结核分枝杆菌快速药敏实验的研究进展

结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)引起的结核病是常见的人类传染病之一。约三分之一的世界人口曾经感染MTB,亚洲地区感染者占全世界的三分之二。中国是全球22个结核病高发国之一,发病人数居世界第2位,仅次于印度[1]。全国第4次结     

微量MIC检测判断结核分枝杆菌药敏的方法学研究

目的 建立用微量MIC值判断结核分枝杆菌药物敏感性的方法 ,并进行初步临床应用评价.方法 采用液体培养基MIC测定技术,在96孔U型板中进行检测,以60株已知药敏结果 的本院菌株库保存菌株作为试验菌株, 根据Bactec MGIT结果采用ROC曲线分析建立微量MIC药敏判断界值,最后用80株连续时间段内收集的结核分枝杆菌临床分离株对微量MIC药敏判断界值进行验证和修正.结果 微量MIC药敏法的最佳接种菌量为10~(-3)mg/ml数量级,7～10 d即可报告结果 ,链霉素、异烟肼、利福平、乙胺丁醇、氧氟沙星、阿米卡星和卷曲霉素的最佳判断界值分别为2、0.25、1、2、1、4和4 μg/ml,其敏感度分别为93.5%、97.7%、93.5%、84.4%、95.8%、91.7%和88.9%, 特异度分别为95.6%、94.6%、100.0%、93.8%、92.9%、95.6%和91.5%.其准确性分别达95.0%、96.3%、97.5%、90.0%、93.8%、95.0%和91.3%. 结论 微量MIC药敏检测方法 具有快速、准确、低成本和操作简单的优点,具有良好的推广应用前景,适合在我国各级结核病专业收治机构使用.     

结核分枝杆菌临床分离株药敏结果与耐药程度的关联分析

目的 探讨结核分枝杆菌临床分离株对12种抗结核药物的MIC值及其药敏检测结果 与耐药程度的关联规律,从而为临床制定治疗方案提供借鉴依据.方法 采用液体培养基联合MTT技术进行抗结核药物的MIC检测.对上海市肺科医院2009年1-6月间的163株结核分枝杆菌临床分离株进行RFP、INH、SM、EMB、OFLX、LVFX、MOX、AMK、CPM、PTA、CLA和PAIN的MIC检测和Bactec MGIT快速培养仪药敏检测,并进行MIC与耐药程度的关联性分析.结果 67%(42/62)的SM耐药株MIC≥16 μg/ml,63%(51/81)的INH耐药株MIC≥8 μg/ml,77%(50/65)的RFP耐药株MIC≥8 μg/ml,20%(12/60)的EMB耐药株MIC≥4 μg/ml;43%(25/58)的OFLX耐药株MIC≥8 μg/ml;41%(15/37)的AMK耐药菌株MIC≥16 μg/ml,41%(12/29)的CPM耐药菌株MIC≥4 μg/ml.OFLX耐药株的3个氟喹诺酮类药物的MIC(OFLX、LVFX和MOX的MIC分别为2～128、1～32和0.0625～1 μg/ml)差异有统计学意义(F=16.874,P<0.01);SM、INH、RFP、EMB、OFLX、AMK和CPM在任6种及7种药物同时耐药株中的MIC值(分别为0.5～128、2～64、0.25～128、1～32、1～64、0.5～128和1～128μg/ml)明显高于任1种及2种药物耐药菌株的MIC值(MIC值分别为0.25～128、0.0625～64、0.25～32、0.25～2、0.125～2、0.5～4和1～4 μg/ml,F值分别为20.066、40.499、47.197、70.373、91.432、41.840和21.547,P均<0.05);SM、INH、RFP、EMB在4种药物同时耐药菌株中MIC值(分别为1～128、2～64、0.25～128和1～32μg/ml)显著高于任1种及2种药物耐药株(MIC值分别为0.25～128、0.0625～64、0.25～64和0.25～2 μg/ml,F值分别为26.242、23.563、31.541和64.469,P均<0.05);RFP在MDR酶株的MIC值(2～64 μg/ml)显著高于非MDR的耐药菌株的MIC值(0.25 μg/ml,F=5.613,P<0.05).结论 本研究揭示了常用的12种抗结核药物的耐药程度与常规药敏检测结果 之间的关联规律,为临床医生根据常规药敏结果 制定更加有效的抗结核治疗方案提供重要的借鉴.     

130株结核分枝杆菌药敏试验结果分析

目的 探讨结核分枝杆菌依赖抗结核药物的发生率及特点。方法 采用绝对浓度间接法对137株结核分枝杆菌（含7株非结核分枝杆菌）进行7种药物的敏感性试验，药物依赖判定：在含抗结核药物的培养基上生长旺盛程度和菌量，高浓度药物培养基≥低浓度药物培养基≥对照培养基。结果 130株结核分枝杆菌和7株非结核分枝杆菌共检出依赖菌12株（8．76％）。其中依赖异烟肼3株（2．19％），依赖利福平10株（7．3％），依赖链霉素3株（2．19％），同时依赖2种药物者4株（2．92％）。结论 药物依赖现象均发生自耐多药菌株，尚未发现非结核分枝杆菌及初始耐药菌药物依赖。     

结核分枝杆菌药物依赖性的研究进展

我国是世界上22个结核病高负担国家之一，结核病患者数量居世界第二位。更为严重的是：我国肺结核耐药情况十分突出，耐药率高达46％，在WHO公布的世界38个国家和地区结核病耐药检测资料中，我国在引起警示的国家和地区中名列第一。耐药导致结核病患者化疗失败，造成排菌病例和难治病例增加，并导致更多的人被耐药菌感染，更多的新病例难以治愈。而作为耐药的特殊形式一结核菌药物依赖现象的发现，为结核病的防治又提出新的挑战。     

我院2010年结核病实验室结核菌药敏结果分析

目的 了解本地区结核菌耐药情况,指导临床医生合理选择抗结核药物,减少耐药菌的产生.方法 采用直接涂片检查法和改良罗氏培养基培养法进行培养鉴定,采用菌液浓度比例法进行药敏测试.结果 385例结核菌培养阳性分离株中,耐药总例数为144例,总耐药率37.4％,单耐药99例,单耐药率25.7％,以耐S最多11.0％(42/385),385例阳性标本中至少耐H、R的有17例,耐多药率4.42％.结论 我市结核病防治工作现状仍不容乐观,结核分枝杆菌耐药状况值得重视,应进一步加强结核病患者的归口管理,推行全程化疗督导.     

新疆地区1998至2008年结核分枝杆菌耐药情况分析

目的 了解新疆地区1998～2008年结核分枝杆菌耐药情况,为新疆地区结核病的诊断、治疗以及防控提供参考.方法 用BACTEC MGIT-960系统对不同来源的临床标本进行药物敏感试验.结果 总耐药率、耐链霉素率、耐利福平率由1998年的78.20%、44.14%、44.68%降低到2008年的59.62%、27.64%、21.05%;耐乙胺丁醇率由1998年的14.23%升高到2008年的21.68%;耐异烟肼变化不大.耐1种药由1998年的35.86%降到2008年的31.44%,耐4种药由1998年的0.54%升高到2008年的2.08%.结论 尽管新疆地区的耐药率仍高于全国平均水平,但11年来耐药率呈下降趋势,耐多药结核病增多应引起高度重视.     

结核分枝杆菌364株耐药结果分析

目的：分析肺结核患者的耐药情况。方法：对沈阳市胸科医院2007-01/2008-05培养阳性的肺结核患者364例进行4种抗结核药物（异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇）的耐药性测定。结果：364株结核分枝杆菌的总耐药率为54.4%,其中初始耐药率为40.2%,获得性耐药率为69.7%;初始耐药率与获得性耐药率比较,差异有统计学意义（2χ=5.43,P〈0.05）。结论：沈阳地区结核病耐药严重,应采取有效的防控措施。     

徐州市结核分枝杆菌耐药情况调查

目的了解徐州市结核分枝杆菌的耐药情况。方法采用整群抽样的方法连续收集徐州市城区结核防治门诊2008年8月至2010年4月痰菌阳性的肺结核患者的痰标本193例,用比例法做一线药物（异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇）的敏感试验,耐多药的患者做二线药物（左氧氟沙星、阿米卡星、卷曲霉素、丙硫异烟胺）的敏感试验。结果符合条件并纳入调查的细菌有178株;178株结核分枝杆菌总的耐药率为38.8%,初治和复治耐药率分别为21.4%、72.1%,耐多药率为18.0%,初治和复治耐多药率分别为4.3%、44.3%,4种一线药物耐药顺序由高到低分别为耐异烟肼30.3%,耐链霉素29.2%,耐利福平22.5%,耐乙胺丁醇19.1%,复治患者对4种一线药物的耐药率明显高于初治患者;同时耐1种、2种、3种、4种药物的初治和复治耐药率分别为6.8%、8.5%、2.6%、4.3%,9.8%、14.8%、9.8%、29.5%,复治患者同时耐3、4种药物的耐药率明显高于初治者;32例耐多药患者对4种二线药物总耐药率为37.5%,耐药顺序由高到低分别为耐左氧氟沙星28.1%,耐丙硫异烟胺15.6%,耐阿米卡星12.5%,耐卷曲霉素6.3%。结论徐州市结核分枝杆菌整体耐药率仍处于高水平,各部门的结核病防治工作者应采取切实有效的措施,降低耐药结核病的发生。     

2318株结核分枝杆菌耐多药性分析

目的 探讨贵阳市肺科医院住院结核病患者中的耐药情况,为临床诊断和治疗耐多药结核病提供可靠的科学依据.方法 对2004年1月至2009年8月住院患者的临床分离株进行菌型鉴定后,进行药物敏感性试验,分析不同类型结核病患者的耐药情况.结果 2318株结核分枝杆菌耐多药率为23.8%,初始耐多药率为12.1%,获得性耐多药率为63.8%.结论 目前结核病患者耐药率较高,应尽快加强耐药结核病患者的防治工作,减少和避免耐多药结核病患者的产生.     

焦磷酸测序技术检测结核分枝杆菌四种药物耐药性

目的 利用焦磷酸测序技术检测结核分枝杆菌对利福平、异烟肼、氧氟沙星、阿米卡星的耐药性,并对其临床应用进行评价.方法 收集上海市肺科医院2008-2009年临床确诊的肺结核患者的痰标本培养阳性结核分枝杆菌89株.所有菌株按<结核病诊断实验室检验规程>进行分枝杆菌培养、菌种鉴定.另外10株已知药敏结果的结核分枝杆菌来自上海市肺科医院菌株库.利用焦磷酸测序技术,以10株已知药敏结果和经直接测序已知耐药基因突变情况的结核分枝杆菌为试验菌株,探索焦磷酸测序检测结核分枝杆菌rpoB、katG、gyrA、rrs耐药基因的最佳模式,并用该条件检测89株结核分枝杆菌临床分离株,检测结果与Bactec 960药敏法进行比较.结果 rpoB、gyrA基因检测宜采用焦磷酸测序序列分析模式,katG、rrs基因检测宜采用焦磷酸测序单核苷酸多态性模式.以Bactec 960药敏法测定结果为判断标准,则焦磷酸测序法检测89株结核分枝杆菌临床分离株对利福平、异烟肼、氧氟沙星、阿米卡星耐药性的敏感度分别为98.0%、64.1%、79.5%、78.3%,特异度分别为97.5%、100.0%、90.0%、100.0%,准确性分别为97.8%、77.5%、85.4%、94.4%,该法检测利福平、氧氟沙星、阿米卡星的检测结果与Bactec 960药敏检测结果一致性较好,Kappa值均≥0.7.结论 焦磷酸测序技术检测结核分枝杆菌对利福平、异烟肼、氧氟沙星、阿米卡星耐药性具有快速、准确、高通量的优点,是一种可对结核分枝杆菌多种药物耐药性进行快速检测的方法.

Abstract：

Objective To develop an assay to determine Mycobacterium tuberculosis resistance to rifampin, isoniazid, ofloxacin and amikacin by pyrosequencing and evaluate the value of this method in clinical application. Methods Eighty-nine clinical isolates of Mycobacterium tuberculosis from tuberculosis patients were collected from Shanghai Pulmonary Hospital during 2008 to 2009. All strains were isolated from decontaminated sputum, cultured on Lowenstein-Jensen media and identified by traditional biochemical tests with standard methods. Ten Mycobacterium tuberculosis were selected from the strain bank of Shanghai Pulmonary Hospital. The optimal conditions of detection of rpoB, katG, gyrA and rrs gene by pyroseuencing were determined, using the 10 Mycobacterium tuberculosis strains whose drug susceptibility of Bactec 960 and sequence of rpoB, katG, gyrA, rrs gene were known. Then the drug susceptibility of 89 Mycobacterium tuberculosis clinical isolate strains were detected by pyrosequencing using this conditions and the results were compared with that of the Bactec 960 methods. Results The pyrosequencing program of sequence analysis was suitable for the detection of the mutations of rpoB and gyrA genes, and the program of single nucleotide polymorphism was suitable for katG and rrs genes. Among the 89 Mycobacterium tuberculosis clinical isolates,when using the drug susceptibility of Bactec 960 as the standard, the sensitivity of rifampin, isoniazid,ofloxacin and amikacin is 98.0%, 64. 1%, 79.5%, 78. 3% respectively, the specificity is 97.5%,100. 0%, 90. 0%, 100. 0% respectively, the accuracy is 97.8%, 77. 5%, 85.4%, 94. 4% respectively,tested by pyrosequencing. The results of the detection of resistance to rifampin, isoniazid, ofloxacin and amikacin in Mycobacterium tuberculosis using pyrosequencing technique were almost the same with that of Bactec 960, and Kappa ≥0. 7 in each detection. Conclusion Pyrosequencing is thus a rapid, accurate and high throughput method for detecting Mycobacterium tuberculosis resistance to these four drugs.     

结核分枝杆菌耐利福平基因变异株的体外最小抑菌浓度研究

目的：研究结核分枝杆菌（MTB）耐利福平临床分离株基因突变对其体外最小抑菌浓度（MIC）测定结果的影响。方法用基因芯片对临床分离的对利福平耐药的175株 MTB及对利福平敏感的48株 MTB进行耐药基因检测;并对所有标本进行利福平的 MIC测定,比较不同变异株的 MIC测定结果。结果对利福平耐药的 MTB 临床分离株基因突变以531、526、516、533位点单突变为主;531位点单突变的利福平耐药变异株 MIC 高于526位点单突变的耐药变异株,差异有统计学意义（t′＝2．2237,t′α＝2．0449,P＜0．05）;526位点单突变的利福平耐药变异株 MIC高于516位点单突变的耐药变异株,差异有统计学意义（t＝2．2056,P＝0．0329,P＜0．05）。双突变者均有较高的 MIC测定值。结论合理的基因芯片设计能检出95．0％以上的对利福平耐药 MTB变异株;对利福平耐药的 MTB变异株有不同的基因突变模式,且不同突变模式的 MTB耐药程度不同,可以为临床用药提供参考。     

膜芯片技术对结核分枝杆菌耐药性检测的研究

目的 验证膜芯片技术在结核分枝杆菌对利福平（RFP）、异烟肼（INH）、链霉素（SM）和乙胺丁醇（EMB）耐药性检测中的应用价值.方法 收集393例临床标本（包括痰液、尿液、胸腔积液、腹水标本）,根据结核分枝杆菌耐药位点的DNA序列,设计用于检测rpoB、katG、inhA、rpsL和embB基因常见突变类型的膜芯片,对上述临床标本进行检测,并将其与传统微生物敏感性试验结果进行比较,对不相符结果用聚合酶链反应产物直接测序（PCR-DS）进行验证.结果 以常规培养法为金标准,膜芯片法扩增结核分枝杆菌的敏感性、特异性、准确性分别为90.4%、98.8%和95.7%,其对结核分枝杆菌RFP、INH、SM和EMB耐药性检测的敏感性分别为92.3%、83.3%、68.8%和83.3%;准确性分别为98.6%、97.3%、96.6%、和98.5%;特异性均达到100.0%.结论 膜芯片法检测结核分枝杆菌耐药性具有较高的敏感性、特异性和准确性,可作为常规微生物敏感性试验的补充.     

868株结核分枝杆菌的药敏结果分析

我们对临床分离的 868株Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ(结核分枝杆菌 )进行左旋氧氟沙星 (ＬＶＦＸ)的药物敏感性试验 ,并与常用的 4种一线抗结核药链霉素 (ＳＭ)、异烟肼 (ＩＮＨ)、乙胺丁醇 (ＥＢ)和利福平 (ＲＦＰ)进行对照 ,结果报告如下。1　材料和方法1 1　结核分枝杆菌标准菌株Ｈ37ＲＶ　购自中国药品生物检定所。1 2　结核分枝杆菌临床分离菌株　由南京市胸科医院检验科提供。1 3　左旋氧氟沙星　由江苏省昆山制药总厂提供 (纯品 ) ;硫酸链酶素 :由华北制药股份有限公司提供 (粉针剂 ) ;异烟肼 :由天津市氨基…     

广泛耐药结核40例的痰结核菌培养及药敏实验报告的初步评价分析

结核病广泛耐药情况的动态监测，是评价国家结核病控制的规划的重要对策。本文对我科40例结核患者痰结核菌耐药检测工作初步评价。     

非结核分枝杆菌170株耐药情况分析

目的观察非结核分枝杆菌(NTM)的耐药情况,为NTM病的临床治疗提供依据。方法收集2008年1月至2009年8月上海市肺科医院痰标本经Bactec-MGIT 960系统培养为NTM的药敏结果进行分析。结果分枝杆菌培养阳性的1583株中NTM170株,占10.73%。耐药株167株,总体耐药率98.34%。耐药依次为异烟肼(H)、链霉素(S)、卷曲霉素(Cm)、氧氟沙星(Ofx)、阿米卡星(Am)、利福平(R)、乙胺丁醇(E)。对上述7药全耐药共143株(78.82%),耐6药以下菌株仅10株(5.88%)。R耐药株和E耐药株较其他各药耐药少,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论 NTM耐药情况十分严重;应对可疑NTM肺病及早行菌型鉴定及药物敏感性测定;经验性治疗推荐在E和R的基础上选药组成方案。研究抗NTM新药是当前的迫切需要。     

结核分枝杆菌临床分离株对三种氟喹诺酮类药物的敏感性分析研究

目的对结核分枝杆菌（MTB）临床分离株对氧氟沙星（OFX）、左氧氟沙星（LFX）和莫西沙星（MFX）三种临床常用的氟喹诺酮类药物的敏感性进行分析研究,为临床用药提供依据。方法本研究采用液体培养基联合MTT技术进行抗结核药物的最低抑菌浓度（MIC）检测。对来自我院不同结核病患者的163株MTB临床分离株进行0FX、LFX、MFX三种药物的MIC检测和BactecMGIT960药敏检测。结果163株中OFX耐药株占35．6％;耐多药（MDR）结核菌株中,OFX耐药率为73．5％,MDR菌株中LFX耐药率超过一半以上;所有MTB菌株MFX的MIC值均≤1μg／ml。结论目前在MTB临床分离株中,OFX和LFX已出现较高的耐药率,值得引起临床医生的重视,MFX在MDR结核和广泛耐药（XDR）结核中显示出良好的抗菌效果,给MDR结核病的治疗带来希望。     

非结核分枝杆菌的药物敏感试验探讨

随着非结核分枝杆菌的不断检出，由非结核分枝杆菌所致的肺病越来越引起临床关注。为了探讨有效的治疗药物，本室对13株非结核分枝杆菌进行了11种药物的药敏试验，以结核分枝杆菌H37RV参照苗株为药敏质控。材料和方法一、参照菌株结核分枝杆菌H37RV，非结核分枝杆菌；堪萨斯、瘰病、偶发、胞内、龟型各1株。二、临床菌株从病人疾标本中分离得到8株非结核分枝杆菌，其中初治病人3株（堪萨斯2株、偶发1株），复治病人5株（偶发和龟型各2株、鸟－胞1株）。三、药物种类除抗结核常用药物INH（异烟肼）、RFP（利福平）、EMB（乙胺丁醇）、…     

结核分枝杆菌体外药敏试验标准株的建立与评价

目的 按照《病原微生物菌(毒)种国家标准株评价技术标准》(WS/T 812—2022),对已有多年使用基础的5株中国临床来源结核分枝杆菌菌株进行系统鉴定评价,以此建立我国的结核分枝杆菌体外药敏试验标准株。方法 建立标准的实验操作程序,对菌株进行培养特性、表型、生化特征、药敏试验及分子特征检测等系统评价,完成全基因组测序,建立主代及工作菌株库。结果 菌株的表型、生化及分子生物学检测结果表明5株菌符合结核分枝杆菌特征,性状稳定;耐药类型为2株全敏感菌株,2株耐多药结核菌株和1株广泛耐药结核菌株;完成全基因组测序;已获得中国疾病预防控制中心病原微生物菌(毒)种保藏中心(CHPC)保藏编号。结论 5个菌株符合结核分枝杆菌体外药敏试验质控菌株及抗结核药物筛选及评价测试菌株的要求,将为中国标准株的建立工作提供参考,为我国结核病耐药监测以及抗结核药物研发提供有力的支撑。     

174株耐多药结核分枝杆菌对二线抗结核药耐药情况分析

目的：分析该院耐多药结核分枝杆菌对二线抗结核药的耐药情况,为耐多药结核病的治疗提供参考。方法采用回顾性分析法分析2011年5月至2013年5月结核病患者痰标本培养及药敏结果资料,对比分析耐多药分枝结核杆菌对5种二线药物耐药比率。结果初治耐多药结核分枝杆菌对二线耐药情况如下：耐药顺次由高到低依次为左氧氟沙星、对氨基水杨酸、丙硫异烟胺、阿米卡星及卷曲霉素的耐药比率分别为17．7％、14．5％、12．9％、8．1％及3．2％,耐两种的比率为4．8％,耐3种及3种以上的比率均为3．2％;复治情况的耐药顺次同初治顺次,但耐药比率不同,分别为50．0％、33．9％、25．9％、21．4％和16．1％,耐2种的比率为16．1％,耐3种为13．4％,耐3种以上的为12．5％。初治与复治的各种情形耐药比率比较,差异均有统计学意义（P＜0．05）。结论该院耐多药结核杆菌耐药比率低于国内平均水平,复治病例耐药比率高于初治。