肺腺癌原发灶及其胸腔渗出液中MMP-2、E-cadherin和β-catenin的表达

目的　研究基质金属蛋白酶2(MMP 2)、上皮钙黏蛋白(E cadherin,E- cad)和β- 连环蛋白(β- catenin)在肺腺癌原发灶及其恶性胸腔渗出液中的表达和相关性及其与患者生存的关系。方法　采用免疫组织化学S- P法检测MMP 2、E cad和β- catenin在30例人原发性肺腺癌与肺腺癌并发的恶性胸腔渗出液中癌细胞表达的关系。结果　MMP 2、E cad和βcatenin在肺腺癌原发灶的阳性表达率分别低于恶性胸腔渗出液。肺腺癌原发灶中MMP 2、E- cad和β- catenin的表达与肺腺癌分化程度和淋巴结转移能力有关(P<0 .05);MMP 2和E -cad在原发灶中的表达呈负相关,在恶性胸腔渗出液中的表达无相关。E -cad和β-catenin在原发灶中的表达呈正相关,在恶性胸腔渗出液中的表达无相关。MMP 2阳性组肺腺癌患者的累积生存率低于MMP- 2阴性组(P<0 .05)。β- catenin阴性组肺腺癌患者的累积生存率低于β-catenin阳性组(P<0. 05)。结论　肺腺癌原发灶MMP 2的表达上调与E cad和β- catenin的表达下调在肺腺癌浸润、转移中起重要作用,可作为预测肺腺癌预后的指标之一。     

不同初始补液速率对内毒素休克猪肺损伤的影响

目的:观察不同初始补液速率对内毒素休克猪肺损伤的影响。方法:健康巴马香猪24头,采用静脉注射内毒素(LPS,20μg/kg)建立内毒素休克模型后,随机分为4组:内毒素休克组、慢速补液组(10ml/kg/h)、中速补液组(30ml/kg/h)和快速补液组(120ml/kg/h),每组各6头。观察注射LPS前、液体复苏即刻、复苏3h、复苏6h、复苏9h和复苏12h血乳酸水平变化。复苏12h后处死动物,取肺组织,HE染色观察肺组织病理变化,免疫荧光法观察肺组织髓过氧化物酶(MPO)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平,Tunnel染色观察肺细胞凋亡情况。结果:与内毒素休克组相比,各补液组乳酸值、肺组织MPO、IL-6、IL-1β及细胞凋亡指数均显著降低(P<0.05);在各补液组中,中速补液组和快速补液组血乳酸值显著低于慢速补液组(P<0.05),乳酸清除率显著高于慢速补液组(P<0.05);中速补液组肺组织MPO、IL-6、IL-1β及细胞凋亡指数较其余两补液组明显降低(P<0.05)。结论:初始进行液体复苏能够降低内毒素休克时肺损伤程度,但不同复苏策略减轻肺损伤的程度不同,中速补液减轻肺损伤效果最佳。     

肺纤维化前期肺组织中ICAM-1、TGF-β、CTGF的表达及其镜下形态改变的动态观察

目的动态观察博莱霉素诱发大鼠肺纤维化模型从肺损伤到肺纤维化前期肺组织中细胞间黏附分子-1(intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1)、转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)水平的变化,探讨肺纤维化前期的发病机制。方法雌性SD大鼠108只,随机分为肺纤维化模型组、内毒素组、空白对照组(每组36只),并于干预后第3、7、14天取各组肺组织进行免疫组化SABC法观察。结果造模后各组TGF-β、ICAM-1、CTGF的表达依次为空白对照组内毒素组肺纤维化模型组。肺纤维化模型组显著高于空白对照组及内毒素组(P0.05)。光镜下观察空白对照组中肺组织结构正常;肺纤维化模型组第7天未见明显肺纤维化改变,第14天VG染色可见少量胶原纤维形成;内毒素组第7天有轻度肺泡炎,第14天肺泡炎消失。结论肺纤维化前期纤维化的发生与TGF-β、ICAM-1、CTGF三种细胞因子均有密切关系,三者可能起协同作用。     

急性肺损伤大鼠多核白细胞与肺组织β受体变化的相关性研究

目的:观察急性肺损伤(ALI)大鼠循环血多核白细胞(PMN)和肺组织β肾上腺素能受体(β-AR)的变化,并探讨二者β-AR变化的相关性.方法:静注内毒素复制大鼠ALI模型,循环血PMN及肺组织β-AR用放射性配基结合分析法测定.结果:静注内毒素后1、4、6h,大鼠循环血PMN及肺组织β-AR的最大结合容量(Bmax)均明显低于对照组(P＜0.01);静注内毒素后4h,6h较1h及6h较4hPMNβ-AR的Bmax均显著降低(P＜0.05),肺组织β-AR Bmax各内毒素组间差异不明显(P＞0.05);循环血PMN和肺组织β-AR变化在程度上无相关性(P＞0.05).结论:ALI时循环血PMN及肺组织β-AR数目均明显减少,其在ALI发生发展中可能起一定的作用,但ALI时外周血PMN β-AR不能作为观察肺组织β-AR变化的相关指标.     

内毒素性急性肺损伤大鼠内源性H2S/CSE体系的变化

目的：观察内毒素性急性肺损伤（ALI）大鼠内源性硫化氢/胱硫醚-γ-裂解酶（H2S/CSE）体系、IL-1β和IL-10的动态变化。方法:健康雄性SD大鼠共80只，随机分为Ⅰ（对照）组；Ⅱ（LPS 1 h）组；Ⅲ（LPS 3 h）组；Ⅳ（LPS 6 h）组；Ⅴ（LPS 9 h）组；Ⅵ（LPS 12 h）组。给予LPS复制内毒素性ALI大鼠模型，分别于1、3、6、9、12 h处死，观察光镜和电镜下肺组织形态学改变，检测肺系数、肺湿/干重比、血浆中H2S含量、肺组织CSE活性、血清中IL-1β和IL-10的动态变化。结果:⑴LPS 1 h组，光镜和电镜下肺组织形态学无明显改变，肺系数、肺湿/干重比、血浆中H2S的含量和肺组织CSE活性与对照组比较无明显变化，血清中IL-1β和IL-10含量明显高于对照组(IL-1β，P<0.05；IL-10，P<0.01)。⑵LPS 3、6、9、12 h组，光镜和电镜下肺组织明显受损，超微结构明显改变，肺系数和肺湿/干重比明显高于对照组(P<0.05或P<0.01)，血浆中H2S的含量和肺组织CSE活性明显低于对照组（P<0.05 或P<0.01) ，血清中IL- 1β和IL-10的含量明显高于对照组(P<0.01)。结论:内源性H2S/CSE体系、IL-β和IL-10参与内毒素性ALI的病理生理过程。     

内毒素血症引起急性肺损伤机理的探讨

白细胞在内毒素所引起的急性肺损伤中的作用已为人们所注意。内毒素可激活补体,生成C_(5a),引起白细胞在肺血管内聚集。聚集的白细胞可释放溶酶体酶、组胺及产生氧基、过氧化物等对肺起损伤作用,引起肺水肿。本工作的目的在于观察内毒素血症大鼠外周白细胞计数,肺组胺(及合成代谢酶),血浆β-葡萄糖醛酸酶(溶酶体酶的一种,以反映溶酶体酶活力,筒称β-g)。及肺系数变化,试图探讨急性肺损伤发生机     

三种温病治法制剂干预家兔内毒素血症疗效特点的比较研究

目的比较及分析清热解毒、活血化瘀和养阴增液三种温病治法制剂抗内毒素效应的特点。方法以大肠杆菌内毒素EColiO111B4 静脉注射建立家兔内毒素血症模型 ,并随机分为模型对照组、清热解毒组、活血化瘀组、养阴增液组 ,后三组动物分别给予相应治法的注射液进行干预 ,另设正常对照组。采用动态比浊鲎试验法定量检测血浆内毒素 (EXT)浓度 ;常规计数血白细胞(WBC)、血小板 (PLT)及检测凝血酶原时间 (PT)、凝血酶时间(TT) ,以放射免疫分析法检测血清肿瘤坏死因子 -α(TNF -α)、白细胞介素 -1β(IL -1β)、内皮素 -1(ET -1)以及前列环素(PGI2)水平。结果与模型对照组比较 ,各治疗组血浆内毒素水平无显著性差异 ,但三治疗组血清中由内毒素诱生的炎性细胞因子水平和血管活性介质均有不同程度的改善。清热解毒组家兔血清TNF -α、IL -1β 降低最为显著 (均P<0.01) ,活血化瘀组改善ET -1、PGI2 最为明显 (分别为P<0.05 ,P<0.01) ,而养阴增液组前两者的功效兼而有之。结论三种温病治法制剂均具有一定的抗内毒素效应 ,但其治疗内毒素血症的作用环节及机理方面各具特点 ,从而显示中医治疗温病采用多种治法配伍的合理性     

内毒素的肺内清除与灭活

本文通过检测正常家兔入、出肺血内毒素含量。家兔肺清除~(51)Cr标记内毒素及观察大鼠先后经过肺注入内毒素的死亡率研究了肺对内毒素的清除与灭活作用。结果表明:正常家兔入肺血内毒素含量明显高于出肺血(P<0.01)。300μg~(51)Cr标记大肠杆菌内毒素一次流经肺循环的肺内清除率为50.31%。静脉注入内毒素组大鼠12及24小时死亡率明显低于动脉注入组(P<0.01和P<0.05)。上述实验结果提示肺可清除循环血中内毒素,内毒素能在肺内灭活。     

Aβ31-35和ApoE4对体外大鼠基底前脑神经元存活和生长的协同作用

目的　探讨 β-淀粉样蛋白 (Aβ)和载脂蛋白 (Apo E4)对基底前脑神经元存活和生长的影响 ,研究Alzheimer病 (AD)发病的细胞分子机制。　方法　体外培养基底前脑神经细胞 ,MTT法和免疫细胞化学方法结合体视学分析 ,观察 Aβ31- 35和 Apo E4对基底前脑神经元存活及胞体和突起生长的影响。　结果　 (1) MTT法测得的 Aβ- 31- 35 Apo E4组的 A值 ,与对照组比较明显减小 (P<0 .0 5 ) ,说明神经元的存活力降低 ,存活数量减少 ;(2 )Aβ31- 35 Apo E4组的神经元胞体最长径和最短径明显低于对照组和 Apo E4组 (P<0 .0 5 ) ;平均突起长度也明显低于对照组、Apo E4组和 Aβ31- 35 (10 μmol/ L)组 (P<0 .0 1) ;(3) Aβ31- 35 (2 0 μm ol/ L)组平均突起长度比对照组、Apo E4组和 Aβ31- 35 (10 μmol/ L)组明显减小 (P<0 .0 1) ;(4) Aβ31- 35 Apo E4组和 Aβ31- 35 (2 0 μm ol/ L)组的胆碱能神经元最长突起长度、总突起长度及平均突起长度均明显低于对照组 (P<0 .0 1) ;且这两组的 Ch AT阳性神经元的胞体平均灰度也明显低于对照组 (P<0 .0 5 ) ,说明 Ch AT的活性下降。单独 Apo E4对基底前脑神经元的存活和生长均无明显影响。　结论　 Aβ31- 35 Apo E4比单独 Aβ31- 35对神经元存活及胞体和突起生长的抑制作     

内毒素血症大鼠中性粒细胞功能的变化

以大肠杆菌内毒素静脉注入复制大白鼠内毒素血症模型。观察了该模型动物中性粒细胞(PMN)功能的变化。结果表明,内毒素血症时外周血白细胞计数降低;肺小血管内有白细胞聚集;PMN吞噬细菌及产生活性氧能力明显减弱;趋化性明显受到抑制;PMN在静止时释放β-葡萄糖醛酸酶(β-g)明显增加;此外,PMN的糖皮质激素受体数目明显减少,而血浆皮质酮含量明显增高。     

绵羊内毒素肺损伤时P物质和前列腺素含量变化

本实验利用较大剂量内毒素在带慢性肺淋巴瘘的清醒绵羊复制肺损伤模型。测定了动物血浆、肺淋巴液中P物质(SP)、血栓烷B_2(TXB_2)和6-酮前列腺素F_(1α)(6-keto-PGF_(1α))含量变化及肺组织中SP含量改变。结果显示,注入内毒素后120min,血浆和肺淋巴液SP含量明显高于注射内毒素前。在注入内毒素后360min,肺组织中SP含量则显著低于注射前。注入内毒素后30min,血浆TXB_2和6-keto-PGF_(1α)显著升高。肺淋巴液中TXB_2和6-keto-PGF_(1α)于注入内毒素后60min显著高于注射内毒素前,且TXB_2比6-keto-PGF_(1α)升高更明显。     

家兔内毒素血症时肝肾心肺线粒体磷脂酶A_2及其膜流动性的改变

本研究采用家兔内毒素休克模型,实验分为四组:对照组;内毒素血症组;磷酸氯喹(CQ)预处理组;地塞米松(DXM)预处理组,测定血浆和肝、肾、心、肺线粒体PLA_2活性及线粒体膜流动性。结果表明正常对照和注射内毒素(ET)后1、3、5、8h血浆PLA_2分别为15.52±5.31与25.83±7.86、30.54±11.53、37.13±8.53、41.88±7.32U/ml,注射ET后血浆PLA_2显著高于注射前(P<0.05)。CQ、DXM预处理组则血浆PLA_2显著低于内毒素血症动物(P<0.05)。注射ET8h后肝、肾、心、肺线粒体PLA_2活性显著高于正常对照组。而CQ、DXM预处理组显著低于内毒素血症组(P<0.05)。同时内毒素血症组肝、肾、心、肺线粒体膜流动性降低,分子排列有序性升高,膜脂区微粘度升高;而CQ、DXM预处理组肝、肾、心、肺线粒体膜流动性显著改善。线粒体PLA_2升高和膜流动性降低呈显著正相关。     

人参皂苷Rh1对哮喘模型小鼠炎症因子表达的抑制作用

目的:观察和探讨人参皂苷Rh1对哮喘模型小鼠的血清和支气管肺泡冲洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中炎症因子的表达和肺组织形态学变化的影响。方法:雄性BALB/c小鼠40只,分为正常对照组、哮喘模型组、人参皂苷Rh1小剂量(40 mg·kg~(-1)·d~(-1))治疗组和人参皂苷Rh1大剂量(80 mg·kg~(-1)·d~(-1))治疗组,并利用卵清蛋白致敏和雾化吸入激发方法制作哮喘模型;人参皂苷Rh1小剂量治疗组和大剂量治疗组分别在每次激发攻击前30 min灌胃,每天一次,共2周。在末次激发24 h后收集BALF,计数嗜酸性粒细胞(eosinophil,EOS)数目;利用ELISA测定BALF中白细胞介素(IL)-4、IL-5和干扰素γ(IFN-γ)的水平;收集血液并测定血清中Ig G和Ig E的水平;用Western blot检测肺组织中转化生长因子(TGF)-β1蛋白表达的变化;用HE染色观察肺组织的病理学变化。结果:人参皂苷Rh1可抑制小鼠哮喘模型BLAF中EOS数目(P0.01);降低BLAF中IL-4、IL-5和IFN-γ的表达(P0.01);减少血清中Ig E的含量(P0.01);减少肺组织中TGF-β1蛋白表达(P0.01),并改善哮喘小鼠肺组织病理学变化。结论:人参皂苷Rh1对哮喘小鼠具有抑制炎症因子表达、调节免疫反应和改善肺组织病理变化的作用。     

内毒素和γ-干扰素对鼠巨噬细胞胆固醇清除受体-β类Ⅰ型表达的影响

目的：探讨内毒素、γ-干扰素对鼠巨噬细胞胆固醇清除受体-β类Ⅰ型(SR-β1)表达及功能的影响。方法：采用Northern blot及蛋白质免疫印迹法测定经内毒素和干扰素处理后的巨噬细胞SR-β1受体在mRNA转录及蛋白翻译水平的表达。结果：用内毒素处理巨噬细胞8h可使SR-β1受体在mRNA转录及蛋白翻译水平均下调(54％和53％)，而干扰素则可使之下调57％和54％，并呈现浓度依赖性和时间依赖性。结论：(1)内毒素、干扰素在mRNA和蛋白双重水平下调SR-β1的表达，明显降低SR-β1调节胆固醇代谢的作用。(2)内毒素通过降低SR-β1的表达及功能，在动脉粥样硬化过程中起着不可忽视的作用。     

γ-促分泌酶抑制剂对支气管哮喘模型小鼠肺组织IL-1β和TNF-α表达的影响

目的研究γ-促分泌酶抑制剂阻断Notch信号对支气管哮喘(简称哮喘)模型小鼠肺组织白介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达变化。方法 30只BALB/c小鼠随机分为正常对照组、哮喘组和γ-促分泌酶抑制剂阻断组。制作小鼠哮喘模型,在小鼠激发阶段尾静脉注射γ-促分泌酶抑制剂MWl67。Westernblot和RT-PCR方法检测三组小鼠肺组织内IL-1β和TNF-α蛋白和mRNA的表达变化。结果正常对照组IL-1β和TNF-α蛋白表达的平均光密度值分别为(0.22±0.02)与(0.17±0.01),显著低于哮喘组的小鼠肺组织IL-1β(0.54±0.04)和TNF-α(0.32±0.03)蛋白的表达(P<0.05),而MWl67阻断Notch信号后,MWl67注射组小鼠肺组织IL-1β和TNF-α蛋白表达的平均光密度值分别为(0.38±0.03)与(0.21±0.02),显著低于哮喘组(P<0.05);正常对照组IL-1βmRNA和TNF-αmRNA表达平均光密度值分别为(0.36±0.03)与(0.26±0.02),显著低于哮喘小鼠肺组织IL-1βmRNA(0.82±0.06)和TNF-αmRNA(0.49±0.04)的表达而MWl67注射组分别为(0.58±0.04)与(0.30±0.03),显著低于哮喘组。结论静脉注射γ-促分泌酶抑制剂能抑制哮喘模型小鼠气道炎症反应。     

银杏内脂B抑制NF-κB P65磷酸化对内毒素诱导的小鼠心肌炎损伤的保护作用

目的:探索银杏内脂B对内毒素诱导的小鼠心肌炎损伤的影响及分子机制。方法:小鼠分为对照组、银杏内脂B组、内毒素组和内毒素+银杏内脂B组。H-E染色检测心肌组织病变。ELISA检测心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌红蛋白(Mb)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6和IL-1β水平。免疫印迹检测caspase-3、Bcl-2、Bax、NF-κB P65和p-NF-κB P65蛋白水平。结果:银杏内脂B可改善内毒素诱导的心肌组织病变。银杏内脂B可抑制内毒素诱导的cTnⅠ、Mb、CK-MB和LDH水平的升高。银杏内脂B可抑制内毒素诱导的caspase-3和Bax表达的上升和Bcl-2表达的下降。而且,银杏内脂B可抑制内毒素诱导的TNF-α,IL-6和IL-1β水平的升高。另外,银杏内脂B可抑制内毒素诱导的p-P65/P65比值的上升。结论:银杏内脂B可通过抑制NF-κB P65磷酸化减轻内毒素诱导的小鼠心肌炎损伤。     

丙酮酸乙酯对LPS致急性肺损伤大鼠肺组织NF-κB p65及TNF-α和IL-lβ的影响

目的:观察丙酮酸乙酯(EP)对内毒素性急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织核转录因子-κB(NF-κB)p65表达及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)含量的影响,探讨EP可能的肺保护机制。方法:雄性SD大鼠30只随机分为三组(n均=10):正常对照组,静脉注射与其它二组等量生理盐水;LPS组,静脉注射脂多糖(LPS)5mg/kg复制大鼠ALI模型;EP+LPS组,于静脉注射LPS前1h腹腔内注射EP(40mg/kg)。所有动物于注射LPS或生理盐水后4h颈动脉放血处死,取肺组织用Westernblot测定其NF-κBp65的表达,用ELISA测定其TNF-α和IL-1β的含量。结果:与对照组相比,LPS组、EP+LPS组肺组织NF-κBp65表达增加,肺组织TNF-α和IL-lβ含量升高(P0.05);与LPS组相比,EP+LPS组肺组织NF-κBp65表达降低,肺组织TNF-α和IL-lβ含量降低(P0.05)。结论:EP通过下调大鼠LPS诱导的肺组织NF-κBp65表达,降低了TNF-α和IL-lβ的释放。EP可减轻ALI大鼠肺的炎症反应。     

福辛普利和缬沙坦抑制Ang Ⅱ诱导的大鼠肾小管上皮细胞klotho基因表达下调

目的探讨福辛普利(Fos)和缬沙坦(Val)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)抑制NRK-52E细胞klotho基因表达的干预作用及klotho与转化生长因子-β1(TGF-β1)的关系。方法将大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)分为对照组、AngⅡ(10-7mol/L)组、AngⅡ分别再加Fos(10-5mol/L)组、Val(10-5mol/L)组和Fos+Val组,培养24 h后,用反转录-多聚酶链反应(RT-PCR)检测klotho和TGF-β1mRNA表达;用免疫组织化学法和Western blot检测klotho和TGF-β1蛋白表达。对klotho和TGF-β1蛋白表达进行直线相关分析。结果 (1)AngⅡ诱导NRK-52E中TGF-β1mRNA表达上调,同时使klothomRNA表达下调,经Fos或Val或Fos+Val干预后,TGF-β1mRNA表达明显受抑制,而klothomRNA显著上调表达(P<0.05)。(2)Fos、Val和Fos+Val均明显上调AngⅡ诱导的klotho蛋白低表达(P<0.05),同时抑制TGF-β1蛋白高表达(P<0.05)。(3)klotho和TGF-β1蛋白表达呈...     

“肺俞”穴对支气管哮喘肺组织中白细胞介素-1β和白细胞介素-6的影响

目的探讨手动"肺俞"单穴对支气管哮喘肺组织中白细胞介素-1β和6的影响。方法Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、"肺俞"穴组以及非经非穴组,每组10只。卵蛋白(OVA)制敏、诱导建立哮喘大鼠模型,苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠肺组织病理改变、采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠肺组织匀浆上清白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)含量。结果针刺"肺俞"穴能够减轻支气管哮喘模型的炎性病理变化,减轻气道增厚,炎性细胞集聚,与非经穴相比具有明显差别。针刺"肺俞"穴可以下调支气管哮喘中升高的IL-1β含量(P=0.009),但是手动针刺"肺俞"单穴并不能明显下调支气管哮喘中升高的IL-6含量(P0.05)。结论手动针刺"肺俞"单穴对支气管哮喘发病的调节作用可能与下调IL-1β表达水平相关。     

Wortmannin对急性肺损伤小鼠肺组织IL-1β和TNF-α表达的影响

目的研究Wortmannin对急性肺损伤模型小鼠肺组织白介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。方法 30只昆明小鼠随机分为正常对照组、急性肺损伤组和Wortmannin处理组。采用腹腔注射LPS(10 mg/kg)建立小鼠急性肺损伤模型,对照组腹腔注射同体积的生理盐水,Wortmannin处理组则于造模前2 h腹腔注射Wortmannin(1.4 mg/kg)。LPS注射后6 h处死大鼠,计算肺组织湿/干重(W/D)比值,Western blot方法检测三组小鼠肺组织内IL-1β和TNF-α蛋白的表达变化,RT-PCR方法检测三组小鼠肺组织内IL-1βmRNA和TNF-αmRNA的表达变化。结果急性肺损伤组小鼠肺组织IL-1β和TNF-α蛋白及mRNA表达水平显著上升,显著高于正常对照组(0.05);相比于急性肺损伤组小鼠,Wortmannin处理组小鼠肺组织IL-1β和TNF-α蛋白及mRNA表达水平显著降低(0.05)。结论 Wortmannin能抑制急性肺损伤小鼠肺组织IL-1β和TNF-α表达。