反相高效液相色谱法测定鼠肝微粒体中依普黄酮及其在代谢研究中的应用

目的　建立鼠肝微粒体中依普黄酮的反相高效液相色谱测定法,以研究依普黄酮的体外代谢。方法　本法中依普黄酮与鼠肝微粒体共孵育之后用氯仿提取,采用地非三唑为内标,以Nova parkC₁₈柱为分析柱,乙腈0.1%醋酸溶液(60∶40)为流动相,流速1.0mL·min^-1,紫外检测波长为250nm。结果　依普黄酮在1～100μg·mL^-1内线性关系良好(r=0 .9998)。检测限为0.02μg·mL^-1(S/N≥3) ,定量限为0.1μg·mL^-1(RSD<5.0% ,S/N=8,n=3)。方法回收率达96 .90 %～112 .8% ,日内,日间RSD分别<8.0%和<10% (n=5)。结论　此法简便,准确,可用于依普黄酮的体外代谢研究     

地非三唑的RP-HPLC法测定及其体外代谢研究

目的为研究抗早孕新药地非三唑(DL111-IT)的代谢作用机理和进一步开发利用,建立其体外代谢的RP-HPLC测定法。方法以Lichrospher ODS-C₁₈为色谱柱,甲醇-pH 7.5磷酸盐缓冲液(70∶30)为流动相,检测波长:235 nm,流速1.0 mL·min^-1,地西泮为内标,对鼠肝微粒体孵育液中DL111-IT的RP-HPLC法进行方法学研究。应用建立的方法对DL111-IT在不同来源的鼠肝微粒体中的体外代谢进行试验。结果DL111-IT浓度在1.01～101.0 μg·mL^-1呈良好的线性关系,在不同浓度下测得平均绝对回收率和相对回收率分别为(92±4)%和(100.3±1.9)%(N=5);DL111-IT在鼠肝微粒体中的代谢, β-萘黄酮组明显快于其他组。结论本法简便、准确,可用于DL111-IT的体外代谢研究。     

手性衍生化-反相高效液相色谱法测定大鼠肝微粒体中盐酸普罗帕酮对映体及其在代谢研究中的应用

目的　建立鼠肝微粒体中盐酸普罗帕酮消旋体(R/S-PPF)的手性拆分法,以研究大鼠肝微粒体中R/S-PPF体外代谢的立体选择性。方法　用GITC柱前手性衍生化、反相高效液相色谱法拆分R/S-PPF;外标法定量;体外微粒体孵育试验。结果　基线拆分了盐酸普罗帕酮两对映体,容量因子分别为7.9和9.5,分离系数α为1.2,分离度R为1.9,线性范围0.5～320 μg.mL^-1,检测限100 ng.mL^-1,定量限5 μg.mL^-1(RSD<15%)。平均绝对回收率S-PPF为77.1%,R-PPF为76.0%。平均日内、日间精密度均<10%。在DEX和BNF诱导鼠肝微粒体中,PPF的代谢呈显著的立体选择性,在空白对照微粒体中的代谢未呈立体选择性。结论　此法简便、经济,可用于鼠肝微粒体中R/S-PPF代谢的立体选择性研究。     

口服制川乌提取物后大鼠体内乌头类生物碱的组织分布

目的建立HPLC法测定口服制川乌提取物后大鼠体内乌头类生物碱的方法。方法用Waters 2690@996 PAD系统，Halsil 100 C₁₈柱(250 mm×4.6 mm ID, 5 μm)，水-甲醇-二乙胺(75∶25∶0.1)为流动相，流速0.9 mL·min^-1，检测波长240 nm。结果乌头碱在心脏、脾脏、肺脏、肾脏的线性范围：0.4-100 μg·mL^-1，r分别为0.997 2,0.998 6,0.999 3,0.999 4；在肝脏的线性范围：2-200 μg·mL^-1，r为0.999 0。次乌头碱在心、肝、脾、肺、肾、脑和脊髓的线性范围：5-100 μg·mL^-1，r分别为0.999 4,0.999 7,0.999 8,0.998 4,0.999 8,0.999 8和0.999 7。乌头碱及次乌头碱的检测限(S/N=3)为0.4 μg·mL^-1。各组织中的回收率：乌头碱为88.7%-102.2%，次乌头碱为865%-101.3%。结论本法为确证乌头类生物碱的中毒提供了科学有效的依据。     

高效液相色谱法测定血浆中醋氯芬酸及其在犬体内药代动力学

建立了HPLC法同时测定家犬血浆中的醋氯芬酸及其主要代谢物的浓度。此法简便易行,精密度好,方法回收率91.3%～96.9%,日内、日间RSD为3.69%～8.13%,血药浓度在0.050～51.2μg·mL^-1范围内呈线性关系,相关系数0.9998,当S/N≥3时,最小检测浓度为10ng·mL^-1。此法可同时测定醋氯芬酸及其在体内的主要代谢物。醋氯芬酸po吸收迅速,给药后约12min即达血药浓度峰值,其药—时曲线符合二室模型,T_1/2α仅为2.5min左右,T_1/2β约为137min,代谢物约在110min达到血药浓度峰值,峰浓度为3.20μg·mL^-1,T_1/2β约为140min。     

人血浆中尼莫地平的毛细管气相色谱电子捕获检测法及药代动力学

目的：建立测定人血浆中尼莫地平的毛细管气相色谱电子捕获检测法,并用本法研究尼莫地平片剂在健康人体内的药代动力学及相对生物利用度。方法：色谱柱为25 m×0.2 mm ID OV-101熔融石英毛细管柱,检测器为⁶³Ni电子捕获检测器。内标为尼群地平,血浆样品在碱性条件下用正己烷—乙酸乙酯(1∶1)提取。结果：浓度在2.0～150.0 ng.ml^-1与峰面积比呈良好线性关系,γ=0.99989。人血浆中尼莫地平的最低检出浓度为0.1 ng.ml^-1,方法重现性好,提取回收率大于80%。10名志愿者随机交叉口服单剂量100 mg二种国产尼莫地平片剂后,以本法测定其体内过程符合一室模型。二种片剂的AUC_0→∞。C_max,T_max均无显著差异。结论：尼莫地平血药浓度测定结果表明两种尼莫地平片剂生物等效,A片剂对B片剂的相对生物利用度为102.0%。     

大鼠肝微粒体中芬氟拉明对映体氧化代谢的立体选择性研究

目的建立大鼠肝微粒体孵育液中l-和d-芬氟拉明的对映体选择性测定的方法,并用于研究芬氟拉明Ⅰ相代谢的立体选择性。方法将dl-芬氟拉明与大鼠肝微粒体孵育后,采用柱前衍生化毛细管气相色谱-氢火焰离子化检测法进行对映体的分离,测定时间反应曲线和酶动力学参数。结果单个对映体的线性范围是1～50μg/mL;l-和d-芬氟拉明的方法平均回收率分别为92.4%和95.5%,检测限和定量限分别为0.1μg/mL和1.0μg/mL,方法精密度为RSD<10%(n=6)。l-和d-芬氟拉明的K_m,V_max,Cl_int值分别为(0.15±0.01)和(0.27±0.02)μmol.mL^-1,(4.99±0.52)和(9.53±0.87)nmol.g^-1.min^-1,(33.3±3.0)和(35.3±3.1)mL.min^-1.g(蛋白)^-1。结论方法准确可靠,已用于l-和d-芬氟拉明在大鼠肝微粒体孵育液中的代谢及其动力学研究;结果表明,芬氟拉明在大鼠的Ⅰ相代谢具有对映体选择性。     

西红花酸在大鼠的药代动力学研究

目的建立高效液相色谱法测定大鼠血浆中西红花酸的浓度。方法用HPLC法,色谱柱为Hypersil C₁₈柱(5 μm,4.6 mm×200 mm),流动相为甲醇-水-冰醋酸(75∶24.5∶0.5),流速1.0 mL·min^-1,柱温30℃,检测波长423 nm。结果西红花酸浓度0.49～7.87 μg·mL^-1与峰面积呈良好的线性关系(γ=0.9996),最低检测浓度为0.14 μg·mL^-1(S/N=3)。样品的平均加样回收率为105.2%。日内、日间精密度的RSD均小于5%。不同时间、不同温度及冻融处理的稳定性考察,RSD分别为7.4%,4.9%和3.3%。结论本法稳定、简单、可靠,可用于西红花酸血药浓度分析及其药代动力学研究。     

乙氧苯柳胺的测定及其在大鼠的药代动力学研究

目的：建立乙氧苯柳胺在大鼠血清中的测定方法,并研究乙氧苯柳胺软膏（ETO）在大鼠体内的药代动力学。方法：采用HPLC方法测定大鼠涂抹ETO后血清中的乙氧苯柳胺的浓度。色谱柱为C₁₈柱,250 mm×4.6 mm(L×ID), 10 μm,流动相为甲醇-水(含0.05%磷酸)=63∶37,流速为1.1 mL.min^-1,检测波长: UV 290 nm。 结果：在10～500 ng.mL^-1范围内具良好线性关系,方法回收率为94.5%～104.8%。大鼠皮肤涂抹ETO 100,200和400 mg.kg^-1后, C_max和AUC均与剂量呈正相关。结论：本法简便、准确、重现性好,可用于ETO的药代动力学研究。在100～400 mg.kg^-1范围内,ETO的吸收和消除呈一级动力学特征。     

离子对反相高效液相色谱法测定百草枯血药浓度

目的：建立离子对反相高效液相色谱法测定血浆中百草枯的浓度。方法：采用Discovery C₁₈色谱柱;流动相为乙腈-庚烷磺酸钠溶液（12∶88）;10%三氯醋酸直接沉淀血浆蛋白;流速为1.0 mL·min^-1;检测波长为258 nm。结果：定量下限为0.1 μg·mL^-1,线性范围为0.1～10.0 μg·mL^-1,批内和批间RSD分别为3.77%和10.60%,平均回收率大于89.31%。结论：本法具有灵敏、准确、稳定、操作简便等优点,符合生物样本测定的要求,适用于测定人血浆中百草枯的浓度。     

尼莫地平在人肝微粒体内的代谢

:采用人肝微粒体在体外研究尼莫地平 (Nim)在人体内的代谢物及代谢途径 . Nim在人肝微粒体内被迅速代谢成 3个代谢物 ,分别是 Nim二氢吡啶环脱氢代谢物 M1,二氢吡啶环侧链脱甲基代谢物M2 ,二氢吡啶环脱氢及其侧链脱甲基代谢物 M3.Nim在人肝微粒体中的最初的两步代谢反应是其二氢吡啶环脱氢氧化及其侧链脱甲基反应 ,两者的代谢产物可以被进一步代谢为代谢物 M3.CYP3A的特异性抑制剂醋竹桃霉素和酮康唑可以抑制Nim的二氢吡啶环脱氢氧化及其侧链脱甲基反应 ,使 Nim的代谢速率明显下降 ,结果提示 CYP3A参与了 Nim在人肝微粒体内的代谢     

反相高效液相色谱法测定大鼠血浆中左旋黄皮酰胺及其主要代谢产物和药代动力学

目的　探讨左旋黄皮酰胺［（-）clau］及其主要代谢产物6-OH-clau在大鼠体内的药代动力学。方法　建立了RP-HPLC-UV法。固定相为Kromasil-100 C₁₈（5 μm）色谱柱,流动相为乙腈-甲醇-水（21∶16.5∶62.5), DM-9384作内标,氯仿作提取溶剂。结果　测得（-）clau的回收率为96.91%～105.74%,日内、日间RSD低于7%,最低检测浓度为24 ng.mL^-1,（-）clau和6-OH-clau分别在0.047～968 μg.mL^-1和0.049～200 μg.mL^-1,线性关系良好(γ=0.999); （-）clau和6-OH-clau血浆浓度-时间曲线符合二室开放模型,同时求得两者的药代动力学参数。结论　数据表明（-）clau在大鼠血浆中的分布、代谢转化和消除均较快。     

In vitro metabolism of a triclyclic alkaloid (M445526) in human liver microsomes and hepatocytes

The in vitro metabolism of M445526 (ZD6126 phenol) was investigated by incubating [¹⁴C]-M445526 at a concentration of 10?µg?ml^?1 with human hepatic microsomes (4?mg?ml^?1) or human hepatocytes (2?×?10⁶ cells?ml^?1) for up to 180?min. Following incubation with microsomes and hepatocytes, up to 78% and 40% of [¹⁴C]-M445526 was metabolized after 180 and 120?min, respectively. High-performance liquid chromatography (HPLC) with radiochemical detection confirmed extensive metabolism of [¹⁴C]-M445526 by microsomes and hepatocytes. Mass spectrometry and ¹H-NMR spectroscopy enabled structural identification of up to eight metabolites. Human liver microsomes formed one major (O-desmethyl) and three minor (a further O-desmethyl and two different hydroxylated) phase I metabolites. Human hepatocytes produced one major metabolite, a sulphate conjugate of the major O-desmethyl metabolite formed by microsomes. Four minor metabolites were also formed, primarily by O-demethylation with subsequent glucuronidation. Taken collectively, [¹⁴C]-M445526 underwent extensive in vitro metabolism by human liver fractions. These data were confirmed by subsequent human in vivo studies.     

气-质联用法测定吉非贝齐血药浓度及药代动力学研究

吉非贝齐（ｇｅｍｆｉｂｒｏｚｉｌ）是一种苯氧乙酸类化合物,可抑制外周脂肪分解,降低肝游离脂肪水平,从而减少肝脏产生甘油三酯,通过降低甘油三酯和总胆固醇而达到降血脂效果,并能有效地提高高密度脂蛋白水平,减少冠心病的发生率和死亡率。目前报道的测定方法多用ＨＰＬＣ法［１～４］,但由于吉非贝齐须在酸性条件下提取,血浆中内源性物质易干扰分析,使方法的准确度受到影响。本文建立的气相色谱质谱联用法检测血浆中的吉非贝齐浓度,用高效毛细管柱分离,选择离子检测（ＳＩＭ）,改善了色谱分离,避免了血浆中杂质的干扰。用…     

西尼地平在人肝微粒体内代谢及代谢抑制

目的：在体外研究西尼地平在人肝微粒体内的代谢及选择性细胞色素P-450（CYP450）酶抑制剂对其代谢的影响。方法：在体外用人肝微粒体研究西尼地平的代谢,并用CYP450酶的选择性抑制剂探讨其对西尼地平代谢的影响及人肝微粒体中参与西尼地平二氢吡啶环脱氢代谢的CYP450酶。结果：西尼地平在人肝微粒体内被迅速代谢物M1,二氢吡啶环侧链脱甲基代谢物M2,二氢吡嘧环脱氢及其侧链脱甲基代谢物M3,酮康唑竞争性地抑制西尼地平二氢吡啶环的脱氢代谢,同时降低西尼地平的代谢速率,而其它抑制剂,奎尼丁,α-Naphthoflavone,diethyldithiocarbamate,sulfaphenazole和tra-nylcypromine对西尼地平二氢吡啶环的脱氢代谢没有明显的影响。结论：西尼地平在人肝微粒体内被迅速代谢,其二氢吡啶环的脱氢代谢是其代谢的关键性的步骤,CYP3A作为主要的CYP酶参与了西尼地平二氢吡啶环的脱氢代谢,CYP3A的抑制剂可能会与西尼地平发生代谢相互作用。     

Characterisation of the human liver in vitro metabolic pattern of artemisinin and auto-induction in the rat by use of nonlinear mixed effects modelling

Aims: The aims of the study were to characterise the metabolic pattern of artemisinin in human and rat liver microsomes and to assess the magnitude of auto‐induction in the rat. Methods: ¹⁴C‐artemisinin was incubated with human liver microsomes and with liver microsomes from rats pretreated with oral artemisinin or placebo. The metabolic fate of ¹⁴C‐artemisinin in microsomes from human B‐lymphoblastoid cell lines transformed with CYP2A6, CYP2B6 and CYP3A4 was also investigated. The human liver microsome data and the rat liver microsomes data were analysed by nonlinear mixed effects modelling and naïve pooling using NONMEM, respectively. Results: Four metabolites were radiometrically detected in experiments with rat liver microsomes. The model that best described the data involved three primary metabolites of which one metabolite was further metabolised to a secondary metabolite. The formation of the four metabolites was induced 2.8, 7.2, 4.8 and 2.5‐fold, respectively, in liver microsomes from rats pre‐treated with artemisinin. Three metabolites were formed in human liver microsomes; having the same retention times as three of the metabolites formed in the rat. The final model consisted of two primary metabolites and a secondary metabolite with CYP2B6 and CYP2A6 influencing the formation rates of the major and minor primary metabolites, respectively. Conclusions: CYP2B6 and CYP2A6 activities described variability in the formation of the major and minor primary metabolites, respectively, in human liver microsomes. All artemisinin metabolic pathways in rat liver microsomes were induced in artemisinin pretreated animals. We suggest modelling as a method for the discrimination and detection of more complex metabolic patterns from in vitro metabolism rate data. Copyright © 2002 John Wiley & Sons, Ltd.     

氮烯乙茶在大鼠、犬、猴肝亚细胞成分中的生物转化

目的:利用肝亚细胞成分研究I类抗癌新药氮烯乙茶的生物转化及其种属差异。方法:以高效液相色谱法检测肝9 000 ×g 上清液(S-9) 和微粒体中氮烯乙茶及其代谢产物的浓度。结果:大鼠、犬、猴肝S-9中氮烯乙茶的固有清除率(CL_int) 分别为14-9,10-4,30-4 μL·min^-1·mg^-1 protein,代谢产物为7-乙基-8-氨基茶碱(7-ethyl-8-aminotheophylline,EAT),氮烯乙茶在肝的生物转化部位在微粒体。结论:预计氮烯乙茶在生物转化途径上的种属差异较小;肝亚细胞成分是研究药物代谢及种属差异的较好体外模型。