淫羊藿对去势雄性大鼠骨密度及骨结构性能的影响

背景：男性骨质疏松的研究起步较晚，治疗上缺乏公认有效的方法。中药淫羊藿具有补肾壮阳的功效，对免疫系统、骨骼以及生殖系统均有明显的调节作用，用于治疗骨质疏松。 目的：观察淫羊藿对去势雄性大鼠骨密度及骨结构性能的影响。 设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2007-01/2008-04在华中科技大学同济医学院附属同济医院老年病实验室完成。 材料：鼠龄15周健康雄性SD大鼠50只，体质量(340±10)g，用于制备骨质疏松模型。 方法：50只大鼠随机数字表法分为对照组、模型组以及低、中、高剂量淫羊藿治疗组，每组10只；淫羊藿治疗组大鼠自造模后第2周开始用淫羊藿治疗12周，淫羊藿治疗剂量分别为：1.0，5.0，10.0 g/(kg?d)，对照组和模型组采用等量生理盐水。 主要观察指标：12周后，行血尿生化、骨密度检查。对第4腰椎离体椎骨应用自制的SL22000骨疲劳损伤实验机进行疲劳损伤，行骨组织形态计量学检测。 结果：50只大鼠均进入结果分析。①对照组、中、高剂量淫羊藿治疗组全身骨密度均高于模型组(P < 0.05)；模型组尿钙/肌酐、尿磷/肌酐、血核因子κB受体激活因子配体、尿羟脯氨酸/肌酐均高于其他各组(P < 0.05)，而血清碱性磷酸酶均低于其他各组(P < 0.05)；治疗组护骨素高于模型组(P < 0.05)。②模型组骨小梁单位面积百分率均低于其他各组(P < 0.05)，其中对照组最高；而单位骨小梁面积百分率的微破裂长度均高于其他各组(P < 0.05)；对照组、中、高剂量淫羊藿治疗组单位骨小梁面积百分率的微破裂数目和椎体体积均高于模型组(P < 0.05)。 结论：去势后雄性大鼠应用淫羊藿可以防止骨量丢失并提高骨结构性能。     

淫羊藿总黄酮治疗原发性骨质疏松症患者骨密度和骨代谢指标的变化

背景: 既往动物实验表明,淫羊藿总黄酮能有效抑制雌激素相关的骨丢失,但是相关的临床报道较少。 目的：观察淫羊藿总黄酮对原发性骨质疏松症患者骨密度的影响。 设计、时间及地点：随机双盲,阳性对照临床试验,病例来自2005-06/2007-09华中科技大学同济医学院附属协和医院门诊。 对象：选择原发性骨质疏松症患者64例,男11例,女53例。 方法：64例患者随机分为治疗组和对照组,每组32例,治疗组给予淫羊藿总黄酮 0.45 g/次,3次/d,口服治疗;对照组给予骨疏康颗粒10 g/次,2次/d,口服治疗,疗程均为6个月。 主要观察指标：①两组患者治疗前后腰椎(L1~L4),股骨颈,Ward’s三角,大转子和左髋的骨密度变化。②两组患者治疗前后血清钙、磷和碱性磷酸酶的变化。 结果：64例原发性骨质疏松症患者均进入结果分析。①治疗组腰椎骨密度明显高于对照组(P < 0.05),其他部位两组骨密度相比,差异无显著性意义(P > 0.05)。与治疗前相比,治疗组骨密度无明显改变(P > 0.05),对照组腰椎,股骨颈,大转子和髋部骨密度明显降低(P < 0.05,P < 0.01)。②两组血钙水平均较治疗前明显升高(P < 0.05),两组间比较无明显差异(P > 0.05);治疗组血磷和血碱性磷酸酶水平与治疗前相比无明显变化(P > 0.05)。 结论：淫羊藿总黄酮治疗能有效抑制原发性骨质疏松症患者骨密度降低。     

淫羊藿苷促进羊骨髓间充质干细胞的增殖和成骨分化

背景：寻找一种简单有效、安全价廉且可替代生长因子的生物活性物质,是骨组织工程的客观要求,中药来源的植物黄酮淫羊藿苷可通过提高成骨细胞功能促进成骨,但是对骨髓间充质干细胞的作用尚未明确。 目的：探讨淫羊藿苷对羊骨髓间充质干细胞增殖和分化的影响。 设计、时间及地点：细胞学体外观察,于2008-09/2009-02在南方医院创伤骨科实验室完成。 材料：清洁级成年雄性中国青山羊3只,由南方医院实验动物中心提供。淫羊藿苷标准品由中国药品生物制品检定所提供,批号110737-200312,纯度98.3%。 方法：体外分离培养羊骨髓间充质干细胞,传至第3代后,按2×103/孔接种至96孔板,分别加入100,10,1,0.1 μmol/L淫羊藿苷培养基150 μL进行培养;设立对照组,仅加入等量普通DMSO培养基。 主要观察指标：采用MTT法检测细胞生长曲线,流式细胞仪测定细胞周期,通过碱性磷酸酶试剂盒测定细胞碱性磷酸酶活性,放免法检测细胞骨钙素表达,茜素红染色观察钙化结节形成能力。 结果：0.1 μmol/L淫羊藿苷可明显促进羊骨髓间充质干细胞增殖,增加S期和G2/M期细胞数量;随着淫羊藿苷浓度的增加,促细胞增殖活性降低,100 μmol/L淫羊藿苷表现为明显的抑制细胞增殖作用。淫羊藿苷呈剂量依赖性促进羊骨髓间充质干细胞碱性磷酸酶活性和骨钙素表达。10,100 μmol/L淫羊藿苷诱导钙化结节形成能力优于0.1和1 μmol/L淫羊藿苷,对照组羊骨髓间充质干细胞未形成钙化结节。 结论：淫羊藿苷对羊骨髓间充质干细胞的增殖和成骨分化具有促进作用,可被视为一种良好的骨诱导活性因子。     

淫羊藿苷对脑缺血大鼠PTEN和GAP-43蛋白表达的影响

目的探讨淫羊藿苷对胡须体觉皮质局灶性脑梗死大鼠PTEN和GAP-43蛋白表达的影响,探究淫羊藿苷促进神经功能恢复的可能机制。方法 24只成年健康雄性SD大鼠,随机分为淫羊藿苷组、局灶性脑缺血模型组以及假手术组各8只,在胡须体觉皮质局灶性脑缺血手术成功后3 d,淫羊藿苷组予淫羊藿苷灌胃,模型组和假手术组每天给予等量的生理盐水灌胃。改为造模前3 d、造模后3 d、治疗后7 d、14 d、21 d分别进行Corner Test进行行为学检测,治疗后21 d进行Western Blot方法检测梗死周边区PTEN、GAP-43蛋白的表达情况。结果胡须体觉皮质局灶性脑缺血后,淫羊藿苷能够明显促进大鼠胡须功能的恢复;Western blot检测显示淫羊藿苷能够明显抑制梗死周边区PTEN的表达,同时明显上调GAP-43的表达。结论淫羊藿苷可能通过抑制PTEN和增加GAP-43的表达而促进脑缺血后神经再生和功能恢复。     

淫羊藿提取液对激素性股骨头坏死的作用

背景：研究表明中药淫羊藿可以改善激素性股骨头坏死的症状,但具体的作用机制尚未阐明。 目的：探讨淫羊藿提取液治疗激素性股骨头坏死的初步效果。 方法：清洁级SD成年雄性大鼠建立激素性股骨头坏死大鼠模型后,分别给予0.4,0.2 g/mL淫羊藿提取液或生理盐水干预,并设立未造模的空白对照组。干预8周后,检测各组大鼠血液三酰甘油、总胆固醇的变化情况,解剖出股骨头并切片光镜下观察骨密度变化情况,计算空骨陷窝比率,进行组间比较。 结果与结论：与空白对照组相比,模型组股骨头疏松,易于凿切,血脂升高,骨小梁变细、稀疏,空骨陷窝率增高,髓腔脂肪细胞增多;而淫羊藿高、低剂量组的上述病变情况有不同程度减低,以淫羊藿高剂量组病变程度最低。结果表明,淫羊藿提取液能够改善激素性股骨头坏死血流变因素,改善脂肪代谢紊乱,促进堆积脂肪代谢的作用;还能够促进体外成骨细胞增殖及分化成熟,抑制破骨细胞活性、促进股骨头骨再生,改变股骨头内环境向好的方向转变,防治激素引起的骨质疏松,为淫羊藿治疗激素性股骨头坏死提供了初步理论依据。     

淫羊藿苷对神经细胞缺血再灌注损害的保护作用及其机制研究

目的 探讨淫羊藿苷对神经细胞缺血再灌注损害的保护作用及其机制.方法 对胎鼠脑皮质原代培养的神经元进行缺糖缺氧(OGD)和复糖复氧,制作拟缺血再灌注损害细胞模型;在OGD和复糖复氧时分别给予低、中、高剂量的淫羊藿苷干预.于复糖复氧24 h后检测细胞生存率、细胞外液乳酸脱氢酶(LDH)和细胞活性氧(ROS)水平.并与OGD模型组进行比较.结果 各淫羊藿苷剂量组的细胞存活率均明显高于OGD模型组(P＜0.05 ～0.01);淫羊藿苷中、高剂量组的细胞存活率又明显高于低剂量组(均P＜0.05);中、高剂量组间细胞存活率的差异无统计学意义.各淫羊藿苷剂量组细胞外液LDH及细胞ROS水平均明显低于OGD模型组(P ＜0.05 ～0.01),淫羊藿苷中、高剂量组这两项指标的水平又明显低于低剂量组(P＜0.05),中、高剂量组之间两项指标的差异无统计学意义.结论 淫羊藿苷对神经细胞的缺血再灌注损害有保护作用,尤其以中、高剂量显著.其机制可能是通过抑制ROS的产生,减轻氧化应激损伤实现的.     

淫羊藿及骨形态发生蛋白2与家兔的骨折愈合*

背景：淫羊藿是防治骨质疏松症的中药,但对骨折愈合的治疗尚缺乏依据。 目的：观察中药淫羊藿对家兔骨折愈合的作用。 方法：建立家兔单侧桡骨3 mm骨折动物模型,随机将其分为空白组、对照组和实验组。空白组予生理盐水灌胃加骨折局部注射生理盐水,实验组予中药淫羊藿熬制液灌胃加骨折局部注射生理盐水,对照组予生理盐水灌胃加骨折局部注射骨形态发生蛋白2。在术后2,4,8周,每组各取4只兔子通过X射线摄片、骨密度测定、生物力学测试(仅8周时)以及组织切片等评价骨折愈合的程度。 结果与结论：在各个时期段,X射线摄片显示实验组和对照组在骨痂的形成、改建及髓腔再通等均比空白组要好。实验组骨密度均优于空白组(P < 0.05),实验组和对照组之间差异无显著性意义(P > 0.05)。实验组生物力学性能优于空白组(P < 0.05),对照组数值介于两者之间。实验组和对照组在胶原纤维、软骨组织、骨小梁及骨基质的形成时期均早于空白组,实验组和对照组之间无显著性差异。提示淫羊藿能促进家兔骨折愈合。     

淫羊藿苷对阿尔茨海默病大鼠模型金属蛋白酶及紧密连接蛋白ZO-1表达的影响

目的探讨淫羊藿苷对阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)大鼠学习记忆、海马区基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、MMP-2及血脑屏障紧密连接蛋白ZO-1表达的影响。方法采用Aβ1-42海马注射建立AD大鼠模型,使用淫羊藿苷进行干预。以Morris水迷宫检测大鼠的空间学习记忆能力,采用Western-blot法分析紧密连接蛋白ZO-1的表达,用免疫组织化学法检测大鼠海马区MMP-9、MMP-2表达。结果与对照组相比,AD模型组大鼠学习记忆能力明显减退,ZO-1表达明显减少(P0.05),MMP-9、MMP-2蛋白明显增加;淫羊藿苷干预后,大鼠学习记忆能力均明显提高,海马区MMP-9/MMP-2表达减少(P0.05),ZO-1表达明显增加(P0.05),以淫羊藿苷高剂量干予后明显。结论淫羊藿苷能通过抑制MMP-9/MMP-2表达,减轻血脑屏障破坏,从而改善AD症状。     

淫羊藿苷对大鼠间充质干细胞骨向分化过程中转化生长因子β1、骨形态发生蛋白2表达的影响

背景：淫羊藿苷作为补肾中药淫羊藿的主要有效成分,能够有效促进间充质干细胞向成骨细胞分化。 目的：观察淫羊藿苷在诱导间充质干细胞骨向分化过程中对转化生长因子β1、骨形态发生蛋白2表达的影响,阐释其可能的诱导机制。 方法：运用全骨髓贴壁法分离、纯化大鼠骨髓间充质干细胞;以20 mg/L淫羊藿苷作为间充质干细胞药物干预浓度,根据干预条件的不同将实验分为：空白组、经典组(加经典成骨诱导剂)、淫羊藿苷组、淫羊藿苷+经组;ELISA法检测各组转化生长因子β1、骨形态发生蛋白2的表达。 结果与结论：经典组、淫羊藿苷组、淫羊藿苷+经组转化生长因子β1、骨形态发生蛋白2值均高于空白组(P < 0.05);各组第7天的转化生长因子β1值高于14,21 d (P < 0.01),各组不同诱导时间骨形态发生蛋白2值之间相比差异无显著性意义(P > 0.05)。提示上调转化生长因子β1、骨形态发生蛋白2的表达量可能是淫羊藿苷诱导各组促进间充质干细胞骨向分化的作用机制之一。     

淫羊藿苷抑制中枢神经髓磷脂抑制因子的表达：在局灶性脑缺血大鼠中的研究

摘要 研究背景：研究表明,成年哺乳动物的中枢神经损伤后勿动蛋白、髓磷脂相关糖蛋白、少突胶质细胞髓磷脂糖蛋白等髓磷脂抑制因子的产生是轴突再生的主要障碍。淫羊藿苷是中草药淫羊藿的主要活性成分,对脑缺血有较好的治疗作用,但对髓磷脂抑制因子的影响还不清楚。 研究目的：观察淫羊藿苷对由大脑中动脉闭塞模型大鼠脑缺血区勿动蛋白、髓磷脂相关糖蛋白、少突胶质细胞髓磷脂糖蛋白表达的影响。 设计、时间、地点：本项目采用随机对照的神经化学研究,于2008年1月至6月在山东中医药大学大学药学院和中心实验室完成。 材料：淫羊藿苷是从中草药淫羊藿干燥的切片中提取的有效成分,由山东中医药大学药学院提供。Nogo-A、MAG购买于武汉博士德生物工程有限公司。Omgp购买于美国ACCURATE公司。高清晰图像分析系统（HPIAS-1000）购买于武汉千屏影像技术有限责任公司。 方法：30只SPF级雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和药物组,每组10只。假手术组合模型组以10mL/Kg的剂量给予生理盐水;药物组以20 mg/kg的剂量给予淫羊藿苷。各组均于造模24小时后灌胃给药,每天1次,连续14天。 主要检测结果：在最后给药后进行大鼠神经功能评分,并用免疫组织化学方法分析勿动蛋白、髓磷脂相关糖蛋白、少突胶质细胞髓磷脂糖蛋白在缺血区脑组织中的表达。 结果：药物组大鼠神经功能评分较模型组明显降低。模型组中勿动蛋白、髓磷脂相关糖蛋白、少突胶质细胞髓磷脂糖蛋白在缺血区脑组织中的表达明显高于假手术组。药物组动蛋白、髓磷脂相关糖蛋白、少突胶质细胞髓磷脂糖蛋白在缺血区脑组织中的表达较模型组明显降低。 结论：淫羊藿苷能改善缺血性脑血管病的神经功能恢复,其可能的机制是通过抑制了髓磷脂相关抑制因子的表达,促进了轴突的发芽与再生。     

The effect of lipoproteins on human glioblastoma growth in vitro

Experiments were performed using an established human glioblastoma cell line to determine the effect of lipoproteins on regulating their growth. It was found that synthetic and natural human high density lipoproteins (HDL) were effective in inhibiting tumor cell growth in a nontoxic, dose-dependent manner, and that the LD₅₀ was 10-fold lower than that for normal rat astrocytes grown under identical conditions. In the presence of the antioxidant, glutathione, essentially all of the growth-inhibiting properties of HDL could be reversed suggesting that oxidized lipids from the HDL interacting with the plasma membranes of the glioblastoma cells were responsible for the growth-inhibiting effect observed. The markedly lower concentration of HDL required to inhibit glioblastoma cells in culture compared to normal astrocytes suggested that the mechanism of HDL-induced inhibition may be important for tumor growth in vivo. One possible mechanism under investigation is the possibility of HDL modulation of a membrane-associated, tumor-specific phosphatase.     

胰岛素样生长因子1与转化生长因子β2促进组织工程软骨构建的体外实验

背景：软骨组织的再生能力差,软骨组织工程能利用较少的细胞、支架材料和细胞因子对缺损进行修复。 目的：观察胰岛素样生长因子1与转化生长因子β2联合应用对组织工程软骨形成的影响。 方法：用酶消化法获取人软骨细胞,将培养的细胞以4×109 L-1的细胞浓度接种在藻酸钙凝珠支架上,分别加入200 μg/L胰岛素样生长因子1和(或)1 μg/L转化生长因子β2进行立体培养。于培养的第3,5,7,9,11,13天,进行细胞计数,观察软骨细胞的增殖情况。培养2周后,进行大体形态观察和阿尔新蓝-过碘酸雪夫氏染色 (AB-PAS)及抗Ⅱ型胶原免疫组织化学染色。 结果与结论：细胞计数及免疫组织化学染色显示,胰岛素样生长因子1和转化生长因子β2均能促进软骨细胞增殖和软骨相关基质黏多糖及Ⅱ型胶原的分泌,其中胰岛素样生长因子1的作用主要体现在促细胞增殖方面,而转化生长因子β2的作用主要体现在促进软骨相关基质形成方面,二者联合应用具有促进组织工程软骨形成的协同作用。     

Effects of Epimedium flavonoids on proliferation and differentiation of neural stem cells in vitro

Abstract

Objective: The purpose of this study is to investigate the effects of Epimedium flavonoids (EF), which is extracted from a traditional Chinese Epimedium herb, and its effect on the proliferation and differentiation of neural stem cells (NSCs) in vitro.

Methods: The single cells isolated from the hippocampi of 1 day old neonatal rats were cultured in a serum-free condition medium DMEM/F12 (1 : 1) with different concentrations of EF or 20 ng/ml epidermal growth factor (EGF) and 10 ng/ml basic fibroblast growth factor (bFGF). After 7 and 28 days, the neurospheres' diameters were measured. The formed neurospheres were cultured in the differentiation medium containing EF or 10% fetal bovine serum (FBS). After 12 hours and 7 days, immunofluorescent studies for nestin, Musashi-1, BrdU, β-III-tubulin, NF-200 and GFAP were performed. The number and lengths of 10–15 axons of NF-200 immunopositive cells were measured.

Results: The results showed that the isolated cells had the ability to propagate as neurospheres in the medium with 200 and 400 m g/ml EF, but without any EGF or bFGF, and the volume of neurospheres increase gradually from 7 to 28 days. In comparison with FBS control, the number of NF-200 positive neurons had significantly increased in the EF groups where the newborn neurons were morphologically more mature and able to migrate farther away from neurospheres than in the FBS control.

Discussion: The results demonstrate that EF effectively promotes the proliferation and differentiation of NSCs in vitro, suggesting that EF may have new properties of regulating central nervous system function by neurogenesis.     

The effect of amitriptyline on growth of olfactory and cerebral neurons in vitro

The tricyclic antidepressant drug amitriptyline has a detrimental effect on neurite outgrowth in primary explant cultures containing either olfactory receptor neurons or cerebral neurons, from both rat and chick embryos. When the drug is added to the culture medium in doses similar to the plasma concentrations known to be therapeutic in humans, the number of explant cultures expressing neurites is significantly reduced. In higher doses, amitriptyline reduces the amount of olfactory marker protein synthesized by organ cultures of olfactory mucosa.     

Neurotrophic effect of hepatocyte growth factor on central nervous system neurons in vitro

Although the expression of hepatocyte growth factor (HGF) and its receptor, proto-oncogene c-met, has been demonstrated in the central nervous system (CNS), the function of HGF in the CNS was not fully understood. In the present studies, we determined the effects of HGF on neuronal development in neocortical explant and mesencephalic neurons obtained from embryonic rat brain. HGF clearly enhanced neurite outgrowth in neocortical explants. In the mesencephalic culture, the number of tyrosine hydroxylase (TH)-positive neurons was significantly higher in the HGF-treated wells and the neurites of the TH-positive neurons appear to be more developed. Moreover, the dopamine uptake into mesencephalic neurons was also enhanced by HGF treatment, indicating that HGF promotes the survival and/or maturation of mesencephalic dopaminergic neurons. In both neocortical explants and mesencephalic neurons, c-met autophosphorylation was induced by HGF and MAP kinase activation was also detected in the neocortical explant. Furthermore, Western blot analysis of the cultured CNS cells revealed that HGF was expressed mainly in microglia. These results suggest that HGF from microglia has neurotrophic activity on the CNS neurons and plays significant roles in the development of the CNS. © 1996 Wiley-Liss, Inc.     

转化生长因子β1与骨形态发生蛋白2对关节软骨损伤修复的价值

关节软骨损伤的修复,一直是医学界及运动损伤领域所关注的问题。随着分子生物技术的应用和发展,生长因子在关节软骨损伤中的作用显得尤为重要。文章通过分析关节软骨损伤修复难的原因,阐述众多生长因子中转化生长因子β1与骨形态发生蛋白2对关节软骨损伤修复的作用及机制,并对存在的问题进行了归纳,为今后的实验研究提供重要的参考依据。     

射频能量处理软骨损伤的急性效应

背景：射频消融能量近年来用于关节软骨损伤的处理,但临床上对其使用时能量设置的大小还存在较大争议。 目的：评估不同大小的双极射频消融能量处理Ⅱ级软骨损伤的急性效应,得出射频能量大小与疗效的关系。 方法：选取3个新鲜的牛膝关节并建立Ⅱ级关节软骨损伤模型,使用双极射频气化仪在30,50,70,90,110 W的不同能量设置下,处理关节损伤区30 s,同时设置对照组。 结果与结论：扫描电镜检测显示,经双极射频处理后,软骨表面变得平滑,在70 W的双极射频能量设置下即可使软骨表面足够光滑;葡糖胺聚糖释放率与射频能量的增加呈反向变化(P < 0.05)。结果证实随着射频能量的增加,软骨细胞活性逐渐降低,因此在达到治疗效果的目的下应尽量降低射频能量的大小。     

脑脊液对体外培养骨髓基质细胞生长的影响

目的观察脑脊液对体外培养的骨髓基质细胞的影响并探讨颅内移植骨髓基质细胞的可能性。方法分离BALB/C小鼠的骨髓细胞进行体外培养,然后将贴壁的骨髓细胞传代,在含不同比例脑脊液的培养基中培养,观察其生长情况。结果在含不同比例脑脊液的培养基中生长的骨髓基质细胞形态相似,呈多角形、梭形以及圆形;各组骨髓基质细胞计数差异无显著性意义(P>0.05)。结论骨髓基质细胞在50%(体积百分浓度)的脑脊液培养基中仍可继续生长、增殖,提示这种细胞对生长环境有高度的适应性。     

血管内皮生长因子反义RNA对C6鼠胶质瘤细胞体外作用的研究

目的探讨VEGF反义RNA对C6鼠胶质瘤细胞体外作用。方法用Lipofectamine介导的方法将VEGF反义eDNA转染入C6鼠胶质瘤细胞系,观察其对细胞增殖和凋亡的影响。结果在体外VEGF反义RNA可有效抑制C6鼠胶质瘤细胞内源性VEGFmRNA和VEGF蛋白的产生,但对细胞增殖和凋亡无明显影响。结论采用VEGF反义RNA可能成为抗血管形成肿瘤治疗的新策略之一。     

A preliminary cinemicrographic study on the effect of NGF on the growth of chick embryonic sensory neurites in vitro

Trypsin dissociated dorsal root ganglia of 8-day-old chick embryos were cultured and filmed in the presence or absence of NGF. The behaviour of neurites and their association with Schwann cells and fibroblasts were observed and described. Isolated neurons cultured in the presence or absence of NGF were filmed and quantitatively analysed to determine the rate of increase in length of their neurites. Isolated neurons growing in control medium were perfused with either NGF or Medium 199 to determine the effect these agents had on rate of advance of nerve processes. Under these particular experimental conditions NGF was shown to increase the rate of growth in length of embryonic neurites but no more than did the nutrient Medium 199.