微囊化人头皮毛乳头细胞体外培养及异种移植

目的探讨微囊化人头皮毛乳头细胞体外培养及异种移植的可行性,并对海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠（alginate-polylysine-alginate,APA）微囊与海藻酸钠-BaCi2（barium-alginate,BA）微囊的物理、生物性能进行评价.方法采用“一步酶消化法”分离、培养人头皮毛乳头细胞,分别用APA微囊与BA微囊包裹.对两种微囊的生物相容性、机械强度、免疫隔离效果及微囊内细胞活性进行比较.结果APA微囊生物相容性优于BA微囊（P＜0.01）,但机械强度低于BA微囊（P＜0.01）;成囊后短期BA微囊内细胞活性高于APA微囊（P＜0.01）,但APA微囊内细胞活性增高较快（P＜0.05）.在微囊完整、表面无纤维化时,两种微囊均可起到良好的免疫隔离作用.结论微囊化人头皮毛乳头细胞可在体外及异种体内培养.综合评价APA微囊与BA微囊的利弊,在不同情况下选择不同的成囊方式是必要的.     

海藻酸-壳聚糖-聚乙烯乙二醇微囊化异种胰岛移植治疗小鼠糖尿病

目的比较海藻酸-聚赖氨酸-海藻酸微囊化(APA)大鼠胰岛和海藻酸-壳聚糖-聚乙烯乙二醇微囊化(ACP)大鼠胰岛移植对小鼠糖尿病的治疗作用.方法链脲霉素220 mg/kg体重腹腔内注射制作小鼠糖尿病动物模型.成模后分成APA微囊组、ACP微囊组和未微囊化胰岛组,每只小鼠腹腔内分别植入200个相应胰岛,检测监测移植前后小鼠的血糖.结果移植后第1天,3组小鼠血糖均较移植前明显降低.未微囊化胰岛移植组小鼠术后第2天血糖均恢复到术前水平;APA微囊组和ACP微囊组小鼠血糖分别维持正常(57.00±14.61)d和(41.67±16.73)d,此两组间差异无显著性(P＞0.05),但均较未微囊化胰岛移植组明显延长(P＜0.05).结论 ACP微囊与APA微囊一样具有免疫隔离作用;ACP微囊化异种胰岛移植可纠正小鼠糖尿病.     

海藻酸-壳聚糖-聚乙烯乙二醇微囊生物相容性的研究

目的比较海藻酸-壳聚糖-聚乙烯乙二醇微囊(ACP微囊)和海藻酸-聚赖氨酸-海藻酸微囊(APA微囊)的生物相容性。方法(1)两种微囊(50、100和200个)与健康人血清共浴,检测微囊对补体的激活程度。(2)1000个APA和ACP微囊分别植入Wistar大鼠的腹腔,4d和3周时统计取出的微囊数和微囊的纤维化率。(3)Wistar大鼠胰岛用ACP微囊和APA微囊包裹,分别贯续置于含3.3mmol/L和16.7mmol/L葡萄糖的Hank's溶液中培养,测定培养液中胰岛素的浓度。结果(1)ACP微囊组残余补体活性高于APA微囊组。(2)4d时,ACP和APA微囊的取出数分别是845.0±40.4和807.6±45.7(P>0.05),囊周纤维化率分别是16.40%和65.68%(P<0.05);3周时两种微囊的取出数分别为715.0±133.0和367.5±105.6(P<0.05),囊周纤维化率为27.8%和83.9%(P<0.05)。(3)在含3.3mmol/L葡萄糖的Hank's液中,未微囊胰岛组、APA和ACP微囊化胰岛组的胰岛素浓度分别是(123.48±4.70)mIU/L、(110.11±12.18)mIU/L和(110.90±11.95)mIU/L,当葡萄糖浓度为16.7mmol/L时,胰岛素浓度分别是(754.75±13.81)mIU/L、(689.30±27.71)mIU/L和(684.28±70.10)mIU/L。结论海藻酸-壳聚糖-聚乙烯乙二醇微囊的生物相容性要优于海藻酸-聚赖氨酸-海藻酸微囊,前者更适合应用于微囊化胰岛移植。     

肝细胞海藻酸钡微囊生物性能的研究

目的　研究肝细胞海藻酸钡微囊的生物学性能。方法　大鼠肝细胞微囊化后移植于腹腔内 ,1个月后取出行组织学检查。结果　不含肝细胞的空囊移植组微囊大多保持良好的形状 ,囊壁光滑、完整 ,囊外无纤维化反应 ,回收率为 ( 89± 2 3) %。肝细胞微囊大部分呈游离状态 ,部分囊外有一薄层纤维层附着 ,回收率为 ( 78± 2 1) % ;囊内细胞存活率由移植前的 ( 91± 16 ) %降至 ( 79±13) %。结论　肝细胞海藻酸钡微囊的生物相容性及机械稳定性较好 ,但免疫源性有待进一步提高。     

微囊化人头皮毛乳头细胞诱导小鼠耳毛囊再生的研究

目的 观察人头皮毛乳头细胞海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠（alginate-polylysine-alginate，APA）微囊是否具备诱导小鼠耳部毛囊再生的功能；寻找理想的微囊直径。方法 以APA微囊包裹体外分离培养的人头皮毛乳头细胞；将毛乳头细胞微囊移植至小鼠耳部皮下，6周后局部取材行组织学检查；共聚焦显微镜下观察葡聚糖-荧光素在APA微囊中的扩散速度和扩散方式，并对比相同时间、不同直径的APA微囊中葡聚糖-荧光素的强度，综合分析确定最佳的微囊直径。结果 组织学检查显示：移植部位皮下有密集的同心圆状毛囊结构形成，其数量、大小、分化程度等与对照组明显不同。荧光素以同心圆状、逐层渗透的方式向APA微囊中扩散；相同时间内荧光强度比较：小囊组〉中囊组〉大囊组。结论 微囊化毛乳头细胞具备诱导毛囊再生的生理功能；微囊理想的直径是400μm。     

一步固化法制作胰岛移植微囊的实验研究

目的　采用一步固化法制作用于胰岛移植的海藻酸钠 -氯化钡微囊 ,研究这种微囊的牢固度及生物相容性。方法　用海藻酸钠和氯化钡为材料 ,采用一步固化法制成微囊 ,观察这种微囊的形态和大小。将其置于生理盐水中 37℃孵育 2个月或置于生理盐水中 37℃、15 0r min水浴振荡1h ,观察微囊的破损率及形态改变。将 5 0 0 0个空微囊分别注射于 12只大鼠腹腔内 ,于 2、6、10周各取 4只大鼠处死后用生理盐水灌洗腹腔 ,将灌洗液离心后计算其中空微囊数并观察微囊的形态改变。结果　一步固化法制作的海藻酸钠 -氯化钡微囊在 37℃培养箱孵育 2个月后破损率为 10 % ;于 37℃、15 0r min水浴振荡 1h后破损率为 18% ;植入空微囊后第 2周每只大鼠可灌洗出空微囊约 30 0 0个 ,微囊均呈圆形 ,完整 ,无纤维化 ;6 - 10周每只大鼠可洗出空微囊约 10 0 0 - 15 0 0个 ,其中 10 % -15 %微囊变形或有裂口 ,部分微囊有明显纤维化。结论　一步固化法制作的海藻酸钠 -氯化钡微囊具有较好的牢固度及生物相容性     

微囊化异种甲状旁腺组织移植的研究

目的探讨微囊化异种甲状旁腺(PTG)组织移植对Wistar大鼠甲状旁腺功能低下的治疗作用及微囊的通透性。方法 40只去甲状旁腺Wistar大鼠随机分为微囊组、非微囊组、空囊组、空白对照组。用海藻酸-钡交联微囊包裹兔甲状旁腺组织,移植至Wistar大鼠肾包囊。移植后每隔2周取血测血钙,移植后第16周取移植物进行透射电镜检查及T淋巴细胞、大鼠IgG抗体的免疫组织化学染色。结果微囊组移植后第4周血清钙由(1．62±0．04)mmol／L恢复至正常水平 (2．2～2．6)mmol／L,9例维持至观察期结束(P<0．01),非微囊组、空囊组及空白对照组血清钙差异无统计学意义(P>0．05)。第16周取出移植物检测显示移植物活性良好,微囊周围可见较多T 淋巴细胞浸润,囊壁及囊内IgG抗体染色阳性。结论海藻酸-钡交联微囊可对甲状旁腺组织起到有效的保护作用,使甲状旁腺组织较长时间存活并发挥正常功能。但海藻酸-钡交联微囊并未减轻受体免疫排斥反应的激活且未有效的免疫隔离IgG抗体。     

大鼠胰岛微囊化延长异种移植物在糖尿病小鼠体内生存期

本实验用胶原酶消化法分离新生大鼠胰岛，培养和Ｆｉｃｏｌｌ密度梯度离心纯化胰岛。用海藻酸－聚赖氨酸－海藻酸生物膜包裹胰岛并进行体外胰岛素分泌的能测定和体内异种移植实验。１０只链脲霉素诱导的糖尿病小鼠腹腔内移植微囊化胰岛３天后，小鼠血糖降至正常，体重逐渐增加，糖尿病得到纠正。维持最长者达１３０天，平均８５．２天。明显优于单纯胰岛植组，其功能维持不足９天。肾脏病理组织染色和透射电镜显示早期微囊化胰岛移植     

一步固化法制作胰岛移植微囊的实验研究

目的 采用一步固化法制作用于胰岛移植的海藻酸钠—氯化钡微囊，研究这种微囊的牢固度及生物相容性。方法 用海藻酸钠和氯化钡为材料，采用一步固化法制成微囊，观察这种微囊的形态和大小。将其置于生理盐水中37℃孵育2个月或置于生理盐水中37℃、150r／min水浴振荡1h，观察微囊的破损率及形态改变。将5000个空微囊分别注射于12只大鼠腹腔内，于2、6、10周各取4只大鼠处死后用生理盐水灌洗腹腔，将灌洗液离心后计算其中空微囊数并观察微囊的形态改变。结果 一步固化法制作的海藻酸钠—氯化钡微囊在37℃培养箱孵育2个月后破损率为10％；于37℃、150r／min水浴振荡1h后破损率为18％；植入空微囊后第2周每只大鼠可灌洗出空微囊约3000个，微囊均呈圆形，完整，无纤维化；6—10周每只大鼠可洗出空微囊约1000—1500个，其中10％—15％微囊变形或有裂口，部分微囊有明显纤维化。结论 一步固化法制作的海藻酸钠—氯化钡微囊具有较好的牢固度及生物相容性。     

微囊化转NGF基因3T3细胞修复大鼠周围神经损伤的实验研究

目的 探讨微囊化转NGF基因3T3细胞移植促进神经再生的可行性。方法 带有小鼠NGF基因的质粒pcDNA3．1 ／NGF经FuGENE^TM6转染NIH 3T3细胞，用APA(海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠)微胶囊包埋后，进行体外培养，定期检测微囊化细胞活性和NGF分泌量变化。同时，将转基因细胞移植于大鼠坐骨神经切断吻合处，于手术后4、8、12周检测神经再生和功能恢复结果。结果 微囊化转NGF基因3T3细胞在体外培养条件下可存活3个月并能稳定表达，移植于损伤坐骨神经的微囊化转NGF基因细胞组再生神经密度大，排列有序，吻合口瘢痕少，单核细胞浸润少，水肿轻，动作电位幅值和传导速度显著增大，坐骨神经功能指数明显升高。结论 微囊化转NGF基因3T3细胞移植可显著促进神经再生和降低异体细胞移植免疫反应。     

A Comparative Study Of Outcomes And Expenses Following Tetraplegia And Paraplegia

Abstract

Objective: A study was designed to directly compare individuals with tetraplegia and paraplegia to further explore neurological and functional outcomes and their impact on theexpense of rehabilitation when controlling for level of completeness, age at the time ofinjury, and length of stay.

Methods: A sample was drawn from the National Spinal Cord Injury Database consisting of 2069 individuals, 1005 with paraplegia and 1064 with tetraplegia.

Results: Significant demographic differences were found between the 2 groups with regard to age, ethnicity, marital status, and employment status. Significant differences werefound between the groups withregard to all individual outcome variables (p<.001) and expenses (p<.05). On average,patients with paraplegic injuries evidenced greater change and efficiency on a functionalindependence measure than patients with tetraplegia. In contrast, patients with tetraplegia showed greater changes and efficiency with regard to ASIAMotor Index scores. Higherrehabilitation expenses were found for patients with tetraplegia.     

神经学定位检查在腰椎间盘突出症临床诊断中应用价值

本文通过对被MRI、cT手术证实的59例腰椎间盘突出症患者的感觉(主要是痛觉)、腱反射和肌力的检查与分析,提示神经学定位检查(尤其是感觉的检查),不但可帮助和检验腰椎间盘突出症的临床诊断,而且可为其定位诊断和鉴别诊断提供重要的依据。临床医生应重视其检查,以提高临床诊断率。     

恶性嗜铬细胞瘤的分子靶标及治疗

近年来,不同国家的研究小组运用遗传学及分子生物学的方法对恶性嗜铬细胞瘤的遗传背景和发生发展过程中的重要生物因子及路径进行了研究,如PDH基因突变、VHL基因突变及其他的一些基因及分子标记物,如VEGFs、HSP90、TERT等,并且指出其中的一些可能作为潜在的分子靶标,并针对这些靶标尝试了一些新的治疗方法.本文仅对近几年来在遗传学及分子生物学方面对恶性嗜铬细胞瘤的分子靶标及治疗所取得的进展作一综述.     

恶性嗜铬细胞瘤的分子靶标及治疗

近年来,不同国家的研究小组运用遗传学及分子生物学的方法对恶性嗜铬细胞瘤的遗传背景和发生发展过程中的重要生物因子及路径进行了研究,如PDH基因突变、VHL基因突变及其他的一些基因及分子标记物,如VEGFs、HSP90、TERT等,并且指出其中的一些可能作为潜在的分子靶标,并针对这些靶标尝试了一些新的治疗方法.本文仅对近几年来在遗传学及分子生物学方面对恶性嗜铬细胞瘤的分子靶标及治疗所取得的进展作一综述.     

Effects Of Carbon Dioxide And Halothane On Compliance And Pulmonary Resistance During Cardio-Pulmonary Bypass

Lung-mechanics during and at the end of cardio-pulmonary bypass were studied in seventeen patients operated upon for acquired or congenital heart disease. Pulmonary resistance to gasflow, volume-pressure ratios and work of breathing were continuously measured with the aid of a respiratory analogue computer. A special calibrating device was used for frequent calibrations with the patient's respiratory gas. Measurements were made at constant blood gas tensions but with varying fractions of inspired carbon dioxide. The effect of halothane as well as the influence of the patient's circulatory situation were analysed. Hypocapnia of the airways resulted in an increase in pulmonary resistance, while ventilation with a 6.5% carbon dioxide mixture in air-oxygen caused a decrease in resistance with 19 to 71% as compared to hypocapnic conditions. An increase of compliance occurred in the majority of the patients with carbon dioxide. Compliance was generally relatively uninfluenced during the operative and postoperative course. A decrease occurred only in those patients where extra-pulmonary factors were in operation as accumulation of fluid in the chest or left heart failure. The breath to breath analytic technique utilized in the study permitted the demonstration of rapid changes in the volume-pressure relationship occurring simultaneously with increasing left atrial pressure, left heart failure, an acute overload of the lungs with blood or a non-satisfactory general circulation. Halothane added to the airway caused a bronchodilatation which was especially evident during airway hypocapnia. Halothane seemed to reverse the bronchodilatatory effect of hypercapnia. The reason for this is not clear, but it is believed that halothane might block some of the adrenergic receptors through which carbon dioxide exerts its action. Further investigations of this problem are necessary.     

面神经腮腺外分支的解剖学研究及其临床意义

目的 准确地描述面神经腮腺外段的分支,走行等情况,为颌面外科、头颈部整形与美容外科提供重要的形态学资料.方法 20具(40侧)新鲜成人头颈部标本,在手术显微镜下解剖观察并记录照相;利用上述形态学资料作为各种面神经损伤的诊断依据,指导相关手术的设计、分离和寻找面神经分支.结果 ①五组神经的分支数个体差异很大,平均颞支3.2支,颧支2.2支,颊支3.6支,下颌缘支1.3支,颈支恒为1支.②面神经急诊损伤探查缝合术12例,均成功.二级吻合前的损伤才具有神经缝合的条件,而二级(集中)吻合后的分支极其细小,探查、缝合基本不可能.③做面神经解剖术或者其他手术需辨清面神经各支时,颞中筋膜和咬肌筋膜是重要的标志.腮腺混合瘤切除面神经解剖术4例,跨面神经移植术2例,SMAS-颈阔肌除皱术千余例.这些手术中,发生明确的医源性面神经颧支损伤2例.结论 ①除颈支或单支的下颌缘支外,各组神经支可以被损伤或切断1～2支而不至于造成严重、永久的瘫痪;②在手术中,颞中筋膜与咬肌筋膜既是重要的保护结构,又是明确的辨别寻找标志.     

力学刺激在工程化心肌组织结构和功能改建中的作用研究

目的 探索力学刺激在工程化心肌组织结构和功能改建中的作用.方法 将分离并培养的新生大鼠心肌细胞与添加了Matrigel的液态Ⅰ型胶原混合,在环形槽中铸成环状心肌细胞/胶原条带.构建的条带在环形槽中培养7天后取出,在对其施加10%的静态拉伸力的情况下,再培养7天.通过光学显微镜、常规HE染色、免疫组织化学染色和透射电镜观察等对构建的组织工程化心肌组织进行评价.结果 工程化心肌组织在力学刺激组的第2天可观察到局部跳动的区域,随时间的延长跳动的区域逐渐增多,强度逐渐增大,并最终形成一致跳动.而对照组未经力学拉伸刺激的工程化心肌组织则未能形成一致跳动.组织学和免疫组织化学染色研究结果显示,构建的工程化心肌组织经力学刺激,心肌细胞比较均匀地分布在整个条带中,且多数沿拉伸方向伸展,胞核呈长梭形,其形态类似于天然成熟心肌组织.透射电镜观察显示,条带中心肌细胞含有排列整齐的肌原纤维,并沿着细胞的长轴方向伸展,肌小节结构和Z带清晰可见.结论 力学刺激可以更好地促进工程化心肌组织的结构和功能改建,使其更接近正常心肌组织.     

一种新型血管生物反应器的研究与开发

目的 根据流体力学的分析改进支撑PGA-细胞材料复合物的硅胶管,设计一种应用于体外培养组织工程血管的生物反应器.方法 利用计算机仿真分析的方法对硅胶管内腔的压力场进行仿真计算,通过计算分析确定硅胶管的结构,进而开发一种新型血管生物反应器.结果 确定了硅胶管的尺寸结构以及培养室内相应的辅助结构,使整个反应器系统能够对PGA-细胞材料复合物进行动态培养.结论 改进后的硅胶管结构合理,整个血管生物反应器系统运行稳定.