外源性野生型p53基因抑制裸小鼠体内人白血病细胞的生长

目的探讨野生型ｐ５３基因对体内生长的白血病细胞的抑制作用。方法采用直接注射法向裸小鼠体内ＨＬ６０－ｎ和Ｋ５６２－ｎ细胞移植瘤注射编码人野生型ｐ５３的重组逆转录病毒，使其在这两种细胞中表达，并导致其编程性细胞死亡。结果裸小鼠在接种ＨＬ６０－ｎ或Ｋ５６２－ｎ细胞后２４ｈ，于接种部位连续７天注射编码野生型ｐ５３的逆转录病毒，移植瘤发生的潜伏期较对照组明显延长。结论直接注射转移野生型ｐ５３基因能有效地抑制裸小鼠体内人白血病细胞的生长。     

腺病毒介导野生型p53基因对人白血病细胞系HL-60、K_(562)生长的抑制作用

目的探索肿瘤抑制基因ｐ５３对人白血病细胞系的生长抑制作用和促凋亡作用。方法选用含野生型ｐ５３基因的重组腺病毒载体,体外感染人白血病细胞系ＨＬ－６０、Ｋ５６２。通过细胞生长曲线,ＤＮＡ检测及流式细胞仪分析检测转染细胞的增殖受抑制和细胞凋亡的发生。结果ＰＣＲ检测转染后ＨＬ－６０和Ｋ５６２细胞ｐ５３ｃＤＮＡ表达。转染后Ａｄ／ｐ５３病毒对ＨＬ－６０细胞和Ｋ５６２细胞的生长有抑制作用。随着Ａｄ／ｐ５３病毒浓度加大,ＨＬ－６０和Ｋ５６２细胞的ＯＤ值越低即生长抑制程度越大。经Ａｄ／ｐ５３病毒转染的ＨＬ－６０和Ｋ５６２细胞均有明显的细胞凋亡峰出现,对照细胞则无。细胞周期分析无明显异常发现。结论重组腺病毒载体介导的野生型ｐ５３基因在体外对人白血病细胞系ＨＬ－６０和Ｋ５６２的生长有抑制作用,能导致细胞凋亡的发生。     

腺病毒介导野生型p53基因对人白血病细胞系HL—60,K562生长的抑制作用

目的 探索肿瘤抑制基因Ｐ５２对人白血病细胞系的生长抑制作用和促凋亡作用。方法 选用含野生型ｐ５３基因的重组腺病毒载体，体外感染人白血病细胞系ＨＬ－６０，Ｋ５６２。通过细胞生长曲线，ＤＮＡ检测及流式细胞仪分析检测转染细胞的增殖受抑制和细胞凋亡的发生。结果 ＰＣＲ检测转染后ＨＬ－６０和Ｋ５６２细胞ｐ５３ ｃＤＮＡ表达。     

反义寡聚脱氧核苷酸对白血病K562细胞株生物特性的影响

目的：探讨反义核酸对白血病Ｋ５６２细胞株的影响。方法：用人工合成的ｂｃｒ３／ａｂ１２反义寡聚脱氧核苷酸（ＡＳＯ－ｂ）及无义寡聚脱氧核苷酸（Ｎ－ＯＤＮ）处理人急性红白血病细胞株Ｋ５６２细胞系，以观察Ｋ５６２细胞的生长及其ｂｃｒ３／ａｂ１２癌基因的表达。结果：ＡＳＯ－ｂ能抑制体外培养的Ｋ５６２细胞的生长（抑制率为５３．８３±１０．７８，Ｐ＜０．０５），集落形成（４０μＭ的ＡＳＯ－ｂ的抑制率为８８．９，Ｐ＜０．０５），ＤＮＡ及Ｐ２１０蛋白的合成（１２ｈ抑制率分别为７９．６８±１３．５３，６０．３３，Ｐ＜０．０５）；而对照组对Ｋ５６２细胞则无明显的影响。结论：提示ｂｃｒ３／ａｂ１２癌基因是维持Ｋ５６２细胞恶性生长表型的主要因素，也为慢性髓系白血病的治疗指出了新的方向。     

外源p53对人肺癌细胞生长的抑制

目的 观察外源性野外型ｐ５３对有ｐ５３基因突变的人肺癌细胞系生长的影响。方法 用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ及ＤＮＡ测序，选择ｐ５３突变的人肺巨细胞癌系８０１－Ｄ。构建野生型ｐ５３表达质粒ＰＺｉＰ－ｐ５３。用基因枪介导外源基因。经Ｇ４１８筛选得到转染细胞系８０１－Ｄ－ｐ５３。用ＰＣＲ检测外源基因，观察转染细胞恶性生长的变化。结果 转染细胞系８０１－Ｄ－ｐ５３体外长期传代有外源性ｐ５３基因存在，转染细胞生长明显     

糖皮质激素诱导p53基因转染的人胃粘膜上皮细胞的凋亡反应

为了研究糖皮质激素对表达不同ｐ５３基因的人胃粘膜上皮细胞所诱导的凋亡反应，将外源性的野生型和突变型ｐ５３基因导入体外培养的人胃粘膜上皮细胞系ＧＥＳ－１细胞中。在浓度为０．２～０．８ｇ／Ｌ的氢化可的松诱导下，转染细胞发生凋亡，但转染有不同的ｐ５３基因的细胞所发生的凋亡反应是不同的。实验结果表明，转染野生型ｐ５３基因的ＧＥＳ－１细胞凋亡反应明显强于突变型ｐ５３基因转染的细胞。由此推测，当胃上皮细胞处于炎症状态时，体内自生分泌的糖皮质激素在抑制炎症反应的同时亦诱导上皮细胞的凋亡。而当胃上皮细胞的ｐ５３基因发生了突变，则在糖皮质激素作用下使得带有ｐ５３基因突变细胞具有选择性生长优势，促进了肿瘤演进     

野生型p53基因抑制膀胱癌细胞株HTB9生长及其机理的研究

目的：探讨野生型ｐ５３基因抑制膀胱癌生长的作用及其机理,方法：将野生型ｐ５３基是组腺病毒载体转染入膀胱癌细胞ＨＴＢ９,观察细胞生长曲线,细胞周期变化及ＤＮＡ合成情况,应用ＲＴ－ＰＣＲ检测ｐ２１ｍＲＮＡ水平,应用免疫组化法检测ｐ２１蛋白表达水平。结果：野生型ｐ５３基因导入可抑制ＨＴＢ９细胞生长和ＤＮＡ合成（ＡｄＣＭＶｐ５３）,流式细胞仪显示,ＤＮＡ合成前期或静止静的细胞比例增高,而合成期细胞比例下降,另外,ＡｄＣＭＶｐ５３还提高了ｐ２１的ｍＲＮＡ和蛋白水平,结论：腺病毒载体介导的野生型ｐ５３基因转梁对于膀胱可能是很有前途的基因治疗方法。     

腺病毒介导的p53基因对喉癌细胞生长的抑制作用

目的探索ｐ５３基因在喉癌基因治疗方面的可行性。方法以人喉癌细胞系Ｈｅｐ－２为实验对象,将载有人野生型ｐ５３ｃＤＮＡ并含巨细胞病毒（ＣＭＶ）启动子的重组腺病毒（Ａｄ５ＣＭＶ－ｐ５３）感染Ｈｅｐ－２细胞及肿瘤组织,体内外实验观察Ａｄ５ＣＭＶ－ｐ５３对Ｈｅｐ－２细胞生长的影响。结果当Ａｄ５ＣＭＶ－ｐ５３在１００ＭＯＩ效靶比时,全部Ｈｅｐ－２细胞得到转染。感染２天后ｐ５３蛋白表达达到高峰,Ｈｅｐ－２生长受到明显的抑制。Ａｄ５ＣＭＶ－ｐ５３感染Ｈｅｐ－２细胞在裸鼠中失去致瘤性。瘤内注射Ａｄ５ＣＭＶ－ｐ５３后,荷瘤裸鼠的肿瘤体积明显减小。结论Ａｄ５ＣＭＶ－ｐ５３转导野生型ｐ５３基因可能是一种有效的喉癌基因治疗途径。     

p53基因对鼻咽癌细胞株CNE－3裸鼠致瘤抑制作用的研究

分别将野生型和突变型ｐ５３基因导入鼻咽癌的体外培养细胞系ＣＮＥ－３．裸鼠致瘤试验表明，导入野生型ｐ５３基因的细胞系，肿瘤生长速度明显低于对照细胞系及导入突变型ｐ５３基因的细胞系；导入突变型ｐ５３基因的细胞系肿瘤生长速度最快；导入野生型ｐ５３基因的细胞系肿瘤生长速度最慢，而且肿瘤出现时间也较导入突变型ｐ５３的细胞及对照细胞晚１～２周。这说明野生型ｐ５３基因能有效地抑制肿瘤的生长，而实变型ｐ５３基因则可以促进肿瘤生长。这是首次有关ｐ５３基因对鼻咽癌细胞作用的报道。这一研究更进一步说明了ｐ５３基因的功能，对于鼻咽癌发生机理的探讨以及肿瘤的防治具有重要意义。     

外源性p53基因增加卵巢癌细胞对顺铂的敏感性

 目的 探讨外源性ｐ５３基因转染对人卵巢癌细胞株的化疗敏感性的影响。方法用脂质体介导的转染技术，将人野生型ｐ５３基因的真核表达载体导入不表达ｐ５３的卵巢癌ＳＫＯＶ－３细胞中，经Ｇ４１８筛选，Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ鉴定后，观察其对顺铂作用后的 ＳＫＯＶ－３细胞的集落形成及凋亡的影响。结果 外源性Ｐ５３基因在转染细胞中有效表达，并增强了顺铂对ＳＫＯＶ－３细胞集落形成的抑制作用及促进了顺铂诱导的细胞凋亡。结论 外源性ｐ５３基因能增加卵巢癌细胞对顺铂的敏感性，两者联合作用能更大程度地杀灭肿瘤细胞。     

抑癌基因p16INK4a与p53抑制白血病细胞株生长作用的比较

 目的 比较野生型p16INK4a、p53抑癌基因的表达对白血病细胞株K562和HL60的生长抑制。方法 采用脂质体介导野生型p16INK4a、p53抑癌基因转染K562、HL60细胞并进行G418筛选，免疫印渍检测p16INK4a、p53基因的表达，通过细胞生长曲线检测细胞活力，流式细胞仪进行细胞DNA周期分析及细胞凋亡分析，采用联苯胺氧化试验检测K562细胞的分化。结果 转染后p53、p16INK4a在K562及HL60细胞中表达；与对照细胞相比，实验组细胞生长受到明显的抑制，G1期细胞数增加，S期细胞减少。与p16INK4a相比，抑癌基因p53使细胞表达Annexin V增加，显示出更强的致凋亡现象，尤其在HL60细胞株。结论 抑癌基因p16INK4a、p53能有效抑制白血病细胞株的生长，可能更适合复发、难治性白血病的基因治疗。     

STI571诱导K562细胞红系分化及其机制的初步研究

目的 :探讨 STI5 71诱导 K5 6 2细胞向红系分化的可能机制。方法 :单用 STI5 71及联用信号传导阻滞剂处理 K5 6 2细胞 ,采用联苯胺染色法检测 K5 6 2细胞向红系分化比例变化 ,流式细胞术检测细胞周期改变 ,Western blot检测 Rb、p- Rb、Erk、p- Erk、p2 7蛋白改变 ,RT- PCR检测 GATA1、GATA2、p2 7m RNA水平变化。结果 :STI5 71诱导 K5 6 2细胞向红系分化 ,呈时间剂量依赖性改变。K5 6 2细胞经 STI5 71处理后 1 2 h即可发生 G1 期阻滞 ,随时间延长趋于明显 ,伴随 p2 7,p- Rb水平下降。p- Erk水平升高。STI5 71与信号传导阻滞剂 U0 1 2 6联合应用后 ,K5 6 2细胞联苯胺阳性率明显下降 (P<0 .0 5 )。STI5 71作用后 ,GATA1、GATA2、m RNA水平未见明显变化。结论 :STI5 71通过上调p2 7,降低 p- Rb水平 ,诱导 K5 6 2细胞发生 G1 期阻滞 ,活化 Erk促使 K5 6 2细胞向红系分化     

三种鼠不同结构p53minigene瞬时转染H1299细胞对其生长的影响

目的：比较一个位点不同碱基的鼠p53minigene对细胞生长的影响。方法：三种小鼠p53minigene[野生型（Arg）、假野生突变型（Leu)和突变型（His)]真核表达载体,由LipofectAMINE介导转染P53缺失的H1299细胞,在转染后不同时间点收集细胞,利用细胞计数、流式细胞术、蛋白免疫印迹等方法比较三种P53对细胞体外生长的影响。结果：在染后不同时间点,野生型和假野生突变型P53均能诱导细胞凋亡和周期阻滞,并可转录激活Bax,p21^waf1和Mdm-2,突变型则无以上效应。结论：野生型和假野生突变型P53具有诱导肺癌细胞凋亡和引起周期阻滞的功能,。这种作用可能是通过转录激活Bax和p21^WAF1而实现,Mdm-2与野生型和假野 生型P53可以反调节,172Len和172His两种突变表现出截然不同的生物学效应,支持P53基因存在保留野生型抑瘤功能突变方式的观点。     

柚皮素对人类白血病K562细胞生长的作用及其机制探讨

 目的 研究柚皮素（naringenin）对人类慢性髓系白血病K562细胞株的作用及其机制。方法 体外培养K562细胞,MTT法检测柚皮素在不同浓度、不同时间点对K562细胞生长的影响;用免疫组织化学的方法检测细胞增殖核抗原（PCNA）的表达,并计算PCNA标记指数（LI）;显微镜和透射电镜下观察细胞形态变化;流式细胞仪分析细胞周期分布和细胞凋亡率;用RT-PCR和Western blot的方法检测K562细胞中p53、p21WAF1 mRNA和蛋白表达的变化。结果 柚皮素对K562细胞增生有明显抑制作用,作用24、48和72 h后的半数抑制浓度（IC50）分别为455 μmol／L、225 μmol／L和175 μmol／L;PCNA在柚皮素实验组的表达显著低于对照组;普通光镜以及电镜观察均见实验组细胞显著的增生抑制和典型的细胞凋亡形态学改变;流式细胞仪分析证实柚皮素能使K562细胞聚积在G0／G1期、S期细胞减少,凋亡率增加;RT-PCR和Western-blot检测表明,实验组细胞表达p21 mRNA和蛋白质呈浓度和时间依赖性升高,而p53变化不明显。结论 柚皮素对K562细胞具有明显的增生抑制作用,细胞周期阻滞和诱导凋亡可能是其重要机制,而非p53依赖性的p21上调可能是其发挥作用的重要途径。     

羟基脲诱导的K562细胞分化中PBK/TOPK的表达变化及其意义

目的研究PBK／TOPK在HU（羟基脲）诱导白血病细胞K562的分化时的表达及意义。方法用不同浓度的羟基脲对K562细胞进行诱导分化实验,通过联苯胺、吉姆萨-瑞氏染色和流式细胞仪证实其分化方向;用Western blot法检测PBK／TOPK在K562细胞分化前后表达的变化。结果400μmol／L的羟基脲对K562作用4d后具有良好的诱导分化效果,并诱导其向红系分化,且PBK／TOPK在K562细胞向成熟分化后表达不变,而Pho-PBK／TOPK和Pho-p38有少量增加。结论HU能抑制白血病细胞K562的增殖,并诱导其向红系分化,在此过程中,有激活的PBK／TOPK参与,推测很可能通过磷酸化下游分子p38而起作用。     

更昔洛韦对慢性粒细胞白血病细胞生长和分化影响及其机制研究

目的：探讨更昔洛韦（ＧＣＶ）对人白血病细胞的抗增殖和诱导分化作用。方法：ＧＣＶ加入Ｋ５６２细胞培养４ｄ,测定其活细胞数目、克隆形成率、联苯胺染色阳性率,观察光镜形态、组织化学染色,并地行流式细胞分析、端粒酶检测。结果：在ＧＣＶ的作用下,Ｋ５６２细胞地增殖受抑,生长分数降低,并且向具有合成血红蛋白能力的细胞分化。结论：ＧＣＶ对Ｋ５６２细胞具有抑制增殖和诱导分化作用,该结果为慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）的治疗探索新的途径。     

Restoration of p53 gene function in 12-O-tetradecanoylphorbor 13-acetate-resistant human leukemia K562/TPA cells

The human leukemia K562 cell line does not express wild-type p53 protein. Due to the loss of one p53 allele and an insertion mutation in exon 5 of the other allele resulting in a frameshift mutation, K562 cells express a truncated p53 protein of 148 amino acids. A human leukemia phorbol ester-resistant subline, K562/TPA, is cross-resistant to some anticancer agents. A remarkable difference in cell cycle progression at G1/S phase was observed in the synchronised K562/TPA cells as compared with K562 cells. Southern blot and DNA sequence analysis revealed no mutation in exon 5 of the p53 gene in K562/TPA cells. p21Cip1 expression was also restored in K562/TPA cells confirming that the reversal of this p53 gene mutation restored wild-type p53 function in these cells. This is a unique report describing reversal of p53 gene mutation by drugs. This was associated with the expression of wild-type p53 mRNA and protein in K562/TPA cells. The K562/TPA cell line may provide a very useful tool for the investigation of the relationship between p53 status and chemosensitization.     

Inhibitory effect of c-Myc on p53-induced apoptosis in leukemia cells. Microarray analysis reveals defective induction of p53 target genes and upregulation of chaperone genes

We have previously demonstrated that c-Myc impairs p53-mediated apoptosis in K562 human leukemia cells, which lack ARF. To investigate the mechanisms by which c-Myc protects from p53-mediated apoptosis, we used K562 cells that conditionally express c-Myc and harbor a temperature-sensitive allele of p53. Gene expression profiles of cells expressing wild-type conformation p53 in the presence of either uninduced or induced c-Myc were analysed by cDNA microarrays. The results show that multiple p53 target genes are downregulated when c-Myc is present, including p21WAF1, MDM2, PERP, NOXA, GADD45, DDB2, PIR121 and p53R2. Also, a number of genes that are upregulated by c-Myc in cells expressing wild-type conformation p53 encode chaperones related to cell death protection as HSP105, HSP90 and HSP27. Both downregulation of p53 target genes and upregulation of chaperones could explain the inhibition of apoptosis observed in K562 cells with ectopic c-Myc. Myc-mediated impairment of p53 transactivation was not restricted to K562 cells, but it was reproduced in a panel of human cancer cell lines derived from different tissues. Our data suggest that elevated levels of Myc counteract p53 activity in human tumor cells that lack ARF. This mechanism could contribute to explain the c-Myc deregulation frequently found in cancer.