骨保护素抑制小鼠植骨气囊模型中聚乙烯磨损颗粒诱导的溶骨效应

目的 运用小鼠植骨气囊模型,研究骨保护素(osteoprotegerin,OPG)减少破骨细胞骨破坏的吸收效应.方法 在小鼠背部注入空气形成气囊,取同源小鼠的颅骨植入气囊内制作气囊模型.实验分成3组:空白组(气囊内注入生理盐水)、颗粒组(气囊注入聚乙烯颗粒和生理盐水)、OPG组(气囊内注入聚乙烯颗粒和OPG).3周后取...     

NBD多肽与OPG联合抑制聚乙烯磨损颗粒诱导的溶骨效应

目的运用小鼠植骨气囊模型,研究NBD多肽、NBD多肽联合骨保护素(osteoprotegerin,OPG)减少骨破坏吸收防治人工关节松动的效应。方法在小鼠背部注入空气形成气囊,取同源小鼠的颅骨植入气囊内。将已制成的气囊模型的小鼠分成3组:NBD多肽组(气囊内注入聚乙烯颗粒及NBD多肽);联合组(气囊内注入聚乙烯颗粒、NBD多肽及OPG);对照组(气囊注入聚乙烯颗粒及生理盐水)。3周后取囊壁和植入颅骨组织进行HE染色检测炎症反应情况及炎症细胞渗出量;取组织匀浆液应用ELISA方法检测炎性细胞因子(IL-1、TNF)浓度;抗酒石酸酸性磷酸酶染色观察破骨细胞的分化成熟情况;应用扫描电镜检测骨片吸收情况及RT-PCR检测破骨细胞骨吸收相关基因Ⅱ型碳酸酐酶(CA-Ⅱ)mRNA表达水平。结果①HE染色检测炎症细胞渗出量NBD多肽组(870±236)、联合组(820±198)明显少于对照组(3 325±467)(P<0.05)。②ELISA法检测炎性细胞因子(IL-1、TNF)浓度NBD多肽组[(138.34±2.32)、(156.14±4.17)]与联合组[(129.32±4.62)、(148.78±5.36)]均明显低...     

假体周围骨保护素表达与磨损微粒分布的关系

目的 :观察骨保护素 (osteoprotegerin ,OPG)在假体周围各区的浓度变化 ,研究各区OPG表达与磨损微粒聚积之间的关系。　方法 :临床选取 4例人工全髋关节翻修术病例 ,于术中按照Delee Charnley髋臼分区法和Gruen Amstutz股骨分区法 ,采取松动假体周围各区的反应界膜组织 ,采用羊抗人OPG多克隆抗体对界膜进行免疫标记 ,比较OPG在各个分区中的浓度 ,并以电镜观察统计界膜各个分区中磨损微粒聚积的数目。　结果 :髋臼分区中OPG阳性细胞数目三区显著高于一区和二区 (P <0 .0 5 ) ,股骨分区中OPG的阳性细胞数目一区、六区和七区显著高于其余各区 (P <0 .0 5 )。髋臼分区中三区磨损微粒聚积数明显高于一区和二区 (P <0 .0 5 ) ,股骨分区中一区、七区中黑色磨损微粒均匀弥漫存在 ,明显高于其余各区 (P <0 .0 5 )。　结论 :假体周围OPG的表达具有一定规律性 ,并与磨损微粒的局部聚积密切相关。     

纱布纤维可否在小鼠气囊植骨模型中诱发炎性骨溶解的研究

目的建立小鼠气囊植骨模型,观察纱布纤维是否会诱发炎性骨溶解,为优化手术操作奠定实验基础。方法选择2011年3—4月4例在我院行膝关节置换术患者丢弃的胫骨上端松质骨作为胫骨标本,均分为2块,1块采用干纱布擦拭(干纱布组),另1块采用0.9%氯化钠溶液浸湿的湿纱布擦拭(湿纱布组),通过电镜扫描并计算两组纱布纤维覆盖率。近交系SPF级BALB/c小鼠30只随机分为对照组、聚乙烯组和纱布组,每组10只,建立气囊植骨模型。肉眼观察小鼠处死前活动情况、死亡情况及处死后切口炎症反应情况;采用苏木素-伊红(HE)染色法观察小鼠囊壁组织单核细胞计数和淋巴细胞计数;抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色法观察骨片破骨细胞阳性染色情况;免疫组织化学染色法观察囊壁组织白介素(IL)-1β、IL-6及肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达水平,以平均光密度值表示;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测囊壁组织TNF-α水平;实时定量聚合酶链反应(PCR)检测囊壁组织TNF-αmRNA表达水平,以TNF-αmRNA表达倍数表示。结果 (1)干纱布组纤维覆盖率为(18.11±6.94)%,湿纱布组为(4.86±3.64)%,差异有统计学意义(t=3.38,P<0.05)。(2)各组小鼠处死前活动情况良好,无死亡小鼠;处死后发现,聚乙烯组和纱布组小鼠切口存在不同程度的炎症反应,对照组小鼠无明显炎症反应。(3)各组小鼠囊壁组织炎症反应程度比较,差异有统计学意义(P<0.05)。(4)各组小鼠颅骨骨片TRAP染色阳性面积比较,差异有统计学意义(F=17.93,P<0.05)。(5)各组小鼠囊壁组织IL-1β、IL-6、TNF-α表达水平比较,差异均有统计学意义(F值分别为23.39、28.40和122.22,P<0.01)。(6)各组小鼠囊壁组织TNF-α水平及TNF-αmRNA表达倍数比较,差异均有统计学意义(F值分别为653.97和375.31,P<0.01)。结论纱布纤维与聚乙烯颗粒一样,可导致局部炎性细胞因子的释放增多而诱发炎性骨溶解。术中使用纱布要慎重,尤其应避免使用干纱布,建议使用湿纱布以减少纤维的残留。     

低强度超声对颅骨溶解模型小鼠磨损颗粒诱导的骨溶解效应的影响

目的:探讨低强度超声在小鼠颅骨溶解模型中对破骨细胞增殖分化的干预,为临床治疗关节松动提供理论依据。方法：选择30只BALB/c小鼠,按随机数字表法分为空白对照组、颗粒组和超声组,每组10只。采用改良磨损颗粒法复制小鼠颅骨溶解模型,在术后15 d获取小鼠颅顶骨骨组织标本,HE染色观察炎细胞渗出量和骨溶解面积变化;扫描电镜检测骨片吸收陷窝面积百分比;抗酒石酸酸性磷酸酶染色（TRAP）观察破骨细胞增殖分化;免疫组织化学染色定位观察损伤骨组织中骨保护素（OPG）的表达变化。结果：HE染色,与空白对照组比较,颗粒组和超声组炎细胞渗出量和骨溶解面积明显增加（P<0.01）;与颗粒组比较,超声组骨溶解面积明显降低（P<0.05）,而2组炎细胞渗出量比较差异无统计学意义（P>0.05）。扫描电镜,超声组骨片吸收陷窝面积百分比显著低于颗粒组（P<0.01）。TRAP染色,超声组破骨细胞数量明显低于颗粒组（P<0.01）。免疫组织化学,超声组OPG阳性细胞数明显高于颗粒组及空白对照组（P<0.05）。结论：低强度超声能抑制小鼠颅骨溶解模型中破骨细胞的增殖分化,有效降低聚乙烯磨损颗粒所致的骨溶解效应,从而增强关节假体周围骨的密度和强度,降低关节松动的发生率。     

UHMWPE颗粒导致假体无菌性松动模型的建立

目的：建立超高分子质量聚乙烯（UHMWPE）颗粒导致的人工关节无菌性松动动物模型.方法：将12只平均体质量3kg的雌性新西兰大白兔随机平分为实验组和对照组,两组均向左侧胫骨髓腔竖直植入羟基磷灰石（HA）涂层假体.实验组于植入前向假体表面均匀涂抹25μgUHMWPE颗粒,对照组不做处理.术后12wk回收标本行骨组织形态学、生物力学以及影像学测量,评估新模型效果.结果：同对照组相比,实验组的骨皮质厚度、生物力学固定强度、骨-假体接触率、假体周围骨体积分数、骨矿化水平和假体周围骨密度均有所下降.结论：成功建立了假体表面涂抹UHMWPE颗粒诱导新西兰大白兔人工关节假体无菌性松动的动物模型.     

盐溶法构建磨损颗粒诱导小鼠颅骨溶解模型方法的建立及评价

目的：探讨构建新型磨损颗粒诱导的骨溶解模型,为研究人工关节无菌性松动提供简单、方便的实验动物模型。方法：制备无菌盐包埋磨损颗粒;采用随机数字表法将50只BALB/c小鼠分为空白对照组、纯盐组、气囊植骨组和盐包埋磨损颗粒组,其中气囊植骨组20只,其他各组10只;气囊植骨组小鼠术后21 d,余3组术后14 d获取小鼠颅骨组织标本,HE染色观察炎细胞渗出量和骨溶解面积;扫描电镜观测骨片吸收陷窝面积百分比;抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色检测破骨细胞增殖分化。结果：HE染色,与空白对照组和纯盐组比较,气囊植骨组和盐包埋磨损颗粒组小鼠的炎性细胞渗出量、骨溶解面积明显增大（P<0.01）;与气囊植骨组比较,盐包埋磨损颗粒组小鼠TRAP染色破骨细胞数量明显增多（P<0.01）;扫描电镜观察,盐包埋磨损颗粒组小鼠骨片吸收陷窝面积百分比显著高于气囊植骨组（P<0.01）。结论：盐溶法是一种简单、经济、快速准确的构建小鼠颅骨溶解模型方法,能够真实模拟人工关节松动发生的病理过程。     

Bevacizumab抑制骨溶解的实验研究

目的：观察局部注射不同浓度的血管内皮生长因子抑制剂bevacizumab对磨损颗粒诱导骨溶解的抑制作用。方法：建立磨损颗粒诱导骨溶解的植骨气囊动物模型,分别在bevacizumab低剂量组（C组）和bevacizumab高剂量组（D组）小鼠气囊内隔天注入0.2 mL 25μg·mL^-1和250μg·mL^-1 Bevacizumab溶液,空白对照组（A组）和阳性对照组（B组）则以等量生理盐水取代,2周后观察囊壁炎症反应及骨溶解情况。结果：阳性对照组囊壁红肿及血管增生明显重于空白对照组,不同剂量bevacizumab组（C、D组）囊壁红肿及血管增生轻于阳性对照组。HE染色显示不同剂量bevacizumab组囊壁厚度、细胞密度均明显低于阳性对照组（P〈0.05）,并随浓度增加而降低（P〈0.05）,骨片边缘骨破坏也轻于阳性对照组。实时荧光定量PCR及ELISA显示不同剂量bevacizumab组炎性因子表达明显低于阳性对照组（P〈0.05）。结论：局部注射Bevacizumab可抑制磨损颗粒诱导的炎症反应及骨溶解。     

小鼠皮下气囊慢性炎症模型的建立

目的:探索建立小鼠皮下慢性炎症模型的方法.方法:在小鼠皮下制作气囊,然后向气囊内注入不同致炎物(脂多糖和卡介苗),建立两种慢性炎症模型,观察皮下慢性炎症发生、发展情况及慢性炎症生成率.对照组小鼠气囊内注入生理盐水.结果:实验组小鼠皮下气囊壁慢性炎症生成率均为100％,对照组小鼠气囊壁无慢性炎症反应发生.使用t检验对各组小鼠皮下气囊壁的重量进行统计分析.脂多糖组与对照组相比,在造模后第5、7、12、14和16天时差异有统计学意义(P＜0.05)；卡介苗组与对照组相比在第5天时差异无统计学意义(P＞0.05),在造模后第7、12、14和16天时差异有统计学意义(P＜0.05).脂多糖和卡介苗组的气囊壁均在造模后第7天出现典型的慢性炎症表现.脂多糖和卡介苗组气囊灌洗液的中性粒细胞在造模5d逐渐为淋巴细胞和单核巨噬细胞取代,对照组灌洗液未检出炎细胞.结论:在小鼠皮下制作气囊,注入脂多糖或卡介苗可以成功地建立小鼠皮下气囊慢性炎症模型.此模型能较好地模拟在单一致炎因子存在情况下引起的慢性炎症状态.     

重离子辐照对荷颊囊癌金黄地鼠血清IL-2水平的影响

摘要：目的通过检测重离子辐照前后荷颊囊癌金黄地鼠外周血血清中白细胞介素-2（IL-2）水平变化,探讨重离子束辐照对机体
免疫状态的影响。方法应用酶联免疫吸附法检测40例荷瘤组及8例空白对照组经重离子束辐照前后血清IL-2水平变化。结
果荷瘤（0Gy）组血清IL-2水平为0.16±0.01,较空白对照组水平低;而荷瘤辐照组经4、6、8、12Gy辐照后IL-2水平分别0.18±
0.04、0.22±0.05、0.15±0.03和0.13±0.04;辐照后血清IL-2水平先出现升高趋势,至6Gy组时达到最高,之后随辐照剂量的增大而
降低,至12Gy时仍低于空白对照组水平。结论重离子束辐照对荷颊囊癌金黄地鼠血清中IL-2表达水平产生影响,存在一定的
量效关系。
     

Combined therapy of interleukin 12 and interleukin 18 against cryptococcus neoformans infection in a murine model

Objective To explore adverse effects of comloined treatment of interleukin-12 (IL-12) and interleukin-18 (IL-18) against cryptococcosis in a murine model.Methods Infected mice were treated with a combination of IL-12 and IL-18. Their body weight and intake of water and food were observed and recorded. Serum levels of leptin were detected with an enzyme-linked immuno sorbent assay (ELISA).Results In the combined treatment group, the intake volume of water and food were reduced,leading to weight loss and undetectable levels of leptin in the serum. These adverse effects were more profound in mice that had received higher doses of cytokines, which sometimes led to a fatal outcome.There was a significant difference compared with the control group. Neutralization of endogenous tumor necrosis factor-α (TNF-α) by its specific mAb did not alter the wasting effect of this treatment.Conclusions The combined IL-12/IL-18 treatment may cause a number of adverse effects independent of TNF-α and leptin synthesis. Further investigations for resolving these adverse effects are required before clinical application of these cytokines.     

Expression of chemokine receptors CCR3,CCR5 and CXCR3 on CD4+ T cells in CBA/JxDBA/2 mouse model,selectively induced by IL-4 and IL-10,regulates the embryo resorption rate

Background Chemokines and their receptors have been a research focus in transplantation immunology.Chemokines and their receptors play a role in lymphocyte recruitment and differentiation process.This study aimed to observe whether IL-4 and IL-10 may regulate the expression of chemokine receptors CCR3,CCR5 and CXCR3 on CD4+ T cells in CBA/JxDBA/2 mouse model and to explore the role of CCR3,CCR5,CXCR3 in immune tolerance in pregnancy.Methods The mouse model of spontaneous abortion (CBA/JxDBA/2) and the normal pregnant mouse model (CBA/JxBALB/c) were used.CBA/JxDBA/2 mice were injected with IL-4 (CBA/JxDBA/2-1L-4),IL-4 and IL-10 (CBA/JxDBA/2-1L-4+IL-10),or normal saline (CBA/JxDBA/2-NS) as a control.The expression of CCR3,CCR5 and CXCR3 on CD4+ T cells from mouse peripheral blood was measured by the double-labelled FCM method,and the embryo resorption rate was also examined.Results The embryo resorption rate in the CBA/JxDBA/2 group without any treatment was significantly higher than that in the CBA/JxBALB/c group (17.9% vs 3.7%,P＜0.01).The embryo resorption rate in the CBA/JxDBA/2 group immunized with IL-4 or IL-4 together with IL-10 was significantly decreased,compared with that in the control and NS groups respectively.CCR3 expression on CD4+ T cells in the CBA/JxDBA/2 group without any treatment was significantly lower than that in the CBA/JxBALB/c group (0.3738±0.3575 vs 1.2190±0.2772,P＜0.01 );both CCR5 (3.0900±1.5603 vs 1.2390±0.6361,P ＜0.01)and CXCR3 (2.4715±0.9074 vs 0.9200±0.5585,P ＜0.01 ) expressions on CD4+ T cells of the CBA/JxDBA/2 group without any treatment were significantly higher than those of the CBA/JxBALB/c group.Significant up-regulation of CCR3 and down-regulation of CXCR3 were found in the CBA/JxDBA/2 group treated with IL-4 (CCR3:2.0360±0.6944,CXCR3:1.3510±0.5263,P ＜0.01) or IL-4 and IL-10 (CCR3:1.8160±1.0947,CXCR3:1.0940±0.7168,P＜0.01).Because of the CCR5,IL-4 and IL-10 (1.9400±0.8504 vs 3.0900±1.5603,P ＜0.05),but IL-4 alone (2.5310±1.3595 vs 3.0900±1.5603,P ＞0.05)treatment significantly decreased the expression of CCR5 in CBA/JxDBA/2.Conclusions The abnormal expression of CCR3,CCR5 and CXCR3 on CD4+ T cells may play an important role in the pathogenesis of spontaneous abortion.The pregnancy immune tolerance may be induced through selective induction of CCR3,CCR5 and CXCR3 expressions by IL-4 together with IL-10.     

矿盐粉粒吸入疗法对哮喘小鼠肺组织病理形态及血清IL-4、IL-5、IL-13水平的影响

目的： 探讨天然矿盐粉粒吸入对哮喘小鼠肺组织病理及血清IL-4、IL-5、IL-13水平的影响。方法： 将40只Balb/c雌性小鼠随机分为对照组、模型组、30 min治疗组、60 min治疗组,每组10只。第0、7天分别在模型组、30 min治疗组、60 min治疗组小鼠腹腔注射致敏液鸡卵清蛋白（Ovalbumin,OVA）,对照组注射生理盐水。第14天对模型组和治疗组行超声雾化吸入OVA以诱发哮喘;对照组则以生理盐水雾化吸入。第15天起,两治疗组每天分别用矿盐粉粒吸入治疗30 min或60 min,对照组和模型组则吸入空气,各组共吸入10 d。第22至第24天连续诱发哮喘3天,第25天处死小鼠,取肺组织常规行病理切片,ELISA法检测血清IL-4、IL-5、IL-13水平。结果： 与对照组比较,模型组小鼠肺组织病理出现支气管收缩、管腔狭窄、黏膜上皮坏死脱落,大量炎症细胞浸润、嗜酸性粒细胞聚集。与模型组比较,治疗组上述表现明显减轻。与对照组比较,模型组小鼠血清IL-4、IL-5和IL-13含量明显升高（P＜0.01或P＜0.05）;与模型组比较,两治疗组的IL-4、IL-5、IL-13含量则明显降低(P＜0.01)。结论： 吸入天然矿盐粉可减轻支气管哮喘小鼠气道炎症,降低血清中哮喘相关细胞因子IL-4、IL-5、IL-13的含量。