灯盏细辛活性部位对抗β-淀粉样蛋白引起的细胞凋亡

目的：研究灯盏细辛醇提物不同活性部位对β-淀粉样蛋白（Aβ）引起的神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）凋亡的拮抗作用,探讨其是否在阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）治疗中有神经保护作用。方法：选用灯盏细辛醇提物不同活性部位及Aβ25-35处理SH-SY5Y细胞,用比色法测定MTT还原率,Annexin V-FITC试剂盒测定细胞凋亡水平。结果：安全浓度的灯盏细辛醇提物不同活性部位能对抗Aβ引起的MTT还原率降低和细胞凋亡。结论：灯盏细辛醇提物不同活性部位可对抗Aβ的神经毒性作用。     

灯盏细辛活性部位对神经细胞α7尼古丁受体表达的影响

目的：研究灯盏细辛活性部位对SH-SY5Y神经细胞中α7神经型尼古丁受体（nAChR）亚单位在蛋白质水平的表达以及对抗β-淀粉样蛋白的毒性作用。方法：灯盏细辛经乙醇提取、乙酸乙酯及正丁醇萃取、再以反相硅胶柱分离等方式得到极性部位,选取一定浓度的灯盏细辛提取物处理神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）后,用Western blotting方法测定α7 nAChR蛋白水平的变化;再将能明显上调α7 nAChR蛋白水平的灯盏细辛提取物预处理SH-SY5Y细胞后,加入Aβ25-35处理,用比色法测定MTT还原率,观察灯盏细辛活性部位对细胞毒性的影响。结果：灯盏细辛醇提乙酸乙酯及正丁醇部位、以及该部位经反相硅胶柱分离的低极性部位均能显著上调α7 nAChR蛋白水平,并减弱β-淀粉样蛋白引起的细胞损伤。结论：灯盏细辛活性部位具有一定的神经保护作用,其机制之一可能与上调α7 nAChR有关。     

三七止血和活血活性部位的筛选

目的对三七不同洗脱部位成分进行分析,并筛选止血与活血活性部位。方法采用70%乙醇回流提取,大孔树脂柱划段制备样品;紫外分光光度法测定总皂苷含量,HPLC法测定三七素和5种主要皂苷的含量;小鼠断尾止血和玻片凝血实验观察样品的止血作用;肾上腺素—胶原蛋白诱导小鼠体内血栓形成实验观察样品的抗血栓作用;高分子右旋糖酐致大鼠急性血瘀实验观察样品的活血散瘀作用。结果制备得到总提物、水洗脱部位、30%乙醇洗脱部位、70%乙醇洗脱部位的三七总皂苷的含量分别为：32.51%、0%、52.39%、83.61%;三七素集中在水洗脱部位（2.78%）;总提物、三个洗脱部位均能明显缩短出血时间与凝血时间,但水洗脱部位缩短凝血时间的作用最显著;总提物和30%乙醇洗脱部位能明显提高小鼠偏瘫恢复率;总提物、30%和70%乙醇洗脱部位能明显降低大鼠血液在不同切变率下的黏度。结论在本实验设计与条件下,三七素仅存在于水洗脱部位中,三七皂苷在30%和70%乙醇洗脱部位中均有分布,但种类与含量存在较大差异;水洗脱部位为三七止血主要活性部位;30%乙醇洗脱部位为三七抗血栓主要活性部位;30%和70%乙醇洗脱部位为三七活血散瘀主要活性部位。     

玉女煎体外抗炎最佳活性部位筛选及物质基础研究

目的：筛选出玉女煎体外抗炎最佳活性部位,并对其化学成分进行研究。方法：玉女煎复方采用水提取,提取物浓缩后经D101大孔树脂进行粗分,分为水洗脱、30 %乙醇-水洗脱、60 %乙醇-水洗脱及95 %乙醇-水洗脱四个洗脱部位。采用脂多糖诱导小鼠巨噬细胞炎症模型评价玉女煎水提液及各洗脱部位的抗炎活性。研究对象包括空白对照组、脂多糖模型组和脂多糖+药物组。使用MTT法和Griess法来评估细胞的存活率和NO的生成量。随后对筛选出的最佳活性部位的抗炎活性进行验证,ELISA实验检测IL-1β、TNF-α、IL-6水平,显微暗场成像法观察细胞形态,免疫荧光法检测细胞内NF-κB p65表达。最后通过MCI柱分离结合活性追踪的方法对最佳活性部位的化学成分进行分离,通过核磁共振仪进行鉴定。结果：玉女煎水提液、水洗部位、30%乙醇-水洗部位及60%乙醇-水洗脱均有显著抗炎活性,其中水洗部位和30%乙醇-水洗部位抗炎活性弱于水提液,60%乙醇-水洗脱部位抗炎活性最强,显著强于水提液;95 %乙醇-水洗部位无抗炎活性。60%乙醇-水洗脱部位对脂多糖诱导的细胞形态改变、NF-κB p65表达及入核增加的有显著抑制作用最强,最后从该部位分离出了5个化合物,其中3个归属知母。结论：60% 乙醇-水洗脱部位为玉女煎抗炎的最佳活性部位,知母可能是其抗炎活性的主要贡献者。     

4-氨基吡啶对MPP+诱导帕金森病细胞具有神经保护作用

目的 探究4-氨基吡啶（4-aminopyridine,4-AP）对1-甲基-4-苯基吡啶离子（1-methyl-4-phenylpyridinium,MPP+）诱导的帕金森病细胞模型是否存在保护作用。方法 利用不同浓度的MPP+孵育SH-SY5Y细胞,探究不同浓度MPP+对细胞活性的影响。单独利用4-AP孵育细胞,探究4-AP是否影响细胞活性。利用4-AP预处理SH-SY5Y细胞系24h后,随后选取合适浓度的MPP+孵育细胞24h,CCK8测定细胞活性并进行统计学分析。结果 随着MPP+药物浓度的升高,SH-SY5Y细胞活性下降。不同浓度的4-AP单独孵育SH-SY5Y细胞系对细胞活性不产生影响。不同浓度的4-AP预处理细胞24h后,加入1mol/L的MPP+孵育24h,当4-AP浓度在0.3～10mol/L时SH-SY5Y细胞的活性增加,在1mol/L时细胞活性增加最佳,为正常细胞的66%。结论 一定浓度范围内的4-AP可减少MPP+对SH-SY5Y细胞的毒性作用,具有神经保护作用。     

菊花不同极性洗脱部位体外抗氧化活性研究及成分分析

目的 通过体外抗氧化实验初步明确菊花不同极性洗脱部位,并对其成分组成进行辨识。方法 采用中压制备色谱法对菊花醇提物进行分离,使用25%、40%、70%甲醇溶液洗脱得到不同极性部位组分,通过DPPH自由基清除法、总抗氧化能力法（FRAP）和亚硝酸盐清除法对不同极性部位组分的抗氧化活性测定,并利用高效液相色谱法对各部位化学成分进行对照辨识。结果 菊花醇提取物不同极性洗脱部位均有一定的抗氧化活性,且在一定浓度范围内呈显著剂量-效应关系,但不同部位的抗氧化活性有差异;在体外抗氧化实验中不同部位抗氧化活性大小顺序为40%甲醇洗脱物>25%甲醇洗脱物>70%甲醇洗脱物;经高效液相色谱（HPLC）分析25%甲醇洗脱物为绿原酸部位,40%甲醇洗脱物为二咖啡酰基奎宁酸类及黄酮苷,70%甲醇洗脱物为黄酮苷元。结论 40%甲醇洗脱部位是菊花发挥抗氧化作用的主要活性部位,其主要活性成分为以木犀草苷为代表的黄酮苷类和以3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸为代表的二咖啡酰基奎宁酸类化合物,可为菊花药效物质研究提供参考。     

不同聚集形式β-淀粉样肽对人SH-SY5Y细胞发动蛋白Ⅰ和突触素表达的影响

目的探讨不同聚集形式的β-淀粉样肽(Aβ)对人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)发动蛋白Ⅰ(DynⅠ)和突触素(Syn)表达的影响。方法制备不同聚集形式的Aβ1～42处理SH-SY5Y细胞,采用蛋白质印迹法检测细胞中DynⅠ及Syn蛋白表达水平;采用免疫组织化学染色方法检测10例阿尔茨海默病(AD)患者及8例老年同龄对照者尸解后脑海马结构中β-淀粉样肽寡聚体(AβOs)表达水平。结果 Aβ单体或Aβ纤丝体处理SH-SY5Y细胞未见DynⅠ及Syn蛋白表达水平显著变化,AβOs处理细胞可见DynⅠ及Syn蛋白表达水平降低(P<0.05);AD患者海马及内嗅区皮质神经元内AβOs的表达显著高于老龄对照者(P<0.05)。结论细胞内表达的AβOs可能是引起AD患者脑中网格蛋白内吞调节蛋白———DynⅠ表达下降及突触丧失的主要Aβ神经毒性形式,该改变可能与AD发病机制中学习记忆能力减退有关。     

毛果算盘子叶抗氧化活性部位筛选

目的以体外抗氧化能力初步筛选算盘子抗氧化损伤保护作用的活性部位。方法算盘子水提浓缩液,大孔树脂吸附,采用0%乙醇、20%乙醇、50%乙醇、80%乙醇、100%乙醇等不同浓度乙醇洗脱,洗脱液浓缩,得到5个不同部位。以清除1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH)自由基、超氧阴离子、羟基自由基,以及络合亚铁离子、还原磷钼酸等能力,综合评价不同提取部位体外抗氧化能力。结果算盘子各个提取部位均有不同的体外抗氧化能力,20%乙醇部位50%乙醇部位0%乙醇部位80%乙醇部位100%乙醇部位。其中20%乙醇部位综合抗氧化能力最强。结论体外实验筛选结果显示,算盘子抗氧化活性成分主要存在于20%乙醇部位,其具体化学组成有待进一步研究。     

藤梨根抗病毒活性部位的初步筛选

目的 通过体外药效实验筛选藤梨根的抗病毒活性部位,初步确定其活性部位的大致成分,为进一步开发利用藤梨根奠定基础.方法 通过MTT实验及对HBsAg和HBeAg的检测,筛选抗乙肝病毒的活性部位.结果 乙醇提取部分(A1)、乙酸乙酯提取部分(Y)对HBeAg和HBsAg的抑制率TI>2,提示对两者抑制作角较强,对试验细胞无明显毒性.结论 根据结果初步认为A1是藤梨根抗肝炎病毒的活性部位,在体外有较强抗肝炎病毒活性,对正常细胞的影响较小.     

Tenuigenin对转染APP695cDNA的SH-SY5Y细胞β-淀粉样蛋白生成的抑制作用及机制

目的用转染APP695cDNA的SH-SY5Y细胞模型,研究tenuigenin对β-淀粉样蛋白(Aβ)生成的抑制作用及其作用机制。方法应用免疫沉淀和蛋白印迹法(Westernblot)检测Aβ含量,应用MTT和LDH法测定tenuigenin的细胞毒性。结果Tenuigenin降低SH-SY5YAPP695细胞Aβ分泌水平;无细胞增生和毒性作用;能抑制SH-SY5YAPP695细胞APPC99的生成,但对SH-SY5YSPA4CT细胞APPC99生成无抑制作用,亦不影响该细胞株Aβ的分泌。结论Tenuigenin可能通过抑制β-分泌酶对APP的水解,降低SH-SY5YAPP695细胞Aβ水平。Tenuigenin这一针对阿尔茨海默病(Alzheimerdisease,AD)上游病理环节的药效,显示了其在AD治疗方面重要的开发和临床应用的价值,值得进一步研究。     

神经母细胞瘤细胞摄取Beta淀粉样蛋白形态学观察

目的 观察人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)对细胞外β-淀粉样蛋白(Aβ)摄取作用和在亚细胞结构定位.方法 接种培养SH-SY5Y细胞,采用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)直接观察SH-SY5Y对细胞外Aβ1-42-fluo摄取的时程变化;用图像分析技术比较24 h时SH-SY5Y对细胞外三种不同浓度Aβ1-42-fluo摄取的差异,同时采用免疫荧光多重染色分析SH-SY5Y摄入Aβ1-42-fluo的哑细胞结构定位.结果 SH-SY5Y与200 nmol/L Aβ1-42-fluo共孵育1 h后就开始摄取Aβ,Aβ被摄入的量随着时间的增加而增加:细胞外Aβ1-42-fluo浓度愈高,被摄入到细胞内Aβ1-42-fluo量也愈多,不同浓度各组间相比具有统计学差异(P<0.01或P<0.05);免疫荧光染色显示部分被内吞Aβ荧光颗粒与溶酶体标记物Lamp-1共定位.结论 SH-SY5Y通过摄人Aβ机制以清除Aβ,呈时间和浓度依赖关系;被摄入的Aβ部分定位于溶酶体.     

莲藕中白桦脂酸的微生物转化及其产物的抗肿瘤活性研究

目的?对莲藕中的白桦脂酸进行微生物转化,并对转化产物分离纯化,解析其结构特征,评价其抗肿瘤活性,以提高莲藕资源的利用率。方法?采用HPLC-PDA法测定莲藕根茎不同部位白桦脂酸的含量;筛选具有转化作用的菌种,采用UPLC-Q-TOF/MS方法对发酵产物进行分析;采用硅胶柱层析法分离转化产物,NMR和MS法解析发酵产物结构特征;利用细胞分子生物学技术测定衍生物抗肿瘤活性。结果?莲藕不同部位（藕尖、藕肉、藕皮、藕节、藕尾）中白桦脂酸含量以藕节中最高,为0.621%,筛选得到一株具有转化白桦脂酸的菌种Bacillus amyloliquefaciens FJ18,该菌转化藕节中的白桦脂酸（1）,获得2个转化产物,分别为3β-hydroxy-lup-20(29)-en-28-oic acid 28-O-(4-oxy-4-oxobutanoic acid-4-O-β-D-glucopyranosyl) ester（2）和28-O-β-D-glucopyranosyl-3β-hydroxy-lup-20(29)-en-28-oate（3）,其中化合物2为新化合物。体外细胞毒性实验表明转化产物对A375、Hela、U251、SH-SY5Y和MCF-7等肿瘤细胞均有一定的细胞毒活性。结论?通过微生物发酵从藕节中获得具有抗肿瘤活性的白桦脂酸转化产物,其中一个为新化合物。      

阿尔茨海默病β淀粉样肽40人单链抗体的生物活性

目的测定重组表达的抗β淀粉样肽(Aβ)40的人单链抗体的生物活性。方法通过基因重组表达方式获得抗Aβ40人单链抗体,应用常规ELISA和竞争性ELISA鉴定抗Aβ40人单链抗体的抗原结合活性,以人成神经细胞瘤SH-SY5Y细胞为模型检测抗Aβ40人单链抗体的神经元保护作用。结果重组表达的抗Aβ40的人单链抗体主要位于细菌不溶性内涵物中,经过尿素溶解和金属亲和层析纯化后具有结合Aβ40或Aβ42的活性。与Aβ42组相比,Aβ42加等摩尔抗体组可显著提高SH-SY5Y细胞的存活率(P<0.05)。与Aβ40组相比,Aβ40加等摩尔抗体组亦显著提高SH-SY5Y细胞的存活率(P<0.01)。结论从大肠杆菌系统中重组表达的抗Aβ40人单链抗体可以部分对抗β淀粉样肽的神经毒性。     

β淀粉样肽对神经母细胞瘤细胞Notch信号通路的影响

目的：研究β淀粉样肽（Aβ）处理SH-SY5Y细胞以及α3神经型尼古丁受体（α3nAChR）沉默细胞后细胞Notch信号通路的变化.方法：2μmol/L Aβ处理SH-SY5Y细胞以及α3nAChR沉默细胞,用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real Time PCR）和蛋白印迹（western blot）方法分别检测细胞中Notch信号通路中Notch1和Hes1的mRNA及蛋白水平的变化,评价Aβ对细胞Notch信号通路的影响.结果：Aβ处理的SH-SY5Y细胞以及α3 nAChR沉默细胞中Notch1和Hes1的mRNA及蛋白水平表达均增加,且在α3 nAChR沉默细胞中增加更为明显,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论：Aβ可增加细胞Notch信号通路基因表达,αα3 nAChR沉默会增强Aβ对Notch信号通路基因表达的影响,这可能与阿尔茨海默氏病（AD）的发病有一定的关系.     

枳壳活性成分对人神经母细胞瘤株SH-SY5Y生长的影响

目的：探讨枳壳醇提有效部位及其所含部分单体成分对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y生长的影响。方法：将细胞分为不同给药组,给以枳壳醇提有效部位及其所含的川陈皮素、红橘素、伞形酮和葡萄内酯不同浓度的试药,以四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定细胞的活力,分析药物对SH-SY5Y细胞生长的作用。结果：红橘素和伞形酮在实验浓度下对SH-SY5Y细胞生长无显著性影响;枳壳醇提有效部位、川陈皮素和葡萄内酯在实验浓度下对SH-SY5Y细胞生长有显著性影响,且呈浓度效应关系。结论：枳壳醇提有效部位、葡萄内酯和川陈皮素对神经细胞生长有保护作用。     

藁本内酯预处理对Aβ25-35诱导人脑神经瘤母细胞SH-SY5Y细胞毒性的保护作用

目的探讨藁本内酯(Z-ligustilide,LIG)对β淀粉样蛋白(Aβ)25-35引起的人脑神经瘤母细胞SH-SY5Y细胞毒性的保护作用。方法 0.1、1.0、2.5、5.0μg/mL LIG作用于SH-SY5Y细胞,24h后以50μmol/LAβ25-35诱导SH-SY5Y细胞凋亡建立阿尔茨海默病体外模型,MTT法检测细胞活性,Western blot法检测细胞中凋亡蛋白含量。结果经Aβ25-35处理后,细胞存活率下降,细胞内凋亡相关蛋白——Bax、cleaved caspase3、细胞色素C、caspase8表达上调,但Bcl-2蛋白表达下降(P均<0.05)。细胞经过LIG一定浓度预处理,细胞存活率提高,凋亡相关蛋白——Bax、cleaved caspase3、细胞色素C、caspase8蛋白表达下降,Bcl-2表达上升(P均<0.05)。结论 LIG具有对Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞毒性的保护作用,其机制可能是抑制Aβ诱导的细胞凋亡。     

跨膜蛋白16F对阿尔茨海默病细胞模型铁死亡的调控作用

目的 探讨跨膜蛋白16F (TMEM16F)对β淀粉样蛋白（Aβ25-35）诱导的阿尔茨海默病（AD）细胞模型铁死亡的影响。方法 将SH-SY5Y细胞分为对照组、模型组、siRNA阴性对照组（siRNA-nc组）、siRNA-TMEM16F转染组（siRNA-TMEM16F组）。采用CCK-8检测Aβ25-35对SH-SY5Y细胞存活率的影响,Western blotting检测各组TMEM16F、AD相关指标（Aβ、p-Tau）、铁死亡相关蛋白（ACSL4、GPX4、Fpn1）的表达情况,免疫荧光法检测各组ACSL4表达情况,荧光探针法检测各组活性氧（ROS）水平。结果Aβ25-35≥20μmol/L作用≥12 h时对细胞有显著损伤作用。与对照组相比,模型组中TMEM16F、Aβ、p-Tau、ACSL4以及ROS水平显著增高,而GPX4、Fpn1水平显著降低（P <0.05）;沉默TMEM16F后,Aβ、p-Tau、ACSL4及ROS表达受到抑制,而GPX4、Fpn1表达水平上升（P <0.05）。结论 沉默TMEM16F能够抑制Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞发生...     

闽产白花鬼针草对人结肠癌RKO细胞的抑制作用及诱导凋亡

目的 研究闽产白花鬼针草对人结肠癌RKO细胞增殖的影响.方法 以75%乙醇回流提取白花鬼针草,浓缩后以石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取,得到4个不同的极性部位.以RKO细胞为对象,采用四甲基偶氮唑盐比色法对不同极性部位以及总提取物进行RKO细胞毒性活性筛选,得到最佳活性部位,以1.5%琼脂糖凝胶电泳和凝胶成像系统观察200...     

人参不同提取部位总皂苷的含量测定

目的确定人参不同提取部位皂苷的含量,为下一步的研究提供依据。方法采用乙醇梯度洗脱制备不同皂苷部位,采用香草醛—冰醋酸法,以人参皂苷Re为对照品,对人参不同部位中总皂苷的含量进行测定。结果人参总皂苷含量的具体高低次序为60%乙醇洗脱部位（ZG4）〉40%乙醇洗脱部位（ZG3）〉95%乙醇洗脱部位（ZG5）〉20%乙醇洗脱部位（ZG2）〉醇提物。结论乙醇洗脱部位中以60%乙醇洗脱部位最高,为富集皂苷部位提供了较好的依据,为下一步不同部位中所含单体皂苷的分离以及部位配伍研究也打下了基础。     

27-羟基胆甾醇诱导人神经母细胞瘤细胞凋亡的调控机制

目的探讨27-羟基胆甾醇（27-OHCH）诱导人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）凋亡的调控机制。方法不同浓度（0、3.125、6.25、12.5、25.0、50.0滋M）的27-OHCH作用SH-SY5Y细胞,采用CCK-8法检测细胞存活率,在光学显微镜下观察27-OHCH处理组、添加苏氨酸蛋白激酶（AKT）抑制剂（LY294002）的27-OHCH处理组细胞形态变化,Westernblot法检测磷酸化AKT（p-AKT）、cleaved-caspase-9蛋白表达,AnnexinV-PE/7-AAD双染流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果给药24h,12.5、25.0、50.0滋M27-OHCH处理组SH-SY5Y细胞存活率均明显降低（均P＜0.05）;给药48h,不同浓度（3.125~50.0滋M）27-OHCH处理组SH-SY5Y细胞存活率均明显降低（均P＜0.05）。在显微镜下观察发现,27-OHCH能诱导SH-SY5Y细胞凋亡,使细胞数量减少,而LY294002能减弱27-OHCH诱导的细胞毒效应。随着27-OHCH处理组浓度的增加,SH-SY5Y细胞内p-AKT（Ser473）、cleaved-caspase-9（37/35kD）表达明显增强;经LY294002预作用后,不同浓度（0~50.0滋M）27-OHCH处理组p-AKT（Ser473）表达均受抑制,而12.5、25.0、50.0滋M27-OHCH处理组cleaved-caspase-9蛋白表达变化不明显。给药48h,12.5、25.0滋M27-OHCH处理组均能引起SH-SY5Y细胞凋亡效应,而LY294002预作用2h能逆转细胞凋亡效应（均P＜0.05）。结论27-OHCH可通过AKT信号通路诱导SH-SY5Y细胞凋亡。