磁标记猪骨髓间充质干细胞自体肝内移植后MR活体示踪研究

目的探讨利用磁共振成像对移植肝脏的磁标记猪骨髓间充质干细胞进行活体示踪的可行性。方法获取猪自体骨髓间充质干细胞,分离、培养、扩增。应用菲立磁（Feridex）标记细胞,普鲁士蓝染色鉴定,标记细胞组（n=6）和未标记细胞组（n=4）行经门静脉行肝内移植,分别于移植前,移植后6h、3d、7d行磁共振T1WI,T2WI,GRE序列成像,7d后行组织切片普鲁士蓝染色。结果：普鲁士蓝染色表明MSCs的标记率达接近100％,磁标记MSCs肝内移植后行磁共振T2＊WI序列呈明显低信号改变,并持续至细胞移植后7d,组织切片普鲁士蓝染色显示7d后肝内仍有移植的磁标记细胞存在于肝实质及肝窦中。结论利用SPIO可以在体外成功标记猪骨髓间充质干细胞,磁共振成像可以对经门静脉移植到肝内的磁标记MSCs进行活体示踪。     

急性肝损伤后猪自体骨髓间充质干细胞肝内移植的MR活体示踪实验研究

目的 探讨应用临床型1.5T磁共振活体示踪磁标记猪骨髓间充质干细胞(MSCs)自体移植肝脏的可行性.方法 获取、分离、培养、扩增猪骨髓MSCs.应用菲立磁标记细胞,普鲁士蓝染色鉴定,建立急性肝损伤模型,分为标记细胞组(n=6)和未标记细胞组(n=4)经门静脉行肝内移植,分别于移植前,移植后6 h、3 d、7 d、14 d行磁共振FFE(T_2WI)序列成像,14 d后行组织切片普鲁士蓝染色.结果 普鲁士蓝染色表明MSCs的标记率达100%,磁标记MSCs肝内移植后行磁共振T_2WI序列呈明显低信号改变,并持续至细胞移植后14 d,组织切片普鲁士蓝染色显示14 d后仍有磁标记细胞存在于肝实质及肝窦中.结论 利用菲立磁可以在体外成功标记猪骨髓间充质干细胞,磁共振成像可以对经门静脉移植到肝内的磁标记MSCs进行活体示踪.     

磁性荧光双标人骨髓间充质干细胞归巢至大鼠急性损伤肝组织示踪显像

目的观察磁粒子和荧光染料双标人骨髓间充质干细胞归巢至大鼠急性损伤肝组织的示踪。方法以超顺磁性氧化铁(SPIO)和氯甲基苯甲酰氨(CM-Dil)标记永生化人骨髓间充质干细胞(UE7T-13)。普鲁士蓝染色检测细胞内铁,荧光显微镜和流式细胞仪检测CM-Dil标记阳性率。建立12只急性肝损伤大鼠模型,分为实验组(n=6)和对照组(n=6),将标记细胞经尾静脉移植入实验组大鼠,未标记细胞移植入对照组大鼠。分别于移植前3h、移植后3h、3天、5天、7天应用MR T2*W、T2*map对大鼠活体成像,获得肝脏R2*值。并与肝脏组织切片普鲁士蓝染色和CM-Dil荧光表达情况对照。结果双标细胞的SPIO-PLL标记率接近100%,流式细胞仪检测CM-Dil标记阳性率达99.97%。实验组细胞移植后3天、5天肝脏R2*值均较移植前明显升高(t=7.282、7.608,P均0.01),对照组细胞移植后各时间点与移植前比较,R2*值差异均无统计学意义(F=0.99,P0.05)。普鲁士蓝阳性细胞主要分布于肝小叶中央静脉周围病变区,荧光显微镜下观察红色荧光阳性细胞与普鲁士蓝阳性细胞分布基本一致。结论 SPIO和CM-Dil可有效标记人永生化骨髓间充质干细胞(UE7T-13),不影响细胞增殖能力,临床应用型1.5T MR可对磁粒子标记的UE7T-13进行肝归巢活体示踪,CM-Dil有助于证实存活干细胞的肝内定植。     

超顺磁性纳米铁颗粒标记许旺细胞及体外磁共振示踪的实验研究

目的 研究超顺磁性纳米铁颗粒(SPIO)体外标记小鼠许旺细胞(SCs)及MRI成像示踪的可行性.方法 分离、纯化新生C57BL/6小鼠(5～7 d)的许旺细胞,取已分别用25.0 μg/ml、50.0 μg/ml浓度SPIO标记的0.5×106、1.0×106、5.0×106个许旺细胞,普鲁士蓝染色和透射电镜观察标记细胞内铁颗粒的分布情况,并用不同MRI扫描序列,测定标记的细胞群信号.结果 0.5×106、1.0×106、5.0×106小鼠许旺细胞与不同浓度的SPIO共同培养24 h后,普鲁士蓝染色见细胞内有许多蓝染的铁颗粒;透射电镜检查显示致密的铁颗粒位于细胞的吞噬泡或溶酶体中.体外MRI呈明显的低信号改变,以T2WI和GRE/30°序列改变最为明显.结论 SPIO可以标记小鼠许旺细胞,应用MRI可以对其进行体外示踪和监测.     

磁共振技术行移植细胞在体示踪

目的寻找一种能够对移植细胞进行在体示踪方法,为细胞的迁移、分布及心功能改善机制的研究提供更多的信息。方法将超顺磁性氧化铁(SPIO)和骨髓间充质干细胞(MSCs)共同孵育培养36h。普鲁士蓝染色评价细胞的标记效率;MTT比色实验评价SPIO对细胞生长能力的影响;台盼蓝染色检验标记后细胞的活性;应用Costar Transwell方法评价铁离子对细胞迁移能力的影响;用细胞分化诱导液培养标记后的细胞评价其分化能力。将标记的细胞移植到中华小型猪心肌内。通过心脏MRI进行连续的在体示踪观察。细胞移植后不同时期取动物心脏切片进行普鲁士蓝染色观察移植细胞。结果MSCs经铁离子标记后,普鲁士蓝染色标记效率>95%,此试剂不影响细胞增殖,标记后98%的细胞保持活性,可继续培养、传代,迁移能力和分化能力未受影响。动态观察显示SPIO标记细胞在MRI影像上表现为低密度灶影或信号缺失,并且在移植后4周仍可显影。病理学检查可以看到移植细胞呈普鲁士蓝染色阳性,与影像学有很好的一致性。结论磁共振对比剂SPIO可以安全、有效的标记骨髓间充质细胞,并可通过心脏MRI进行持续的在体示踪。     

大鼠蛛网膜下腔移植超顺磁性氧化铁纳米离子标记永生化神经前体细胞后的磁共振成像追踪

目的观察大鼠蛛网膜下腔移植超顺磁性氧化铁纳米粒子（SPIO）标记永生化神经前体细胞后的磁共振成像追踪。方法用SPIO-多聚赖氨酸复合物（SPIO-PLL）标记永生化神经前体细胞。采用普鲁士蓝染色鉴定SPIO-PLL标记永生化神经前体细胞的效率，采用MTT法检测标记前后细胞活力，用免疫细胞化学法对标记后1周的细胞进行抗巢蛋白、微管相关蛋白和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）染色，检测标记细胞的分化能力。蛛网膜下腔置管成功的SD大鼠10只，随机分为2组（n=5），标记细胞组和未标记细胞组，蛛网膜下腔分别移植标记后2d的永生化神经前体细胞和未标记细胞，移植后30min及移植后1周用MRI对蛛网膜下腔的细胞进行活体追踪，用组织切片进行普鲁士蓝染色和抗猿肾病毒40大T抗原染色。结果SPIO可以高效率地标记永生化神经前体细胞，普鲁士蓝染色显示SPIO—PLL标记永生化神经前体细胞质内出现细小的天蓝色铁颗粒，SPIO-PLL标记对永生化神经前体细胞的活力没有明显的影响，标记后1周，抗巢蛋白、微管相关蛋白染色阳性，GFAP染色阴性。标记细胞组移植后30min及移植后1周MRI活体检查发现标记细胞在磁共振成像上呈明显的低信号改变，脊髓组织学切片结果普鲁士蓝、抗猿肾病毒40大T抗原染色阳性；未标记细胞组磁共振成像上无明显低信号改变。结论利用MRI技术可以对蛛网膜下腔移植后的标记细胞进行活体追踪。     

MRI活体内示踪SPIO标记BMSCs的动物实验研究

目的研究活体内运用超顺磁性氧化铁颗粒(Superparamagneticiron oxide particles,SPIO)标记骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)在核磁共振下的示踪情况。方法本研究挑选SPIO合适的离子浓度、合适的磁共振显影序列,利用SPIO核磁共振显影差异特性,在活体内示踪干细胞移植后的存活、修复、迁移及分化过程。结果利用SPIO核磁共振显影差异特性,活体内从影像学上直观证实了SPIO活体示踪干细胞的时限性、可行性及有效性,损伤小灵敏度高,可连续跟踪,为干细胞移植运用于骨科临床治疗及疗效判断提供了明确的体内监测手段。结论 MRI活体内示踪SPIO标记BMSCs可以帮助研究干细胞的作用过程、机理及转归。     

神经干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤的体内示踪

目的:探讨观察神经干细胞(NSCs)移植到大鼠损伤脊髓(SCI)后迁徙情况的方法.方法:体外培养大鼠NSCs,应用超顺磁性氧化铁(super paramagnetic iron oxide,SPIO)及多聚左旋赖氨酸(PLL)标记NSCs,分别进行普鲁士蓝染色、电子显微镜观察NSCs在体外标记情况.66只SD大鼠随机分为假损伤组(A组)、脊髓损伤对照组(B组)、脊髓损伤后NSCs移植治疗组(C组),分别在细胞移植术后第7d、14d、21d、28d及35d,按照改良Tadov评分法和Rivlin斜板试验观察大鼠神经功能恢复情况,B、C组术后第7、21、35d行MRI检查,扫描序列包括T1WI、T2WI、T2*WI.结果:(1)普鲁士蓝染色证实SPIO和PLL标记NSCs的有效率为100％.(2)细胞移植后7～35d,C组与B组动物运动功能均有不同程度恢复,但B组恢复较慢,14d、21d、28d和35d时C组Tarlov评分和斜板试验角度与B组相比差异有统计学意义(P<0.05).(3)1.5T MRI榆查,C组移植处在T2*WI序列呈低信号改变,第21d低信号向损伤区扩大,第35d损伤区见到低信号改变.B组相同时间点无低信号改变.第35天时与B组相比,C组3个扫描序列中信号强度分别下降32.55％、54.14％、62.27％,T2*WI的信号强度变化最大,T1WI变化最小.结论:磁共振技术可以追踪SPIO及PLL标记的移植在体内的NSCs.     

新型超顺磁性氧化铁标记血管内皮祖细胞的实验研究

目的 研究新型超顺磁性氧化铁(SPIO)标记骨髓源血管内皮祖细胞(EPCs)对其生物学影响,提高其标记效率及安全性.方法 采用梯度离心结合贴壁法分离纯化SD大鼠骨髓源EPCs并鉴定,以3-氨丙基三乙氧基硅烷(APTS)修饰Fe2O3配制成SPIO,用六种不同浓度SPIO(0 μg/ml、6.25 μg/ml、12.5 μg/ml、25 μg/ml、50 μg/ml、100 μg/ml)分别转染标记EPCs,对标记后的EPCs行普鲁士蓝染色、台盼蓝染色、透射电镜、噻唑蓝(MTT)检测、流式细胞仪检测细胞凋亡与细胞周期,探讨不同SPIO浓度对EPCs标记效率、细胞活性及增殖的影响.结果 普鲁士蓝染色显示EPCs呈浓度依赖性摄取SPIO,培养基中Fe3+浓度为25 μg/ml时,标记效率最高,可见95％以上EPCs普鲁士蓝染色阳性;当Fe3+浓度小于12.5 μg/ml时,染色阳性细胞数小于50％;当Fe3+浓度为100μg/ml时活细胞数目小于40％,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).台盼蓝染色显示随着标记浓度的升高,细胞活力逐渐升高.当SPIO浓度超过50 μg/ml,细胞活性逐渐降低.透射电镜可见EPCs超微结构保存良好,大量的高密度SPIO颗粒,主要位于溶酶体内、滑面内质网、线粒体等细胞器的膜结构上.MTT测试及细胞凋亡与周期检测表明SPIO标记对EPCs存活、增殖的能力无明显影响,标记后的EPCs可用于进一步干细胞示踪研究.结论 梯密度离心结合贴壁法可分离出血管内皮祖细胞进行体外增殖分化.APTS修饰Fe2O3配制而成的新型SPIO可简便标记EPCs,并且在适当浓度下对MSCs的生物学活性没有影响,为后期的活体MRI示踪于细胞移植实验奠定基础.     

大鼠骨髓内皮祖细胞SPIO体外标记的实验研究

目的探索体外超顺磁性氧化铁(superparamagnetic iron oxide,SPIO)标记大鼠骨髓内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)及其条件优化,为下一步EPCs活体示踪实验奠定基础。方法采用密度梯度离心法分离培养大鼠骨髓EPCs,不同浓度的SPIO体外标记EPCs,普鲁士蓝染色测定细胞标记率,MTT法检测细胞增殖力,台盼蓝染色检测细胞活力。结果 EPCs培养约7 d逐渐生长呈单层排列,SPIO浓度为50μg/m L时普鲁士蓝染色显示标记率达到90%,标记后的EPCs生长状态良好,能正常贴壁生长并传代,台盼蓝染色及MTT法显示此时细胞活力及增殖能力最强。结论 SPIO浓度为50μg/mL时标记EPCs其标记率高,不影响细胞的活力及增殖能力,可为下一步EPCs活体示踪实验奠定基础。     

目前国内普通外科临床科研中存在的主要问题

自1978年恢复研究生招生工作以来,同其他临床医学学科一样,普通外科的临床科研工作取得了长足进步,获得了一些有创造性的科研成果,为推动我国普通外科事业的发展作出了较大的贡献。近年,我国普通外科领域的科研论文数量增长较快,但不可否认的是,目前我国普通外科研究领域仍存在     

2015年乳腺癌辅助化疗进展

【摘要】〓乳腺癌是危害我国女性健康的头号杀手,尽管近年来辅助化疗的研究进展突飞猛进,但临床中仍有不少问题未能明确,如辅助化疗的合适人群、化疗的开始时间、蒽环及紫杉类的地位和用法、强化维持治疗的作用、疗效及预后的生物标志物等。本文结合乳腺癌辅助化疗在临床上的常见问题和2015年各大乳腺癌会议阐述乳腺癌辅助化疗的最新进展。     

Changes in neuroendocrine elements in bronchial mucosa in chronic lung disease in adults.

BACKGROUND--It is not clear whether there is any association between metaplasia of the bronchial epithelium and changes in the distribution of neuroendocrine cells. This study examined, by immunohistological techniques, the distribution of neuroendocrine cells and juxtamucoscal nerve fibres in bronchial biopsies showing metaplastic changes. METHODS--Bronchial biopsies from 12 subjects with epithelial metaplasia associated with bronchiectasis and diffuse pulmonary fibrosis were examined by conventional light microscopy and immunohistological techniques for protein gene product 9.5 (PGP), chromogranin A and B (CAB), serotonin, vasoactive intestinal peptide (VIP), substance P (SP), calcitonin gene-related peptide (CGRP), calcitonin (CT), and gastrin releasing peptide (GRP). RESULTS--Regions of non-metaplastic epithelium contained numerous PGP and serotonin immunoreactive cells. Sub-populations of these cells displayed CAB, CGRP, CT, and GRP immunoreactivity. Metaplastic epithelium contained only a few weakly stained PGP, serotonin, CAB, GRP, CT and CGRP immunoreactive cells in six cases. Metaplastic epithelium was characterised by a high number of CAB-containing cells in six cases and in these biopsies prominent PGP-containing nerve bundles were seen in the subepithelial layer beneath the metaplastic epithelium. CONCLUSIONS--The distribution patterns of neuroendocrine cells and neuronal elements vary between areas of normal and metaplastic epithelium and within areas of metaplastic epithelium. Neuronal hyperplasia was associated with an increase in the number of CAB-containing cells within the metaplastic epithelium.     

Disparities in Amputations in Minorities

Background  

As a result of the impact of health disparities on the healthcare system such as their influence on arenas significant to healthcare distribution, including cost, quality, and access, identification and resolution of health disparities is a primary national agenda item. Resolution of disparities in amputation is an area of opportunity that warrants further consideration.