胚胎与成人视网膜神经细胞培养

目的 建立胚胎及成人视网膜神经细胞体外培养系统，为视网膜神经细胞的基础研究与药物开发提供实验模型。 方法 10～13周龄胎儿及20～40岁成人视网膜神经层用不同的酶进行消化，分散的细胞接种于预先经过包被的细胞培养盘内，加入或不加入表皮生长因子(epidermal growth factor, EGF)、成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor, FGF)、脑源性神经营养因子(brainderived neurotrophic factor, BDNF)、神经营养素 4(neurotrophic-4，NT-4)等培养。通过BrdU掺入、免疫组织化学及免疫荧光等方法检测培养细胞增殖并辨别细胞成分。 结果 胚胎及成人视网膜细胞可在体外连续培养100及180 d以上。加入EGF、FGF、BDNF或NT-4可明显促进胚胎与成人视网膜神经元存活，胎儿视网膜细胞增殖。与对照组相比，处理组神经元或神经节细胞的百分率较高。 结论 胚胎及成人视网膜神经细胞培养技术为视网膜神经细胞基础研究及药物开发提供了一种十分有价值的手段，加入外源性的生长因子可促进培养的视网膜神经细胞存活、增殖与分化。 (中华眼底病杂志, 2002, 18: 279-282)     

银杏叶对成人视网膜神经细胞活性的影响

目的 研究银杏叶对视网膜神经细胞活性的影响,为治疗退行性视网膜疾病等提供参考依据.方法 以成人视网膜为研究对象,以24 h和72 h MTT检测,透射电镜超微形态学观察,细胞线粒体膜电位测定等为研究手段,研究银杏叶对成人视网膜神经细胞活性的影响.结果 细胞超微形态学观察发现,银杏叶药物组培养2周的细胞外节段盘膜排列规整,内节段线粒体丰富,细胞核染色质均匀.MTT检测发现,银杏叶能够较好地促进视网膜神经细胞增生,且以15.625 mg/ml时保护作用最明显.银杏叶能够显著升高视网膜神经细胞的膜电位并使兴奋性呈波动性变化.结论 银杏叶对培养的视网膜神经细胞有良好的保护作用.     

大鼠小团样视网膜神经细胞培养的方法

目的:探讨视网膜神经细胞的体外培养方法。方法:取出生3d的SD大鼠视网膜组织,木瓜蛋白酶和胰蛋白酶依次消化并吹打制成含不同大小细胞团块的细胞悬液,放入50mL/LCO2,37℃的孵箱中培养。用倒置相差显微镜观察视网膜神经细胞的生长情况。结果:聚集成小团的视网膜神经细胞(<50个细胞)与完全分离成单个的神经细胞相比,贴壁和发出轴突的时间早,轴突长度长,细胞间的轴突联系增多,细胞存活时间亦延长。而较大团块状的细胞只可以见到轴突的伸出和伸长。结论:小团样的视网膜神经细胞培养有利于神经细胞的存活和细胞间的轴突联系,这可能得益于视网膜多种细胞间的联系在体外的持续保持。     

中药对体外培养视网膜神经细胞的干预作用研究

目的　观察中药对体外培养新生小牛及先天性视网膜变性小鼠rds小鼠视网膜细胞生长的干预作用。方法　采用MTT法观察单味中药、复方、中药单体成分对新生小牛和rds小鼠体外培养视网膜神经细胞增殖率的影响。结果　复方 1、枸杞、枸杞多糖、当归、阿魏酸对牛视网膜神经细胞有明显的促增殖作用 ,黄芪、黄芪多糖、bFGF的保护作用较为温和 ,丹参无明显促增殖作用。各药物对rds小鼠的作用趋势与新生小牛视网膜细胞基本相同 ,复方 1对 2个种系的视网膜细胞均作用最强 ,浓度 5 g·L-1时新生小牛视网膜的增殖率为 16 2 % ,浓度 10g·L-1时rds小鼠视网膜的增殖率为 188.0 2 % ,bFGF对rds小鼠视网膜神经细胞无明显作用。结论　复方 1等中药对体外培养视网膜神经细胞生长有较好的保护作用。     

糖尿病早期视网膜病变的神经保护治疗研究进展

糖尿病视网膜病变的早期就可见视网膜神经细胞及胶质细胞的改变,从而引起视网膜的功能改变.多种药物被用来研究早期糖尿病视网膜病变的神经保护,主要包括补充与视网膜损伤相关的营养因子、调节视网膜氧化应激状态、抑制谷氮酸毒性及抗炎症治疗等四个方面,可以通过一种或联合几种作用机制来保护神经细胞,从而减少神经细胞的凋亡,保护视网膜的功能.     

小鼠视网膜神经细胞在不同培养模式中的形态表现

目的:观察不同培养环境对小鼠视网膜神经细胞的影响。方法:分别培养新生小鼠的视网膜神经细胞和色素上皮细胞,并纯化培养视网膜神经节细胞,将纯化和未纯化的视网膜神经细胞分别与视网膜色素上皮细胞接触和分层共培养,相差显微镜观察视网膜神经细胞在不同培养模式中的表现。结果:混合培养的视网膜神经细胞较纯化培养的神经节细胞生存时间长,突触联系多。与视网膜色素上皮细胞共培养时,神经细胞的存活时间进一步延长,突触联系增多,但是神经细胞在与视网膜色素上皮细胞分层和接触共培养的两种模式中,显示出了不同的细胞形态。结论:视网膜神经胶质细胞和视网膜色素上皮细胞不但对神经节细胞具有滋养作用,细胞间的立体结构关系可能还影响着细胞的成熟分化。     

成年人视网膜神经细胞体外培养的实验研究

目的建立成年人视网膜神经细胞的体外培养体系,研究细胞体外生长特性和结构特点。设计实验性研究。研究对象体外培养的成年人视网膜神经细胞。方法以成年人视网膜为研究对象,进行体外细胞培养;取培养7～10天的细胞行免疫组织化学鉴定;取培养10天的细胞行扫描电镜超微形态学检查。主要指标细胞形态,结构。结果在适宜的条件下,成年人视网膜神经细胞可以在体外培养并表现特有的结构特点和生长特性,免疫组化鉴定显示大部分细胞神经元特异性烯醇化酶(NSE)阳性,说明所培养细胞大部分为神经细胞。扫描电镜下观察贴壁伸展生长细胞主要为感光细胞、双极细胞、水平细胞等神经细胞和少量胶质细胞。结论在适宜的培养条件下,成年人视网膜神经细胞可以在体外进行培养并且表现出良好的生长活性。     

N-甲基-D-天冬氨酸及其非竞争性受体阻滞剂和钙离子对培养的鼠视网膜神经细胞的作用

目的　探讨N 甲基 D 天冬氨酸 (N methyl D aspartate,NMDA)及其非竞争性受体阻滞剂(MK80 1)和Ca2 + 对培养的鼠视网膜神经细胞的作用及其相互间的关系。方法　取生后 1～ 3d鼠龄的Sprague Dawley(SD)乳鼠视网膜作为原代视网膜神经细胞进行体外培养 ,对培养 7d的视网膜神经细胞经抗神经丝蛋白 (neurofilamentprotein ,NF)、Thy1 1及抗胶质纤维酸性蛋白 (glialfibrillaryacidicprotein ,GFAP)单克隆抗体进行鉴定 ,同时在培养 7d的神经细胞中单独及联合加入NMDA、MK80 1和Ca2 + ,锥虫蓝拒染 ,计算细胞活性。结果　 2 0 0 μmol/L的NMDA及 10mmol/L的Ca2 + 所致视网膜神经细胞失活与对照组比较 ,差异有显著意义 (F =2 6 0 91;P =0 0 2 5 ,P <0 0 0 1) ,2 0 μmol/L的MK80 1对视网膜神经细胞的影响不明显 ,对Ca2 + 所致细胞毒性无保护作用 ,但可阻断NMDA的作用。结论NMDA、一定浓度的Ca2 + 对培养的视网膜神经细胞有毒性作用 ,MK80 1可阻断NMDA的毒性作用 ,但对Ca2 + 的毒性无阻断作用 ,Ca2 + 致神经元死亡可能还有其他途径     

SD大鼠视网膜神经细胞培养上清液对胚胎干细胞体外分化的诱导作用

目的 探讨视网膜神经细胞培养的上清液对胚胎干细胞（embryonic stem cells, ES）体外分化的诱导作用。 方法 收集SD大鼠视网膜神经细胞培养上清液，抽滤后按2∶3比例与DMEM培养液混合，用该混合液进行ES 细胞的诱导分化，每天倒置相差显微镜观察ES细胞的生长及分化情况,对诱导分化后的细胞进行神经丝蛋白(nellcofilament protein，NFP)免疫组织化学检查。 结果 加入了视网膜神经细胞培养上清液的ES细胞生长出类似神经细胞突起样结构，NFP免疫组织化学染色阳性。 结论 SD大鼠视网膜神经细胞培养的上清液具有诱导ES细胞向神经细胞分化的作用。 (中华眼底病杂志, 2002, 18: 134-136)     

体外无血清培养新生SD大鼠视网膜神经细胞

目的 采用无血清培养建立新生SD大鼠视网膜神经细胞的体外培养方法,为视网膜神经细胞的体外实验研究奠定基础.方法 取出生后3～5d的SD大鼠视网膜,用胰蛋白酶消化分离获取细胞悬液,使用无血清神经原培养基(Neurobasal TM-A Medium)和添加剂B-27 Supplement Minus AO进行培养.倒置相差显微镜观察细胞形态及轴突生长情况.培养至第5天,用抗微管相关蛋白2抗体、抗视紫红质蛋白抗体及抗胶质纤维酸性蛋白抗体,行免疫细胞化学鉴定并计算视网膜视杆细胞的纯度.结果 采用无血清法培养的视网膜神经细胞生长良好,细胞伸出突起,部分神经元的突起交织呈网状.生长至第5天经免疫细胞化学证实其中神经元细胞占95.6％,而38.6％为视网膜视杆细胞,同时神经胶质细胞的生长得到了很好地抑制.结论 无血清培养法可以获取纯度较高的视网膜神经细胞,为研究视网膜光感受器细胞提供了理想的体外实验模型.     

Strabisme Alternant - Etude clinique - traitement

The author defines motor and sensory alternation: the term alternation should not be used in isolation, it should always be accompanied by the name of the parameter concerned. Sensory alternation is always found together with motor alternation but the reverse is not true.The examining criteria for a diagnosis of sensory alternation are given, sensory alternation must not be confused with alternating inhibition. Working from clinical observations of cases of motor alternating strabismus, the author selects 2 types of binocular sensory relations which allow one to differentiate between:- cases of primary alternating strabismus- cases of secondary alternating strabismusThese forms will develop in different ways; in both cases a cure is possible providing that the right treatment is prescribed and once prescribed carefully followed, etc. It is always a case of serious forms of strabismus whose developmental period is spread over several years.According to the authors, the frequency of cases of true primary strabismus is from 1–3%, the frequency of cases of secondary alternating strabismus varies according to the type of therapy practised on cases of monocular strabismus with amblyopia. These latter will become cases of alternating strabismus under the influence of certain types of therapy carried out over several years (penalization, rocking, alternated occlusion, etc...).Experimental data on kittens confirm clinical data; kittens placed in abnormal environments during the sensitive period will show modification in the distribution of cortical cells and the absence of binocular cells (either because the excitation of the two eyes was not simultaneous, or not identical: artificial strabismus, occlusion, opaque glasses). This disturbances become irreversible after a certain period of exposure (a function of age, length of exposure, etc...).It is thus necessary to bear in mind: 1) the iatrogenic risks of certain orthoptic treatments, 2) the necessity for a binocular form of treatment as soon as possible, as once a certain stage is passed, cortical plasticity diminishes and the elaboration of normal binocular relations becomes impossible.

---

     

Effects of Adenosine Agonists on Intraocular Pressure and Aqueous Humor Dynamics in Cynomolgus Monkeys

The effects of single or multiple topical doses of the relatively selective A₁adenosine receptor agonists (R)-phenylisopropyladenosine (R-PIA) and N⁶-cyclohexyladenosine (CHA) on intraocular pressure (IOP), aqueous humor flow (AHF) and outflow facility were investigated in ocular normotensive cynomolgus monkeys. IOP and AHF were determined, under ketamine anesthesia, by Goldmann applanation tonometry and fluorophotometry, respectively. Total outflow facility was determined by anterior chamber perfusion under pentobarbital anesthesia. A single unilateral topical application of R-PIA (20–250 μg) or CHA (20–500 μg) produced ocular hypertension (maximum rise=4.9 or 3.5 mmHg) within 30 min, followed by ocular hypotension (maximum fall=2.1 or 3.6 mmHg) from 2–6 hr. The relatively selective adenosine A₂antagonist 3,7-dimethyl-1-propargylxanthine (DMPX, 320 μg) inhibited the early hypertension, without influencing the hypotension. Neither 100 μg R-PIA nor 500 μg CHA clearly altered AHF. Total outflow facility was increased by 71% 3 hr after 100 μg R-PIA. In conclusion, the early ocular hypertension produced by topical adenosine agonists in cynomolgus monkeys is associated with the activation of adenosine A₂receptors, while the subsequent hypotension appears to be mediated by adenosine A₁receptors and results primarily from increased outflow facility.