rhGH对Jurkat细胞中NF-κB活性的影响

目的:探讨重组人生长激素(rhGH)对Jurkat细胞核因子-κB(NF-κB)信号通路活化的影响.方法:(1)将含荧光素酶报告基因的质粒pNF-κB-luc转染入T淋巴细胞系-Jurkat E6-1细胞中,在培养液中加入梯度浓度rhGH.(2)用梯度浓度rhGH直接刺激Jurkat细胞,然后用RT-PCR方法检测IκBα、IKK1 mRNA表达情况.结果:各浓度rhGH对转染pNF-κB-luc的Jurkat细胞中荧光素酶表达有促进作用,而对IκBα、IKK1 mRNA表达无显著影响.结论:rhGH对PHA活化的T细胞NF-κB的活化有促进作用,而对与NF-κB活化相关的IκBα和IKK1的mRNA表达无显著影响.     

核因子κB抑制蛋白家族的研究进展

核因子κB抑制蛋白(inhibitor ofNF-κB,IκB)是核因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)的抑制因子。IκB蛋白家族与Rel/NF-κB蛋白家族一样,也是一个大家族,它们都来源于相同祖先NF-κB/IκB超家族的Rel同源区-锚蛋白重复序列区(Rel homology domain-ankyrin repeat domain,RHD-ARD)结构[1]。IκB蛋白一方面可以在胞浆中与NF-κB二聚体结合形成复合物,抑制NF-κB进入细胞核发挥转录激活作用;另一方面也可以直接在细胞核内抑制NF-κB与DNA的结合。IκB蛋白家族的成员主要包括:IκBα、IκBβ、IκBε、Bcl-3、IκB…     

重组腺病毒ΔN IκBα的构建及其对A549细胞中NF-κB活性的抑制

目的: 探讨ΔN IκBα基因对NF-κB活性的调节作用.方法: 构建去除Ser32和Ser36磷酸化位点的IκBα重组腺病毒Ad-ΔN IκBα.A549细胞分为3组: 即LPS组、 Ad-LacZ+LPS组和Ad-ΔN IκBα+LPS组.LPS组单纯用内毒素(LPS)激活NF-κB; Ad-LacZ+LPS 组及Ad-ΔN IκBα+LPS 组在用LPS前2 d, 分别感染Ad-LacZ和Ad-ΔN IκBα.用Western blot、电泳迁移率变动分析(EMSA)和ELISA法分别检测LPS刺激后5 h, 细胞总蛋白中NF-κB的活性和培养上清中TNF-α及IL-6的含量.结果: Ad-ΔN IκBα+LPS组NF-κB的活性, TNF-α和IL-6的含量, 均显著低于LPS组及Ad-LacZ+LPS组.结论: 突变后的IκBα可明显抑制NF-κB活化, 减少TNF-α和IL-6的释放, 有望成为一种强有力的抗炎治疗制剂.     

大鼠脑出血后的细胞凋亡及其与NF-κB和I-κBα蛋白表达的关系

目的:探讨大鼠脑出血(ICH)后细胞凋亡及其与NF-κB和I-κBα蛋白表达的关系和演变规律,本实验用Ⅶ胶原酶联合肝素注入大鼠右侧脑纹状体制备脑出血模型。方法:TUNEL染色(末端脱氧核糖核苷转移酶介导的dUTP缺口末端标记法)观察细胞凋亡的变化;免疫组化SABC法检测NF-κB和I-κBα蛋白的表达;Western Blot技术检测NF-κB和I-κBα蛋白相对光密度值。结果:(1)ICH组TUNEL阳性细胞于出血后12h可检测到,3d达高峰,7d仍有较高表达(P0.01);(2)ICH组I-κBα和NF-κB蛋白免疫阳性细胞分别于出血12h、3d达高峰,7d仍高于假手术组和正常对照组(P0.01);(3)Western Blot结果显示NF-κB相对光密度比值在ICH3d出血侧达高峰,I-κBα蛋白相对光密度比值在ICH组ICH侧12h达高峰,7d时仍明显高于正常对照组(P0.05)。结论:ICH后存在细胞凋亡;NF-κB和I-κBα参与了ICH所致的细胞凋亡。     

一氧化氮对香烟烟雾提取物诱导大鼠肺泡巨噬细胞核因子κB活化的影响

目的:探讨一氧化氮(NO)对香烟烟雾提取物(CSE)诱导的大鼠肺泡巨噬细胞(AM)中核因子κB(NF—κB)活化的影响及机 制。方法:将大鼠AM与不同浓度的NO前体左旋精氨酸(L-Arg)或iNOS特异性抑制剂N6-(1-亚氨乙基)赖氨酸(L-NIL)及CSE共同培养,用免疫细胞化学染色法检测NF-κB,用Western blot检测I-κB蛋白含量,用Griess法测定培养上清液中NO的水平。结果:CSE可使NF-κB活化细胞的百分率增加,I-κB的水平下降。加入CSE和低浓度L-Arg培养的AM,NF-κB活化细胞的百分率显著高于只加入CSE的AM;而I-κB的水平显著低于只加入CSE的AM。加入CSE和高浓度L-Arg培养的AM,NF-κB活化细胞的百分率显著低于只加入CSE的AM,而I-κB的水平无显著变化。加入CSE和不同浓度的L-NIL培养的AM,NF-κB活化细胞的百分率显著低于只加入CSE的AM;而I-κB的水平则显著高于只加入CSE的AM,并呈浓度依赖(P<0.01)。结论:内源性NO对香烟烟雾所致NF-κB的活化具有双向调控作用。     

妊娠滋养细胞疾病中NF-κBp65和IκBα的表达及临床意义

目的:分析核转录因子κB p65(NF-κBp65)和核转录因子κB抑制蛋白α(IκBα)在正常早孕绒毛及妊娠滋养细胞疾病中表达的差异性,以及与妊娠滋养细胞肿瘤(GTN)(包括侵蚀性葡萄胎和绒毛膜癌)患者年龄及临床分期的关系。并探讨两者在妊娠滋养细胞肿瘤组织中的相关性。方法:采用免疫组化方法(SP法)检测20例正常早孕绒毛组织、30例葡萄胎组织、13例侵蚀性葡萄胎和15例绒毛膜癌中NF-κBp65和IκBα的表达情况。结果:NF-κBp65在正常早孕绒毛组与侵蚀性葡萄胎组、正常早孕绒毛组与绒毛膜癌组、葡萄胎组与侵蚀性葡萄胎组、葡萄胎组与绒毛膜癌组之间阳性表达率比较差异均具有统计学意义(P=0.013,0.018,P=0.026,0.035,P<0.05);IκBα在正常早孕绒毛组与侵蚀性葡萄胎组、正常早孕绒毛组与绒毛膜癌组、葡萄胎组与侵蚀性葡萄胎组、葡萄胎组与绒毛膜癌组之间阳性表达率比较差异均具有统计学意义(P<0.01)。NF-κBp65和IκBα在GTN中的表达与临床分期有关(P=0.043,0.042,P<0.05),与患者年龄无关。NF-κBp65与IκBα在GTN中呈负相关(r=-0.403,P=0.034,P<0.05)。结论:NF-κBp65上调、IκBα的下降或缺失可能与滋养细胞肿瘤的发生发展以及侵袭、转移有关,NF-κBp65、IκBα两者在妊娠滋养细胞肿瘤组织中的表达呈负相关。     

白藜芦醇缓解完全弗氏佐剂所致小鼠炎性痛的NF-κB信号通路机制

目的:探讨白藜芦醇抗小鼠炎性痛的核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路机制。方法:将60只BALB/c小鼠随机分为正常对照组、炎性痛模型组、阳性对照(地塞米松,0.5 mg/kg)组及白藜芦醇(100、50和25 mg/kg)组,每组10只。通过测定小鼠机械刺激缩足反射阈值、热刺激缩足反应潜伏期及冷缩足反射次数,观察白藜芦醇是否具有缓解小鼠炎性痛的作用。采用RT-PCR和Western blot法检测炎性痛小鼠脊髓组织(L4~L6)NF-κB、NF-κB抑制蛋白α(inhibitor of NF-κBα,IκBα)、NF-κB抑制蛋白激酶β(inhibitor of NF-κB kinaseβ,IKKβ)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)的mRNA和蛋白表达水平的影响。结果:白藜芦醇(100和50 mg/kg)可明显升高完全弗氏佐剂(complete Freund’s adjuvant,CFA)所致炎性痛小鼠机械刺激缩足反射阈值,显著延长其热刺激缩足反应潜伏期,减少其冷缩足反射次数(P0.05或P0.01);白藜芦醇(100 mg/kg)可明显下调CFA诱导的炎性痛小鼠脊髓组织NF-κB、IκBα、IKKβ、TNF-α及IL-1β的mRNA和蛋白表达水平(P0.05或P0.01)。结论:白藜芦醇对炎性痛具有较好的缓解作用,其机制可能与抑制NF-κB信号通路有关。     

己酮可可碱对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝NF-κB活性作用的研究

目的探讨己酮可可碱(PTX)对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠肝核因子-κB(NF-κB)蛋白的活性作用。方法SD大鼠40只,标准饲料喂养1周后,随机分为4组:对照组、12周模型组、16周模型组和PTX治疗组。用高脂饮食法建立大鼠非酒精性脂肪性肝炎模型,采用免疫组织化学染色法检测大鼠肝组织NF-κB和κB抑制蛋白α(IκB-α)的表达,应用Western blotting的方法检测肝组织中NF-κB的表达。结果免疫组织化学及Westernblotting结果表明,与对照组相比,模型组及PTX治疗组大鼠肝NF-κB的表达显著增加(P<0.05),IκB-α显著降低(P<0.05)。与16周模型组相比,PTX治疗组NF-κB的表达有所降低,IκB-α有显著提高(P<0.05)。结论PTX能抑制大鼠肝IκB的降解,减少NF-κB的活化。     

一氧化氮对香烟烟雾提取物诱导大鼠肺泡巨噬细胞核因子кB活化的影响

目的:探讨一氧化氮(NO)对香烟烟雾提取物(CSE)诱导的大鼠肺泡巨噬细胞(AM)中核因子κB(NF—κB)活化的影响及机 制。方法:将大鼠AM与不同浓度的NO前体左旋精氨酸(L-Arg)或iNOS特异性抑制剂N6-(1-亚氨乙基)赖氨酸(L-NIL)及CSE共同培养,用免疫细胞化学染色法检测NF-κB,用Western blot检测I-κB蛋白含量,用Griess法测定培养上清液中NO的水平。结果:CSE可使NF-κB活化细胞的百分率增加,I-κB的水平下降。加入CSE和低浓度L-Arg培养的AM,NF-κB活化细胞的百分率显著高于只加入CSE的AM;而I-κB的水平显著低于只加入CSE的AM。加入CSE和高浓度L-Arg培养的AM,NF-κB活化细胞的百分率显著低于只加入CSE的AM,而I-κB的水平无显著变化。加入CSE和不同浓度的L-NIL培养的AM,NF-κB活化细胞的百分率显著低于只加入CSE的AM;而I-κB的水平则显著高于只加入CSE的AM,并呈浓度依赖(P<0.01)。结论:内源性NO对香烟烟雾所致NF-κB的活化具有双向调控作用。     

双歧杆菌对实验性大肠癌NF-κB和IκBα的影响

目的 :阐明青春型双歧杆菌的体内抑瘤机理。方法 :以大肠癌裸鼠移植瘤为动物模型 ,用激光共聚焦显微镜和免疫组化检测了大肠癌组织NF -κB及其抑制性蛋白IκBα的活性。结果 :双歧杆菌注射组大肠癌移植瘤NF -κB的阳性细胞密度明显低于肿瘤对照组 (P <0 0 1) ;而IκBα的表达则相反 ,双歧杆菌注射组大肠癌IκBα的平均荧光强度显著高于肿瘤对照组 (P <0 0 1)。结论 :青春型双歧杆菌体内能抑制大肠癌IκBα的降解 ,进而阻止NF -κB的活化。     

pcDNA3.1/NF-κB(p65)表达载体的构建及蛋白表达

目的克隆NF-κB(p65)基因,构建真核表达载体pcDNA3.1/NF-κB(p65),并进行体外表达研究。方法提取B16总RNA,RT-PCR扩增出NF-κB(p65)基因片段,并将其克隆到pcDNA3.1载体中进行序列分析,转染到B16细胞中,Real-time PCR和Western-blot检测NF-κB(p65)的抗原性和表达量。结果获得高质量的B16总RNA,RT-PCR扩增出1.65kb的cDNA片段,成功构建了pcDNA3.1/NF-κB(p65)载体,Blast序列分析与GenBank中NM_009045.4完全一致。NF-κB(p65)重组蛋白具有抗原性,其基因和蛋白表达高于B16细胞组和空质粒pcDNA3.1组。结论成功构建pcDNA3.1/NF-κB(p65)表达载体和表达出具有NF-κB(p65)抗原性的重组蛋白。     

CD40-P227A单核苷酸多态性与B细胞信号系统活化的研究

目的 探讨CD40的单核苷酸多态性突变(CD40-P227A SNP)对B细胞核因子κB(NF-κB)和活化蛋白1(AP-1)信号系统和B细胞功能的影响.方法 使用人Ramos B淋巴瘤细胞株,分别将融合黄色荧光蛋白(CFP)的野生型CD40和突变型CIMO-P227A质粒,连同表达荧光素酶的NF-κB或AP-1质粒,或融合绿色荧光蛋白(GFP)的NF-κB质粒共转染至Ramos细胞中.用荧光素测定法和流式细胞仪分析检测NF-κB和AP-1信号系统的活化水平.用免疫印迹和ELISA等方法检测IκBα的降解和NF-κB亚单位的核内转移情况.结果 与野生型CD40比较,CD40-P227A可诱导增加NF-κB和AP-1的信号活化,并促进IκBα的降解和NF-κB亚单位的核内转移.转染CD40-P227A质粒的细胞分泌IL-6和TNF-α较转染野生型CD40质粒的细胞明显增多.结论 CD40-P227A SNP是一种功能性突变,可诱导NF-κB和AP-1信号系统活化,可能为系统性红斑狼疮的易感因素.     

抑制HMGB1表达促进血管瘤内皮细胞凋亡的机制研究

目的:探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对血管瘤内皮细胞(HemECs)活力和凋亡的影响及机制。方法:分离培养人HemECs,将设计并合成的HMGB1小干扰RNA(HMGB1-siRNA)转染HemECs。CCK-8法检测各组细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率及活性氧(ROS)含量;Western blot检测HMGB1、NF-κB p65、p-IκBα、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和survivin的蛋白表达。结果:与空白对照组比较,转染HMGB1-siRNA的HemECs中HMGB1的蛋白表达显著降低(P0.05)。与NC组比较,转染HMGB1-siRNA的HemECs活力显著降低,凋亡率显著升高,ROS含量显著升高,NF-κB p65、p-IκBα、cyclin D1和survivin的蛋白表达均显著降低(P0.05);且与si-HMGB1组比较,HemECs中加入NF-κB信号通路抑制剂PDTC后,细胞活力抑制、凋亡率和ROS诱导及NF-κB p65、p-IκBα、cyclin D1和survivin的蛋白表达下调更明显(P0.05)。结论:抑制HMGB1表达可降低人HemECs活力和诱导凋亡,机制可能是通过提高ROS含量及下调NF-κB信号通路。     

核因子-κB在糖尿病性阴茎勃起功能障碍中的作用

目的:探讨核因子-κB(NF-κB)在糖尿病(DM)性阴茎勃起功能障碍(ED)中的作用.方法:注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型,分别在注射8周和12周后观察阴茎勃起次数、取大鼠阴茎和脊髓第2～4骶椎节段,免疫印迹法检测阴茎核因子-κB(NF-κB)蛋白量的变化,ABC免疫组织化学方法检测脊髓第2～4骶髓节段NF-κB的...     

氧固醇诱导巨噬细胞J774A.1的凋亡依赖于NF-κB的活化

目的:探讨7-酮基胆固醇(7-KC)作用小鼠巨噬细胞J774A.1后,NF-κB的活化与细胞凋亡的关系.方法:细胞经7-KC处理后,通过形态学观察,MTT检测法,DNA电泳,流式细胞术检测细胞凋亡水平.用Western blot和免疫组织化学方法检测NF-κB活化情况,采用二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)抑制实验检测NF-κB活化对7-KC诱导的细胞凋亡的影响.结果:7-KC能抑制小鼠巨噬细胞的生长并促进细胞凋亡,同时能诱导小鼠巨噬细胞NF-κB的活化,且NF-κB特异性抑制剂PDTC能显著抑制7-KC诱导的细胞凋亡.结论:7-KC能通过活化NF-κB途径诱导巨噬细胞发生凋亡.     

核因子κB在蛋白激酶C诱导哮喘模型大鼠气道平滑肌细胞增殖中的作用

目的:探讨核因子κB(NF-κB)在蛋白激酶C(PKC)致哮喘模型大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖中的作用。方法:16只Wistar大鼠随机分为哮喘组(8只)和对照组(8只)。应用PKC激动剂PMA和NF-κB抑制剂PDTC干预哮喘组和对照组大鼠ASMCs。采用流式细胞术、MTT法及增殖细胞核抗原(PCNA)免疫荧光技术等方法检测ASMCs增殖;免疫荧光技术及电泳迁移率改变分析(EMSA)检测NF-κB活性。结果:PMA干预哮喘组ASMCs后S期细胞比例、A值、PCNA表达率、NF-κBp65阳性率及结合带的灰度值均显著高于未干预的哮喘组ASMCs(均P<0.05),PDTC预处理后再给予PMA上述指标均低于仅用PMA干预及未干预者(均P<0.05)。仅用PDTC处理的哮喘组ASMCs上述指标均低于未干预的ASMCs(均P<0.05)。结论:NF-κB参与哮喘大鼠ASMCs增殖,在其增殖中存在着PKC-NF-κB信号途径。     

抑制核因子κB与妊娠糖尿病大鼠子宫胰岛素抵抗的关系

目的:观察妊娠糖尿病(GDM)大鼠子宫组织中,核因子-κB(NF-κB)及葡萄糖转运蛋白-4(GLUT-4)的表达,探讨GDM子宫胰岛素抵抗与抑制NF-κB表达的关系。方法:将30只SD孕鼠随机分为正常妊娠对照(NC)组、妊娠糖尿病(GDM)组和PDTC干预组,每组10只。采用链脲霉素(STZ)腹腔注射建立大鼠GDM模型。PDTC干预组大鼠在建模后每日腹腔注射PDTC(40 mg/kg)。大鼠分娩前及妊娠20 d处死留取子宫标本,观察子宫组织的病理变化。用免疫组化染色法及Western blot法检测子宫组织中GLUT-4与NF-κB的表达变化。结果:GDM组NF-κB的表达明显高于NC组(P0.01);PDTC干预组NF-κB的表达明显降低(P0.01)。GDM组GLUT-4的表达明显低于NC组(P0.01);PDTC干预组GLUT-4的表达与GDM组比较明显升高(P0.01)。结论:抑制核因子κB的活性能使GDM大鼠子宫组织中GLUT-4的表达升高,提示GDM大鼠子宫胰岛素抵抗的发生可能与核因子κB活化介导的GLUT-4表达下调有关。     

系统性红斑狼疮中A20表达特点的研究

目的:了解系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血中肿瘤坏死因子α诱导蛋白3(TNFAIP3,也称A20)、核因子κB(NF-κB)、黏膜相关淋巴瘤易位基因1(MALT1)及其转录本1(MALT1V1)的mRNA表达特点。方法:采用real-time PCR法检测21例SLE患者(其中合并硬皮症2例,合并类风湿关节炎1例,合并淋巴瘤1例)及31例健康人外周血单个核细胞(PBMC)中MALT1、A20、NF-κB和MALT1V1 mRNA的表达情况。结果:SLE样本中,A20 mRNA表达水平较健康人明显降低(P0.01),MALT1和NF-κB也较健康人降低(P0.01)。在健康人组,A20和NF-κB mRNA的表达水平未呈现明显相关性,MALT1和NF-κB则呈正相关(P0.05);而在SLE组中,A20和NF-κB mRNA则显示出显著正相关(P0.05),MALT1和NF-κB则不存在相关性。SLE中MALT1V1表达量显著低于正常人(P0.05),相关性研究还显示,健康人中A20和MALT1V1存在正相关关系(P0.01),在SLE中则不存在(P0.05)。结论:本研究首先提供了MALT1-A20-NF-κB通路在SLE中的表达特点。SLE患者异常低表达A20,这可能与患者低免疫耐受相关,其与NF-κB表达的正相关性情况可能与其它因素的调控有关,有待进一步证实。     

甲状腺乳头状癌组织中STAT3和核因子κB水平增加北大核心CSCD

目的研究甲状腺癌组织中核因子κB(NF-κB)和信号转导子与转录激活子3(STAT3)的表达情况。方法选取69例甲状腺癌和58例正常甲状腺组织标本,荧光定量PCR检测NF-κB以及STAT3 mRNA水平,ELISA检测其组织匀浆中NF-κB和STAT3蛋白含量、免疫组织化学检测NF-κB和STAT3定位。结果与正常甲状腺组织相比,甲状腺癌组织中NF-κB和STAT3的mRNA和蛋白表达水平显著升高,免疫组织化学结果显示,甲状腺癌组织中STAT3阳性率(89.3%)显著高于正常甲状腺组织(10.2%)。结论 STAT3介导的NF-κB信号通路在甲状腺癌患者的组织活性增强。     

NF-κB/IκB信号通路在乙型肝炎病毒相关性肾炎肾组织中的表达

目的探讨核转录因子-κB(NF-κB)/IκB在乙型肝炎病毒相关性肾炎(HBVGN)肾组织中的表达及其在HBVGN发病机制中的可能作用。方法采用免疫组化染色法,检测42例HBVGN、20例原发性膜性肾病及5例正常肾组织中NF-κBp65、IκB-α蛋白的表达。结果NF-κBp65蛋白在HB-VGN组织中的表达,明显高于在原发性膜性肾病(P<0.01)及正常肾组织(P<0.05)中的表达,且细胞核和细胞质中都可检测到NF-κBp65的表达;相反IκB-α在HBVGN组织中的表达低于原发性膜性肾病肾组织(P<0.05)。结论HBVGN肾组织可能有IκB-α蛋白降解及NF-κB核转移。NF-κB/IκB可能参与了肾组织的病理损害过程。