(26．03&;#177;0．96)％]，并有差异有显著性意义(t=-3．036，P=0．023；t=-3．142，P=0．020)，而G0／G1期细胞百分率(70．58&;#177;1．94)％低于基础状态组(73．98&;#177;0．98)％，差异显著(t=3．142，P=0．020)。③IL—6作用组CFs的p27蛋白表达阳性率为(72．60&;#177;2．47)％，明显低于基础状态组(78．45&;#177;1．91)％，差异有显著性意义(t=3．753，P=0．009)。结论：IL—6能够诱导CFs增殖，其机制可能与p27蛋白表达水平下调有关。     

血管紧张素Ⅱ对心肌成纤维细胞增殖及p21,p27表达的影响

目的:探讨血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)对大鼠心肌成纤维细胞(cardiacfibroblasts,CFs)增殖的作用及其分子机制。方法:差速贴壁法体外培养新生Wistar大鼠的CFs,随机分为3组:对照组,AngⅡ处理组,洛沙坦(losartan)+AngⅡ处理组。作用24h后,收集细胞,倒置显微镜下观察活细胞形态;四氮唑盐(MTT)比色法检测细胞的增殖;流式细胞仪分析细胞周期与p21和p27的蛋白表达。结果:AngⅡ可显著提高CFsMTT-OD值,使S期细胞比率增加,G1期细胞比率下降,并降低细胞p27蛋白的表达,而对p21的蛋白表达无影响。AT1受体拮抗剂Losartan可完全阻断AngⅡ的作用。结论:AngⅡ通过AT1受体促进CFs增殖的机制可能与降低细胞p27蛋白的表达有关。     

LINC01224靶向miR-125b对口腔鳞癌细胞增殖及凋亡的影响

摘要：目的?探讨长链非编码RNA(LncRNA)LINC01224是否通过调控微小RNA-125b(miR-125b)的表达，从而影响口腔鳞癌(OSCC)细胞增殖及凋亡。方法?采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测OSCC患者癌组织及癌旁组织中LINC01224的表达水平；体外培养OSCC细胞系CAL-27，将si-NC、si-LINC01224、si-LINC01224与anti-miR-NC、si-LINC01224与anti-miR-125b转染至CAL-27细胞；甲基噻唑基四唑(MTT)试验检测细胞增殖能力；流式细胞术检测细胞周期与细胞凋亡率；双荧光素酶报告试验验证LINC01224与miR-125b的靶向结合关系；western blot检测半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶3前体蛋白(pro-caspase-3)、增殖标记蛋白细胞增殖核抗原67(Ki67)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(clv-caspase-3)、P21蛋白的表达水平。结果?与癌旁组织相比，OSCC患者癌组织中LINC01224的表达水平(1.00±0.05 vs 2.43±0.17)显著升高(t=94.345，P<0.05)，miR-125b的表达水平(0.98±0.06 vs 0.22±0.02)显著降低(t=14.838，P<0.05)；与si-NC组比较，si-LINC01224组细胞存活率[(100.02±6.73)% vs (47.94±4.69)%]显著降低(t=19.047，P<0.05)，G1期细胞比例[(31.03±3.01)% vs (42.29±4.12)%]显著增加(t=6.615，P<0.05)，S期细胞比例[(34.18±3.38)% vs (23.49±2.57)%]显著减少(t=7.553，P<0.05)，细胞凋亡率[(8.10±0.92)% vs (24.17±1.74)%]显著升高(t=24.494，P<0.05)，Ki67、pro-caspase-3蛋白水平显著降低(P<0.05)，P21、clv-caspase-3蛋白水平显著升高(P<0.05)；双荧光素酶报告试验证实LINC01224与miR-125b靶向结合；与si-LINC01224+anti-miR-NC组比较，si-LINC01224+anti-miR-125b组细胞存活率[(48.03±4.57)% vs (90.01±5.59)%]显著升高(t=17.442，P<0.05)，细胞凋亡率[(24.11±1.58)% vs (12.81±1.12)%]显著降低(t=17.504，P<0.05)，G1期细胞比例[(42.27±4.10)% vs (35.09±3.18)%]显著减少(t=4.151，P<0.05)，S期细胞比例[(23.53±2.54)% vs (30.03±2.96)%]显著增加(t=4.999，P<0.05)，pro-caspase-3、Ki67蛋白水平显著升高(P<0.05)，clv-caspase-3、P21蛋白水平显著降低(P<0.05)。结论?LINC01224能够靶向调控miR-125b的表达，从而促进OSCC细胞增殖及抑制细胞凋亡。     

鳖甲和三七对心肌成纤维细胞增殖影响的实验研究

目的:观察以鳖甲和三七为主要成分的复方鳖甲软肝片和氯沙坦对心肌成纤维细胞(cardiacfibroblasts,CFs)增殖的影响。方法:取生后1～3d的雄性SD仔鼠心脏原代培养心肌成纤维细胞、传代,将第3代心肌成纤维细随机分为3组:空白对照组、氯沙坦组、复方鳖甲软肝片组。并根据血清药理学理论,分别以蒸馏水、10mg/kg氯沙坦、0.7g/kg复方鳖甲软肝片喂养新西兰兔获得血清,制备相应培养液干预培养的心肌成纤维细胞。结果:鳖甲片和氯沙坦能明显抑制CFs增殖(空白对照组、氯沙坦组、鳖甲片组的A值分别为0.387±0.0539,0.181±0.044,0.212±0.038,F=5.805,P=0.016),并将细胞周期阻抑在G1期犤(74.32±1.76)%,(81.02±4.15)%,(81.62±3.83)%,F=7.041,P=0.009犦,处于分裂期(S期)的细胞比例减少犤(18.36±2.15)%,(13.18±3.26)%,(11.60±2.23)%,F=9.290,P=0.004犦,对CFs增殖和细胞周期影响的作用强度与氯沙坦相近(A值:95%CI:-0.180～1.118,P=0.662;G1和S期:95%CI:-5.306～4.106,P=0.768;95%CI:-1.995～5.515,P=0.355)。结论:复方鳖甲软肝片具有防治心肌纤维化的作用。     

运动对胰岛素抵抗大鼠肝脏蛋白酪氨酸磷酸酶1 B表达的影响

目的在高脂饮食诱导胰岛素抵抗的基础上,观察运动对大鼠肝脏中蛋白酪氨酸磷酸酶1B(protein tyrosine phosphatase 1B,PTP1B)表达的影响.方法选取雄性Wistar大鼠30只,随机分为对照组10只,给予基础饲料;模型组20只,给予高脂饲料.模型组大鼠给予高脂喂养5周后,随机分为2亚组胰岛素抵抗组继续高脂饮食;运动组继续高脂饮食+运动.干预6周后,用蛋白印迹法检测各组大鼠肝组织中PTP1B蛋白含量.结果①高脂饮食饲养5周后,大鼠的空腹血糖轻度升高(t=2.163,P＜0.05),胰岛素、三酰甘油、胆固醇及胰岛素抵抗指数(homeostasis model assessment-insulin resistance index,HOMA-IR)明显升高(t≥5.307,P＜0.001),胰岛素敏感指数(insulin sensitive index,ISI)显著下降(t=3.097,P＜0.01),出现了胰岛素抵抗.②运动6周后,运动组大鼠的空腹血糖、三酰甘油、胆固醇、附睾脂肪垫及HOMA-IR下降(t≥3.365,P＜0.01),ISI显著升高(t=3.097,P＜0.01).③在胰岛素抵抗状态时,大鼠肝组织中PTP1B蛋白表达(A值)显著升高(0.62±0.08),与对照组(0.31±0.07)比较,增加了98.3%(t=9.335,P＜0.001);游泳干预后,PTP1B的表达明显降低(0.42±0.12),与胰岛素抵抗组(0.62±0.08)比较,减少了32.2%(t=4.263,P＜0.001).结论运动改善组织胰岛素抵抗,可能与降低肝脏组织中PTP1B蛋白表达有关.     

LXR异常激活上调p27蛋白致胰岛β细胞周期阻滞

目的探讨肝X受体(liver X receptors,LXR)激动剂对小鼠胰岛β细胞系MIN6的作用。方法 LXR激动剂T0901317作用于MIN6细胞后,CCK-8法检测细胞活力;流式细胞仪检测细胞周期变化;实时定量RT-PCR法检测S期激酶相关蛋白2(Skp2)和p27 mRNA的表达水平;western blot检测Skp2和p27蛋白的表达情况。结果与control组相比,1、5和10μmol/L药物处理后的细胞存活率分别为(98.54±0.94)%、(87.03±0.93)%和(75.57±1.85)%,各组间差异有统计学意义(F=301.90,P0.01)。与control组G1期(35.93±2.25)%和S期(52.87±1.19)%相比,1、5和10μmol/L药物处理组G1期细胞比例分别为(38.45±0.91)%、(45.46±1.34)%和(53.28±1.14)%,差异有统计学意义(F=80.83,P0.01)。S期细胞比例分别为(48.65±0.85)%、(36.31±1.37)%和(31.45±1.22)%,差异有统计学意义(F=221.30,P0.01)。10μmol/L T0901317处理组p27蛋白表达水平(2.84±0.14)明显高于control组(2.28±0.10),差异有统计学意义(t=4.54,P0.05)。但两组间p27 mRNA水平差异无统计学意义(t=0.28,P0.05)。10μmol/L T0901317下调Skp2 mRNA(0.52±0.02,t=29.22,P0.01)和蛋白质水平(相对灰度值为0.98±0.12,control组为1.89±0.01,t=10.98,P0.01)。以对照组(100%)为参照,转染组、药物处理组和干扰组的细胞存活率分别为(100.97±1.08)%、(75.03±1.83)%和(86.67±2.45)%,与对照组比较,转染组间差异无统计学意义(t=1.542,P0.05),药物处理组细胞活力下降(t=23.58,P0.01);药物处理组和干扰组间差异亦有统计学意义(t=7.77,P0.01)。结论 LXR异常激活可导致胰岛β细胞增殖抑制,p27蛋白表达量增加,其机制可能为降解调控p27蛋白的Skp2 mRNA和蛋白质表达水平下降。     

加速度致大鼠脑缺血急性期血浆一氧化氮、一氧化氮合酶和白细胞介素6的含量变化

目的:观察实施加速度作用后造成大鼠脑缺血,在急性期血浆中的一氧化氮、一氧化氮合酶(NOS)和白细胞介素-6(IL-6)的含量变化,探讨加速度对机体引起的继发性脑损伤程度及机制。方法:30只雄性健康wistar大鼠,随机分为3组,分别施加+1Gz(正加速度)、高+Gz和正、负加速度(±Gz)的交替作用,并把被施加+1Gz加速度的大鼠作为对照组。于加速度作用后即刻麻醉,腹主动脉采血。分别测定各组大鼠血浆中一氧化氮、NOS和IL-6的含量。结果:一氧化氮含量:±Gz交替组犤(60.4±6.6)μmol/L犦与高+Gz组犤(50.3±2.2)μmol/L犦比较,t=16.5250;高+Gz组与对照组犤(35.9±3.3)μmol/L〗比较,t=27.9397;±Gz交替组与对照组比较,t=50.0324,P均<0.01。NOS活性:±Gz交替组犤(890±73)μmol/(s·L)犦与高+Gz组犤(791±60)μmol/(s·L)犦比较,t=3.3147;高+Gz组与对照组犤(332±27)μmol/(s·L)犦比较,t=23.4389;±Gz组与对照组比较,t=25.9615,P均<0.01。IL-6含量:±Gz交替组犤(132±18)ng/L犦与高+Gz组犤(106±15)ng/L犦比较,t=19.6748;高+Gz组与对照组犤(71±10)ng/L比较,t=24.9296;±Gz组与对照组比较,t=48.1645,P均<0.01。结论:正、负加速度交替和单纯高正加速度作用均可使血浆中的一氧化氮、NOS和IL-6的含量增加明显,且正、负加速度     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞中Tim-1表达增高及其意义

目的 检测原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者外周血Tim-1,IFN-γ和IL-4的表达水平,分析其相关性,初步探讨Tim-1在PBC诊治中的临床意义。方法 收集2013年6月～2015年11月来长海医院就诊的32例PBC患者和32例同期就诊的健康成人的外周血,分离外周血单个核细胞(PBMC),反转录酶-聚合酶链锁反应(RT-PCR)法检测PBMC中Tim-1 mRNA,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血浆中Tim-1蛋白表达量,对Tim-1和IFN-γ,IL-4之间的关系进行Pearson相关性分析。结果患者组和对照组Tim-1 mRNA分别为0.63±0.40和0.36±0.32,差异具有统计学意义(t=3.005,P=0.003,P<0.01)。患者组与对照组Tim-1蛋白表达水平分别为62.72±38.60和35.66±30.55 pg/ml(t=3.11,P=0.002 8),IFN-γ表达水平分别为200.81±18.06和79.23±20.02 pg/ml(t=25.51,P<0.000 1),IL-4表达水平分别为99.22±14.67和30.18±20.56 pg/ml,差异均具有统计学意义(t=15.46,P<0.000 1)。Pearson相关分析结果提示Tim-1与IFN-γ呈负相关(r=-0.552,P=0.001 1),与IL-4呈正相关(r=0.652,P<0.000 1)。结论Tim-1可能参与了PBC的发病机制,是该病潜在的标志物和治疗靶点。     

银屑病患者血清中IL-10与IL-21水平监测的临床应用

目的 通过检测银屑病患者血清中IL-10与IL-21表达水平,探讨其在银屑病病情进展程度及治疗效果中的意义。方法 按照赵辨主编的临床皮肤病学诊断标准,选择2014年3月～9月期间皮肤科就诊的门诊和住院寻常型银屑病患者65例,其中进行期25例(A组),稳定期20例(B组),恢复期20例(C组),并选择正常对照组25例(D组)。ELISA法检测各组血清中IL-10与IL-21表达水平,并对各组患者进行银屑病皮损面积和严重程度(PASI)评分。结果 A与B两组血清中IL-21表达水平分别为127.59±16.09 pg/ml和105.74±21.08 pg/ml,均明显高于D组85.46±14.25 pg/ml,差异有统计学意义(t值分别为5.174,4.863,P值均<0.01),而两组IL-10表达水平分别为10.64±3.23 pg/ml和12.27±2.18 pg/ml,均低于D组20.29±2.51 pg/ml,差异有统计学意义(t值分别为2.031,2.027,P值均<0.05)。C组血清中IL-21表达水平94.03±8.90 pg/ml高于D组,差异有统计学意义(t=2.033,P<0.05)。A组血清中IL-21表达水平高于C组,差异有统计学意义(t=2.352,P<0.05),IL-10表达水平低于C组19.69±1.54 pg/ml,差异有统计学意义(t=2.071,P<0.05)。银屑病患者血清中IL-21表达水平与PASI评分值正相关(r=0.508,P=0.027),而血清中IL-10表达水平与PASI评分为负相关(r=-0.413,P=0.039)。结论 银屑病的病情进展与患者血清中IL-21升高或IL-10降低有关,检测细胞因子IL-21和IL-10水平有助于判断其病情严重程度及疗效评估。     

高血压心肌纤维化的发病机制:成纤维细胞在血管紧张素Ⅱ刺激下单核细胞趋化蛋白-1的表达状况

目的:研究成年大鼠心脏成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)在血管紧张素Ⅱ刺激下单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotaxia protein-1,MCP-1)表达情况,探讨高血压合并心脏损害的可能机制。 方法:成年大鼠CFs体外培养,在不同浓度血管紧张素Ⅱ不同作用时间刺激下,应用免疫蛋白印迹法和ELISA法分别测定细胞中和培养上清中MCP-1的含量。 结果:①在细胞内和培养上清中均有MCP-1表达。②随着血管紧张素Ⅱ、刺激浓度的增加和刺激时间的延长,细胞内和上清中MCP-1的表达量也逐渐增加。在1×10~(-11),1×10~(-9),1×10~(-8),1×10~(-7),1×10~(-6)mol/L的血管紧张素Ⅱ作用下,上清中MCP-1的含量分别为(1.60±0.21),(3.18±0.15),(4.70±0.22),(9.18±0.52),(8.75±0.42)μg/L,与对照组(1.13±0.09)μg/L比较,除1×10~(-11)mol/L组外,差异均有显著性意义(t=26.21～39.67,P<均0.05)。③在1×10~(-7)mol/L的血管紧张素Ⅱ作用下,3,6,12和24h MCP-1的表达量分别为(2.13±0.31),(3.25±0.20),(5.28±0.50)和(9.18±0.52)μg/L,与空白对照组(1.13±0.09)μg/L比较差异均有显著性意义(t=6.93～34.11,P均<0.05)。 结论:成年大鼠CFs的MCP-1的表达对血管紧张素Ⅱ的刺激有浓度和时间依赖性。CFs的MCP-1的表达可能参与高血压时     

External noninvasive cardiac pacing in out-of-hospital cardiac arrest

External noninvasive cardiac pacing was applied outside the hospital to 19 patients who had experienced cardiopulmonary arrest and 1 patient with life-threatening bradycardia. Seven patients developed electrocardiographic evidence of pacemaker capture, although only 2 had palpable pulses. The patient with bradycardia was successfully paced. This study demonstrates the feasibility of cardiac pacing in out-of-hospital cardiac arrest but confirms the poor prognosis of asystolic cardiac arrest even with the application of pacing.     

Utility of cardiac troponin measurement after cardiac surgery

Postoperative cardiac failure due to myocardial necrosis remains a major complication in cardiac surgical procedures and its diagnosis is still difficult. In fact, cardiac enzymes, electrocardiogram and echographic signs are often misleading. The prognostic valve of troponin I after coronary artery bypass or conventional value surgery has been evaluated in 500 adult patients. Postoperative troponin I concentrations after cardiac surgery represent an independent variable associated with mortality (in-hospital death) and morbidity (low cardiac output and acute renal failure).     

Spontaneous gasping generates cardiac output during cardiac arrest

OBJECTIVES: To measure stroke volumes coincident with spontaneous gasping during untreated ventricular fibrillation and to evaluate the effects of gasping. DESIGN: Prospective study in laboratory animals. SETTING: University-affiliated research institute. SUBJECTS: Male Yorkshire-X domestic pigs. INTERVENTIONS: Pigs were anesthetized (ketamine, 20 mg/kg intramuscularly and sodium pentobarbital, 30 mg/kg intravenously), intubated, and mechanically ventilated. Ventricular fibrillation was electrically induced and untreated for 7 mins. The right femoral artery and vein were cannulated. A 5.5/7.5-MHz biplanar transesophageal echocardiography transducer was advanced into the esophagus. MEASUREMENTS AND MAIN RESULTS: Stroke volumes were measured as the product of the transaortic blood flow velocity and transesophageal echocardiographic measurements of valve area. In addition, left ventricular volumes were echocardiographically estimated at peak inspiration and at peak expiration of each gasp by transesophageal methods. The stroke volume produced by gasping averaged 23 +/- 6 mL, which represented approximately 60% of a precardiac arrest stroke volume (38 +/- 8 mL, p <.001). Increases in end-tidal carbon dioxide tension coincident with each gasp were consistent with comparable increases in pulmonary blood flow and therefore stroke volumes. Both were associated with increases in aortic pressure from 20 +/- 3 to 33 +/- 8 mm Hg (p <.001) and coronary perfusion pressure from 4 +/- 3 to 13 +/- 7 mm Hg (p <.001). CONCLUSIONS: Our studies confirm that preterminal gasping during ventricular fibrillation increases both ventilation and forward blood flow.     

心脏介入术中并发急性心脏压塞的抢救与护理

目的研究心脏介入术(CIO)中并发急性心脏压塞(ACT)的抢救与护理。方法将64例患者实施CIO时并发ACT,以数字法随机分成观察组及对照组各32例,2组均实施ACT抢救措施,对照组在此基础上另实施常规护理,而观察组则实施综合护理。对比2组ACT发现率及抢救成功率,2组护理满意情况以及HDL评分情况。结果观察组ACT发现率及抢救成功率均显著高于对照组,差异均有统计学意义(P0.05);观察组的护理满意情况显著优于对照组,差异有统计学意义(P0.05);观察组护理后的焦虑、抑郁评分及总分均显著低于护理前及对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论对CIO并发ACT患者,积极予以抢救措施及综合护理,可明显提升抢救成功率及护理满意率,降低HDL评分,减少医患纠纷。