冬凌草甲素对Raji细胞的增殖抑制作用及其机制

目的探讨冬凌草甲素对B淋巴细胞白血病细胞株Raji细胞的增殖抑制作用及其机制。方法以不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的Raji细胞，MTT法检测细胞生长抑制率，应用流式细胞仪、Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡，TRAP-PCR-ELISA法检测细胞凋亡前后的端粒酶活性。结果冬凌草甲素可显著降低Raji细胞的端粒酶活性，抑制细胞的生长，诱导细胞发生凋亡，并呈现出明显的剂量-效应与时间-效应关系。结论冬凌草甲素对B淋巴细胞白血病具有明显的体外抗白血病作用，降低细胞端粒酶活性，诱导细胞发生凋亡，可能是其重要作用机制。     

冬凌草甲素对膀胱癌T24细胞生长抑制作用的研究

目的探讨冬凌草甲素对膀胱癌T24细胞的生长抑制作用及机制。方法以不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的T24细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,并应用Hoechst33258荧光染色法以流式细胞仪观察细胞凋亡情况。结果冬凌草甲素可显著抑制T24细胞的生长,诱导细胞凋亡,并呈现出明显的剂量-效应与时间-效应关系。结论冬凌草甲素对膀胱癌具有明显的体外抗肿瘤作用,诱导细胞凋亡可能是其重要作用机制。     

冬凌草甲素对急性白血病原代细胞的增殖抑制作用

目的研究冬凌草甲素对急性白血病原代细胞的增殖抑制作用。方法以人急性早幼粒细胞白血病(APL)患者的骨髓原代细胞为研究对象,以不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的白血病细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,应用流式细胞仪、台盼蓝染色及Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡。结果冬凌草甲素体外可明显地抑制白血病原代细胞的增殖,并能诱导细胞发生凋亡,而且呈现出明显的量-效与时-效关系。结论冬凌草甲素能有效地抑制APL细胞的生长及诱导细胞发生凋亡,是一种潜在的抗白血病药物。     

冬凌草甲素对PC3细胞增殖及神经内分泌分化抑制作用研究

目的 研究冬凌草甲素(Oridonin,Ori)对前列腺癌细胞增殖及神经内分泌分化的影响.方法 用Ori处理PC3细胞,利用CCK8检测Ori的半抑制浓度IC50及对PC3细胞增殖的时间依赖性;然后用Ori和NF-κB抑制剂咖啡酸苯乙酯(CAPE)处理PC3细胞,通过Western blot检测神经内分泌分化标志物(NSE,CgA)的蛋白表达情况.结果 Ori作用PC3细胞48 h时IC50约为15 μmol/L,且随浓度和时间的增加,抑制作用越显著.Western blot检测结果显示,Ori能显著抑制PC3细胞pp65、pp50和神经内分泌分化标志物NSE、CgA的表达.给予NF-κB抑制剂CAPE处理PC3细胞,抑制pp65表达时,能显著下调神经内分泌分化标志物NSE、CgA的表达.结论 Ori可以抑制PC3细胞增殖,并能通过抑制NF-κB信号通路抑制PC3细胞神经内分泌分化,为临床治疗前列腺神经内分泌癌提供了理论依据.     

冬凌草甲素对胰腺癌SW1900细胞凋亡的影响

目的 探讨冬凌草甲素对胰腺癌SW1900细胞凋亡的影响及其作用机制.方法 采用MTT法观察不同浓度冬凌草甲素对SW1900细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪检测冬凌草甲素作用于SW1900细胞后的凋亡情况;Western blot观察Bcl2-2和Bax表达变化.结果 冬凌草甲素明显抑制SW1900细胞的增殖,诱导SW1900细胞凋亡,具有明显的量-效与时-效关系.冬凌草甲素作用48 h后.凋亡过程中Bcl-2蛋白表达的降低和Bax蛋白上调.结论 冬凌草甲素对人胰腺癌Sw1900细胞具有生长抑制和诱导凋亡作用,同时抗凋亡蛋白Bcl2-2表达的降低和促凋亡蛋白Bax上调是冬凌草甲素体外诱导胰腺癌SW1900细胞发生凋亡的重要作用机制之一.     

冬凌草甲素对急性白血病HL-60细胞的增殖抑制作用及其作用机制

目的探讨冬凌草甲素对急性白血病HL-60细胞的增殖抑制作用及其作用机制。方法以不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的HL-60细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,应用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,瑞氏染色法观察细胞凋亡时的形态学变化。应用PCR-ELISA及RT-PCR法检测细胞凋亡前后端粒酶活性及端粒酶hTERTmRNA表达水平的变化。结果冬凌草甲素可显著的抑制HL-60细胞的生长,诱导细胞发生凋亡,并呈现出明显的量-效与时-效关系。冬凌草甲素作用48～60h后在瑞氏染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡特征,同时端粒酶hTERTmRNA的表达水平及端粒酶活性均明显降低。结论冬凌草甲素能抑制HL-60细胞的生长及诱导细胞发生凋亡;降低端粒酶hTERTmRNA的表达水平及端粒酶活性可能是其重要作用机制之一。     

冬凌草甲素对骨肉瘤细胞的凋亡诱导效应的研究

目的：考察冬凌草甲素是否能诱导MG-63细胞凋亡。方法：用不同浓度的冬凌草甲素作用于MG-63细胞,用Hochest33258染色鉴定MG-63细胞凋亡的形态学特征;用流式细胞仪分析MG-63早期凋亡细胞的百分率;用Caspase-8蛋白印迹分析证明MG-63细胞凋亡发生的分子特征。结果：凋亡细胞形态学鉴定、流式细胞仪检测均有力证明冬凌草甲素能以浓度依赖性方式诱导MG-63细胞凋亡;冬凌草甲素诱导MG-63细胞凋亡伴有Caspase-8蛋白表达上调和裂解激活。结论：冬凌草甲素能以浓度依赖性方式诱导MG-63细胞凋亡。     

冬凌草甲素对卵巢癌细胞紫杉醇耐药性的拮抗作用及其机制研究

目的 探讨冬凌草甲素体内外对卵巢癌细胞紫杉醇耐药性的拮抗作用及其机制。方法 通过大剂量冲击法,诱导制备耐紫杉醇的人卵巢癌HO-8910PM细胞株（HO-8910PM/PIX）,用不同浓度冬凌草甲素处理HO-8910PM/PIX细胞;或在冬凌草甲素作用HO-8910PM/PIX细胞前以NF-κB激活剂TPA进行预处理。给药后,细胞经DAPI染色,荧光显微镜下观察细胞形态变化;CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;Western blotting检测卵巢癌细胞中NF-κB蛋白的表达。建立裸鼠卵巢癌皮下移植瘤模型。接种后8周,观察冬凌草甲素对裸鼠皮下移植瘤生长的影响;免疫组织化学法检测肿瘤组织中NF-κB的阳性表达。结果 与对照组相比,冬凌草甲素呈浓度相关性抑制卵巢癌HO-8910PM/PIX细胞增殖,显著诱导细胞凋亡,而TPA可显著削弱冬凌草甲素诱导细胞凋亡的作用。与HO-8910PM细胞相比,NF-κB在HO-8910PM/PIX细胞中表达显著上调,冬凌草甲素可抑制HO-8910PM/PIX细胞中NF-κB的表达。冬凌草甲素可显著抑制裸鼠卵巢癌皮下移植瘤生长,明显减弱移植瘤组织中NF-κB的阳性表达。结论 冬凌草甲素体内外对卵巢癌细胞紫杉醇耐药性具有拮抗作用,该作用可能通过抑制NF-κB的表达而实现。     

冬凌草甲素对HL-60细胞凋亡及Survivin表达的影响

目的 探讨冬凌草甲素对人白血病细胞株 HL-60 细胞生长抑制作用及其机制.方法 收集经不同浓度冬凌草甲素干预的HL-60细胞,制成细胞涂片,光学显微镜下观察细胞形态.采用MTT比色法观察不同浓度冬凌草甲素对HL-60细胞增殖的抑制作用,通过凋亡试剂盒Annexin V-FITC标记,流式细胞仪检测细胞凋亡率,并以RT-PCR检测凋亡抑制基因 Survivin的表达.结果 冬凌草甲素在10～25 μmol/L范围内可抑制HL-60细胞的生长,且呈时间和浓度依赖性.并可诱导HL-60细胞发生凋亡,表现出特异性的凋亡形态学改变.流式细胞仪分析显示,冬凌草甲素处理后凋亡细胞比例增多,且随着药物浓度的增加而逐渐增加.RT-PCR检测结果显示, 20 μmol/L冬凌草甲素作用后,与对照组相比, HL-60细胞Survivin mRNA水平下降,且随时间延长表现得更为明显.结论 冬凌草甲素能抑制人白血病细胞株HL-60细胞的生长增殖,并可诱导其发生凋亡, 其作用机制可能与凋亡抑制基因Survivin的下调有关.     

冬凌草甲素对体外培养的前列腺癌PC-3细胞生长的影响

目的观察冬凌草甲素对前列腺癌PC-3细胞生长活性的影响,并对其可能机制进行探讨。方法 10、20、40、60μg/mL浓度冬凌草甲素分别作用于前列腺癌PC-3细胞12、24、36h（阳性对照药物为阿霉素）,应用MTT法检测各组OD值,并计算抑制率;流式细胞术检测60μg/mL冬凌草甲素作用于PC-3细胞36h的细胞周期分布情况。结果与空白对照组相比较,冬凌草甲素组与阳性对照组的抑制率都显著增加,呈时间与剂量依赖性（P〈0.05）。与阳性对照组相比较,冬凌草甲素组抑制率无明显变化（P〉0.05）。与空白对照组相比较,冬凌草甲素组与阳性对照组的细胞在G0/G1期显著减少,G2/M期明显增加（P〈0.05）。与阳性对照组相比较,冬凌草甲素组细胞在G0/G1期和G2/M期无明显变化（P〉0.05）。结论冬凌草甲素能显著抑制PC-3细胞活性,由于毒性更低,副作用更小,其在治疗前列腺癌方面具有较好的临床应用及开采价值。     

TP X2在甲状腺乳头状癌中的表达及其对甲状腺癌KAT细胞增殖能力的影响

目的 研究TPX2蛋白(Xklp2靶蛋白)在甲状腺乳头状癌组织中的表达水平及其与临床病理参数的相关性,并探讨其在甲状腺癌KAT细胞增殖过程中的作用.方法 收集我院2013—2016年期间60例新鲜冰冻的甲状腺乳头状癌组织及其配对癌旁组织,采用荧光定量PCR方法检测甲状腺癌组织和癌旁组织中TPX2 mRNA的表达水平,并分析其与临床病理参数的相关性;同时用siRNA干扰甲状腺癌KAT细胞株TPX2的表达,用MTT、流式分析和Western blot方法,分析KAT细胞的增殖能力、凋亡改变及相关凋亡蛋白(cleaved caspase 3、caspase 3)的变化.结果 相对于癌旁组织,甲状腺细胞癌组织中TPX2的表达量在mRNA水平显著高表达(39/60)(P<0.05);在KAT细胞上干扰TPX2表达后,可显著抑制细胞增殖能力,凋亡率增加,同时Cleaved caspase 3、Caspase 3相关凋亡蛋白表达上调(P<0.05).结论 甲状腺细胞癌组织中TPX2表达水平相对癌旁增高,且与甲状腺癌细胞增殖能力相关,可能是甲状腺癌干预的新靶点之一.     

冬凌草甲素对人鼻咽癌细胞株CNE-2细胞的放射增敏作用

目的:观察冬凌草甲素对人鼻咽癌细胞株CNE-2细胞的放射增敏作用,并探讨其可能机制。方法:用克隆形成实验计算药物的放射增敏比,流式细胞仪法分别检测、比较单纯药物组、单纯照射组、联合治疗组各组的细胞周期变化。结果:冬凌草甲素的放射增敏比为1.227,流式细胞仪法分析显示,联合治疗组的细胞周期变化以G2/M期阻滞为主(45.2%),与单纯药物组、单纯照射组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:冬凌草甲素对人鼻咽癌细胞株CNE-2细胞具有一定的放射增敏作用,其机制可能与改变细胞周期有关。     

miR-144对甲状腺乳头状癌细胞增殖及细胞周期的影响

目的：研究甲状腺乳头状癌（PTC）细胞株中miR-144的表达水平,探讨miR-144不同表达水平对甲状腺癌细胞增殖能力及细胞周期的影响。方法：通过qPCR检测人PTC细胞K1、TPC-1和人甲状腺细胞Nthy-ori 3-1中miR-144的表达水平。K1细胞分别转染miR-144 mimics、miR-144 inhibitor及阴性对照（NC）。应用MTT增殖实验、克隆形成实验和流式细胞术分别检测miR-144不同表达水平对K1细胞生物学功能的影响。Western blot检测细胞周期蛋白Cyclin D1的表达情况。结果：PTC细胞中miR-144相对表达量与正常甲状腺细胞相比显著降低（P＜0.05）,其中K1细胞中miR-144的表达量最低。在K1细胞株中过表达miR-144后,细胞的增殖能力、单克隆形成能力显著下降,并且Cyclin D1表达水平降低,细胞被阻滞在G0/G1期（P＜0.05）。而miR-144表达下调则得到相反的结果。结论：miR-144在PTC细胞中低表达。通过抑制PTC细胞增殖、阻滞细胞周期,miR-144可能在PTC的发生发展中扮演抑癌基因的角色。     

降糖药二甲双胍对甲状腺未分化癌细胞增殖及凋亡的作用

目的:研究二甲双胍对甲状腺未分化癌细胞增殖及凋亡的作用,初步探讨其作用机制?方法:以不同浓度二甲双胍作用于未分化癌SW1736细胞,MTT法检测其增殖,流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况?结果:二甲双胍可显著抑制SW1736细胞增殖,其抑制作用呈剂量依赖性,并随着作用时间的延长抑制作用逐渐增强,于72 h达到最大抑制效果?流式细胞检测结果显示二甲双胍可阻滞未分化癌细胞周期至G0/G1期;并可促进肿瘤细胞凋亡,随着二甲双胍作用浓度的递增,肿瘤细胞的凋亡率逐渐增加,20 mmol/L二甲双胍作用48 h后,可使SW1736细胞凋亡率从8.3%增加至13.3%,与对照组相比,有显著统计学差异?结论:二甲双胍可抑制甲状腺未分化癌细胞的增殖活性,阻滞细胞周期进程,诱导细胞凋亡,为甲状腺未分化癌的治疗研究提供了新的方向?     

白藜芦醇对人甲状腺乳头状癌IHH4细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察白藜芦醇对人甲状腺乳头状癌细胞(IHH4)增殖和凋亡的影响,并初步探讨其可能的机制?方法:采用CCK-8法检测白藜芦醇对IHH4细胞增殖的影响;倒置显微镜?透射电镜?DAPI染色观察细胞的形态学变化;细胞免疫荧光和Western blot法检测细胞内cleaved caspase-3蛋白的表达;应用流式细胞技术(flow cytometry,FCM)观察细胞周期和凋亡的改变?结果:①白藜芦醇可以呈时间和浓度依赖性抑制IHH4细胞增殖;②与正常对照相比,加入白藜芦醇后IHH4细胞皱缩?变圆?脱落,细胞质中出现大小不等的空泡,胞质内容物增多;透射电镜下细胞核的染色质高度凝聚?边缘化;DAPI染色后荧光显微镜下观察,细胞核呈致密浓染;③细胞免疫荧光和Western blot显示,随着白藜芦醇作用浓度和时间的增加cleaved caspase-3蛋白的表达明显增加;④流式Annexin V-FITC/PI双染检测显示白藜芦醇呈浓度依赖性诱导IHH4细胞凋亡?白藜芦醇可引起细胞S期阻滞?结论:白藜芦醇可抑制人甲状腺乳头状癌IHH4细胞增殖,诱导IHH4细胞凋亡?白藜芦醇阻滞细胞于S期,可能是抑制IHH4细胞增殖?促使其凋亡的原因之一?     

紫杉醇对人甲状腺未分化癌细胞体外作用的实验研究

目的观察紫杉醇对人甲状腺未分化癌DRO细胞增殖、细胞凋亡以及血管内皮生长因子(VEGF)、bcl-2和bax基因表达的影响。方法MTT法检测紫杉醇对DRO细胞增殖的抑制效应;流式细胞术检测经紫杉醇6.25μg/L作用24、487、2 h后细胞周期和凋亡率的变化;RT-PCR方法观察经紫杉醇6.25μg/L作用48 h后细胞内VEGF、bcl-2和bax基因的表达情况。结果紫杉醇能够抑制DRO细胞生长,72 h的IC50为10μg/L;可将细胞阻滞于G2/M期并诱导其凋亡,6.25μg/L紫杉醇作用48 h后凋亡达高峰,凋亡率为32.76%±1.54%;细胞内VEGF的表达低于对照组;凋亡抑制基因bcl-2在细胞凋亡过程中表达没有显著性变化,而促凋亡基因bax呈高表达。结论紫杉醇明显抑制DRO细胞生长,并诱导细胞凋亡,且能下调VEGF的表达,bax基因在紫杉醇诱导的DRO细胞凋亡中可能起着重要的调控作用。     

喷他脒对人宫颈癌细胞株 Hela 细胞增殖和诱导凋亡的作用

目的:研究抗肺孢子虫类药物喷他脒对人宫颈癌Hela细胞增殖的抑制作用和凋亡的诱导作用,探讨其抗癌机制。方法:应用MTT法检测不同浓度喷他脒对Hela细胞的生长抑制作用,光镜观察其形态学变化,流式细胞仪及流式细胞仪间接免疫荧光技术检测其细胞周期、细胞凋亡率及细胞内bcl-2蛋白的表达。结果:Hela细胞经不同浓度(分别为0.10μmol/L、1.00μmol/L、10.00μmol/L、100.00μmol/L)的喷他脒处理后,细胞生长明显受到抑制,且这种抑制作用呈时间及浓度依赖性,10.00μmol/L、100.00μmol/L喷他脒作用72 h后抑制率分别达到89.32%和97.26%。倒置显微镜和光学显微镜可观察到细胞增殖情况的形态学改变。流式细胞仪分析,实验组G0/G1期上升,S期下降,凋亡率上升,细胞内bcl-2蛋白表达率明显降低,并呈剂量依赖性。结论:喷他脒对Hela细胞生长的抑制作用呈明显的时间及浓度依赖性,并诱导其凋亡,同时可使抗凋亡基因bcl-2蛋白的表达下降。     

microRNA-21对人甲状腺乳头状癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨microRNA-21(miR-21)在人甲状腺乳头状癌中的表达及其对人甲状腺乳头状癌K1细胞增殖和凋亡能力的影响?方法:通过qRT-PCR检测12对甲状腺乳头状癌组织(PTC)与癌旁正常组织中miR-21的表达差异;将miR-21抑制试剂(Anti-miR-21)?过表达试剂(miR-21 mimic)分别转染入K1细胞,并各自设立阴性对照组,运用qRT-PCR验证K1细胞中miR-21的表达;MTT实验检测miR-21对K1细胞增殖能力的影响;流式细胞术检测转染后K1细胞凋亡的变化,Western blot检测细胞凋亡增殖相关蛋白的表达情况?结果:miR-21在PTC组织中的表达明显高于癌旁正常甲状腺组织(P < 0.05);与阴性对照组相比,瞬时转染Anti-miR-21的K1细胞miR-21的表达明显减弱(P < 0.01);MTT实验结果显示抑制miR-21表达后,K1细胞的增殖能力明显下降(P < 0.05);流式细胞仪检测显示转染Anti-miR-21后的K1细胞凋亡明显增加,凋亡率为19.5%,阴性对照组的凋亡率为9.4%;Western blot结果显示转染Anti-miR-21组K1细胞Bcl-2表达降低,Bax表达升高?转染miR-21mimic的K1细胞增殖和凋亡无明显改动?结论:miR-21在人甲状腺乳头状癌中呈高表达,抑制miR-21的表达能显著降低K1细胞的增殖能力,增加K1细胞凋亡率?     

奥沙利铂抗人结肠癌细胞株HT29增殖及其机制的研究

目的 观察抗肿瘤药物奥沙利铂对人结肠癌细胞株HT29体外增殖的影响,初步探讨其作用机制.方法 采用人结肠癌细胞株HT29作为研究对象,MTT法检测不同浓度和作用时间的奥沙利铂对细胞增殖的抑制作用;透射电镜观察细胞形态和超微结构的改变;流式细胞仪分析细胞周期的分布及凋亡的情况;免疫细胞化学法检测细胞周期蛋白及凋亡相关基因蛋白的表达.结果 奥沙利铂对HT29细胞的增殖有抑制作用而且呈剂量和时间依赖性.奥沙利铂作用72 h后,电镜可见凋亡细胞及凋亡小体;流式细胞仪检测发现细胞阻滞于G2/M期,G0/G1、S期细胞减少及出现凋亡峰;免疫细胞化学显示Bax和Fas表达增强,CyclinB1、Bcl-2、PCNA表达减弱.结论 奥沙利铂对HT29结肠癌细胞的增殖有抑制作用,其作用机制与细胞周期阻滞及诱导细胞凋亡有关.     

雷公藤内酯醇对皮肤鳞状细胞癌A431细胞株增殖与凋亡的影响

目的:探讨雷公藤内酯醇(triptolide,TP)对体外培养的人皮肤鳞状细胞癌A431细胞株增殖与凋亡的影响.方法:以体外培养的人皮肤鳞状细胞癌A431细胞株为研究对象,MTT比色法测定TP对A431细胞株增殖活性的影响,光镜观察细胞形态学的改变,流式细胞仪检测TP作用于A431细胞株后细胞周期的分布及凋亡率的变化.结果:随着TP剂量的增加及作用时间的延长,TP对A431细胞株增殖活性的抑制作用增强,TP不但能够引起细胞形态的改变(漂浮细胞及核固缩现象增多),而且能够诱导A431细胞株凋亡,改变细胞周期的分布,与对照组相比G0/G1期细胞比例增多(P<0.05),S期细胞比例减少(P<0.05).结论:TP通过诱导A431细胞凋亡并抑制其增殖发挥抗肿瘤作用.