青天葵组培扩繁中的污染控制初探

目的研究青天葵组织培养中的污染问题,并提出防治措施。方法通过对污染的青天葵材料使用无菌水,生理盐水(0.9%NaCl),0.1%升汞,漂渍液和消毒片(次氯酸钠)清洗,对感染植物消毒效果进行研究,并考察了次氯酸钠的灭菌浓度及灭菌时间。结果青天葵组培物使用5%次氯酸钠清洗10min效果较好,可基本抑制污染,植物材料仍能正常生长;升汞灭菌虽可较彻底抑制污染,但对植物伤害较大,只用于对感染的球茎灭菌。结论通过污染控制研究,能提高青天葵组织培养的成功率。     

青天葵组培物超低温保存研究

目的用超低温方法保存青天葵组培物。方法采用单因子比较法、均匀设计法考察生长周龄、冷冻保护剂、预培养时间、降温方式、化冻方式等因素对青天葵组培物超低温保存后细胞生活力的影响。结果青天葵组培物较佳的超低温保存程序为：5周龄的组培物，在4℃进行低温锻炼12d，以12，5％DMSO＋0．25％LH为冷冻保护剂，在4℃静置处理30min，然后在-18℃，停留1h后投入液氮中保存，材料取出后，在20℃化冻，无菌洗涤后，再接种，组培物能够存活并继续生长。结论超低温保存方式可以成功保存青天葵组培物种质资源。     

不同生长方式青天葵中黄酮类成分的质谱比较分析

目的 检测通过组培快速繁殖试管苗,人工栽培青天葵与传统野生药材之间的黄酮类成分是否发生质或量的改变.方法 通过正离子模式电喷雾质谱对不同生长方式青天葵的黄酮类成分进行比较分析.结果 经质谱初步定性比较,表明不同生长方式对青天葵黄酮类成分组成比例有一定影响.结论 不同来源药材的质量评价中不仅要考虑活性成分的含量,同时应增加能反映活性成分比例的质量评价方法.     

基于转录组测序的青天葵差异表达基因分析

目的在青天葵球茎和叶片两个组织的转录组测序数据的基础上,进行差异表达基因(differential expressed gene,DEG)的筛选和分析。方法采用Reads Per Kb per reads(RPKM)方法计算青天葵转录组测序获得的单基因(unigene)在球茎和叶片中表达量,根据球茎和叶片之间RPKM的log2倍数绝对值大于1且错误发现率小于0.01筛选DEG,将DEG归类至Nr、GO、KEGG等公共数据库获取其功能释义;并基于功能注释,挖掘参与青天葵激素合成和信号传导过程的DEG。结果筛选出符合条件的DEG共62 605条,包括了31 488条表达上调DEG和31 117条表达下调DEG。分别有51 652条和14 215条DEG在GO和KEGG数据库中获得注释,涵盖GO数据库的42个功能亚类和KEGG数据库的280条代谢途径。在挖掘到的16个与青天葵激素合成和信号传导过程的DEG中,7个为上调表达基因,9个为下调表达基因。结论通过转录组测序数据较全面地提供了青天葵球茎和叶片基因的差异表达情况,为青天葵的功能基因的克隆和功能分析等提供研究基础和理论依据。     

青天葵药材高效薄层指纹图谱鉴别研究

摘要：目的：建立青天葵药材指纹图谱质量控制方法。方法 采用Merck硅胶60高效预制薄层板,氯仿:乙酸乙酯:甲醇:甲酸（4.5 : 1.5 : 2.5 : 0.4）为展开剂,10 %硫酸乙醇溶液显色366 nm波长下扫描吸收光谱,测定18批青天葵药材的薄层色谱图谱,采用指纹图谱系统解决方案软件进行指纹图谱分析,与随行黄酮对照品比较,辨认色谱峰。结果：建立青天葵药材薄层色谱指纹图谱,确定7个共有峰;与随行对照品比较,辨认了其中的5个色谱峰分别为鼠李秦素-3-O-β-D-葡萄糖苷、青天葵甲素、青天葵乙素、沙苑子苷和青天葵丙素,均为黄酮类成分;对18批次青天葵药材指纹图谱主成分分析,根据主成分得分,筛选出12批次合格样品导入中药色谱指纹图谱相似度评价软件系统,建立共有模式,生成共有模式,并进行相似度评价,结果7批大叶青天葵和5批中叶青天葵指纹图谱与共有模式相似度＞0.90,3批小叶青天葵及5批毛叶青天葵相似度均低于0.75;紫背天葵和天葵的薄层色谱与青天葵在相同位置无相同的荧光斑点。结论：所建立的青天葵黄酮指纹图谱具有专属性强、操作简便、快速的特点,可有效地鉴别不同商品规格的青天葵药材、青天葵代用品“毛叶青天葵”以及“同名异物”紫背天葵和天葵,用于青天葵药材的鉴别和质量评价。     

施肥和覆草方式对西红花生长及其产量的影响

目的：探索西红花施肥和覆草方式，指导药农正确使用化肥和覆盖稻草，提高西红花产量和质量。方法：不同的施肥和覆草方式对比研究分析。结果：覆草方式对西红花生长及倒苗有明显的影响；覆草方式显著影响单个球茎重量；覆草方式极显著影响球茎产量；施肥方式对西红花生长和产量影响不明显，与覆草方式复合处理能提高球茎产量。结论：西红花栽培中采用稻草深层覆盖的方式，可显著提高西红花单个球茎重量和球茎产量；在稻草表层覆盖的情况下，适量追氮肥有利于提高球茎产量。     

基于RAPD的青天葵遗传多样性及鉴别研究

目的 建立及优化青天葵样品总DNA的提取方法及RAPD反应,探讨不同品种的青天葵及其替代品、伪品在DNA分子水平上的遗传多样性及其遗传关系.方法 使用高盐低pH值法提取总DNA,采用随机扩增多态性DNA,从49条随机引物中筛选能扩出清晰条带的引物,对22个青天葵样品及伪品进行RAPD分析.用统计分析软件对扩增出的条带进行聚类分析,以Shonnon's指数和Nei's指数对青天葵遗传多样性进行估算.结果 高盐低pH值法提取的新鲜样品纯度高,药材纯度低,但都能用于RAPD.选取能扩增出清晰条带的19条引物,把鲜品与干品分别聚类分析.干药材中小叶与中叶距离较近,与大叶及毛叶距离远.新鲜叶片中三种青天葵为一类,青天葵与其组培品、毛叶与红薯叶距离稍远,与车前草、积雪草距离最远.青天葵种群遗传多样性Shonnon's指数为0.463,Nei's指数为0.267,种群内遗传多样性较高,基因流为0.94.结论 不同品种青天葵间及伪品在分子水平上存在差异,可用此方法鉴别青天葵.青天葵的遗传多样性大多是由地理环境造成的.     

青天葵高效薄层色谱指纹图谱的鉴别研究

目的建立青天葵药材指纹图谱质量控制方法。方法采用Merck硅胶60高效预制薄层板,氯仿∶乙酸乙酯∶甲醇∶甲酸(4.5∶1.5∶2.5∶0.4)为展开剂,10%硫酸乙醇溶液显色,366 nm波长下扫描吸收光谱,测定18批青天葵药材的薄层色谱图谱,采用指纹图谱系统解决方案软件进行指纹图谱分析,与随行黄酮对照品比较,辨认色谱峰。结果建立青天葵药材薄层色谱指纹图谱,确定7个共有峰;与随行对照品比较,辨认了其中的5个色谱峰分别为鼠李秦素-3-O-β-D-葡萄糖苷、青天葵甲素、青天葵乙素、沙苑子苷和青天葵丙素,均为黄酮类成分;对18批次青天葵药材指纹图谱主成分分析,根据主成分得分,筛选出12批次合格样品导入指纹图谱系统解决方案软件,建立及生成共有模式,并进行相似度评价,结果 7批大叶青天葵和5批中叶青天葵指纹图谱与共有模式相似度0.90,3批小叶青天葵及5批毛叶青天葵相似度均低于0.75;紫背天葵和天葵的薄层色谱与青天葵在相同位置无相同的荧光斑点。结论所建立的青天葵黄酮指纹图谱具有专属性强、操作简便、快速的特点,可有效地鉴别不同商品规格的青天葵药材、青天葵代用品"毛叶青天葵"以及"同名异物"紫背天葵和天葵,可用于青天葵药材的鉴别和质量评价。     

人工种植青天葵生长状况的初步调查

本文报道三种野生青天葵人工栽培的生长状况,包括物候期成活率及生长差异.结果显示青天葵休眠期长,种植后成活率可达95%,并比较了同月份叶片大小、重量、全株重、母块茎及子块茎的数目、直径,可为青天葵适宜采收期以及今后扩大种植提供参考.     

青天葵及其近缘种毛叶青天葵的HPLC指纹图谱鉴别研究

目的:建立青天葵HPLC指纹图谱分析方法,并与外形极相似的毛叶青天葵进行比较,为该药材的鉴别及质量评价提供依据。方法:采用Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);以乙腈-0.2%磷酸系统为流动相,梯度洗脱;流速为1.0 m L/min;检测波长为256 nm;柱温为室温。测定了15批青天葵以及5批毛叶青天葵的HPLC图谱。采用中国药典推荐的"中药色谱指纹图谱相似度评价系统"(2004 A版)对HPLC图谱进行分析。结果:青天葵与毛叶青天葵的HPLC指纹图谱差异显著;大叶青天葵与小叶青天葵的HPLC指纹图谱无显著差异。结论:所建立的HPLC指纹图谱方法可以用于青天葵药材的质量评价,并能有效地将青天葵与其代用品毛叶青天葵区分开来。     

青天葵组织培养及植株再生的研究

目的:对青天葵进行组织培养并获得再生植株。方法:考察不同外植体、植物生长调节剂、添加物等对根状茎及再生植株生成的影响。结果:以球茎为外植体效果最好,6-BA2mg·L^-1诱导球茎生成根状茎的效果优于6-BA1mg·L^-1,椰汁、活性炭对根状茎的生长有促进作用。结论:青天葵球茎接种于1/2MS+6-BA2mg·L^-1培养基上,能够诱导出芽,芽接种于添加了10%椰汁和1‰活性炭的培养基中能够生成大量的根状茎,将白色的根状茎接种于1/2MS+1‰活性炭的培养基中能够先形成球茎,并进一步形成再生植株;将绿色的根状茎接种于1/2MS+6-BA2mg·L^-1+NAA2mg·L^-1的培养基上能够直接形成再生植株。     

栽培基质对多花黄精组培苗生长的影响

目的 研究解决多花黄精Polygonatum cyrtonema组培苗移栽后成苗率低、长势差和叶部病害危害等问题。方法 以多花黄精组培苗为实验材料,采用福建地区生产上常用的2种商品基质和以泥炭土、珍珠岩、蛭石、沙、菌渣、草木灰为原料自行配制的6种基质,其中T5和T7基质中添加专用的育苗营养液。测定不同基质的理化特性,研究不同基质对多花黄精组培苗成苗率、生物学性状、生长量、壮苗指数、叶部病害发病率的影响,探索不同栽培基质理化特性与多花黄精组培苗生物学性状、生长量、壮苗指数的相关性。结果 不同的栽培基质对多花黄精组培苗的成苗率、形态指标、生长量、评价指标和叶部病害发病率影响较大,不同基质容重与多花黄精组培苗株高存在显著负相关,不同基质有机质含量同多花黄精组培苗全株鲜质量、干质量存在显著正相关。自行配制的T5基质处理的多花黄精组培苗成苗率、形态指标、壮苗指数优于其他基质,植株生长健壮,未发现叶部病害。结论 自行配制的T5基质可作为多花黄精组培苗栽培基质推广应用。     

A Kunitz proteinase inhibitor from corms of Xanthosoma blandum with bactericidal activity

Bacterial infections directly affect the world's population, and this situation has been aggravated by indiscriminate use of antimicrobial agents, which can generate resistant microorganisms. In this report, an initial screening of proteins with antibacterial activity from corms of 15 species of the Xanthosoma genus was conducted. Since Xanthosoma blandum corms showed enhanced activity toward bacteria, a novel protein with bactericidal activity was isolated from this particular species. Edman degradation was used for protein N-termini determination; the primary structure showed similarities with Kunitz inhibitors, and this protein was named Xb-KTI. This protein was further challenged against serine proteinases from different sources, showing clear inhibitory activities. Otherwise, no hemolytic activity was observed for Xb-KTI. The results demonstrate the biotechnological potential of Xb-KTI, the first proteinase inhibitor with antimicrobial activity described in the Xanthosoma genus.     

太子参不定根组织培养的研究

目的:对太子参不定根的培养条件进行系统的优化.方法:利用组织培养技术结合紫外分光光度法,考察了接种量、蔗糖浓度、无机盐浓度、培养天数、逐级扩大培养以及不同角度鼓泡式反应器对太子参不定根生长的影响,并对不定根中皂苷、多糖和氨基酸等成分进行含量测定.结果:每1L培养基接种的不定根鲜重为6 g时,太子参不定根的干重增殖倍数达到最大值;随着蔗糖浓度的升高,太子参不定根干重增殖倍数呈先升高后降低的趋势;培养基中的无机盐浓度对不定根的生长有较大影响,3/4 MS最有利于不定根的生长;太子参生长呈“S”型曲线,在第28天生物量达到最大.结论:接种量、蔗糖浓度、无机盐浓度、逐级扩大培养以及反应器角度都会显著影响太子参不定根的生长,不定根中的皂苷和氨基酸含量高于栽培的太子参,而多糖含量低于栽培的太子参.     

多叶棘豆组织培养及快速繁殖研究

目的:由于多叶棘豆的种子为短寿型,本文通过组织培养来确定多叶棘豆快速繁殖的人工繁殖方法。方法:将种子接种于诱导培养基上,待其长成小苗后用不定芽作为外植体,在MS培养基上添加不同种类及不同浓度的激素,对多叶棘豆进行丛生芽诱导及根的培养。结果:丛生芽诱导的适宜培养基为MS+0.5 mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA;生根壮苗的适宜培养基为1/2MS+NAA 0.1 mg/L。结论:采用组织培养方式可进行多叶棘豆的快速繁殖。     

人眼结膜上皮细胞的体外培养

目的探讨体外分离培养结膜上皮细胞的方法。方法用组织块培养法将人眼结膜上皮组织分别种植于培养皿及处理过的羊膜上,培养2周。观察结膜上皮细胞的生长特点。结果接种在培养皿的结膜上皮6天左右组织块之间可融合成膜状,细胞为单层上皮细胞。接种在羊膜上的结膜组织,生长较慢,2周左右组织块之间可互相连接,融合成膜状,细胞为复层上皮细胞。免疫组化鉴定结膜上皮细胞CK13染色阳性。结论组织块培养法是结膜上皮细胞培养的较好方法,种植在羊膜上可获得复层上皮细胞。     

丹参酮ⅡA对四氯化碳损伤原代培养大鼠肝细胞的影响

目的：研究丹参酮ⅡA对四氯化碳(CCl4)损伤原代培养大鼠肝细胞的保护作用。方法：原位灌流分离大鼠肝细胞培养36h后加入丹参酮ⅡA，同时造成CCl4损伤，于损伤3h测培养液中丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)的含量，谷丙转氨酶(ALT)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性，并用MTT法测肝细胞存活率。结果：丹参酮ⅡA明显改善细胞存活率，抑制CCl4引起的ALT、LDH活力的升高，同时抑制MDA、NO的产生及提高SOD活力。结论：丹参酮ⅡA能有效抑制CCl4造成的原代培养大鼠肝细胞损伤。     

陶瓷化骨对成人骨髓基质干细胞分化的影响

目的:观察陶瓷化骨时成人骨髓基质干细胞生长和分化的影响.方法:体外分离培养成人骨髓基质干细胞,将第二代细胞以陶瓷化骨为载体进行培养,利用倒置显微镜、碱性磷酸酶细胞化学染色、碱性磷酸酶活性检测等条件,了解陶瓷化骨对成人骨髓基质干细胞生物学行为的影响.结果:体外连续培养6d,倒置显微镜下可见成人骨髓基质干细胞与陶瓷化骨相容性好,材料周边细胞生长密集,并有向陶瓷化骨趋化迁移现象,3周后形成矿化结节.碱性磷酸酶染色呈阳性、碱性磷酸酶活性检测有明显的细胞分泌量.结论:体外培养条件下,陶瓷化骨可诱导成人骨髓基质干细胞向成骨和骨质细胞分化.     

延胡索干物质累积及氮、磷、钾养分吸收规律

目的:研究不同产量水平下延胡索干物质累积及其氮、磷、钾养分吸收特点,旨在揭示延胡索养分吸收规律,为延胡索高产栽培和科学施肥提供理论依据。方法:以城固延胡索为试验材料,连续2年在延胡索各生育时期对陕西省城固县8个乡镇106个种植户的样品进行采样分析,测定各器官干物质累积量及氮、磷、钾吸收量。结果:延胡索地上部表现为先增加后降低的趋势,而延胡索地下部则呈直线增加趋势。幼苗期至花期末是地上部旺盛生长阶段,干物质累积较快,占全生育期26.7%~44.1%。花期末地上部累积量达到最高,进入膨大期地上部茎叶开始枯萎及养分转移,干物质累积量有所降低。初花期至膨大期是地下部迅速膨大阶段,其累计量占全生育期50.3%~87.5%;至收获期地下部干物质达到最高值,占全株78.5%~79.8%。延胡索不同生育时期对氮、磷、钾养分吸收量有差异,幼苗期至花期末是地上部养分吸收迅速阶段,于花期末达到峰值,以钾吸收最多,氮次之,磷最少。初花期至膨大期是地下部对养分吸收高峰期,以吸氮量最高,钾次之,磷最低。结论:综合延胡索各器官和全株需肥规律及肥料特性,建议该地区栽培延胡索时,应在前期将全部有机肥和磷肥投入土壤中;氮肥和钾肥可以在前期投入总量40%~50%,其余的后期追肥,以保证延胡索正常生长,从而达到延胡索高产。     

姜黄素对四氯化碳损伤原代培养大鼠肝细胞的影响

目的：研究姜黄素对四氯化碳（CC14）损伤原代培养大鼠肝细胞的保护作用。方法：原位灌流分离大鼠肝细胞培养36h后加入姜黄素，同时造成CC14损伤，于损伤3h后测培养液中丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）的含量，谷丙转氨酶（ALT）、乳酸脱氢酶（LDH）、超氧化物歧化酶（SOD）的活性，并用MTT法测肝细胞存活率。结果：姜黄素明显改善细胞存活率，抑制CC14引起的ALT、LDH活力的升高，同时抑制MDA、NO的产生及提高SOD活力。结论：姜黄素能有效抑制CCl4造成的原代培养大鼠肝细胞损伤。