百草枯诱导A549细胞间质转化及四氢吡咯二硫代氨基甲酸酯的干预作用

目的探讨体外培养的人肺腺癌细胞(A549)在百草枯(PQ)诱导下能否发生上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)及四氢吡咯二硫代氨基甲酸酯(PDTC)的干预作用和可能机制。方法体外培养A549细胞,实验分为对照A549细胞组(Control)、PQ诱导A549细胞组(PQ)、PDTC 3个浓度干预组(PQ+PDTC1,2,3;终浓度分别为10,20,40μmol/L)。用噻唑蓝(MTT)测定细胞毒性;活性氧荧光定量法(DCFH-DA)测定细胞内活性氧(ROS)水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)测定转化生长因子β1(TGF-β1)表达水平;实时定量RCR(Real Time,RT-PCR)测定EMT相关标志物上皮细胞钙粘蛋白(Ecad)、紧密连接蛋白(ZO-1)、N-钙粘蛋白(N-cad)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA表达。结果与对照组比较,PQ(600μmol/L)作用A549细胞24h后,细胞存活率降低,细胞内ROS水平明显升高,TGF-β1表达水平明显升高,上皮细胞标志物E-cad、ZO-1基因表达下调,间质细胞标志物N-cad、α-SMA基因表达明显上调(P<0.05);PDTC干预组能够降低PQ诱导的A549细胞毒性,明显抑制上述作用,其中对TGF-β1表达、E-cad、N-cad基因表达的干预作用呈剂量依赖方式(P<0.05)。结论PQ诱导A549细胞过度表达TGF-β1,继而导致上皮细胞向间质细胞转化,这可能是PQ致肺纤维化的重要机制之一;PDTC的有效干预可能基于其抗氧化和核因子-kappaB(nuclear factor-kappaB,NF-κB)抑制作用。     

铅对HK-2细胞转分化及纤维化相关因子表达的影响

目的 探讨铅在人肾小管上皮细胞表型转化中的作用及对纤维化相关因子的影响.方法 体外培养人类近端肾小管上皮细胞系(HK-2)细胞,以2.5、5.0、10.0μmol/L醋酸铅剂量染毒,以Oμmol/L醋酸铅剂量组为对照组,应用形态学、间接免疫荧光-流式细胞术、反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)观察醋酸铅染毒72 h HK-2细胞形态、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和纤维连接蛋白(FN)表达的改变,以及对纤维化相关因子转化生长因子(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)的影响.结果 5.0、10.0μmol/L醋酸铅可使肾小管上皮细胞形态发生明显改变.5.0、10.0μmol/L醋酸铅组α-SMA阳性细胞率分别为9.32%,和6.98%,明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);与对照组比较,5.0、10.0μmol/L醋酸铅组FN蛋白表达增高,差异有统计学意义(P<0.01).与对照组比较,5.0、10.0μmol/L醋酸铅组细胞TGF-β1MRNA以及蛋白质表达明显增强,2.5、5.0、10.0μmol/L醋酸铅组CTGFmRNA以及蛋白质表达明显增强,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.05).结论 铅在体外可诱导肾小管上皮细胞转分化并能增强FGF-β1、CTGF、FN表达.     

槲皮素对百草枯染毒肺上皮细胞存活率和上皮间质转化标志的影响

  目的  探讨槲皮素（Que）对百草枯（PQ）处理肺上皮细胞（MLE-12）的存活率和上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）的影响及机制。
  方法  采用CCK-8法分别检测不同剂量PQ（50、150、450 μmol/L）对MLE-12细胞存活率的影响。实验设立空白对照组、阳性对照组、PQ（150 μmol/L）+Que（30、60、90μmol/L）干预组、阴性对照组，在Que干预24 h后检测细胞存活率。应用荧光定量PCR法和蛋白免疫印迹（Western blot）法分别检测α-SMA、结缔组织生长因子（connective tissue growth factor，CTGF）、E-Cadherin、TGF-β1、Smad3、Akt、mTOR的mRNA和蛋白表达。
  结果  经PQ（150 μmol/L）处理后，60 μmol/L和90 μmol/L的Que能够显著提高MLE-12细胞存活率，与阳性对照组比较差异有统计学意义（P < 0.05）。荧光定量PCR法和Western blot法检测结果表明，与空白对照组比较，50 μmol/L的PQ能提高α-SMA、CTGF、E-Cadherin、TGF-β1、Smad3、Akt、mTOR的mRNA表达，以及α-SMA、CTGF、E-Cadherin、TGF-β1、Smad3、Akt的蛋白表达（P < 0.05）；150 μmol/L的PQ能提高TGF-β1和mTOR的mRNA表达，以及α-SMA、E-Cadherin、TGF-β1、Smad3的蛋白表达（P < 0.05）；450 μmol/L的PQ能提高CTGF和Smad3的mRNA表达，以及α-SMA、E-Cadherin、Smad3的蛋白表达（P < 0.05）。在不同浓度Que干预PQ（150 μmol/L）染毒的MLE-12细胞后，与阳性对照组相比，30 μmol/L的Que能降低α-SMA、TGF-β1、Akt、mTOR的mRNA和蛋白表达水平，以及α-SMA、CTGF、Akt、mTOR的蛋白表达水平（P < 0.05）；60 μmol/L的Que能提高CTGF、E-Cadherin、Smad3、Akt的mRNA表达水平，以及α-SMA、Smad3、mTOR的蛋白表达水平（P < 0.05）；90 μmol/L的Que能降低TGF-β1、mTOR的mRNA表达水平，提高CTGF的mRNA表达水平，降低Akt、mTOR的蛋白表达水平（P < 0.05）。
  结论  百草枯染毒可能通过TGF-β1诱导细胞发生上皮间质转化。槲皮素干预能提高百草枯染毒MLE-12细胞的存活率，并能改变细胞上皮间质转化程度，其机制可能是通过调控TGF-β1/Smad和Akt/mTOR信号通路实现。
     

香烟烟雾提取物对A549细胞MUC5AC分泌影响的机制研究

目的探讨香烟烟雾提取物(CSE)所致人气道上皮细胞黏液高分泌的分子机制及血红素加氧酶-1(HO-1)对该分子机制的阻断作用。方法通过CSE刺激人肺A549细胞,构建气道黏液高分泌的细胞模型,给予HO-1诱导剂氯化高铁血红素(Hemin)及HO-1抑制剂锌原卟啉(ZnPPIX)干预,观察HO-1、双功能氧化酶1(Duox1)、黏蛋白5AC(MUC5AC)、表皮生长因子受体(EGFR)及磷酸化EGFR(p-EGFR)的表达。将A549细胞分为对照组、CSE刺激组、Hemin干预组和ZnPPIX干预组。用四甲基偶氮唑盐法(MTT)测定Hemin及ZnPPIX对细胞活性的影响;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测各组HO-1、Duox1、EGFR及MUC5AC的mRNA水平;Western blot法检测p-EGFR、EGFR、Duox1及HO-1的蛋白水平;并用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测各组上清液及细胞裂解液中的MUC5AC蛋白含量。结果 CSE刺激组MUC5AC的mRNA积分吸光度值、培养上清液及细胞裂解液中MUC5AC蛋白水平分别为(0.660±0.044)、(62.80±6.85)μg/mg及(157.00±3.26)μg/mg,EGFR mRNA和蛋白的积分吸光度值分别为(0.596±0.061)和(0.620±0.051),均较对照组明显升高(P0.05),p-EGFR蛋白水平亦明显升高,且HO-1及Duox1的mRNA和蛋白水平也较对照组增高(P0.05)。给予Hemin预处理后,与CSE刺激组相比,HO-1mRNA及蛋白明显增多,p-EGFR蛋白水平、Duox1、EGFR及MUC5AC的mRNA和蛋白水平降低(P0.05)。给予ZnPPIX预处理后,与对照组相比,HO-1mRNA及蛋白水平无明显增高(P0.05),而p-EGFR蛋白水平、Duox1、EGFR及MUC5AC的mRNA和蛋白水平明显增高(P0.05)。结论 HO-1可通过下调Duox1的表达,阻断香烟烟雾诱导的EGFR活化上游的配体依赖信号途径,减少EGFR活化,从而抑制黏蛋白MUC5AC的合成及分泌,此结果为研究香烟烟雾诱导的气道黏液高分泌的信号机制提供了新的线索。     

硫酸铍对人肺腺癌A549细胞纤维化中TβR Ⅱ及相关因子的影响

目的 探讨BeSO4致人肺腺癌A549细胞纤维化中转化生长因子-β Ⅱ型受体(TβR Ⅱ)及其他纤维化相关因子的变化。方法 建立离体A549细胞培养实验模型,以终浓度分别为1.0、10.0 和100.0μmol/L的BeSO4处理(溶剂为完全培养基,设为低、中、高剂量组),于处理24、48和72h后收集细胞。采用荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time PCR)检测胶原蛋白Ⅰ(COL-Ⅰ)、胶原蛋白Ⅲ(COL-Ⅲ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和TβR Ⅱ的mRNA相对表达水平,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、α-SMA和TβR Ⅱ蛋白相对表达水平。结果 24、48和72h不同剂量BeSO4处理A549细胞中COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、α-SMA和TβR Ⅱ的mRNA和蛋白相对表达量均呈升高趋势。以72h时间点为例,与对照组相比,高剂量组COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、α-SMA和TβR Ⅱ的mRNA相对表达量分别增长了2.30、1.82、1.98和2.40倍,差异均具有统计学意义(P<0.05);72h高剂量组COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、α-SMA和TβR Ⅱ的蛋白相对表达量分别增长了0.90、1.28、0.50和1.23倍,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论 BeSO4可上调A549细胞中TβR Ⅱ及其他纤维化相关因子的基因和蛋白表达水平,其作用机制有待进一步的研究。     

毛蕊异黄酮对TGFβ1诱导的内皮细胞转分化相关细胞因子的影响

目的 探讨毛蕊异黄酮对转化生长因子β1(TGFβ1)诱导的人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)转分化相关细胞因子的影响.方法 TGFβ1(10μg/L)刺激生长良好的HUVECs,用毛蕊异黄酮(25、50、100μmol/L)进行干预;MTT法检测毛蕊异黄酮对HUVEC的细胞毒性作用;实时定量PCR法检测细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Gremlin、CD31、骨形态发生蛋白7(BMP7)mRNA的表达水平.结果 ①TGFβ1(10μg/L)、25、50、100μmol/L浓度的毛蕊异黄酮对HUVECs无细胞毒性作用(P>0.05).②用TGFβ1刺激HUVECs后,细胞中 α-SMA、Gremlin mRNA的表达水平显著升高,CD31、BMP7 mRNA的表达水平显著降低(P<0.05);毛蕊异黄酮(25、50、100μmol/L)进行干预后,α-SMA、Gremlin mRNA的表达水平显著降低,CD31、BMP7 mRNA的表达水平显著升高,并且表现出一定的浓度依赖性(P<0.05).结论 毛蕊异黄酮能抑制TGFβ1诱导的内皮细胞转分化,具有内皮细胞保护作用.     

SB431542对矽肺纤维化大鼠肺组织α-SMA和E-cadherin表达的影响

目的 探讨转化生长因子β（TGF-β）特异性受体抑制剂SB431542对矽肺纤维化大鼠肺组织中α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和钙黏蛋白（E-cadherin）表达的影响及其机制的研究。方法 40只健康雄性SD大鼠随机分为4组,每组10只。依次为:生理盐水对照组,矽肺模型组,SB431542抑制剂组和SB431542抑制剂对照组。除生理盐水对照组外,其余三组采用非暴露气管注入法一次性气管内注入游离二氧化硅（SiO2）粉尘50 mg,生理盐水对照组大鼠注入等量的生理盐水。SB431542抑制剂组于染尘第7、30天腹腔注射（5 mg/kg）SB431542,SB431542抑制剂对照组采用同样的方式注入等量的抑制剂助溶剂。染尘60天后取材,苏木素-伊红（HE）染色镜下观察肺组织的形态改变,实时荧光定量PCR（Realtime qPCR）法检测肺组织中α-SMA和E-cadherin mRNA表达水平,蛋白免疫印记（Western blot）法检测肺组织中α-SMA和E-cadherin蛋白表达水平。各组间基因和蛋白表达水平比较采用单因素方差分析（ANOVA）,组间两两比较采用SNK法,α-SMA和E-cadherin的相关性分析采用Spearman秩相关检验。结果 qRCR与Western blot结果显示,各组大鼠肺组织α-SMA基因和蛋白表达水平有所改变（F=7.632,P=0.001;F=39.098,P=0.002）;E-cadherin mRNA和蛋白表达水平均发生改变（F=3.751,P=0.024;F=9.014,P=0.03）。与生理盐水对照组相比,模型组大鼠肺组织有结节状结构,部分肺间质纤维化,呈肺气肿样改变,肺组织中α-SMA mRNA和蛋白表达水平升高,E-cadherin mRNA和蛋白表达量降低,差异均有统计学意义（P<0.05）;与SB431542抑制剂组比较,SB431542抑制剂对照组肺组织有结节状改变,肺泡腔扩张,腔内有少量渗出物,肺组织中α-SMA mRNA和蛋白表达水平升高,E-cadherin mRNA和蛋白表达量降低,差异均有统计学意义（P<0.05）;模型组与SB431542抑制剂对照组比较,基因和蛋白表达水平均无统计学差异（P>0.05）。相关性检验结果显示,α-SMA和E-cadherin mRNA和蛋白表达水平均呈现负相关,差异均有统计学意义（r=-0.452,P=0.016;r=-0.738,P=0.037）。结论 SB431542可通过阻断TGF-β与其受体结合,抑制α-SMA mRNA和蛋白表达,促进E-cadherin mRNA和蛋白表达,从而干预纤维化的进展。     

肺泡Ⅱ型上皮细胞过表达OC-STAMP诱导肌动蛋白细胞骨架重塑促进上皮-间质转化的机制

目的探讨过表达破骨细胞刺激性转膜蛋白(osteoclast stimulatory transmembrane protein, OC-STAMP)对上皮-间质转化的作用及机制。方法于2021年4月, 将小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞MLE-12细胞分为过表达对照组(NC组)、Ocstamp过表达组(over-Ocstamp组)、法舒地尔(Fasudil)干预组(over-Ocstamp+Fasudil组)、沉默对照组(si-NC组)、Ocstamp沉默组(si-Ocstamp组)。采用蛋白免疫印迹(Western blotting)法、免疫细胞化学染色法检测OC-STAMP、上皮标志蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin, E-cad)、间质标志蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA)、Ras基因家族成员A(Ras homolog gene family member A, RhoA)、Rho GDP解离抑制因子α(Rho GDP dissociation inhibitor α, Rho GDIα)、Rho相关蛋白激酶(Rho-associated ...     

桩蛋白在TGFβ1诱导入肾小管上皮-间充质转分化中的表达及意义

目的探讨不同浓度重组人转化生长因子β1（rhTGFβ1）诱导人近端肾小管上皮细胞（HKCs cells）发生小管上皮-间充质转分化（TEMT）过程中桩蛋白（Pax）的表达及金雀异黄素（Gen）干预来探讨Pax在此过程中的意义。方法将体外培养HKCs细胞随机分为3组：⑴对照（C）组：无血清培养基（FSM）培养;⑵TGFβ1培养（T）组：分别用含不同浓度的TGFβ1（T5组：5ng/ml,T10组：10ng/ml）的FSM培养;⑶T＋G组：TGFβ110ng/ml＋Gen50μmol/L共同培养。48h后用半定量逆转录多聚酶链式反应（RT-PCR）或免疫组化方法检测HKCs细胞E-cadherin、alpha-smooth muscle（α-SMA）和Pax的mRNA或蛋白表达;Western blot分析Pax蛋白表达变化。结果⑴C组：E-cadherin大量表达,αSMA表达阴性,Pax有基础的表达;⑵T组：E-cadherin表达减少,αSMA及Pax表达增加较C组差异均有统计学意义（P〈0.01）,且T10组较T5组差异有统计学意义（P〈0.01）。⑶T＋G组：E-cadherin表达减少及αSMA和Pax表达增加较T10组差异均有统计学意义（P〈0.01）,较C组差异有统计学意义（P〈0.01）。结论TGFβ1启动并介导HKCs细胞发生TEMT过程中能呈剂量依赖性诱导Pax表达增加;Pax参与TGFβ1诱导的TEMT部分是通过酪氨酸激酶（PTK）途径进行信号转导。     

肺腺癌中AK2表达与EGFR突变及预后的相关性分析

目的探讨腺苷酸激酶2(adenylate kinase 2,AK2)在肺腺癌中的表达情况及其与表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因突变的相关性并分析其预后预测价值。方法选取2013年2月至2016年9月经病理学确诊的肺腺癌患者145例,利用免疫组织化学法检测AK2在肺腺癌组织中的表达,分析其与EGFR突变及临床病理特征之间的相关性;采用Kaplan-Meier法进行生存分析;以Cox比例风险回归模型进一步分析患者无疾病生存期(diseasefree survival,DFS)的影响因素。结果 AK2在肺腺癌组织中的表达水平高于对应癌旁组织(P0.001)。AK2高表达组(强染色)和弱表达组(中等、弱染色及阴性)的EGFR突变率分别为70.0%和49.4%,差异具有统计学意义(χ~2=6.117,P=0.013)。伴有EGFR突变的患者中,AK2表达与肿瘤最大径、TNM分期、淋巴结转移、胸膜侵犯、突变类型显著相关(P0.05),而与其他临床特征无相关性。生存分析表明,在EGFR突变患者中,AK2高表达组和弱表达组的中位DFS分别为15.0和21.0个月,差异有统计学意义(χ~2=5.126,P=0.024);而EGFR未突变患者AK2高表达与弱表达患者的中位DFS差异无统计学意义(χ~2=2.467,P=0.117)。单因素分析显示,AK2水平、EGFR突变、肿瘤最大径、TNM分期、淋巴结转移和胸膜侵犯均为影响肺腺癌患者DFS的因素;进一步进行多因素Cox比例风险回归模型分析表明,AK2高表达(HR=1.555,95%CI:1.021～2.369,P=0.040)和淋巴结转移(HR=1.953,95%CI:1.181～3.230,P=0.009)为肺腺癌患者DFS的独立影响因素。结论肺腺癌组织AK2表达水平与EGFR突变率呈正向关联,癌组织高表达AK2预示较差的预后。     

表皮生长因子及其受体在胎儿生长发育中的作用

表皮生长因子及其受体在女性生殖系统如子宫内膜、蜕膜、胚泡、胎盘均有表达 ,具有促进滋养细胞增殖、分化、胚胎着床及胎儿器官发育和功能成熟等作用 ,并与胎儿宫内发育迟缓、先兆子痫发病有一定相关性。     

抗EGFR/VEGF双特异性单链抗体的构建及其抗卵巢癌SKOV-3的研究

目的 将表皮生长因子受体(EGFR)和血管内皮生长因子(VEGF)同时进行靶向治疗,可协同抑制作用,增强抗肿瘤效果.方法 使用重叠聚合酶链式反应(PCR)手段,西妥昔单抗的可变区和贝伐珠单抗的可变区通过G4S柔性肽连接在一起,获得同时靶向EGFR和VEGF的双特异性单链抗体(scDb);通过酶联免疫吸附测定(ELISA)检测scDb与EGFR和VEGF的结合活性,并计算亲和力常数;流式细胞术检测scDb对受体过表达的卵巢癌细胞系SKOV-3的结合能力;MTT法检测scDb对卵巢癌细胞系SKOV-3的增殖抑制;Western Blot研究与单独给药相比 scDb对 SKOV-3相关信号通路的影响;建立卵巢癌SKOV-3细胞荷瘤小鼠动物模型,检测scDb的体内抗肿瘤活性.结果 通过重叠PCR手段和毕赤酵母X-33表达,成功获得scDb,经Western blot鉴定验证了scDb的分子量为55kD,证明表达及装配正确.ELISA检测scDb与EGFR和VEGF均有结合活性,通过EC50计算,得到scDb与EGFR的亲和力常数为1.27nM,与VEGF的亲和力常数为0.75nM.流式细胞术检测scDb与SKOV-3的结合率为72.00%.MTT实验,亲本抗体组与双特异性单链抗体组对SKOV-3均有抑制作用.通过Western blot实验表明,scDb能同时阻断EGFR和激酶结构域受体(KDR)的磷酸化,最终导致丝氨酸/苏氨酸激酶等信号通路被强烈抑制.通过SKOV-3细胞裸鼠移植瘤模型的体内抗肿瘤实验,scDb组在体内仍能发挥较强的抗肿瘤效果,高剂量组肿瘤抑制率可以达到(74.53±9.63)%.结论 该文成功构建并表达了scDb.scDb具有良好的体内外抗肿瘤活性,为抗肿瘤治疗提供了新的思路,有潜在的临床应用前景.     

3种生物制剂对芥子气眼角膜损伤的疗效观察

目的观察碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)、表皮生长因子 (EGF)和纤维连接蛋白(FN) 3种促进上皮再生的生物制剂对兔眼角膜芥子气损伤的疗效。方法将 32只兔左眼角膜以芥子气染毒后 ,随机均分为 4组 ,分别用氯霉素眼液 (对照 )、bFGF、EGF及FN处理 ,分别于染毒后 2、8、16、2 4、36、4 8和 72h对角膜荧光素着色区拍照 ,计算其上皮愈合速率和上皮破损率。结果bFGF、EGF和FN治疗组的角膜上皮愈合速率 (3d)分别为 (1.2 76± 0 .15 2 )、(1.2 94± 0 .15 8)和(1.373± 0 .177)mm2 ·h 1,与对照组的 (1.0 94± 0 .15 4)mm2 ·h 1相比有显著差异 (P <0 .0 5 ) ;3个组的角膜上皮破损率 (2 7d)分别为 5 1.9%、5 4.2 %和 5 2 .8% ,与对照组的 (73.6 % )相比有非常显著差异 (P <0 .0 1)。结论bFGF、EGF和FN 3种生物制剂可促进芥子气眼损伤的角膜上皮修复     

子宫内膜癌分子标志物与临床病理的关系研究

目的：探索子宫内膜癌患者雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）、表皮生长因子受体2（CerbB-2）、增殖细胞核抗原（Ki-67）的表达以及其与临床和病理的关系。方法选择2013年8月至2014年8月于浙江省肿瘤医院行手术治疗的72例子宫内膜癌患者为研究对象,应用免疫组化法测定不同病理分期、分化程度以及浸润转移等ER、PR、CerbB-2、Ki-67各项表达情况。结果手术－病理分期Ⅲ期～Ⅳ期者ER、PR阳性率均明显低于Ⅰ期和Ⅱ期,而Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期者CerbB-2、Ki-67阳性率均明显高于I期,上述差异均有统计学意义（χ2值分别为6．73、5．35、6．92、6．02、7．23、7．83、6．85、7．03,均P＜0．05）。组织学分化G3级者ER、PR阳性率均明显低于G1级和G2级者,而G2、G3级者CerbB-2、Ki-67阳性率均明显高于G1级者,且G3级者CerbB-2、Ki-67阳性率均明显高于G2级者,上述差异均有统计学意义（χ2值分别为7．53、6．68、7．90、7．24、9．22、12．64、6．82、7．53,均P＜0．05）。肌层浸润深度＞1／2者ER、PR阳性表达率均显著低于肌层浸润深度≤1／2者和无肌层浸润者,而肌层浸润深度＞1／2者CerbB-2、Ki-67阳性率显著高于肌层浸润深度≤1／2者和无肌层浸润者,且肌层浸润≤1／2者CerbB-2、Ki-67阳性率显著高于无肌层浸润者,差异均有统计学意义（χ2值分别为7．74、7．63、7．54、7．16、5．86、7．02、6．06、7．44,均P＜0．05）。有淋巴结转移者ER、PR阳性率均明显低于无淋巴结转移者,差异均有统计学意义（χ2值分别为7．74、7．63,均P＜0．05）,而有淋巴结转移者和无淋巴结转移者CerbB-2、Ki-67阳性率比较无显著差异（χ2值分别为1．22、2．05,均P＞0．05）。结论 ER、PR、CerbB-2、Ki-67表达与子宫内膜癌临床和病理有密切相关性,联合应用可作为判断疾病预后和指导临床治疗的依据。     

人正常早孕滋养细胞体外培养株的系统鉴定

目的 建立人早孕滋养细胞株（HPT-8）的系统鉴定方法。方法 通过光镜、扫描电镜、透射电镜、免疫组化和免疫荧光激光共聚焦的方法对体外培养出的HPT-8进行系统鉴定评价。结果 电镜下可见细胞表面微绒毛丰富；胞质丰富；内质网扩张明显，细胞间紧密的桥粒样结构连接；检测细胞胞浆中角蛋白18和波形蛋白均为阳性，细胞胞浆中角蛋白7为阳性，细胞膜上移动相关蛋白为阳性。表皮生长因子受体、滋养细胞趋化因子和胎盘碱性磷酸酶结果均阳性，而人绒毛促性腺激素和胎盘催乳素结果均为阴性。结论 通过多种方法对HPT-8进行形态、超微结构、蛋白骨架和功能指标的综合评价，可以较全面的确定体外传至72代的细胞株HPT-8为具有部分内分泌功能的滋养细胞株，为进一步开展实验研究建立细胞模型。     

乳腺癌新辅助化疗前后ER、PR、Ki-67和Her-2变化

目的 探讨乳腺癌患者新辅助化疗前后雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、Ki-67抗原(Ki-67)、人表皮生长因子受体-2(Her-2)表达的变化及意义.方法 回顾性分析99例接受新辅助化疗的乳腺癌患者临床资料,观察化疗近期疗效,免疫组化检测化疗前后乳腺癌组织中ER、PR、Ki-67、Her-2的表达,分析化疗前四者的相关性,疗效与其化疗前表达的关系以及化疗对其表达的影响.结果 新辅助化疗前ER与PR呈显著正相关(r=0.731,P=0.000),与Ki-67呈显著负相关(r=-0.298,P=0.003),PR也与Ki-67呈显著负相关(r=-0.265,P=0.014);化疗结束后16例获得PCR,PCR率为16.16%,ER、PR阴性表达的患者病理完全缓解(PCR)率高于阳性表达患者,差异有统计学意义(χ2值分别为12.038、10.834,均P<0.05);化疗前激素受体、Ki-67和Her-2阳性/阴性表达或过表达/非过表达间总有效率的比较差异均无统计学意义(χ2值分别为0.38、0.17、0.13、0.04,均P>0.05);除去16例获得PCR患者,剩余83例患者新辅助化疗后Ki-67阳性率显著降低,差异有统计学意义(χ2=7.923,P<0.05),ER、PR阳性率、Her-2过表达率均无显著变化,差异均无统计学意义(χ2值分别为0.965、1.364、0.392,均P>0.05).结论 ER、PR阴性表达的乳腺癌患者Ki-67表达增加,提示增殖能力较强,而新辅助化疗可以下调Ki-67表达,降低肿瘤的增殖活性,ER、PR阴性患者对新辅助化疗更为敏感.乳腺癌组织ER、PR和Ki-67表达的变化可以有效预测新辅助化疗的疗效.     

33例三阴乳腺浸润性导管癌声像图特征分析

目的分析三阴乳腺浸润性导管癌声像图特征,提高术前对此类患者认识水平。方法分析33例经外科术后病理、免疫组化确诊的三阴乳腺浸润性导管癌声像图,并与同期247例非三阴乳腺浸润性导管癌声像图比较分析。结果三阴乳腺浸润性导管癌患者声像图以边缘光滑、后方回声稍增强、内部少见微钙化为主要特征,腋窝常见淋巴结转移。结论三阴乳腺浸润性导管癌大多不具有乳腺癌典型声像图特征,同侧腋窝转移淋巴结较多见,了解这些特征可为临床判断预后及制定治疗方案提供一定参考信息。     

三羟异黄酮拮抗表皮生长因子促乳腺癌细胞增殖

目的通过体外细胞，观察三羟异黄酮(genistein)和表皮生长因子(EGF)对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响。方法用不同剂量genistein、不同剂量EGF、固定剂量genistein和EGF的混合液，作用于体外培养的雌激素受体阳性(ER^ )人乳腺癌细胞株MCF-7，作用不同时间后，用噻唑蓝(MTT)法测定细胞生长情况。结果genistein剂量超过25μmol／L以后对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞增殖均有抑制作用，而且随剂量增大和作用时间延长其抑制作用逐渐增强，其中50μmol／L为最适宜浓度，EGF剂量超过4．15nmol／L以后对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞增有明显的促进作用，而且随剂量增大和作用时间延长其作用逐渐增强，其中8．30nmol／LEGF联合作用于MCF-7细胞，则可显示出两者有交互作用，EGF对细胞的促增殖作用可以被genistein的作用逆转。结论genistein可抑制EGF诱导的人乳腺癌细胞株MCF-7细胞的增殖。     

VEGF及其受体在上皮性卵巢癌组织中的表达及预后

目的 研究血管内皮生长因子（VEGF）及其受体血管内皮生长因子受体1（VEGFR1）、血管内皮生长因子受体2（VEGFR2）在上皮性卵巢癌中表达及临床预后意义。方法 采用SP免疫组化法检测139例不同卵巢组织VEGF及其受体VEGFR1、VEGFR2的表达及在上皮性卵巢癌组织中的共表达情况,并结合临床资料进行统计分析。结果 VEGF及其受体VEGFR1、VEGFR2在上皮性卵巢癌组织中的染色强度明显高于良性卵巢肿瘤及正常卵巢组织;并且VEGF及其受体在上皮性卵巢癌组织中的表达与临床分期、腹水量的差异均具有统计学意义（χ^2=4．207,P＝0．034;χ^2=7．432,P＝0．007）;在相关分析中高表达的VEGF与VEGFR2（r＝0．316,P＜0．05）、VEGFR1与VEGFR2（r＝0．415,P＜0．05）均存在相关性;VEGF及其受体三者共高表达较非共高表达患者的5年生存率差异具有统计学意义（χ^2＝4．043,P＝0．044）。结论 高表达和共表达VEGF及其受体VEGFR1和VEGFR2的患者可能存在较差预后,并且三者共表达及高表达可作为一项指导临床应用抗肿瘤血管生成药物（ Bev）靶向治疗的疗效预测分子。