过敏性哮喘患者外周血Th17细胞及IL-17水平的变化

目的:探讨Th17细胞及其细胞因子IL-17水平在过敏性哮喘患者外周血中的变化及意义。方法:通过测定屋尘螨特异性IgE(sIgE)而选取19例轻度、16例中重度过敏性哮喘患者作为研究对象,并行肺功能及哮喘控制问卷(ACQ)调查,18名正常人作为对照。采用流式细胞术检测外周血Th17细胞的百分率,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆以及重组屋尘螨抗原蛋白1(rDerp1)刺激48h后外周血单个核细胞(PBMC)上清液中的IL-17水平。结果:中重度过敏性哮喘患者外周血Th17细胞百分率、血浆以及rDerp1刺激后PBMC上清液中的IL-17水平高于轻度哮喘患者(P值分别为<0.01、<0.01、<0.05)及正常对照组(P值分别为<0.01、<0.01、<0.05)。哮喘患者外周血中Th17细胞百分率、血浆IL-17水平与第1秒用力呼气容积(FEV1)占预计值百分率(%)呈负相关,与ACQ平均分呈正相关(P值均<0.01)。结论:Th17细胞应答增强可能促进哮喘加重,并影响其症状控制。     

miR-99a对类风湿性关节炎及TH17/Treg细胞的影响

目的探讨类风湿性关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMC)中miR-99a的表达与辅助性T细胞17(T helper cell 17,T_H17)、调节性T细胞(regulatory cells, Treg)比率失衡的关系。方法收集于我院就诊的RA患者80例,分为活动期RA组(42例)和稳定期RA组(38例),以体检健康者42例作为健康人对照组。流式细胞术测定各组外周血PBMC中T_H17、Treg细胞数;ELISA法检测各组血清IL-17、IL-6、TFN-α、IFN-γ、IL-4和IL-10的表达水平;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分别测定T_H17和Treg细胞特异性转录因子RORγt和FoxP3 mRNA以及RA患者PBMC中miR-99a的表达水平;western blot检测各组RORγt和FoxP3蛋白的表达水平。结果与健康人对照组相比,活动期和稳定期RA患者的T_H17细胞数、RORγt mRNA和蛋白质的表达水平均显著升高,Treg细胞数及FoxP3 mRNA和蛋白质的表达水平均显著降低(P均0.01)。活动期RA患者血清IL-17、IL-6、TNF-α、IFN-γ的表达水平均显著升高,而IL-4和IL-10的表达水平均显著降低(P均0.01)。此外,活动期RA患者T_H17细胞中miR-99a的表达水平显著升高,Treg细胞中miR-99a的表达水平显著降低(P均0.01)。Pearson相关分析结果显示,RA患者T_H17细胞中miR-99a与RORγt mRNA的表达水平呈正相关(r=0.721,P0.01),Treg细胞中miR-99a与FoxP3 mRNA的表达水平呈正相关(r=0.815,P0.01)。结论 RA患者T_H17和Treg细胞中miR-99a的表达与T_H17、Treg细胞发育分化关键转录因子RORγt、FoxP3密切相关,miR-99a可能通过影响RORγt和FoxP3,参与RA患者T_H17/Treg细胞比率失衡。     

沙利度胺对多发性骨髓瘤患者外周血Th17细胞影响的研究

目的:探讨沙利度胺治疗多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)患者前后外周血辅助T细胞17(Th17)变化及其意义。方法:研究对象为35例沙利度胺治疗的MM患者及35例同期健康体检者,采用流式细胞术检测外周血Th17细胞百分率,实时定量PCR检测核转录因子维甲酸相关孤儿受体γt(retinoid-related orphan receptor gamma-t,RORγt)mRNA表达水平,酶联免疫吸附法检测血浆白细胞介素17(interleukin-17,IL-17)水平。结果:MM患者外周血中Th17细胞百分率、RORγt mRNA表达水平及血浆IL-17水平均明显高于正常对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。MM患者外周血中Th17细胞百分率与性别、年龄、疾病分型、球蛋白、免疫球蛋白、轻链、M蛋白及骨髓浆细胞比例无明显相关性(P0.05),而与疾病ISS分期、β2-微球蛋白水平及血浆中IL-17水平有关(P0.05)。沙利度胺治疗有效的MM患者外周血中Th17细胞百分率、RORγt mRNA表达水平及血浆IL-17水平均比治疗前明显降低,其差异均有统计学意义(P0.05)。结论:MM患者外周血Th17细胞数增多,抑制Th17细胞可能是沙利度胺发挥抗MM作用的机制之一。     

结核性盆腔炎患者外周血TH17/Treg细胞的表达

目的了解结核性盆腔炎患者外周血T_H17/Treg细胞免疫应答情况,探讨其在结核性盆腔炎发病中的作用。方法采用胞内流式细胞术分别检测46例结核性盆腔炎患者治疗前外周血T_H17和Treg细胞的表达水平,以健康育龄期妇女25例作为对照,并对28例患者抗结核治疗3个月和6个月后T_H17/Treg细胞的变化情况进行随访检测。结果结核性盆腔炎患者外周血T_H17细胞的百分比为(3.26±1.30)%,明显低于对照组(4.92±1.71)%(P0.01),Treg细胞的百分比为(5.18±1.53)%,明显高于对照组(3.26±1.10)%(P0.01);结核性盆腔炎患者治疗6个月后T_H17细胞表达水平(4.67±1.75)%明显高于治疗前(3.26±1.30)%及治疗3个月(3.70±1.06)%,差异均有统计学意义(P均0.01);治疗6个月后Treg细胞表达水平为(3.93±0.94)%,明显低于治疗前(5.18±1.53)%及治疗3个月(4.94±1.51)%,差异有统计学意义(P均0.01);治疗6个月后Treg细胞仍高于对照组(P0.05);治疗前T_H17/Treg细胞的比值较对照组明显降低(P0.01),治疗3个月后升高不明显,治疗6个月后T_H17/Treg细胞的比值(1.18±0.34)%较治疗3个月(0.77±0.21)%和治疗前(0.55±0.13)%升高明显(P均0.01),但仍未恢复至正常水平(P0.01)。结论 T_H17/Treg细胞参与了结核性盆腔炎患者的免疫应答,并存在T_H17/Treg的失衡状态。     

习惯性流产患者绒毛和蜕膜中Treg/Th17免疫失衡的检测及其临床意义

目的探讨绒毛和蜕膜中调节性T细胞(Treg)/Th17免疫失衡在习惯性流产(RSA)患者免疫发病机制中的作用。方法收集RSA患者和自愿终止妊娠的早孕妇女(正常对照组)的绒毛和蜕膜,采用流式细胞术检测其中Treg和Th17细胞数量,采用RT-PCR检测其中叉头翼状螺旋转录因子(Foxp3)和维甲酸相关核孤儿受体γt(RORγt)的mRNA水平;收集RSA患者和正常对照组的外周血,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测其中转化生长因子-β(TGF-β)、白细胞介素(IL)-10、IL-17A和IL-17F的水平;统计分析Treg细胞和其相关细胞因子、Th17细胞和其相关细胞因子之间的相关性。结果和正常对照组比较,RSA患者绒毛和蜕膜中Th17细胞明显增多(均P0.01),Treg细胞明显减少(均P0.01),RORγt的mRNA水平明显升高(均P0.01),Foxp3的mRNA水平明显降低(均P0.01);RSA患者外周血中IL-17A和IL-17F水平明显升高(均P0.01),TGF-β和IL-10水平明显降低(均P0.01);RSA患者和正常对照组Treg细胞数量和TGF-β及IL-10水平、Th17细胞数量和IL-17A及IL-17F水平均呈正相关(均P0.01)。结论绒毛和蜕膜中Treg/Th17免疫失衡可能与RSA的免疫发病机制有关。     

脓毒血症患者外周血中Th17细胞检测及意义

目的 探讨脓毒症患者外周血Th17细胞和细胞因子IL-17、IL-6的表达水平及其对免疫功能的影响.方法 选取2010-04～2010-11住我院ICU病房的脓毒症患者62例,采用流式细胞术检测外周血Th17%(Th17/CD4+T),应用酶联免疫吸附方法(ELISA)检测血浆IL-17和IL-6的表达水平.同时选取来自我院查体中心的健康查体者30例作为对照组.结果 脓毒症患者外周血Th17%明显高于健康对照组(P<0.01);血浆IL-17、IL-6的表达亦显著高于对照组.患者血浆IL-17与IL-6表达水平呈正相关(r=0.886,P<0.01).Th17的表达与IL-17、IL-6的表达亦呈正相关(r1=0.846,r2=0.891,P均<0.01).结论 脓毒血症患者外周血中Th17%增加,血浆IL-17及IL-6表达水平亦升高,提示Th17参与脓毒血症的发病.     

支气管哮喘患者外周血TH1、TH2、TH17及Treg细胞相关细胞因子的表达及意义

目的研究支气管哮喘患者T_H1、T_H2、T_H17及Treg细胞相关炎性因子的变化规律。方法采用多重蛋白定量技术(CBA法)检测支气管哮喘患者及健康对照人群血清中T_H1、T_H2、T_H17及Treg细胞相关细胞因子的蛋白质表达。结果在支气管哮喘患者血清中转化生长因子β(TGF-β)、白细胞介素2(IL-2)、IL-4、IL-6、IL-17A的表达水平明显高于健康对照人群,且差异有统计学意义(P0.05)。在支气管哮喘患者与健康人群血清中IL-10、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)的表达水平差异无统计学意义(P0.05)。结论支气管哮喘患者外周血中TGF-β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-17A的表达水平明显升高,推测存在TH1、TH2、TH17及Treg细胞的比列失衡。     

原因不明复发性流产患者血清IL-33水平与TH1、TH2、TH17及Treg细胞间的关系

目的探讨IL-33和T_H1、T_H2、T_H17及调节性T细胞(Treg细胞)在原因不明复发性流产(URSA)患者中的水平及其相关性。方法收集46例URSA患者及40例健康人对照者,流式细胞术检测外周血T_H1、T_H2、T_H17及Treg细胞比例;ELISA检测血清IL-33浓度。结果与健康人对照组相比,URSA患者血清IL-33浓度显著下降,此外,外周血T_H1和T_H17细胞比例更高,而T_H2和Treg细胞则低于健康人对照组(P0.05)。IL-33浓度与T_H1和T_H17细胞比例均显著负相关,而与T_H2细胞比例呈正相关性,但与Treg细胞间无显著相关性(P0.05)。结论 URSA患者外周血IL-33浓度显著下调,并与T_H1、T_H2和T_H17等免疫细胞比例相关,提示在URSA患者中IL-33可能与T_H1、T_H2和T_H17存在关联。     

ITP患者外周血Th9、Th17和Treg细胞水平及IL-9、IL-17和TGF-β表达在ITP发病中的作用

目的:检测免疫性血小板减少症(ITP)患者外周血Treg、Th17、Th9细胞水平及转化生长因子-β(TGF-β)、白介素-17(IL-17)、白介素-9(IL-9)表达水平并探讨他们在ITP发病中的意义。方法:对54例ITP患者(病例组)与40例健康体检者(对照组)外周血Treg、Th17、Th9细胞水平,用流式细胞术检测2组外周血中TGF-β、IL-17、IL-9等细胞因子的表达用酶联免疫吸附法测定。结果:病例组外周血Treg细胞比例较对照组显著降低,而Th17、Th9细胞比例较对照组均显著升高(P 0.01)。病例组外周血中细胞因子TGF-β的表达水平较对照组显著降低,而IL-17、IL-9的表达水平较对照组均显著升高(P 0.01)。经Pearson相关性分析发现,病例组外周血Treg细胞比例与血小板计数(Plt)存在正相关关系(r=0.35,P 0.05),而Th17、Th9细胞比例与Plt均存在负相关关系(r=-0.37、-0.43,均P 0.05);病例组细胞因子TGF-β的表达水平与Plt存在正相关关系(r=0.46,P 0.05),而IL-17、IL-9的表达水平与PLT均存在负相关关系(r=-0.48、-0.54,均P 0.05)。结论:ITP患者外周血Treg、Th17、Th9细胞比例异常,伴有细胞因子TGF-β、IL-17、IL-9表达水平异常,提示可能在ITP的免疫发病中发挥着重要作用。     

过敏性紫癜患儿Th17细胞表达及意义

目的 探讨Th17细胞在儿童过敏性紫癜(henoch-schonlein purpura,HSP)免疫发病机制中的作用.方法 过敏性紫癜急性期患儿55例,采用流式细胞分析法检测外周血Th17细胞的比例,ELISA法检测血浆相关细胞因子IL-17和IL-6的水平,并进行相关性分析.同期选取20例同龄健康儿童作为对照.结果 HSP患儿外周血Th17/CD4+T细胞比例显著高于对照组[(1.91±0.78)% vs(0.52±0.24)%,(P＜0.01)];HSP患儿血浆IL-17和IL-6的水平亦明显高于对照组[IL-17:(47.4±17.6)pg/ml vs (15.6±11.2) pg/ml;IL-6:(273.8±42.4)pg/ml vs(228.7±37.4)pg/ml,(P＜0.01)].患儿血浆IL-17和IL-6的水平呈正相关(r=0.762,P＜0.01).结论 过敏性紫癜急性期患儿Th17细胞比例增加,IL-17和IL-6水平升高,提示Th17细胞可能参与了HSP的发病及其炎性反应过程.     

白细胞介素17和重症肌无力

白细胞介素17是一种新的前炎性细胞因子,由新发现CD4+辅助性T细胞-Th17分泌.文章从介绍白细胞介素17的结构和编码基因入手,研究了白细胞介素的受体家族,从而发现白细胞介素17具有促进细胞增生分化、招募中性粒细胞及免疫调节等重要作用,并且与某些自身免疫性疾病过程密切相关.Th17细胞亚群的发现,弥补了Th1/Th2介导效应机制的不足.白细胞介素17可致严重的自身免疫性重症肌无力并且提高乙酰胆碱受体特异性的IgG和IgG2b的数量,说明白细胞介素17诱导自身免疫性重症肌无力的形成,白细胞介素17与重症肌无力密切相关.     

IL-17A and IL-17F induce autophagy in RAW 264.7 macrophages

Autophagy is an important cellular catabolic process for the lysosomal degradation of cytoplasmic organelles, proteins and microorganisms. The autophagic process is intertwined with the immune response: autophagy regulates both innate and adaptive immunity, conversely, cytokines produced during the course of the immune response modulate various functions of the autophagic cascade. The IL-17 family member cytokines play a pivotal role in immune protection against extra- and intracellular bacterial pathogens. Since the effects of IL-17A and IL-17F on autophagy have not yet been reported, we have evaluated the autophagic activity in the RAW 264.7 cell line treated with either IL-17A or IL-17F. Both IL-17A and IL-17F proved to promote microtubule-associated protein 1 light chain 3 B-II (LC3B-II) accumulation, enhance the autophagic flux, facilitate the intracellular redistribution of LC3B, increase both the average number and the size of autophagosomes per cell, and foster the formation of acidic vesicular organelles. IL-17F was considerably more efficient than IL-17A in promoting the autophagic process. Further experiments to determine the potential effect of IL-17-induced autophagy on the antibacterial activity of RAW macrophages revealed that IL-17F significantly decreased the intracellular counts of Mycobacterium terrae, while the colony-forming unit values remained comparable in the IL-17A-treated cells and the control cultures. In conclusion, these results demonstrate that IL-17A and IL-17F are capable of inducing autophagy in macrophages, and thereby contribute to the elimination of Mycobacterium terrae. These data may bear on the pathogenesis of infections caused by Mycobacterium terrae, as IL-17 plays a pivotal role in the immune response to mycobacteria. IL-17-mediated activation of autophagy may also be implicated in various infections and other pathological conditions.     

Th17细胞及白介素17在原发性免疫性血小板减少症中的表达和临床意义

本研究检测原发性免疫性血小板减少症(ITP)患者外周血中Th17细胞比例和IL-17水平的变化,并探讨其临床意义。应用流式细胞术和ELISA方法分别检测48例ITP患者及28例对照组外周血中Th17细胞比例及IL-17水平。结果显示,ITP患者Th17细胞比例为(1.40±1.35)%,较对照组升高(P<0.05),Th17细胞比例在糖皮质激素治疗组低于未使用糖皮质激素治疗组(P<0.05)。ITP患者Th17分泌的IL-17量为(19.624±5.187)pg/ml,较正常对照组升高(P<0.05),但IL-17水平在糖皮质激素治疗组与未使用糖皮质激素治疗组的差异无统计学意义。结论:Th17细胞在ITP发病中可能发挥一定作用,糖皮质激素可能通过抑制Th17细胞发挥治疗作用。     

Th17细胞及其分泌的IL-17在特发性血小板减少性紫癜患者中的变化及临床意义

目的探讨辅助性T17细胞（Th17）及其分泌的细胞因子白细胞介素（IL）-17在特发性血小板减少性紫癜（ITP）患者中的变化及临床意义。方法选择2010年11月至2012年1月于大连医科大学附属第-医院就诊的门诊和住院ITP患者38例为研究对象,纳入研究组;随机选取同期于本院体检的健康成年人30例纳入对照组。两组-般情况,如年龄、性别等比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。应用流式细胞术（FCM）检测研究组治疗前、糖皮质激素治疗后及对照组外周血中Th17细胞的比率,同时用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测各组血清中IL-17的水平（本研究遵循的程序符合大连医科大学附属第-医院人体试验委员会所制定的伦理学标准,得到该伦理会批准,分组征得受试对象本人的知情同意,并与之签订临床研究知情同意书）。结果研究组治疗前外周血中Th17细胞比率和血清中IL-17的水平分别为（1．384-0．42）％和（25．52±6．83）ng／L,与对照组的（0．71±0．29）％和（8．23±3．15）ng／L比较,差异有统计学意义（P〈0．05）,研究组患者外周血中Th17细胞比率和血清中IL-17的水平较对照组显著增高。研究组经糖皮质激素治疗后,外周血中Th17细胞比率和血清中IL-17的水平分别为（1．05±0．31）％和（17．46±5．14）ng／L,较治疗前显著降低（P〈0．05）。结论ITP患者外周血中Th17细胞的比率及其IL-17的水平均升高,经糖皮质激素治疗后可下调Th17细胞的比率和IL-17的水平,有效地缓解ITP。     

^131I-17-丙烯胺基-17-脱甲基格尔德霉素毒副作用的初步观察

目的观察^131I-17-丙烯胺基-17-脱甲基格尔德霉素（^131I-17-AAG）治疗VX2肝癌移植瘤模型的骨髓及肝脏毒副作用。方法16只新西兰白兔，制成VX2荷肝癌模型后，按完全随机原则分为2组，1组（治疗组）8只，10mCi^131I-17-AAG耳缘静脉注射；2组（对照组）8只，为未经治疗的荷瘤兔，1、2组荷瘤兔均分别于第1、2周耳缘静脉采血，进行血常规（白细胞、红细胞、血红蛋白、血小板）及酶学（谷草转氨酶、谷丙转氨酶、碱性磷酸酶、谷氨酰转酞酶）检查。结果2周时白细胞、红细胞和血红蛋白无显著差异（P〉0．05），血小板、ALT、AST均有显著差异（P〈0．05），碱性磷酸酶、谷氨酰转移酶无显著差异（P〉005）。结论^131I-17-丙烯胺基17脱甲基格尔德霉素（^131I-17-AAG）对骨髓造血干细胞及肝功能各项指标有不同程度的影响，且随时间逐步得到恢复。     

Th17细胞和白介素-17在异基因造血干细胞移植aGVHD中的免疫调控分析

目的探讨Th17细胞和白介素-17(IL-17)在异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)aGVHD中的免疫调控。方法采用野生型(WT)C57BL/6(H-2b)小鼠与C57BL/6(H-2b)IL-17基因敲除(IL-17-/-)小鼠作为供体,采用BALB/C(H-2b)小鼠作为受体,小鼠给予全身照射8.5 Gy进行清髓性预处理,移植野生型(WT)小鼠1×107个去除T细胞骨髓细胞(TCD-BMCs)以及WT小鼠1×106个CD4+IL-17-/-T细胞。移植之后每天对小鼠生存状况进行观察1~2次,每隔5 d对aGVHD进行临床评估。收集实验小鼠肝脏、肺、肠以及皮肤,并进行HE染色并进行病理组织学分析,并对移植后Th17细胞组、CD4+IL-17-/-T细胞组、IL-17-/-BMCs+IL-17-/-SCs组(KK组)、WT BMCs+IL-17-/-SCs组(WK组)及WT BMSCs+WTSCs组(WW组)小鼠的aGVHD积分进行评估。结果 1Th17细胞组移植后5 d、10 d、15 d、20 d aGVHD积分均显著高于IL-17-/-CDD4+T细胞组(P0.05),且Th17细胞组小鼠平均生存时间显著小于IL-17-/-CDD4+T细胞组(P0.05);2KK组、WK组及WW组移植后5 d、10 d、15 d、20 d aGVHD积分差异均具有统计学意义(P0.05),且三组平均生存时间方面的差异也均具有统计学意义(P0.05)。结论 Th17细胞与IL-17在异基因造血干细胞移植aGVHD中具有较好的免疫调控作用。     

~(131)I-17-丙烯胺基-17-脱甲基格尔德霉素毒副作用的初步观察

目的观察131I-17-丙烯胺基-17-脱甲基格尔德霉素(131I-17-AAG)治疗VX2肝癌移植瘤模型的骨髓及肝脏毒副作用。方法16只新西兰白兔,制成VX2荷肝癌模型后,按完全随机原则分为2组,1组(治疗组)8只,10mCi131I-17-AAG耳缘静脉注射;2组(对照组)8只,为未经治疗的荷瘤兔,1、2组荷瘤兔均分别于第1、2周耳缘静脉采血,进行血常规(白细胞、红细胞、血红蛋白、血小板)及酶学(谷草转氨酶、谷丙转氨酶、碱性磷酸酶、谷氨酰转酞酶)检查。结果2周时白细胞、红细胞和血红蛋白无显著差异(P>0.05),血小板、ALT、AST均有显著差异(P<0.05),碱性磷酸酶、谷氨酰转移酶无显著差异(P>0.05)。结论131I-17-丙烯胺基17脱甲基格尔德霉素(131I-17-AAG)对骨髓造血干细胞及肝功能各项指标有不同程度的影响,且随时间逐步得到恢复。     

阴性突变Rac-N17基因转染对人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的 探讨基因转染对内皮细胞凋亡的影响及其相关机制。方法 采用凝血酶诱导法诱导人脐静脉内皮细胞株（HUVECs）凋亡，检测细胞凋亡情况及caspase-3活性。结果 结果显示，凝血酶诱导48 h后，HUVECs细胞浆内颗粒和空泡增多，细胞凋亡率明显增高，caspase-3活性明显增加，而加入RacN17干预后，细胞凋亡率明显降低、caspase-3活性明显下降。结论 Rac-N17基因转染能防止细胞的凋亡与衰老，保护血管内皮细胞。     

Hrad17在头颈肿瘤中表达下降的研究

目的 DNA损伤修复基因在维持细胞稳定性的作用及头颈肿瘤表现染色体不稳定性研究。方法应用基因表达芯片在7例头颈肿瘤和6例正常口腔粘膜中筛查表达下调的基因,用实时定量RT-PCR证实基因芯片的结果,蛋白印迹检测蛋白表达,定量PCR检测其DNA拷贝数。结果 Hrad17是发现下调的基因之一,Z-score和倍数变化分别为-2.5和0.39,定量RT-PCR显示肿瘤组织中Hrad17 mRNA表达下降,均值为0.216 6,而正常粘膜为0.395 7(P0.05)。Western印迹显示Hrad17蛋白在肿瘤组织中检测不到(0/12),而在正常口腔粘膜组织中表达很强(6/7)。定量PCR显示Hrad17DNA在大多数头颈肿瘤组织中下降。结论 Hrad17表达的缺失经常出现在头颈鳞癌中,由于基因的缺失并可能导致头颈鳞癌基因组的不稳定性,导致肿瘤发生。