人肝微粒体中尼莫地平代谢的酶动力学及其抑制(英文)

目的:在体外研究人肝微粒体中尼莫地平代谢的酶动力学及选择性的细胞色素P-450(CYP450)酶抑制剂对尼莫地平代谢的影响。方法:采用人肝微粒体研究尼莫地平脱氢酶的代谢动力学,运用Eadie-Hof-stee方程估算其动力学参数。在体外运用CYP450酶的选择性抑制剂探讨其对尼莫地平代谢的影响及人肝微粒体中参与尼莫地平二氢吡啶环脱氢代谢的CYP450酶。结果:尼莫地平在人肝微粒体中的代谢存在较大的个体差异,尼莫地平脱氢酶的K_m为(36±11)μmol,其V_m为(17±7)μmol·g~(-1)·min~(-1)。酮康唑和三乙酰竹桃霉素竞争性地抑制尼莫地平二氢吡啶环脱氢代谢,其K_i值分别为0.59和122.2μmol。非那西丁、奎尼丁、DDC、Sul和Tra对尼莫地平二氢吡啶环脱氢代谢没有明显的影响。结论:尼莫地平在体内的药物动力学个体差异与其在肝中的代谢存在多态性有关。CYP3A参与了尼莫地平二氢吡啶环脱氢代谢,CYP3A的抑制剂可能会与尼莫地平发生代谢相互作用。     

尼莫地平在人肝微粒体内的代谢

:采用人肝微粒体在体外研究尼莫地平 (Nim)在人体内的代谢物及代谢途径 . Nim在人肝微粒体内被迅速代谢成 3个代谢物 ,分别是 Nim二氢吡啶环脱氢代谢物 M1,二氢吡啶环侧链脱甲基代谢物M2 ,二氢吡啶环脱氢及其侧链脱甲基代谢物 M3.Nim在人肝微粒体中的最初的两步代谢反应是其二氢吡啶环脱氢氧化及其侧链脱甲基反应 ,两者的代谢产物可以被进一步代谢为代谢物 M3.CYP3A的特异性抑制剂醋竹桃霉素和酮康唑可以抑制Nim的二氢吡啶环脱氢氧化及其侧链脱甲基反应 ,使 Nim的代谢速率明显下降 ,结果提示 CYP3A参与了 Nim在人肝微粒体内的代谢     

HPLC法测定大鼠肝微粒体中洛伐他汀含量的方法学研究

目的:考察测定大鼠肝微粒体中洛伐他汀含量的方法学。方法:采用高效液相色谱法,内标为地西泮,色谱柱为Ulti-mateXB-C18,流动相为乙腈-水(70∶30),流速为1.0mL·min-1,检测波长为238nm,柱温为30℃,进样量为20μL。结果:大鼠肝微粒体中洛伐他汀检测浓度的线性范围为2.5～40μmol·L-1(r=0.9983),低、中、高浓度洛伐他汀溶液的日内RSD分别为5.44%、2.89%、2.83%,日间RSD分别为5.48%、1.84%、1.91%,方法回收率分别为(109.24±3.28)%、(104.82±5.92)%、(102.17±1.92)%,绝对回收率分别为(104.65±2.93)%、(113.72±6.25)%、(101.92±1.89)%。结论:方法学考察结果表明,本方法简单易行、灵敏度高,可用于肝微粒体中洛伐他汀的含量测定。     

左旋黄皮酰胺在大鼠肝微粒体中的代谢转化研究

用大鼠肝微粒体体外温孵法进行了左旋黄皮酰胺[(-)-clausenamide]代谢转化研究,优化了温孵体系,建立了反相HPLC-DAD同时分离检测左旋黄皮酰胺及其体外代谢产物的分析方法。用硅胶低压柱色谱、制备TLC及制备HPLC分离纯化了两个代谢产物并进行了光谱鉴定。结果表明,两个代谢物分别确定为6-和5-位羟基取代的黄皮酰胺。     

舒芬太尼在体外人肝微粒体中代谢速率的测定

目的:建立高效液相色谱法(HPLC)测定人肝脏微粒体中舒芬太尼的药物浓度,为进一步研究舒芬太尼的药物代谢提供新方法.方法:于人体肝组织微粒体孵育液中加入舒芬太尼,用HPLC测定孵育液中不同时点的舒芬太尼浓度,以芬太尼为内标,用正己烷—无水乙醇(19:1)进行萃取,采用Diamonsil C18色谱柱(4.6mm×200...     

高效液相色谱-电化学检测器法测定人肝微粒体中雌二醇的代谢产物(英文)

目的:建立雌二醇在人肝微粒体中代谢产物的测定方法,研究低浓度雌二醇在人肝微粒体中的代谢机制。方法:有机溶剂提取、蒸发、重溶的方法处理样品,高效液相色谱法分离组分,电化学检测器测定含量。结果:流动相为醋酸缓冲液-乙腈(50:50,v/v,pH4.5,电压为 0.7V vs Ag/AgCl时,在C18柱上分离较好。最低检测量为100pg。结论:本法可用于测定底物浓度在1-100μmol/L时,人肝微粒体中的代谢产物。     

HPLC法测定大鼠肝微粒体中睾酮的含量

目的:建立以高效液相色谱法测定大鼠肝微粒体中细胞色素P4503A4(CYP3A4)探针底物睾酮含量的方法。方法:色谱柱为Ultimate-XB C18,流动相为水-乙腈(50∶50),内标为地西泮,流速为1.0mL·min-1,检测波长为245nm,柱温为30℃,进样量为20μL。结果:睾酮生物样品检测浓度的线性范围为10.0～200.0μmo·lL-1(r=0.9995);低、中、高浓度的平均方法回收率分别为86.15%、103.10%、97.48%,平均相对回收率为111.15%、107.24%、100.78%,日内RSD分别为3.92%、2.46%、2.82%,日间RSD分别为2.98%、1.34%、2.41%。结论:本方法简便快速、灵敏度高、重复性好,可用于大鼠肝微粒体中CYP3A4活性的测定及相关研究应用。     

右旋黄皮酰胺在大鼠肝微粒体中的代谢转化

目的：研究黄皮酰胺的主要代谢途径,为进一步研究黄皮酰胺代谢的立体选择性打下基础。方法：用大鼠肝微粒体体外温孵法对右旋黄皮酰胺((+)-clausenamide)进行温孵,用硅胶柱色谱、制备TLC分离纯化代谢产物并通过光谱分析鉴定其结构。结果：分离得到5个代谢产物CM1,CM3,CM4,CM5及CM6,其结构分别鉴定为6-羟基,4-羟基,4,6-二羟基,4-苯环邻位羟基,4,7-苯环间位-二羟基黄皮酰胺。结论：黄皮酰胺的代谢主要发生羟化或双羟化,CM3是其主要代谢产物,量较少的CM4,CM6为其进一步代谢产生的双羟基代谢产物;另2个代谢产物CM1,CM5产生的量也较少;CM2未分离得到,但通过HPLC分析知其为右旋黄皮酰胺的微量代谢产物。     

大鼠肝微粒体中葛根素的液相色谱-质谱测定法及药物代谢动力学

目的建立大鼠肝微粒体中葛根素及其代谢物的液相色谱质谱测定法,并研究葛根素在大鼠肝微粒体中的药物代谢动力学。方法色谱柱为Waters C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇水(体积比为50∶50),通过电喷雾电离源(ESI),以正离子方式进行检测。结果方法的回收率为95.6%~96.8%,其日内、日间的RSD分别为4.9%~7.6%和3.7%~6.2%,葛根素的质量浓度在0.5~20 mg.L-1内与峰面积呈良好的线性关系。在温孵时间0~40 min内、微粒体蛋白质量浓度在0.5~2.0 g.L-1内,葛根素呈线性消除,随着肝微粒体蛋白质量浓度的增大,葛根素呈线性消除,葛根素可被肝微粒体代谢成大豆苷元。其代谢机理为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)依赖性的氧化代谢。还原型烟酰胺二核苷酸(NADH)对葛根素代谢基本没有催化作用。结论葛根素在大鼠肝微粒体内被迅速代谢,大鼠肝微粒体P450酶参与了葛根素的代谢。     

HPLC法测定尼莫地平滴眼液含量

目的建立用高效液相色谱法测定尼莫地平滴眼液含量的方法.方法色谱柱:AgilentTC-C18(250mm×4.6mm,5μm);流动相:甲醇-乙腈-水(27∶43∶30);流速1.0ml?min-1;检测波长:237nm.结果尼莫地平在2～80μg?ml-1的范围内线性关系良好.回收率为100.29%.结论方法简便、准确、可靠,适用于尼莫地平滴眼液的质量控制.     

人血浆中尼莫地平的毛细管气相色谱电子捕获检测法及药代动力学

目的：建立测定人血浆中尼莫地平的毛细管气相色谱电子捕获检测法,并用本法研究尼莫地平片剂在健康人体内的药代动力学及相对生物利用度。方法：色谱柱为25 m×0.2 mm ID OV-101熔融石英毛细管柱,检测器为⁶³Ni电子捕获检测器。内标为尼群地平,血浆样品在碱性条件下用正己烷—乙酸乙酯(1∶1)提取。结果：浓度在2.0～150.0 ng.ml^-1与峰面积比呈良好线性关系,γ=0.99989。人血浆中尼莫地平的最低检出浓度为0.1 ng.ml^-1,方法重现性好,提取回收率大于80%。10名志愿者随机交叉口服单剂量100 mg二种国产尼莫地平片剂后,以本法测定其体内过程符合一室模型。二种片剂的AUC_0→∞。C_max,T_max均无显著差异。结论：尼莫地平血药浓度测定结果表明两种尼莫地平片剂生物等效,A片剂对B片剂的相对生物利用度为102.0%。     

HPLC法测定小鼠肝匀浆中乳梨醇的含量

用高效液相色谱法建立了小鼠肝匀浆中乳梨醇的含量测定方法。乳梨醇的回收率为９９．９％，日内和日间ＲＳＤ均小于１．０％（ｎ＝５）。     

氯唑沙宗及其代谢物的HPLC测定方法和药代动力学研究

目的旨在建立氯唑沙宗及其代谢物的方法。应用高效液相色谱法,内标物为5-fluorobenzoxazolone,经乙酸乙酯提取,紫外检测波长为287nm。结果表明,6-羟氯唑沙宗、内标物及氯唑沙宗的保留时间分别为6.12,10.47和18.65min。6-羟氯唑沙宗及氯唑沙宗在0.5～20μg·ml^-1血浆浓度范围内线性关系良好,回收率均在82.80%～100.76%之间,当日及日间相对标准差分别小于8%和11%。两药的最低检测浓度分别为0.2和0.5μg·ml^-1。多种常用药物对样品的色谱峰无干扰。曾对8名健康受试者单次口服氯唑沙宗400mg的药代动力学进行了观察。提示此方法可用于氯唑沙宗的体内氧化代谢研究。     

高效液相色谱法同时测定盐酸维拉帕米及其主要代谢产物

建立了反相高效液相色谱法同时测定人血浆中维拉帕米及其主要代谢产物去甲维拉帕米血药浓度.以甲醇—水—三乙胺(67∶33∶0.4,pH6.7)为流动相,乙吗噻嗪(ethmosine)为内标,样品用正己烷—正丁醇混合液提取浓缩后进样,紫外检测器检测(279nm)。此法操作简便,精密度好,日内、日间误差:维拉帕米<8.6%,去甲维拉帕米<7.6%;方法回收率高,维拉帕米、去甲维拉帕米回收率均>92%。两者血药浓度在25～1000ng·ml-1范围内呈线性关系,最小检测浓度维拉帕米:2.5ng·ml^-1,去甲维拉帕米:5.0ng·ml^-1。应用该法测定了6名志愿者口服盐酸维拉帕米片剂后的血药浓度。     

血浆中去甲地西泮及代谢物奥沙西泮的HPLC测定方法和大鼠口服药代动力学

采用高效液相色谱法测定去甲地西泮(去甲安定)及其代谢产物奥沙西泮。以RP-C₁₈为固定相,乙腈—0.01mol·L^-1醋酸钠(pH3.8,33.3:66.6)为流动相,地西泮为内标物,紫外波长240nm处定量测定。去甲地西泮、奥沙西泮和内标物的保留时间分别为2.8min,4.85min和8.5min;绝对回收率分别为74%,86%和86%。奥沙西泮在35.3～2260ng·ml^-1,去甲地西泮在20～2560ng·ml^-1血浆浓度范围内线性关系良好,r=0.9997和r=0.9998。二药的最低检测浓度分别为10ng·ml、和7ng·ml^-1;日内和日间相对标准偏差(RSD)均分别小于6%和10%(n=5)。多种常用药物对样品的色谱峰无干扰。并用此法研究了大鼠单次口服去甲地西泮的药代动力学。     

尼卡地平在人肝微粒体代谢的酶动力学

目的　体外研究人肝微粒体中尼卡地平代谢的酶动力学及选择性的CYP酶抑制剂对其代谢的影响。方法　用人肝微粒体研究尼卡地平代谢的酶动力学,探讨CYP酶的选择性抑制剂对其代谢的影响及参与其脱氢代谢的CYP酶。结果　结果表明CYP3A的抑制剂酮康唑可以显著地抑制尼卡地平的脱氢代谢,使尼卡地平的代谢速率下降。CYP2E1的抑制剂DDC仅在高浓度时抑制尼卡地平二氢吡啶环脱氢代谢,而其他CYP特异性抑制剂对尼卡地平二氢吡啶环脱氢代谢没有明显的影响。结论　CYP3A参与了尼卡地平的代谢,CYP3A的抑制剂可能会与尼卡地平发生代谢相互作用,从而降低尼卡地平的代谢速率     

肝微粒体酶在集落形成试验中对环磷酰胺和甲基苄肼的激活作用

S-9 10μl/ml不减少肿瘤细胞集落形成。当其直接加入双层软琼脂系统上层,在环磷酰胺浓度为25,50,100和200μg/ml时,L_(1210)细胞的集落形成率分别为66,45,39和9％,HeLa细胞集落形成率为96,81,66和38％;甲基苄肼浓度为100,200和400μg/ml时,B_(16)细胞集落形成率为64,45和26％。不加S-9时,上述药物对各种细胞均不显示抑制作用。但人肝癌细胞株SMMC_(7721)虽不加S-9,在上述二药作用下集落形成率明显降低。     

高效液相色谱法测定乙吗噻嗪在人的血浆浓度及药代动力学

建立了反相高效液相色谱法测定人血浆中乙吗噻嗪浓度。色谱柱采用SpherisotbC18柱(25cm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇—水—三乙胺(70:30:0.4,pH6.5),检测波长268nm。用乙腈沉淀蛋白后,吹干浓缩进样。血药浓度在20～4000ng/ml范围内呈线性关系,相关系数0.9994,血浆最低检测浓度3ng/ml。方法回收率90～103%,日内、日间RSD2.4～10.2%。应用该法研究了8名志愿者口服乙吗噻嗪片后的药代动力学,用一室模型拟合,消除相半衰期为1.75±0.45h。本法简便、回收率和灵敏度高、重复性好,适于临床药代动力学和药效学的研究。     

反相高效液相色谱法测定血浆中丙吡胺及其代谢物

用反相高效液相色谱法测定血浆中丙吡胺(DP)及其代谢物单异丙吡胺(MND)。两者的检测限均小于0.02μg,最低检测浓度0.1μg/ml;回收率分别为101.4%和98.6%;日内及日间变异系数均小于5%;临床上可能与 DP 同时服用的一些药物对本测定均无干扰。     

人血浆中辅酶Q10的HPLC测定法及其动态研究

目的：建立人血浆中辅酶Q₁₀的高效液相色谱检测法,以测定人体内辅酶Q₁₀的经时变化过程。方法：血浆经无水乙醇沉淀蛋白后,以正己烷提取,进行高效液相色谱法检测。色谱柱为Spherisorb C₁₈ 10 μm 25 cm×4.6 mm ID,流动相为无水乙醇—水—冰醋酸(98∶2∶0.7),检测波长为275 nm,内标为辅酶Q₉。结果：在0.2～4.0 μg.ml^-1浓度范围内峰面积比与浓度呈良好的线性关系,γ=0.9998,方法重现性好,提取回收率大于90%;以本法测定了8名男性健康受试者服用辅酶Q₁₀制剂前后血浆中辅酶Q₁₀的浓度经时变化过程。结论：用本法测定人血浆中辅酶Q₁₀浓度结果满意;人血浆中内源性辅酶Q₁₀浓度为(763.3±86.3) ng.ml^-1,且受饮食及运动量的影响。