PML生长抑制因子过表达抑制前列腺癌细胞生长和致瘤能力的实验研究

为探讨ＰＭＬ（Ｐｒｏｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃｌｅａｋｅｍｉａ）生长抑制因子对人前列腺癌细胞的作用，采用ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ介导基因转染技术将ＰＭＬ基因和Ｇ４１８抗性基因联合导入体外培养的人前列腺癌细胞，经Ｇ４１８筛选、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ杂交检测出ＰＭＬ蛋白过表达细胞克隆，经体外生长抑制试验和裸鼠体内致瘤能力试验，观察ＰＭＬ过表达对前列腺癌细胞体外生长和裸鼠体内致瘤能力的影响。结果证实ＰＭＬ基因被成功地导入前列腺癌细胞中并得到高效表达。过表达ＰＭＬ蛋白的细胞体外生长能力和裸鼠体内致瘤能力明显低于对照细胞。提示ＰＭＬ生长抑制因子过表达能够有效地抑制前列腺癌细胞的体外生长和裸鼠体内的致瘤能力。     

腺病毒载体介导的PML生长抑制因子对前列腺癌细胞生长和致瘤能力的 …

为探讨用腺病毒载体携带ＰＭＬ基因作为前列腺癌基因治疗的可能性，应用重要组人携带ＰＭＬ基因腺癌感染培养的前列腺癌细胞，观察表达ＰＭＬ蛋白的癌细胞与对照组癌细胞的体外生长的裸鼠生长和裸鼠体内致瘤能力变化，对荷瘤裸鼠瘤体周围注射Ａｄ－ＰＭＬ，观察治疗组和对照组肿瘤生长的变化。结果显示，感染Ａｄ－ＰＭＬ后肿瘤生长速度明显减慢。证实了ＰＭＬ是一种生长抑制因子，提示其可能被应用于前列腺癌的基因治疗研究 。     

PML生长抑制因子在前列腺癌组织中的表达及其意义

应用免疫组化方法检测了４０例不同分化程度的前列腺癌组织中早幼粒细胞白血病基因（ＰＭＬ）蛋白的表达变化。结果显示：ＰＭＬ蛋白在癌组织中的表达总水平较其周围的非癌组织中明显减弱，而低分化和未分化癌组织中的表达总水平又较高、中分化癌组织明显减弱，其中一些呈浸润生长的低分化癌组织ＰＭＬ蛋白表达甚至消失。提示ＰＭＬ蛋白表达变化可能和前列腺癌的分化、浸润转移有关。     

腺病毒介导的野生型p53对前列腺癌细胞系PC3M的影响

目的　探讨腺病毒介导的野生型p5 3在前列腺癌基因治疗中的可能性及其机制。　方法　培养前列腺癌细胞系PC3M ,转染腺病毒介导的野生型p5 3,检测其增殖和凋亡水平变化 ,并检测其对bax蛋白及mRNA水平的影响。　结果　腺病毒介导的野生型p5 3可高水平转染入PC3M细胞 ,转染率 95 %。转染后的PC3M细胞增殖受到抑制 ,BrdU吸光度A值 0 .4 96 ,显著低于对照组的 1.4 5 4 ,P <0 .0 0 1;细胞凋亡水平增高 ,凋亡指数 16 .2 5 % ,显著高于对照组的 3.6 0 % ,P <0 .0 0 1。细胞中bax蛋白及mRNA水平皆增高。　结论　腺病毒介导的野生型p5 3可抑制PC3M细胞增殖并促进其细胞凋亡 ,其作用可能是通过促进bax表达而实现的。     

RNAi沉默STAT3基因对人前列腺癌PC3细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的 探讨pSilencer1．0-U6-siRNA-STAT3重组质粒对人前列腺癌细胞PC3裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法 采用裸鼠前列腺癌模型模拟siRNA—STAT3基因治疗实验，观察siRNA—STAT3重组质粒的抗瘤疗效，Western blot法检测重组质粒对STAT3基因表达的影响，HE及Tunel染色方法观察肿瘤组织形态及细胞凋亡情况。结果 肿瘤接种后第49天重组质粒组肿瘤体积为（391±56）mm^3，盐水对照组为（1111±182）mm^3，空质粒对照组为（981±169）mm^3，与对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．01）；重组质粒抑制瘤体内STAT3及pTyr-STAT3基因表达率分别为77％及68％，与对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。HE染色证实重组质粒组出现大片细胞核固缩、破碎等凋亡征象，Tunel染色显示癌组织出现大量细胞凋亡。结论 pSilencer1．0-U6-siRNA-STAT3重组质粒能明显抑制人前列腺癌细胞PC3裸鼠移植瘤的生长，具有良好的应用前景。     

逆转录病毒介导的HSV_1-tk基因疗法对雄激素非依赖性前列腺癌细胞系的杀伤效应

目的　探讨逆转录病毒载体介导单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶 (HSV1 tk)结合环氧鸟苷(GCV) ,对雄激素非依赖性前列腺癌 (C4 2、PC3 )的治疗效果。　方法　通过DNA重组技术构建含tk基因的逆转录病毒载体 ,经转染包装细胞系PA3 17,选择出高病毒滴度的生产细胞系 (VPC) ,PCR、RT PCR检测VPC内HSV1 tk基因的整合和表达。VPC与癌细胞按不同比例混合培养 ,以硫基罗丹明B(SRB)法测定GCV治疗后癌细胞生长情况。　结果　经阳性克隆筛选 ,得到高滴度并能稳定表达HSV1 tk基因的VPC细胞。逆转录病毒载体介导的HSV1 tk基因对雄激素非依赖性前列腺癌C4 2、PC3均具有杀伤效应 ,光镜下没有发现凋亡小体 ;经比较 ,HSV1 tk基因对PC3的治疗效果最好 ,差别具有显著性意义。　结论　逆转录病毒载体介导的HSV1 tk基因对雄激素非依赖性前列腺癌细胞有杀伤作用 ,其机制是通过细胞毒作用     

腺病毒载体介导的PML生长抑制因子用于胆囊癌基因治疗的实验研究

目的 探讨腺病毒介导的PML基因对胆囊癌细胞（GBC-SD）的生长抑制作用。方法 用原位杂交和免疫组织化学法分别检测PMI，重组腺病毒的转导效率、GBCSD中PMI，mRNA和蛋白的表达量及表达时间，MTT法检测PML基因转染后GBC-SD的生长状况，观察转染PML基因后GBC-SD的致瘤能力的变化。结果 腺病毒滴度为100MOI时被感染的胆囊癌细胞可达100％，Ad-PML感染的GBC-SD能高效表达PML-mRNA和PML蛋白，表达时间可持续2周以上，PML对GBC-SD体外生长具有明显抑制作用，Ad-PML感染的GBC-SD不能在裸鼠体内形成肿瘤。结论 腺病毒介导的PML基因能在GBC-SD细胞中稳定、高效表达，并能显著抑制GBC-SD细胞的体外生长及其在裸鼠体内的致瘤性，PML有可能用于胆囊癌的基因治疗。     

荷载hTERT基因double-shRNA溶瘤腺病毒对人前列腺癌DU145细胞的杀伤效果

目的 构建荷载hTERT基因double-shRNA溶瘤腺病毒ZD55-double-hTERT,研究其对前列腺癌DU145细胞的杀伤效果。方法 实时荧光定量PCR法检测对hTERT基因的mRNA表达的影响;Western blot检测对前列腺癌细胞hTERT、病毒E1A蛋白表达的影响;MTT法检测对细胞增殖的抑制作用;Hoechst-33342 染色了解不同处理组对前列腺癌细胞凋亡的诱导作用。结果 成功包装病毒ZD55-double-hTERT;RT-PCR和Western blot结果显示：ZD55-double-hTERT组hTERT表达量明显减少,与其他各组比较差异有统计学意义（P＜0.05）,所包装的病毒可以表达E1A蛋白。MTT结果显示：20MOI的各组病毒感染DU145细胞72 h后,ZD55-double-hTERT组细胞存活率为（45.13±3.41）%,显著低于Blank组（81.60±3.31）%、ZD55-hTERT1组（70.51±4.69）%和ZD55-hTERT2组（76.93±1.63）%（P＜0.05）。Hoechst-33342染色结果显示：ZD55-double-hTERT（57.29±4.19）%与Blank（3.29±1.73）%、ZD55-hTERT1（23.14±3.56）%、ZD55-hTERT2（33.38±3.55）%相比,DU145细胞凋亡率明显增加（P＜0.05）。结论 荷载hTERT基因double-shRNA溶瘤腺病毒ZD55-double-hTERT与单靶点溶瘤腺病毒比较,对前列腺癌DUl45细胞hTERT基因的沉默作用增强,抑制增殖和促进凋亡的作用进一步提高。     

腺病毒载体介导的早幼粒细胞白血病基因生长抑制因子诱导胃癌细胞凋亡的机制研究

目的 探讨腺病毒载体介导的早幼粒细胞白血病基因（PML）生长抑制因子诱导胃癌细胞凋亡作用的机制。方法 将人PML全长cDNA插入穿梭质粒pSGCMV，再与腺病毒骨架质粒pPE3共转染293细胞后获得重组病毒。用重组病毒感染胃癌细胞系SGC-7901，采用噻唑蓝比色法、流式细胞术以及免疫细胞化学法对p53和bcl-2在肿瘤细胞内的表达以及细胞凋亡的定性与定量指标进行检测。结果 经腺病毒介导的PML处理的SGC-7901细胞生长受到明显抑制，凋亡细胞发生率升高，且与MOI值呈正相关，MOI值由5增加到20，细胞的生长抑制率从22．4％增加到38．5％，而细胞凋亡率从37．2％增加到49．8％。经腺病毒介导的PML处理的SGC-7901细胞内p53蛋白表达较对照组明显增加，bel-2蛋白的表达则无明显变化。结论 腺病毒介导的PML对胃癌细胞的杀伤主要是通过诱导细胞凋亡，p53蛋白高表达为其诱发胃癌细胞凋亡的机制之一。     

nm23基因在前列腺癌中的表达与癌转移的关系

应用ＬＳＡＢ免疫组织化学染色方法，研究转移抑制基因ｎｍ２３表达产物二磷酸核苷激酶（ＮＤＰＫ）在前列腺癌中的表达及其意义。结果表明，ＮＤＰＫ／ｎｍ２３在前列腺癌中有较高的表达，阳性率为５００％（２０／４０）。无前列腺癌转移者其阳性率为６６７％（１２／１８），有前列腺癌转移者其阳性率为３６４％（８／２２），两者比较差异有显著性（Ｐ＜００５），并与前列腺癌分化程度和临床分期有显著相关。因此，ｎｍ２３基因可能在前列腺癌形成及转移过程中起不同的调节作用，其表达程度与前列腺癌转移呈负相关，有可能成为评价前列腺癌病人预后的一项新指标。     

E-cadherin在前列腺癌细胞中的表达及与预后的关系

目的　探讨上皮细胞粘附因子Ｅｃａｄｈｅｒｉｎ 在前列腺癌组织中的表达及其与前列腺癌预后的关系。　方法　采用免疫组织化学染色法检测４２ 例前列腺癌标本Ｅｃａｄｈｅｒｉｎ 的表达。　结果　４０ ．５ ％ 表达阳性，４２ ．８ ％ 表达不同程度下降，１６．７ ％ 表达阴性。肿瘤恶性程度越高，其表达异常所占比率越高。确诊时即已发现肿瘤转移和随访中相继出现转移的患者Ｅｃａｄｈｅｒｉｎ 表达下降比率均高于全组，分别为８３ ．３ ％ 和７７ ．７％ 。　结论　Ｅｃａｄｈｅｒｉｎ 在前列腺癌组织中表达异常的比率随着肿瘤分级的升高而增加，Ｅｃａｄｈｅｒｉｎ 的表达状况对前列腺癌的预后有一定参考价值     

前列腺肿瘤中雄激素受体基因突变的研究

为了探讨雄激素受体基因突变与前列腺癌和前列腺增生症发生发展的关系，采用多聚酶链反应单链构象多态分析技术对未经治疗的２０例前列腺癌和２０例前列腺增生症组织中雄激素受体基因第８外显子突变情况进行检测。结果：在２例晚期前列腺癌和１例前列腺增生症组织中检出雄激素受体基因第８外显子突变，２例晚期前列腺癌患者经内分泌治疗后均在９个月内复发。结果认为：前列腺癌中雄激素受体基因突变可能是不常见的，但雄激素受体基因突变与前列腺癌对内分泌治疗产生抵抗关系密切；对雄激素受体基因突变与前列腺增生症的关系有必要作进一步研究。     

p16基因修饰的小鼠肾癌细胞体内致瘤性观察

目的　探讨 p16基因修饰后小鼠肾癌细胞体内致瘤性的变化。　 方法　将携带 p16基因腺病毒体外转染的小鼠肾癌Renca细胞 ,p16基因修饰的肾癌细胞、野生型肾癌细胞及对照基因LacZ修饰的肾癌细胞分别接种于小鼠皮下 ,观察肿瘤生长情况及小鼠存活时间 ,每组 10只小鼠。　结果　经p16基因修饰的肾癌细胞在小鼠体内出现肿瘤的时间在Adp16基因实验组比野生型对照组及AdLacZ对照组晚 5天 ,且肿瘤生长缓慢 (P <0 0 5 )。小鼠存活时间 :野生型对照组为 (2 7.0±2 2 )d ,AdLacZ组为 (2 9.0± 2 .5 )d ,Adp16基因实验组为 (5 2 .0± 3 .4)d ,并有 3只小鼠长期存活。肿瘤局部 p16蛋白表达测定显示p16基因已转入肿瘤细胞 ,并在癌体内有效表达。　 结论　p16基因的导入能降低小鼠肾癌细胞的体内致瘤性 ,显著延长荷瘤小鼠的存活期。     

人抑癌基因PTEN对前列腺癌细胞系生物学行为的影响

目的　探讨外源性人抑癌基因PTEN表达对前列腺癌细胞系LNCaP、DU 14 5细胞增殖和侵袭转移能力的影响。　方法　利用携带人PTEN基因的可调控性腺病毒 (Ad PTEN ) ,体外转染人前列腺癌细胞系LNCaP、DU 14 5,RT PCR、Westernblot检测目的基因不同水平的表达 ,通过细胞生长试验、流式细胞仪分析技术以及Boyden小室法检测LNCaP、DU 14 5转染前后细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡和细胞体外侵袭力的变化。　结果　转染Ad PTEN后LNCaP、DU 14 5细胞的PTEN表达由阴性转为阳性 ,转染后对LNCaP、DU 14 5细胞生长有抑制作用 ,阻滞于G0 ～G1期 ,早期细胞凋亡率增加 ,LNCaP细胞 (6.89± 0 .51) % ;DU14 5细胞 (5.44± 1.13 ) % ,与对照组相比差异有显著性 ,Boyden小室法检测转染后体外侵袭力受到明显抑制。 　结论　重组腺病毒介导的人PTEN基因在体外对前列腺癌细胞系LNCaP、DU 14 5的细胞增殖和体外侵袭力有明显抑制作用 ,可望作为前列腺癌基因治疗的有效工具     

急性早幼粒细胞白血病基因生长抑制因子在前列腺癌和前列腺增生组织中的表达及意义

目的：探讨急性早幼粒细胞白血病基因(PML)在人类前列腺癌(PCa)组织、癌周围组织以及前列腺增生症(BPH)前列腺组织中的表达及意义。方法：应用免疫组化方法检测23例PCa标本、38例BPH组织标本中PML的表达情况。结果：BPH组织中阳性表达共35例，弱阳性表达2例，总阳性表达率97．37％，PCa组织中阳性表达l例，弱阳性表达8例，总阳性表达率39．13％，两者差异有显著性意义(P＜0．05)。PML在癌组织中表达比癌旁组织中表达明显降低(P＜0．05)。而PML在癌旁组织和增生组织中表达基本一致。结论：PML在人类PCa组织中比良性BPH组织中表达明显减弱，而且与PCa的病理分级有关。提示PML可能是一种广谱的生长抑制因子和转录抑制因子，它的表达减弱或丢失可能与肿瘤的发生、发展及转移有关。     

前列腺癌的诊断方法及其临床意义

为提高前列腺癌的早期诊断水平，对１９８５～１９９５年收治的３６例前列腺癌根据临床症状、直肠指检、Ｂ超、ＣＴ、ＭＲＩ、活检及瘤标检查等，分析其诊断价值。结果：临床症状中排尿不畅３３例（９１．６％），尿潴留１５例（４１．６％），血尿１２例（３３．３％），假性尿失禁、消瘦、阴囊水肿４例（１１．１％）；直肠指检可触及前列腺质地坚硬２８例（７７．７％），腺体表面高低不平１１例（３０．５％），单纯性结节２６例（７２．２％）。Ｂ超３４例，腺体增大凸入膀胱８例（２３．５％），内部强回声４例（１１．７％），低回声１２例（３５．２％），两侧叶不对称、伴高低不平１３例（３８．２％），浸润膀胱壁和三角区６例（１７．６％），侵犯双侧精囊和直肠壁３例（８．８％）；活检阳性２４例（９２．３％），ＰＳＡ检查２３例，均高于正常值。结果认为，临床症状、影像学检查及瘤标ＰＳＡ测定是诊断前列腺癌的重要依据。