熊果酸对活化型肝星状细胞NADPH氧化酶亚基p47Phox表达及ERK1/2信号通路活化的影响

目的 研究熊果酸（Ursolic acid ,UA）对瘦素诱导的大鼠肝星状细胞（HSC-T6）NADPH氧化酶（NOX）亚基p47Phox及ERK1/2信号通路活化的影响,并观察细胞增殖及I型胶原合成情况。方法 将培养激活的HSC-T6细胞株分为6组：正常对照组不加任何药物;瘦素组给予重组大鼠瘦素(100ng/ml)刺激细胞;各干预组分别给予UA、JAK抑制剂AG490、NOX抑制剂DPI、ERK抑制剂PD98059预处理30min,再加入瘦素刺激不同时间。采用Western blotting检测细胞膜移位的p47Phox蛋白、细胞总的p47Phox蛋白和磷酸化的ERK1/2（p-ERK1/2）蛋白表达;采用MTT法检测细胞增殖;采用RT-PCR法检测I型胶原mRNA的表达。结果 瘦素刺激HSC-T6细胞30min后细胞膜p47phox蛋白表达显著增高于正常对照组（0.68±0.09比0.44±0.11,P<0.01）,细胞内p-ERK1/2蛋白表达也随之增高（P<0.01）;UA、AG490及DPI干预后抑制了p47phox蛋白向细胞膜移位和细胞内ERK1/2蛋白磷酸化,PD98059抑制p47phox蛋白膜移位的作用较弱。瘦素刺激HSC-T6细胞12h后I型胶原的mRNA表达较正常对照组升高（P<0.01）,UA干预后I型胶原的mRNA表达明显低于瘦素组（0.57±0.18比1.02±0.5,P<0.01）,AG490、DPI及PD98059干预后I型胶原mRNA的表达均低于瘦素组（P<0.01）。瘦素刺激HSC-T6细胞12h、24h、48h后细胞增殖率高于正常对照组（均P<0.01）;UA、AG490、DPI及PD98059干预不同时间点的细胞增殖率均低于瘦素组（均P<0.01）,UA的抑制作用稍弱于DPI。结论：UA能抑制瘦素诱导的HSC-T6细胞增殖及I型胶原表达,机制可能与抑制NOX亚基p47phox向细胞膜移位及下游信号通路ERK1/2的激活有关。     

JAK2/STAT3信号传导通路在瘦素促进子宫内膜癌细胞增殖中的作用

目的 探讨JAK2/STAT3信号传导通路在瘦素促进子宫内膜癌细胞(Ishikawa细胞)增殖中的作用.方法 免疫荧光染色法检测瘦素受体(OB-Rb)在Ishikawa细胞的表达.Ishikawa细胞分别用不同浓度的瘦素(0、10、50、100、150 ng/ml)作用不同的时间(6、12、24 h)后,MTT法检测各组细胞的增殖情况;另应用不同浓度(0、25、50、100 μmol/L)JAK2激酶特异性抑制剂AG490阻断STAT3磷酸化后,采用MTT法检测瘦素对Ishikawa细胞增殖的影响;瘦素(100 ng/ml)作用Ishikawa细胞不同时间(0、20、40、60 min)后,采用免疫印迹法(Western blot)检测细胞STAT3磷酸化水平.结果 免疫荧光染色证实Ishikawa细胞膜存在OB-Rb的表达;瘦素能明显促进Ishikawa细胞的增殖,在0 ～100 ng/ml范围内呈剂量依赖性,于150 ng/ml瘦素作用24 h时细胞增殖效应最大;AG490可明显抑制瘦素对Ishikawa细胞的促增殖作用,呈剂量依赖性;Ishikawa细胞经100 ng/ml瘦素处理后,随时间的延长,STAT3活化程度逐渐增高,至少可持续60 min.结论 瘦素可能通过激活JAK2/STAT3信号传导通路促进子宫内膜癌细胞的增殖.     

乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭转移中JAK抑制对ERK的作用及意义

目的:研究JAK激酶抑制剂AG490对乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)磷酸化的影响,探讨JAK激酶对ERK信号转导通路的作用以及在乳腺癌细胞侵袭转移中的调控意义.方法:以JAK激酶抑制剂AG490处理乳腺癌细胞MDA-MB-231,MTT法检测AG490对细胞的生长抑制作用;MTT法检测AG490处理后细胞对人工基底膜Matrigel的黏附能力变化;Transwell小室进行人工重组基底膜侵袭和迁移实验,检测AG490处理后细胞侵袭、迁移能力变化;Western印迹法检测AG490处理后细胞中磷酸化ERK(P-ERK)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白水平变化.结果:应用JAK酶抑制剂AG490后MDA-MB-231细胞生长受到抑制,作用呈时效-量效依赖关系;MDA-MB-231细胞黏附、侵袭、迁移能力降低,同时细胞中P-ERK、MMP-9蛋白减少.结论:JAK激酶可以通过改变ERK的磷酸化水平影响ERK信号转导通路的活化.JAK激酶抑制对ERK信号转导通路的激活有阻断作用,可以抑制MMP-9的表达及乳腺癌细胞的侵袭转移.     

Janus激酶抑制剂AG490对人肝癌SMMC-7721细胞侵袭转移的影响

目的 研究Janus激酶抑制剂AG490对人肝癌SMMC-7721细胞侵袭转移能力的影响,探讨JAK2/STAT3信号通路在肝癌侵袭调控中的作用。方法实验分为对照组、实验组（5、10 μmol/L AG490处理的SMMC-7721细胞）。采用Transwell小室检测肝癌细胞的侵袭能力,RT-PCR检测MMP-2 m...     

MEK1 and MEK2 differentially regulate human insulin- and insulin glargine-induced human bladder cancer T24 cell proliferation

Background  Increased risk of bladder cancer has been reported in diabetic patients. This study was to investigate the roles of mitogen-activated protein kinase kinase (MEK) 1 and 2 in the regulation of human insulin- and insulin glargine-induced proliferation of human bladder cancer T24 cells.

Methods  In the absence or presence of a selective inhibitor for MEK1 (PD98059) or a specific siRNA for MEK2 (siMEK2), with or without addition of insulin or glargine, T24 cell proliferation was evaluated by cell counting kit (CCK)-8 assay. Protein expression of MEK2, phosphorylation of ERK1/2 and Akt was analyzed by Western blotting.

Results  T24 cell proliferation was promoted by PD98059 at 5–20 µmol/L, inhibited by siMEK2 at 25–100 nmol/L. PD98059 and siMEK2 remarkably reduced phosphorylated ERK1/2. Insulin- and glargine-induced T24 cell proliferation was enhanced by PD98059, suppressed while not blocked by siMEK2. Insulin- and glargine-induced ERK1/2 activation was blocked by PD98059 or siMEK2 treatment, whereas activation of Akt was not affected.

Conclusion  MEK1 inhibits while MEK2 contributes to normal and human insulin- and insulin glargine-induced human bladder cancer T24 cell proliferation.

     

PI3K/AKT和MAPK/ERK1/2信号通路对胰腺癌PANC-1细胞VEGF表达的影响

目的:探讨PI3K/AKT和MAPK/ERK1/2信号通路对人胰腺癌PANC-1血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:抑制剂LY294002和PD98095分别处理人胰腺癌PANC-1细胞,Western blotting检测细胞VEGF蛋白表达。结果:分析表明LY294002和PD98095处理后的PANC-1细胞的磷酸化AKT、磷酸化ERK1/2及VEGF蛋白表达水平均明显低于对照组VEGF(P<0.05)。结论:抑制PI3K/AKT和MAPK/ERK1/2细胞信号通路能够下调VEGF蛋白表达,进而抑制肿瘤新生血管的生成及浸润转移能力。     

Effects of insulin, insulin-like growth factor-I and -II on proliferation and intracellular signaling in endometrial carcinoma cells with different expression levels of insulin receptor isoform A

Background  Hyperinsulinemia, insulin-like growth factor (IGF)-I and -II (IGF-II) are associated with increased risk of endometrial carcinoma. Insulin receptor isoform A (IR-A) is more frequently expressed in endometrial carcinoma than in normal endometrial tissues. To better understand their roles in endometrial carcinoma, we investigated the effects of insulin, IGF-I, and IGF-II in endometrial carcinomas cells with different IR-A expression levels.

Methods  To explore the role of IR-A in mediating the activity of IGF-I, IGF-II, and insulin, we investigate the cellular proliferation of endometrial carcinoma cell lines RL95-2 and RL95-2-IR-A by MTS assays. Then we examined the protein kinase Akt phosphorylation and extracellular signal-regulated kinase (ERK) 1/2 phosphorylation in both cell lines by Western blotting. The effect of IGF-II and AG1024 on cell cycle progression and apoptosis was assessed by flowcytometry. To examine whether the effects of IGFs were mediated by IR-A, we blocked IGF-I receptor (IGF-IR) in both cell lines using AG1024, an IGF-IR-specific inhibitor.

Results  IGF-I and IGF-II significantly enhanced proliferation of both cell lines (P <0.05). By contrast, insulin significantly increased proliferation of RL95-2-IR-A cells only (P <0.05). IGF-I and IGF-II significantly increased pAkt levels in RL95-2 cells and pERK1/2 levels in RL95-2-IR-A cells (all, P <0.05). Insulin increased pERK1/2 levels in RL95-2–IR-A cells only (P <0.05). LY294002 and PD98059 inhibited the specific signaling activities and cellular proliferation. After AG1024 pretreatment, neither IGF-I nor IGF-II affected pAkt levels in RL95-2 cells. IGF-II, but not IGF-I, increased pERK1/2 levels in RL95-2-IR-A cells. After AG1024 pretreatment, the proliferation rate and DNA content corresponding to the S phase increased and apoptosis decreased significantly in IGF-II-treated RL95-2-IR-A cells only (P <0.05).

Conclusions  The proliferation effect of insulin is mediated by IR-A. When IR-A dominates in a cell line, IGF-II activated cell proliferation mainly through the ERK1/2 pathway. On the other hand, IGF-II activated cell proliferation mainly through the Akt pathway. IR-A can at least partly mediate the proliferative and anti-apoptotic effects of IGF-II through the ERK1/2 pathway.

     

Analysis of epidermal growth factor signaling in nasal mucosa epithelial cell proliferation involved in chronic rhinosinusitis

Background Aberrant epithelial repair has been observed in chronic rhinosinusitis （CRS） patients; however, the mechanism of epithelial cell repair regulation is unclear. Epidermal growth factor （EGF） plays an important role in regulating epithelial cell repair in lower airway and may be a critical factor in the remodeling processes of CRS. The objective of our research is to evaluate the differences between CRS and normal subjects and between chronic rhinosinusitis without nasal poiys （CRSsNP） and chronic rhinosinusitis with nasal polys （CRSwNP） in the regulation of EGF pathways and the regulating proliferative position of classic Ras/Raf/MEK/ERK pathways. Methods We evaluated the proliferation rates of ethmoidal mucosal cells before and after stimulation with EGF, epidermal growth factor receptor （EGFR） kinase inhibitor AG1478, and extracellular signal-regulated kinase 1/2 （ERKI/2）inhibitor PD98059 using MTT assays. We also analyzed the sinonasal epithelial cells collected from control subjects and patients with CRS subtypes CRSsNP and CRSwNP for the expression of ERK1/2, phosphorylated ERK1/2, P21, P15, and P27 using western blotting analyses. Results The proliferation rates of sinonasal epithelial cells before and after EGF stimulation were lower in CRS patients than in the controls. AG1478 or PD98059 inhibitor treatment of control epithelial cells did not result in a significant difference in proliferation. Although, AG1478 and PD98059,inhibited the proliferation of CRS cells, the degree of proliferation inhibition was markedly different in CRSsNP. AG1478 suppressed the proliferation of CRSwNP epithelial cells, whereas PD98059 had no effect. The ratio of ERK1/2 phosphorylation in CRS cells was lower than that of the control cells. Cyclin-dependent kinase inhibitors were highly expressed in CRS cells compared with that of control cells. ERK1/2 and P27 showed differential expression in CRSsNP and CRSwNP. Conclusions Differences existed in EGF pathways in CRS patients and normal subjects     

JAK2/STAT3通路在肝癌细胞侵袭及血管生成拟态中的作用

目的 探讨JAK2/STAT3通路在肝癌细胞QGY-7701侵袭及血管生成拟态中的作用.方法 JAK2抑制剂AG490(5、10 μmol/L)处理肝癌细胞48 h,Transwell小室、体外成管实验分别检测各组细胞的体外侵袭能力和成管能力,RT-PCR检测Twist1及MMP-2 mRNA表达差异,Western blot检测STAT3、p-STAT3、Twistl和MMP-2蛋白表达差异.结果 与对照组相比,Transwell小室穿膜细胞数减少,形成管道结构数目减少,Twist1及MMP-2 mRNA表达减少,Twist1、MMP-2和p-STAT3蛋白表达减少,差异均有统计学意义(P＜0.05),STAT3蛋白表达无差异(P＞0.05).结论 AG490能有效抑制肝癌细胞侵袭及成管的能力,JAK2/STAT3通路在肝癌细胞侵袭及血管生成拟态中起促进作用.     

ERK1/2 及p38通路调节P2Y受体介导的前列腺癌细胞体外侵袭

目的 探讨细胞外信号调节激酶(ERK1／2)及p38激酶在P2Y嘌呤受体活化介导的前列腺癌细胞体外侵袭中的作用。方法 以脂质体法将负显性MAPK激酶1(KA-MEKl)及野生型p38磷酸酶(MKP-5)转染人前列腺癌细胞PC-3亚系1E8(高转移)和284(不转移)细胞,以Western印迹法检测细胞经P2Y嘌呤受体激动剂ATP刺激后ERK1／2及p38活化情况,并用体外侵袭实验检测在P2Y受体介导的前列腺癌细胞体外侵袭效应中ERK1／2及p38通路所起的作用。结果ATP可以激活ERK1／2及p38通路并促进前列腺癌细胞体外侵袭,这种侵袭促进效应可以分别被MEK1抑制剂PD98059及p38抑制剂SB203580所抑制。转染KA-MEK1及MKP-5使侵袭细胞数分别降低约40％及60％。如果加入抑制剂同时抑制ERKl／2及p38通路,细胞的侵袭能力被抑制约76％。结论 ERK1／2及p38通路在P2Y嘌呤受体活化所介导的前列腺癌细胞侵袭中起重要作用。     

AGEs通过JAK2/STAT3信号通路诱导结肠癌SW480细胞增殖、侵袭及上皮间质转化

目的 观察糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)对结肠癌SW480细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移及上皮间质转化的影响,并探讨其相关机制.方法 将结肠癌SW480细胞分为对照组、AGEs组(200 μg/mL AGEs)、AGEs(200 μg/mL)+AG490(50 μmol/L)组,CCK-8检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞周期、凋亡,Transwell实验检测细胞体外侵袭能力,划痕实验检测细胞体外迁移能力.不同浓度(0、50、100、200 μg/mL) AGEs和200 μg/mL AGEs、50 μmol/L AG490单独处理及二者联合处理SW480细胞后,Western blot检测上皮间质转化相关分子标志物E-cadherin、N-cadherin、Vimentin及JAK2/STAT3信号通路相关分子的变化.结果 与对照组比较,AGEs能明显促进结肠癌SW480细胞的增殖,减少G1/S期阻滞,抑制凋亡,增强体外的侵袭、迁移能力(P＜0.05).与AGEs组比较,AGEs+ AG490组结肠癌SW480细胞增殖减少,G1/S期阻滞增加,凋亡增加,侵袭、迁移能力降低,差异有统计学意义(P＜0.05).Western blot检测结果显示,AGEs处理结肠癌SW480细胞后E-cadherin表达降低,N-cadherin、Vimentin、p-STAT3、p-JAK2表达升高,而AG490可逆转AGEs对结肠癌SW480细胞的作用.结论 AGEs能够通过JAK2/STAT3信号通路促进结肠癌SW480细胞的增殖,抑制凋亡,增强侵袭、迁移能力,促进上皮间质转化.     

白细胞介素-22促进类风湿关节炎成纤维化膜细胞的增殖

目的 通过白细胞介素-22(IL-22)干预类风湿关节炎(RA)成纤维滑膜细胞(FLS)以期明确IL-22促进其增殖的机制.方法 无菌条件下获取的RA滑膜组织,应用组织块分离法培养RA-FLS,含10% FBS的DMEM培养基进行细胞传代培养,并对第4~5代FLS应用vimentin/CD68进行免疫组化法鉴定;不同浓度的IL-22干预FLS培养24、48、72 h后,MTT法检测细胞增殖程度;联合IL-22和/或AG490干预FLS,于冰面上用含蛋白酶抑制剂的细胞裂解液获取细胞总蛋白,再经超声、离心提取、蛋白定量后,Western blot法检测STAT3、ERK1/2、P38蛋白及其磷酸化蛋白的表达,统计分析采用SPSS20.0软件进行,P<0.05为差异有统计学意义.结果 不同浓度IL-22干预FLS的增殖均较对照组呈梯度增高变化,差异具有统计学意义(P<0.05).随着IL-22干预时间的延长,STAT3总蛋白表达相对灰度值的整体水平差异无统计学意义(P=0.68),但是其磷酸化蛋白表达相对灰度值整体水平差异具有统计学意义(P<0.001),且在干预的不同时间点STAT3磷酸化蛋白相对表达量较基线0 h时均显著升高,且差异具有统计学意义(P<0.001).IL-22干预后的ERK1/2和P38总蛋白及其磷酸化蛋白表达相对灰度值差异均无统计学意义(P>0.05).联合50 ng/mL IL-22和100 μmol/L AG490干预FLS不同时间后,细胞的增殖程度较单用IL-22干预均显著降低(P<0.01).结论 IL-22以浓度依赖方式促进RA成纤维化膜细胞STAT3蛋白磷酸化所介导的细胞增殖,而非ERK1/2和P38蛋白所介导的信号通路.     

JAK2/STAT3通路在表皮生长因子诱导结肠癌细胞侵袭迁移中的作用

目的探讨JAK2/STAT3通路在表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)诱导结肠癌细胞侵袭迁移中的作用。方法以人结肠癌细胞株LoVo为研究对象,分为对照组、表皮生长因子处理组(EGF组)、表皮生长因子与JAK2激酶抑制剂AG490共处理组(EGF+AG490组)。采用免疫荧光和Western blot检测各组LoVo细胞E钙粘素蛋白、磷酸化STAT3表达水平;Transwell法检测细胞侵袭能力;细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果细胞划痕实验对照组细胞划痕闭合约38%,EGF+AG490组细胞划痕闭合约40%,而EGF组闭合约80%。EGF组显著高于另2组(P<0.05);体外侵袭实验显示对照组透膜细胞数为(21.24±2.65)/视野,EGF+AG490组为(23.19±3.50)/视野,EGF组为(55.08±2.14)/视野。EGF组显著高于另2组(P<0.05);与EGF+AG490组结肠癌LoVo细胞相比,EGF组细胞P-STAT3表达增加72.4%,E-cadherin蛋白表达降低68.5%(P<0.05);免疫荧光显示EGF组细胞E-cadherin向细胞质内移位...     

黏着斑激酶对ERK介导的滋养层细胞侵袭行为的调节作用

目的:探讨黏着斑激酶(FAK)在细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)信号通路介导的滋养层细胞侵袭中的作用.方法:利用人绒毛外细胞滋养层(extravillous cytotrophoblasts,EVCT)细胞体外侵袭模型,加入不同浓度的黏着斑激酶抑制...     

尾加压素Ⅱ对自发性高血压大鼠血管外膜成纤维细胞增殖活性及细胞外信号调节激酶1/2磷酸化的影响

目的研究尾加压素Ⅱ(UⅡ)对自发性高血压大鼠(SHR)血管外膜成纤维细胞增殖活性的影响,并进一步探讨其可能涉及的信号转导通路。方法用胸腺嘧啶掺入法(3H-TdR)观察UⅡ诱导的SHR大鼠血管外膜成纤维细胞的增殖活性,及UⅡ受体拮抗剂Urantide、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)特异性的抑制剂PD98059对UⅡ诱导SHR大鼠血管外膜成纤维细胞增殖活性的影响;用免疫印迹技术观察UⅡ诱导后ERK1/2的磷酸化,及Urantide、PD98059对ERK1/2磷酸化的影响。结果UⅡ可以剂量依赖性地诱导SHR大鼠血管外膜成纤维细胞的增殖活性,且这一作用可以完全及部分被Urantide、PD98059抑制;UⅡ可以时间依赖性地诱导血管外膜成纤维细胞ERK1/2的磷酸化,且这一作用可以完全被Urantide、PD98059抑制。结论UⅡ可以诱导SHR大鼠血管外膜成纤维细胞的增殖活性,且该过程部分由ERK1/2信号通路所介导。     

MEK／ERK信号通路活性表达与乳腺癌干细胞增殖和凋亡的关系

目的探讨MEK／ERK信号通路在乳腺癌干细胞增殖和凋亡中的作用。方法体外培养乳腺癌干细胞,采用MEK抑制剂PD98059抑制MEK／ERK信号通路表达,Western blot检测PD98059对p—ERK1／2表达的影响,进一步应用MTT法测定PD98059对乳腺癌干细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测细胞周期变化;同时,TUNEL荧光染色分析、Histone／DNAELISA和流式细胞术检测评价细胞凋亡。结果PD98059可有效下调p—ERK1／2表达,抑制乳腺癌干细胞生长,诱导G0／G1期抑制;TUNEL荧光染色,Histone／DNAELISA检测和流式细胞术检测分析显示PD98059可有效诱导乳腺癌干细胞凋亡。结论MEK／ERK信号通路在乳腺癌干细胞增殖和凋亡中发挥重要作用。     

榄香烯和PD98059诱导人胃癌SCG-7901细胞株凋亡及其机制的探讨

目的：探讨榄香烯及PD98059对人胃癌SCG-7901细胞株凋亡的影响,及其与ERK1／2、P38MAPK信号通路的关系。方法：用不同浓度的榄香烯和PD98059处理人胃癌SCG-7901细胞,体外细胞增殖抑制实验（MTT）法检测细胞增殖情况;Western—blot法检测ERKl／2、磷酸化ERKl／2（p-ERK1／2）和磷酸化P38（p-P38）的表达;RT-PCR检测bcl-2mRNA及baxmRNA的表达;TUNEL法检测胃癌细胞凋亡并计算凋亡指数。结果：榄香烯和PD98059单独作用都有抑制胃癌细胞增殖的作用,前者呈浓度和时间依赖性,后者则呈时间依赖性但无浓度依赖性,两药联合作用时对胃癌细胞增殖的抑制作用显著大于单一用药时（P〈0．05）;随榄香烯的浓度增加p-ERK1／2蛋白的表达量增加（P〈0．05）,总FRK1／2无明显变化;榄香烯（0．08mg／mL）、PD98059（50μmol／L）及榄香烯＋PD98059组作用胃癌细胞24h,p-P38的表达均高于对照组（P〈0．05）,且榄香烯＋PD98059组较榄香烯组或PD98059组更高（P〈0．05）;随榄香烯浓度的增加,baxmRNA的表达增加,bcl-2mRNA的表达降低,且榄香烯＋PD98059组表现最显著;实验组细胞凋亡率均高于对照组（P〈0．05）,具有浓度依赖性（P〈0．05）,且榄香烯＋PD98059组的凋亡率明显高于单一作用组（P〈0．05）。结论：榄香烯及PD98059可以抑制胃癌细胞增殖,前者具有时间和浓度依赖性;榄香烯及PD98059还可以促进胃癌细胞凋亡。榄香烯抑制细胞增殖、促进细胞凋亡的机制包括促进ERKl／2磷酸化和上调P-P38MAPK信号通路的表达;PD98059抑制ERKl／2的磷酸化,但通过上调p-P38MAPK信号通路的表达而发挥其细胞调节作用。     

PD98059对bFGF诱导的CAOV3细胞增殖的抑制作用

目的探讨细胞外信号调节激酶(ERK)激酶MEK抑制剂PD98059对碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)诱导的人卵巢上皮性浆液性癌细胞株CAOV3细胞增殖的抑制作用.方法以不同浓度的bFGF和PD98059诱导CAOV3细胞,通过细胞计数法MTT比色法观察PD98059对细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪测定细胞各周期细胞百分数的变化;利用[γ-32P]ATP掺入外源性底物的方法,液体闪烁测定ERK活性的变化.结果bFGF使该细胞株增殖比明显增加,而PD98059使该细胞株增殖比明显下降,在一定浓度范围内,其程度均随浓度增高而增强;CAOV3细胞受到bFGF刺激后,由G0 G1期进入S和G2 M期的细胞明显增多,在PD98059的作用下,由G0 G1期进入S和G2 M期的细胞明显减少,并在一定浓度范围内成剂量依赖性,与对照组比较,差异显著;随着bFGF浓度的增加,CAOV3细胞ERK活性随之升高,当bFGF浓度为75ng/ml时,ERK活性达到峰值,PD98059抑制细胞内ERK活性,与PD98059浓度呈剂量依赖效应.结论PD98059对bFGF引起的细胞增殖具有抑制作用,bFGF可能通过激活Ras-Raf-ERK信号转导途径来调控CAOV3细胞增殖,PD98059可有效阻滞此传导途径.     

PD98059通过诱导PUMA表达增强肠癌LoVo细胞对奥沙利铂的敏感性

目的 体外实验探讨MEK1特异性抑制剂PD98059对奥沙利铂药物治疗作用的影响及PUMA在这一过程中的作用.方法 MTT法检测转染MEK1 active质粒后及不同药物处理后对LoVo细胞增殖率的影响;Western blot检测奥沙利铂和/或PD98059处理后PUMA蛋白的表达和ERK的活性;利用表达反义PUMA基因的细胞克隆抑制PUMA的表达后检测对PD98059和奥沙利铂诱导凋亡作用的影响.结果 在肠癌LoVo细胞中,ERK的激活增加细胞的增殖率;奥沙利铂可以抑制ERK的活性,并呈剂量依赖关系;PD98059可以协同奥沙利铂抑制细胞增殖率的作用;奥沙利铂和PD98059可以协同诱导PUMA的表达;抑制PUMA的表达可以减弱奥沙利铂和PD98059诱导的LoVo细胞的凋亡.结论 PD98059通过诱导PUMA表达增强肠癌LoVo细胞对奥沙利铂的敏感性.     

整合素β1信号通路参与非小细胞肺癌吉非替尼获得性耐药

目的 探讨整合素β1及其下游信号转导通路在非小细胞肺癌表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR) 酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor, TKI)吉非替尼获得性耐药中的作用。方法 以人肺腺癌细胞株PC-9和吉非替尼耐药株PC-9/G作为研究对象,用MTT法检测吉非替尼和/或磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）抑制剂LY294002、细胞外调节蛋白激酶（ERK）抑制剂PD98059对细胞增殖抑制率的影响;用Annexin Ⅴ/PI试剂盒和TUNEL试剂盒检测细胞凋亡。免疫印迹分析检测整合素β1、Akt、磷酸化Akt蛋白的表达。结果 吉非替尼耐药株PC-9/G高表达整合素β1,RNAi抑制整合素β1表达能够抑制PC-9/G细胞的生长、促进调亡。ERK抑制剂PD98059不能恢复PC-9/G细胞对吉非替尼的敏感性。PC-9/G细胞中吉非替尼对Akt的磷酸化的抑制作用弱于PC-9细胞。PI3K抑制剂LY294002能恢复PC-9/G细胞对吉非替尼的敏感性,RNAi抑制整合素表达后Akt的磷酸化水平降低。结论 表达升高的整合素β1通过PI3K途径激活下游信号分子可能是一种重要的EGFR-TKI耐药机制。