磷酸化突触素在神经元囊泡循环与递质释放中作用

目的探讨磷酸化突触素I在微波辐射所致囊泡循环和氨基酸递质释放改变中的作用。方法采用30 mW/cm² 微波辐射原代海马神经元, 免疫荧光染色观察辐射后1、6、12 h, 1、2、3 d神经元Ser-62/67及Ser-553位点突触素I磷酸化表达改变;高效液相色谱检测辐射后6 h海马神经元氨基酸递质释放量变化; time-lapse观察辐射后6 h神经元突触囊泡循环改变;给予U0126和roscovitine进行干预, 观察上述指标改变。结果30 mW/cm² 微波辐射后海马磷酸化突触素I Ser-62/67、Ser-553及磷酸化细胞外调节激酶(p-ERK)、细胞周期素依赖性激酶(Cdk5)表达明显减少, γ-氨基丁酸(GABA)释放明显减少, 海马神经元囊泡循环速度减慢;辐射并给予U0126后, 神经元p-ERK和Ser-62/67位点突触素I磷酸化表达明显减弱, 囊泡循环速度减慢;辐射并给予roscovitine后, 神经元Cdk5表达减少, Ser-553位点突触素I磷酸化表达上调, GABA释放明显增加, 囊泡循环速度明显减慢。结论30 mW/cm²微波辐射通过下调海马神经元ERK活性抑制突触素I Ser-62/67位点磷酸化而使囊泡循环受抑制, 囊泡锚定障碍;通过下调Cdk5促进突触素I Ser-553位点磷酸化而利于含GABA的囊泡锚定于突触前膜, 但抑制囊泡循环。     

钙蛋白酶抑制剂对丙烯酰胺中毒大鼠神经毒性的拮抗作用

目的探讨钙蛋白酶抑制剂(calpeptin,CP)对丙烯酰胺(acrylamide,ACR)中毒大鼠神经毒性的拮抗作用。方法将30只健康成年雌性Wistar大鼠随机分为对照组、ACR中毒组、CP干预组3组,每组10只。ACR中毒组腹腔注射ACR30 mg/kg,3次/周,共4周;对照组腹腔注射等体积生理盐水;CP干预组腹腔注射ACR后1 h再腹腔注射CP 200μg/kg,3次/周,共4周。测定体重、步态评分、后肢撑力和神经组织细胞内钙蛋白酶(calpain)活力。结果与对照组相比,ACR中毒组大鼠体重增加缓慢(P0.05);与ACR中毒组相比,CP干预组大鼠体重在第2周显著升高(P0.05)。ACR中毒组和CP干预组步态评分和后肢撑力明显高于对照组(P0.01),CP干预组明显高于ACR组(P0.05)。ACR中毒组和CP干预组脊髓、坐骨神经细胞中calpain活力均明显高于对照组(CP干预组坐骨神经除外);CP干预组脊髓、坐骨神经细胞中calpain活力明显低于ACR组(P0.05)。结论 CP可通过抑制钙蛋白酶的活力拮抗ACR诱导的神经毒作用。     

微波辐射对大鼠海马突触结构和功能的影响

目的探讨微波辐射对大鼠海马突触结构、突触体特性以及神经递质含量和释放的影响。方法采用30 mW／cm2微波辐射Wistar大鼠,通过电镜观察辐射后6 h海马突触结构改变,并对突触体进行鉴定;采用流式细胞仪和电子自旋共振仪检测辐射后突触体内Ca2 浓度和膜蛋白流动性的改变;于辐射后6 h及1、3、7 d采用高效液相色谱仪和分光光度法检测辐射后海马氨基酸和乙酰胆碱递质含量以及突触体释放的变化。结果30 mW／cm2微波辐射可引起海马突触囊泡堆积、活性区延长、突触后致密物增加、突触穿孔以及突触曲率增加。突触体内Ca2 浓度升高,与假辐射组比较,差异有统计学意义(P<0．01),膜蛋白旋转相关时间(τc)缩短,与假辐射组比较,差异有统计学意义(P<0．05)。海马谷氨酸和甘氨酸含量降低,突触体γ-氨基丁酸(GABA)释放减少;乙酰胆碱含量,乙酰胆碱酯酶(AChE)活力以及乙酰胆碱释放均增加,与假辐射组比较,差异有统计学意义(P<0．01)。结论微波辐射可引起海马突触结构和功能损伤,进而可能影响学习记忆功能。     

铅对大鼠海马突触小体摄取谷氨酸递质的增强作用

为了探讨铅影响学习记忆功能的作用机制，作者进行了海马突触小体递质摄取实验。结果显示：３．１～５０．０μｍｏｌ／Ｌ剂量铅在体外作用１５分钟，能使突触小体３Ｈ－ＤＬ－谷氨酸摄取率增加７０．３８％～１９３．２４％，且存在明显的剂量效应关系。动物先经１０～１６００μｇ／ｍｌ剂量铅饮水染毒３０天，然后直接进行摄取实验，摄取率增加６５．７３％～１２４．９３％，与海马组织中铅含量存在剂量效应关系。提示铅离子能直接加速谷氨酸递质的灭活，产生抑制性作用。     

黄芪颗粒对老年痴呆大鼠基质金属蛋白酶9及钙蛋白酶活性的影响

目的探讨黄芪颗粒对老年痴呆大鼠海马组织中基质金属蛋白酶-9的含量及钙蛋白酶活性的影响。方法通过向大鼠的侧脑室注射链脲佐菌素制备老年痴呆大鼠的动物模型,实验分成4组:对照组、模型组、黄芪颗粒组及脑复康组。脑复康组和黄芪颗粒组分别口服黄芪颗粒和脑复康,对照组与模型组只口服同样量的生理盐水,治疗时间为28天。Morris水迷宫测定每组鼠的逃避潜伏期和穿台次数,免疫印迹实验测定各组大鼠海马组织中基质金属蛋白酶-9的含量;酶学法测定大鼠海马组织中钙蛋白酶活性。结果与对照组相比,模型组大鼠逃避潜伏期延长,而穿台次数减少(P<0.05);海马组织中基质金属蛋白酶-9相对含量明显上升(0.71±0.08)(P<0.05);钙蛋白酶活性增加(2.98±0.48)(P<0.05)。与模型组相比,口服黄芪颗粒以及脑复康组的大鼠逃避潜伏期缩短,而穿台次数增加(P<0.05);海马组织中基质金属蛋白酶-9相对含量均显著下降(均P<0.05);钙蛋白酶活性降低(均P<0.05)。结论黄芪颗粒可通过降低老年痴呆大鼠海马组织中基质金属蛋白酶-9含量和钙蛋白酶活性来减少神经细胞凋亡,...     

钙蛋白酶抑制剂对丙烯酰胺染毒神经干细胞毒性的干预模型

目的建立钙蛋白酶抑制剂MDL-28170对丙烯酰胺(ACR)诱发神经干细胞(NSCs)毒性的干预模型。方法取Wistar新生大鼠的脊髓背根神经节进行体外细胞培养,采用细胞免疫化学染色检测细胞的巢蛋白(nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)以进行NSCs鉴定。将处于对数生长期的NSCs分为对照(培养液)组和ACR单独染毒(140、350、560、700μmol/L)组及MDL-28170干预(700μmol/L ACR+65、130、195、260μmol/L MDL-28170)组,暴露48h后,采用MTT法测定细胞存活率。结果细胞的nestin、NSE及GFAP鉴定结果均呈阳性。与对照组相比,仅700μmol/L ACR染毒组NSCs的存活率较低,各剂量MDL-28170干预组NSCs的存活率均较低,差异有统计学意义(P0.05);且随着ACR染毒剂量的升高,NSCs的存活率呈下降趋势。与700μmol/L ACR染毒组相比,65、130μmol/L MDL-28170干预组NSCs的存活率均较高,而260μmol/L MDL-28170干预组NSCs的存活率较低,差异有统计学意义(P0.05)。结论成功建立钙蛋白酶抑制剂对ACR诱发NSCs毒性的干预模型。     

GnRH拮抗剂对化疗中卵巢的保护作用

化疗药物对女性患者的卵巢具有细胞毒性作用,可引起卵巢功能不全,提早出现更年期综合征和不孕,严重影响年轻女性患者生活质量和自信心.促性腺激素释放激素类似物通过抑制女性性腺轴,可减少化疗对原始卵泡的损害,对卵巢起到明显的保护作用.促性腺激素释放激素拮抗剂作为促性腺激素类似物的衍生物之一,对女性性腺轴有较强抑制作用,且副作用、所用剂量及用药时间均小于促性腺激素释放激素激动剂,是理想的替代促性腺激素释放激素激动剂的治疗药,因此在防治卵巢损伤方面倍受关注.     

纳米二氧化钛染毒对大鼠脑皮层细胞内钙离子浓度和钙蛋白酶1表达的影响

目的研究纳米二氧化钛染毒对大鼠脑皮层细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)和钙蛋白酶1(calpain 1)表达的影响。方法将50只健康SPF级雄性Wistar大鼠随机分为5组,分别为对照(蒸馏水)组和低(62.5 mg/kg)、中(125 mg/kg)和高(250mg/kg)剂量纳米二氧化钛染毒组及微米二氧化钛(250 mg/kg)染毒组,每组10只。采用灌胃方式进行染毒,每天1次,连续染毒60d,测定大鼠脑皮层细胞内[Ca2+]i和calpain 1的表达水平。结果与对照组比较,仅高剂量纳米二氧化钛染毒组大鼠脑皮层细胞内[Ca2+]i升高,差异有统计学意义(P0.05);而低、中剂量纳米二氧化钛及微米二氧化钛染毒组大鼠脑皮层细胞内[Ca2+]i略有升高趋势,但差异均无统计学意义(P0.05)。且随着纳米二氧化钛染毒剂量的升高,大鼠脑皮层细胞内[Ca2+]i呈上升趋势。与对照组比较,纳米二氧化钛及微米二氧化钛染毒组大鼠脑皮层组织calpain 1表达水平略有升高趋势,但差异均无统计学意义(P0.05)。结论在本实验剂量下,纳米二氧化钛染毒可导致大鼠脑皮层细胞内[Ca2+]i升高,但并未影响calpain 1的表达。     

大豆异黄酮加钙和骨胶原对PMOP骨的保护作用

目的探讨大豆异黄酮与钙和骨胶原的共同作用对绝经后骨质疏松症 （ postmenopausal osteoporosis，PMOP）骨密度及生物力学影响。方法设一假手术组；将去卵巢大鼠分为阴性对照组，高、中、低剂量组和碳酸钙对照组，分别给予基础饲料和不同剂量受试物以及碳酸钙，12周后进行骨密度和生物力学测定。结果受试物能增加骨密度及改善部分骨生物力学性能。结论大豆异黄酮与钙和骨胶原组合的受试物可改善雌激素缺乏所致骨质疏松症的骨质性能。     

细胞外囊泡对胚胎着床影响的研究进展

细胞外囊泡(EV)由多种细胞分泌,携带多种生物活性物质,如脂质、蛋白质、DNA、mRNA及非编码RNA(ncRNA)等,并可作为细胞与细胞间通讯物质传输的载体。EV可在女性生殖过程中介导细胞间交流,子宫内膜、胚胎、输卵管及精液来源EV,可对胚胎着床产生不同作用。笔者拟就子宫内膜、胚胎、输卵管及精液来源EV对胚胎着床影响的最新研究进展进行阐述,旨在为EV影响胚胎着床的具体调控机制研究提供参考。     

锰对神经元细胞内SNARE复合物蛋白及突触囊泡的影响

目的研究锰干扰神经递质释放的分子机制,重点观察锰对神经元细胞内SNARE复合物蛋白及突触囊泡的影响。方法利用体外培养的神经元,用0~400μmol/L锰处理24 h后,观察细胞活力及培养液中LDH的释放量。根据结果挑选剂量为0、12.5、50、200μmol/L的氯化锰处理神经元24 h,测定SNARE复合物相关蛋白的基因及蛋白表达,以及活动性突触囊泡的数量。结果随着锰处理浓度的增加,神经元损伤逐渐加重;与对照组比较,Syntaxin1A的基因及蛋白表达均未见明显改变,SNAP 25的基因和蛋白表达均逐渐下降,VAMP 2的基因和蛋白表达均逐渐升高,进而导致SNARE复合物蛋白形成下降,同时活动性突触囊泡的数量明显减少。结论锰通过干扰SNARE复合物相关蛋白的表达,减少了神经元细胞内SNARE复合物蛋白的形成,进而导致活动性突触囊泡减少,造成神经递质释放紊乱。     

牛磺酸对锰致海马神经元损伤影响

目的 探讨牛磺酸对锰致海马神经元损伤的影响。方法 新生Wistar大鼠海马神经元细胞原代培养后随机分为空白组、牛磺酸组、低、中、高剂量锰组、牛磺酸+低、中、高剂量锰组,检测乳酸脱氢酶(LDH)活力、流式细胞仪定量凋亡率和观察神经元超微结构变化。结果 LDH活力低、中、高剂量锰组分别为(1 048.063 0±55.459 8)、(1 004.123 3±65.339 4)、(1 405.303 3±163.311 5)U/L,明显高于空白组(895.203 3±53.228 6)U/L(F=31.802,P<0.001),牛磺酸+低剂量锰组(834.595 0±173.445 5)U/L明显低于低剂量锰组(1 048.063±55.459 8)U/L(t=2.871,P=0.017);神经元凋亡率中、高剂量锰组分别为(44.6±4.0)%和(57.7±6.2)%,均明显高于空白组(17.5±2.5)%(F=159.05,P<0.001),牛磺酸+中剂量锰组(34.6±6.4)%明显低于中剂量锰组(44.6±4.0)%(t=3.813,P=0.019),牛磺酸+高剂量锰组(28.9±13.2)%明显低于高剂量锰组(57.7±6.2)%(t=3.709,P=0.021);电镜下观察,锰组神经元呈凋亡和坏死的形态学改变,牛磺酸+锰组与其比较有所改善。结论 锰在体外可剂量依赖性引起海马神经元死亡,牛磺酸可在一定程度上拮抗锰的神经毒性。     

锰暴露不同时长对神经元细胞突触囊泡及其相关蛋白的影响

目的 研究锰暴露不同时长对神经元细胞突触囊泡及其相关蛋白的影响。 方法 将体外培养的神经元,分别用100 μM 锰处理0、6、12、18、24 h后,观察细胞活力及培养液中LDH的释放量,测定SNARE复合物相关蛋白的基因及蛋白表达,以及活动性突触囊泡的释放。 结果 神经元细胞用100 μM锰暴露不同时长后,神经元损伤逐渐加重(P<0.01);与对照组比较,Syntaxin 1A的基因及蛋白表达均未见明显改变(P>0.05),SNAP 25的基因和蛋白表达均逐渐下降(P<0.05),VAMP 2的基因和蛋白表达均逐渐升高(P<0.01),进而导致SNARE复合物蛋白形成先升高后下降的趋势,同时活动性突触囊泡的释放也出现相应改变。 结论 锰暴露可以时间依赖性的干扰SNARE复合物相关蛋白表达,减少了神经元细胞内SNARE复合物的形成,进而导致活动性突触囊泡减少,造成神经递质释放紊乱。     

锰 铬对体外培养小鼠卵母细胞减数分裂的影响

采用卵母细胞体外培养的方法 ,研究了硫酸锰、氯化铬对小鼠卵母细胞的成熟和减数分裂的影响。结果表明 ,二者均能抑制体外培养卵母细胞的第一极体释放 ,降低体外培养卵母细胞的存活率 ,在培养 8h时都能够抑制卵母细胞的生发泡破裂。实验结果还显示 ,氯化铬比硫酸锰对卵母细胞的损伤作用更大。提示 ,硫酸锰和氯化铬都可以破坏卵母细胞的成熟和减数分裂 ,有明显的生殖毒性。     

锰对小鼠卵母细胞成熟和体外受精的影响

目的　研究锰的生殖毒性。方法　采用小鼠卵母细胞体外培养、体外受精的方法研究了硫酸锰对小鼠卵母细胞成熟和受精能力的影响。结果　硫酸锰可以抑制卵母细胞第一极体的释放 ,降低小鼠平均超排卵的卵母细胞数和卵母细胞的存活率和体外受精率。对小鼠体内生发泡破裂 (GVBD)没有影响 ,但可以抑制体外培养卵母细胞的GVBD ;硫酸锰还可以抑制受精卵的卵裂。结论　本实验结果提示 ,硫酸锰可以破坏卵母细胞的成熟 ,降低卵母细胞的受精能力 ,具有明显的生殖毒性     

An effect of erythrocyte protoporphyrin on blood manganese in lead-exposed children and adults

Summary In one study in 2- and 3-year-old children (geom. average 143 g Pb/1) and in two studies in workers (geom. average 483 pg Pb/1 and 323 g Pb/1) manganese in blood levels increased with blood lead and with free erythrocyte porphyrin (FEP). The zero-order correlation between PbB and MnB disappeared when FEP was kept constant. The conclusion is drawn that the increase of MnB with increasing PbB is probably not due to simultaneous exposure, neither to direct interaction between Pb and Mn, but mediated through a relationship between Mn and porphyrin in erythrocytes.This study was supported by a grant from the Dutch Prevention Fund     

锰干扰纹状体内N-甲基-D天冬氨酸受体致小鼠学习记忆功障碍的研究

目的 研究纹状体内N-甲基-D天冬氨酸受体在锰致小鼠学习记忆功能障碍中的作用。方法 将48只昆明小鼠按体重随机分成4组,每组12只,雌雄各半,分别为对照组,12.5、25、50 mg/kg染锰组。腹腔注射,剂量为50 ml/kg,连续染毒2周,进行水迷宫以及避暗实验。处死小鼠,取纹状体,HE染色观察纹状体组织形态,电镜观察超微结构,免疫组化和Western blotting法测定NR2A和NR2B的表达。结果 水迷宫实验训练阶段的后期,50 mg/kg MnCl2组较同日对照组小鼠的逃避潜伏期和游泳距离增加;在6天和13天的检测阶段,50 mg/kg MnCl2组的小鼠穿环次数明显减少,25、50 mg/kg MnCl2组小鼠24 h后进入暗室的潜伏期明显缩短,次数明显增加。随着染锰剂量的增加,可见纹状体的组织形态发生病理性改变并出现超微结构损伤; 在25、50 mg/kg MnCl2组中,NR2A和NR2B的免疫组化表达的阳性面积比和积分光密度均明显下降,两者的蛋白水平亦明显降低,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 锰通过干扰纹状体内NMDA受体的表达,造成小鼠学习记忆功能障碍。     

叔丁基对苯二酚对锰致神经细胞毒性的保护作用

目的 研究叔丁基对苯二酚(tBHQ)对锰致大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞毒性的保护作用.方法 以不同终浓度(300、600、900μmol/L)的MnCl2分别处理PC12细胞24、48、72 h,用噻唑蓝(MTT)法检测PC12细胞毒性.MnCl2组予600μmol/L MnCl2处理72 h;tBHQ组予40 μmol/L tBHQ处理细胞84h;tBHQ+MnCl2组予40μmol/L tBHQ预处理12h后,600 μmol/LMnCl2处理72 h,用MTT法检测细胞毒性,MnCl2处理剂量为300 μmol/L时用Annexin V-FITC/PI法流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡.结果 与对照组比较,300、600、900μmol/LMnCl2处理24、48、72h,细胞增殖相对比值降低,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);300、600、900 μmol/L MnCl2处理组各组间相互比较,有剂量一效应关系,差异均有统计学意义(P＜0.01).与对照组比较,600 μmol/L MnCl2组抑制PC12细胞增殖,抑制率为40%,差异有统计学意义(P＜0.01).与对照组及MnCl2组比较,tBHQ组和tBHQ+MnCl2组的细胞出现增殖效应,细胞增殖相对比为1.8,差异均有统计学意义(P＜0.01).300μmol/L MnCl2处理组PC12细胞凋亡率明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01),tBHQ+MnCl2组细胞凋亡率低于300μmol/L MnCl2处理组,差异有统计学意义(P＜0.01),细胞凋亡抑制率61%.结论 锰可抑制PC12细胞增殖作用,可诱导细胞凋亡;tBHQ可减弱锰抑制PC12细胞的增殖作用并可削弱锰致PC12细胞凋亡的作用.     

铅锰镉暴露对儿童生长发育及神经认知功能的影响

目的 分析本地区重金属铅、锰、镉暴露对儿童生长发育及神经认知功能的影响,探讨重金属铅、锰、镉对该地区儿童神经认知功能的影响。方法 收集2017年9月-2019年9月在东莞市石龙镇卫生院进行幼儿园入学前体检的243例儿童,进行血铅、锰、镉含量的检测,并将铅、锰、镉分别分为高铅组(31例)和低铅组(212例)、高锰组(46例)和低锰组(197例)、高镉组(50例)和低镉组(193例),比较三种重金属与儿童年龄、身高、体重、空间记忆能力、目标追踪注意力、空间旋转能力之间的相关性。结果 高铅组儿童身高、体重低于低铅组,血铅与儿童身高、空间记忆能力、目标追踪注意力、空间旋转能力呈负相关(r=-0.180、-0.367、-0.334、-0.217, P＜0.05),血镉与空间记忆能力呈负相关(r=-0.140,P＜0.05),血锰与年龄、身高、体重、空间记忆能力、目标追踪注意力、空间旋转能力均无明显相关性(P＞0.05)。结论 本地区铅升高可能影响儿童生长发育,此外,铅和镉升高可能影响神经认知功能,其中记忆能力下降尤为明显,应及早发现重金属污染问题,及时干预,保证儿童身心健康。