重楼提取物对HepG2细胞的毒性作用

目的 研究重楼提取物对肝癌HepG2细胞的毒性作用及其机制。方法 应用锥虫蓝拒染法测定不同浓度重楼提取物作用不同时间后对HepG2细胞存活率的影响。通过倒胃相差显微镜、透射电镜及苏木精-伊红染色后光镜观察重楼提取物对HepG2细胞形态学的影响。通过碘化丙啶染色法及流式细胞术对重楼提取物是否诱导细胞凋亡进行验证。结果 各浓度重楼提取物都对肝癌HepG2细胞有一定的杀伤作用．浓度越高、作用时间越长，其杀伤作用越强；与阳性对照组（FT-207）相比，62．5、125μg／ml重楼提取物对HepG2细胞的杀伤作用较弱（P〈0．01．P〈0．05）．而250、500μg／ml重楼提取物的杀伤作用与其相当（P〉0．05）．1000、2000μg/ml重楼提取物的杀伤作用则明显较高（均P〈0．01）。重楼提取物作用后的HepG2细胞呈现变性坏死的形态学改变。流式细胞仪检测结果显示不同浓度重楼组与阴性对照组凋亡率无明显差异（P〉0．05）。结论 重楼提取物具有细胞毒性作用。重楼提取物可能不是通过诱导细胞凋亡．而是通过导致癌细胞的变性坏死发挥其抗癌作用。     

嘉陵江C市段水中有机污染物睾丸毒性分子机制初步研究

目的 探讨水中有机污染物对大鼠睾丸损伤的分子机制.方法 采用XAD-2树脂浓缩水中有机污染物;大鼠经灌胃暴露于水中有机提取物,用TUNEL法检测细胞凋亡;免疫组化与免疫印迹方法检测水中有机提取物对fas,fasL,scf,c-kit蛋白表达的影响.结果 高剂量组水中有机污染物可增加精子细胞凋亡率(P＜0.05),精原细胞也观察到凋亡,但实验组与对照组之间没有统计学差异.高剂量组水中有机污染物可明显增加精原细胞fas,fasL和c-kit蛋白表达(P＜0.05).结论 水中有机污染物对精原细胞的发育分化有影响,并可诱导精子细胞凋亡,有可能破坏精原细胞的生精过程,但详细机制还需进一步研究.     

二氧化氯水消毒剂消毒效果的检测

目的 :了解二氧化氯消毒剂对水消毒的效果。方法 :使用抽滤法 ,观察二氧化氯对脱氯自来水中人工污染大肠杆菌的杀灭效果。结果 :水中二氧化氯含量为 9mg/L和 6mg/L时 ,分别对大肠杆菌作用 3min和 5min ,使大肠杆菌降至 0cfu/10 0ml。在脱氯自来水中加入腐殖酸 ,使水色度为 10和 15度时 ,二氧化氯含量为 6mg/L ,作用5min ,亦能使大肠杆菌降至 0cfu/10 0ml,表明有机物对该消毒剂无影响。结论 :二氧化氯是目前国内外水消毒中较理想的消毒剂。     

臭氧溶液对HBV体外感染的HepG2细胞的抗病毒作用

目的:建立乙型肝炎病毒(HBV)体外感染人肝癌HepG2细胞的实验模型,并研究臭氧溶液对感染了HBV后的HepG2细胞的抗病毒作用。方法:乙肝阳性血清与HepG2细胞共孵育建立体外感染模型,采用倒置相差显微镜检测细胞形态,MTT法检测细胞成活率,ELISA法检测HBsAg和HBeAg表达水平,HBV荧光定量PCR检测HBV DNA表达量。结果:体外感染了HBV DNA的HepG2细胞能持续稳定分泌HBsAg和HBeAg,并能产生HBV DNA,通过低浓度臭氧溶液作用后,细胞形态无明显差异,细胞成活率无明显影响(P>0.05),HBsAg和HBeAg均转阴(P<0.01),HBV DNA拷贝量亦明显降低(P<0.01)。结论:较低浓度臭氧溶液对感染了HBV的HepG2细胞有明显的抗病毒作用,对细胞并无损伤。     

山竹果皮提取物对人肝癌细胞HepG2增殖及凋亡的影响

目的 探讨山竹提取物对人肝癌细胞HepG2增殖及凋亡的影响及其作用机制.方法 采用MTT法检测不同浓度山竹提取物对HepG2细胞增殖的影响;分别应用Annexin-V/PI双重染色、PI单染法检测山竹提取物对HepG2凋亡和细胞周期的影响;天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)试剂盒检测山竹提取物对HepG2细胞Caspase-3酶活化的影响.结果 不同浓度(100 μmol/L、200μmol/L、400 μmol/L、600 μmol/L、800 μmol/L)山竹提取物均可抑制人肝癌细胞HepG2的增殖活性,且随着山竹提取物浓度及其作用时间的增加,细胞抑制率升高(P＜0.05);山竹提取物浓度为256.67 μmol/L时可诱导人肝癌细胞HepG2出现早期凋亡,并且随着山竹提取物作用时间的增加,凋亡早期癌细胞的比率增高.细胞周期分析结果显示随着山竹提取物的浓度升高(0 μmol/L、200 μmol/L、400 μmol/L、600 μmol/L、800 μmol/L),G1期HepG2细胞比例升高,而S期细胞比例下降(P＜0.05).与对照组(0 μmol/L)比较,各浓度(200 μmol/L、400 μmol/L、600 μmol/L、800 μmol/L)山竹提取物组HepG2细胞的Caspase-3酶活性均升高(P＜0.05),给药组的酶活力单位随给药浓度的增加而明显增加(P＜0.05).结论 山竹提取物对人肝癌细胞HepG2有抑制增殖和促进凋亡的作用,其作用机制可能与抑制HepG2细胞进入S期和激活Caspase-3有关.     

乙型肝炎病毒X蛋白对阿霉素诱导的肝癌细胞凋亡及p53、PTEN表达的影响

目的 探讨乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白对阿霉素诱导的肝癌细胞凋亡及p53、PTEN表达的影响.方法 用阿霉素(2.5 μg/ml)分别处理HepG2及稳定表达GFP、GFP-HBx融合蛋白的细胞系HepG2/GFP、HepG2/GFP-HBx,处理后不同时间在显微镜下观察细胞形态变化,流式细胞术检测细胞凋亡;RT-PCR检测p53、PTENmRNA水平;Western blotting检测p53、PTEN蛋白水平.结果 流式细胞术检测显示阿霉素处理后36h,HepG2/GFP-HBx细胞凋亡率为3.94%,明显低于HepG2(59.03%)、HepG2/GFP细胞(61.38%)(P<0.001),而与未处理对照组细胞(2.12%、2.78%、2.55%)无显著差别(P>0.05).RT-PCR分析显示HepG2/GFP-HBx细胞PTEN mRNA水平低于HepG2及HepG2/GFP细胞,而p53 mRNA水平无明显差别.Western blotting检测显示HepG2/GFP-HBx细胞PTEN蛋白明显低于HepG2及HepG2/GFP细胞,而p53蛋白无明显差别.结论 HBVX蛋白能够抑制阿霉素诱导的细胞凋亡及PTEN表达.HBVX蛋白对其细胞凋亡的抑制可能与其对p53-PTEN的抑制有关.     

三叶青乙酸乙酯提取物对肝癌细胞HepG2凋亡的影响及机制

目的:研究三叶青乙酸乙酯提取物对肝癌细胞HepG2增殖与凋亡的影响,并探究其作用机制。方法:HepG2细胞体外培养,在不同浓度三叶青提取物的作用下,采用CCK8法检测细胞增殖,应用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期,运用Western Blot法检测蛋白表达情况。结果:三叶青乙酸乙酯提取物能显著抑制HepG2细胞增殖和诱导凋亡(P<0.05);上调Caspase-3和Bax表达量,下调Bcl-2表达,但细胞周期结果不显著。结论:三叶青乙酸乙酯提取物对HepG2细胞有抑制增殖作用,其机制可能与调控细胞信号通路诱导凋亡有关。     

黄芪-莪术不同提取物抗肿瘤作用研究

目的研究不同方法提取的黄芪-莪术提取物的抗肿瘤作用。方法建立人肝癌细胞株HepG2模型,分别以95%乙醇、50%乙醇、水提醇沉、传统水煎四种方法为提取工艺,用CCK-8法检测不同提取物对HepG2细胞抑制生长作用,并用流式细胞法检测其体外诱导HepG2细胞凋亡的情况。用小鼠肝癌H22细胞建立移植性肝癌模型,检测上述提取物体内抗肿瘤活性,用免疫组织化学法检测H22肝癌组织中NF-κB p65的表达情况。结果CCK-8结果显示,与阴性组相比,黄芪-莪术95%乙醇和50%乙醇提取物组最高抑制率分别为89.13%、78.36%,差异有统计学意义(P0.05),醇沉和水煎提取物组最高抑瘤率分别为20.38%、18.78%,差异无统计学意义(P0.05)。流式细胞术结果显示,95%乙醇提取组和50%乙醇提取物组能明显诱导HepG2细胞凋亡,水提醇沉组和传统水煎组效果不明显。95%乙醇、50%乙醇、水提醇沉、传统水煎四种提取物对小鼠H22荷瘤均有一定的抑瘤效果,抑瘤率分别为47.55%、36.12%、29.96%、34.68%。与模型组相比,95%乙醇和50%乙醇提取物组能明显降低H22荷瘤组织中NF-κB p65水平的表达(P0.05)。结论黄芪-莪术95%乙醇、50%乙醇、水提醇沉、传统水煎四种提取物均有抑制小鼠H22荷瘤生长作用,但是只有95%乙醇和50%乙醇提取物能抑制NF-κB p65蛋白的表达,并有抑制人肝癌HepG2细胞生长及诱导其发生细胞凋亡的作用。     

医用臭氧对肝癌细胞HepG2生物学行为的实验研究

目的探讨使用医用臭氧(O3)在体外对肝癌HepG2细胞的作用。方法获取人肝癌HepG2细胞在体外增殖、传代、对数生长期的细胞,将细胞分为对照组和实验组,实验组采用含浓度为0.5μg/ml的医用臭氧水的培养液处理细胞,对比两组试验的细胞形态学变化,细胞生长曲线、细胞凋亡情况、细胞迁移能力变化。结果体外实验结果显示,含臭氧的培养基中细胞数量明显减少,肿瘤细胞膜破裂,核固缩甚至裂解,臭氧对细胞的生长有抑制作用,同时CCK-8的检测结果显示O3能抑制肝癌细胞的增殖(P<0.01),Transwell迁移实验显示O3能抑制肿瘤细胞的迁移(P<0.01)。结论臭氧能直接杀死肝癌HepG2细胞,能在体外抑制肝癌HepG2细胞的增殖和迁移。     

墓头回提取物对HepG2细胞作用的初步研究

目的研究墓头回提取物体外对HepG2细胞毒作用，探讨其抑癌作用机理。方法用MTF法检测墓头回提取物对HepG2细胞毒作用；透射电镜观察细胞超微结构变化；流式细胞仪P1染色观察墓头回对HepG2细胞的促凋亡活性。结果墓头回提取物对HepG2细胞增殖具有明显的抑制作用；流式细胞仪结果显示，实验组细胞凋亡率明显高于对照组；透射电镜观察可见细胞体积缩小，微绒毛减少或消失，核固缩，核染色质浓缩边集。结论墓头回提取物对HepG2细胞具有良好的抗肿瘤活性，其作用机制与诱导细胞凋亡有关。     

ClO_2毒性研究

ClO_2是一种可以代替液氯的新型消毒剂。本文通过金鱼毒性实验,确定了ClO_2用于饮水消毒的安全浓度;通过小白鼠急性经口毒性实验,确定了ClO_2属实际无毒型水处理剂。     

重楼水提物对肝癌细胞HepG2增殖及凋亡的影响

目的 探讨重楼水提物对人肝癌HepG2细胞株增殖和凋亡的影响.方法 以体外培养的肝癌HepG2细胞为研究对象,MTT法检测重楼对肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪Annexin V/PI 双染法检测重楼对其凋亡的影响,ELISA法检测Bcl-2、Bax 蛋白表达的情况.结果 不同浓度重楼水提物能有效抑制HepG2细胞的增殖,且呈时间及浓度依赖性,作用效果在12 μg/ml时抑制效果最好（P〈0.01）.12 μg/ml重楼水提物作用HepG2细胞24 h、48 h后,结果表明HepG2随着重楼水提物作用时间的延长,细胞凋亡率增加,与阴性对照组相比,差异有统计学意义（P〈0.01）.12 μg/ml重楼水提物作用HepG2 细胞24 h后,Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达增加,与阴性对照组相比,差异有统计学意义（P〈0.05）.结论 重楼水提物能抑制HepG2细胞的体外增殖,抑制作用表现出时效关系,其机制可能与促进细胞凋亡、降低Bcl-2蛋白表达、增加Bax蛋白表达有关.     

5,7-二甲氧基白杨素对HepG2细胞凋亡的影响研究

目的：：研究5,7-二甲氧基白杨素(dMChR)对 HepG2细胞凋亡的影响。方法：体外培养HepG2细胞,分别用1.0、4.0和16.0μM的dMChR处理48 h 后进行 AO/EB染色,用荧光显微镜进行观察;经PI染色后用流式细胞仪检测 HepG2细胞发生凋亡的情况。结果：dMChR 诱导 HepG2细胞凋亡具有浓度依赖性,经16.0μM的dMChR处理后 HepG2细胞的凋亡率最高(31.5%),与5-FU相当,其凋亡率显著高于相同浓度的白杨素组。结论：dMChR能诱导 HepG2细胞凋亡。     

木犀草素对人肝癌细胞HepG2的促凋亡作用

目的：研究木犀草素（Luteolin）对人肝癌细胞HepG2的生长抑制与促凋亡作用机制。 方法：用梯度浓度木犀草素作用于多种肿瘤细胞,以MTT法检测药物对细胞的生长抑制作用,以流式细胞术检测HepG2细胞内活性氧水平,以Annexin V-FITC/PI双染法利用流式细胞术检测HepG2细胞凋亡情况,以Western-blot检测HepG2细胞凋亡相关通路蛋白表达水平。 结果：木犀草素对多种肿瘤细胞的生长具有浓度和时间依赖的抑制作用（72 h最高抑制率超过60%）,并能有效降低HepG2细胞内活性氧水平（约降低41.11%）。木犀草素作用下HepG2细胞凋亡率可达14.43%左右。木犀草素能够降低HepG2细胞内iASPP蛋白表达水平并上调p53与ASPP2蛋白表达。 结论：木犀草素能够抑制肿瘤细胞生长,降低HepG2细胞内活性氧水平,并调节细胞内相关凋亡通路蛋白水平,从而诱导HepG2细胞凋亡。     

塞来希布抑制人肝癌HepG2细胞生长及COX-2、NF-κB表达

目的:观察塞来希布(celecoxib)对人肝癌细胞株HepG2细胞生长及COX-2和NF-κB表达的影响,探讨celecoxib抗肿瘤作用的机制。方法:用不同浓度的celecoxib作用于HepG2细胞,检测其对HepG2细胞增殖和凋亡以及COX-2、NF-κB表达的影响。结果:celecoxib呈剂量依赖性抑制HepG2细胞增殖,并诱导细胞凋亡;celecoxib处理组HepG2细胞COX-2和NF-κB蛋白表达明显减弱(P<0.05),COX-2蛋白表达和NF-κB蛋白表达呈正相关(P<0.05)。结论:celecoxib明显抑制HepG2细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与抑制COX-2和NF-κB的蛋白表达有关。     

幽门螺杆菌诱导HepG2细胞损害的研究

目的 探讨幽门螺杆菌对HepG2细胞杀伤和凋亡的作用。方法 应用MTT比色法和Hoechst33258细胞核荧光染色等技术检测不同浓度的cagA（＋）Hp和cagA（-）Hp对HepG2细胞杀伤和凋亡的作用。结果 HepG2杀伤率和凋亡率随着cagA（＋）Hp菌液浓度的增加而升高，且呈剂量依赖性。结论 cagA（＋）Hp对HepG2细胞具有明显的细胞杀伤和凋亡作用。     

p53在漆树黄酮诱导人肝癌细胞系HepG2细胞凋亡的作用

目的:观察漆树黄酮诱导人肝癌细胞系HepG2细胞凋亡的现象,研究p53在漆树黄酮诱导人肝癌细胞系HepG2细胞凋亡的作用究。方法：用不同浓度的漆树黄酮（50μmol•L-1、100μmol•L-1、200μmol•L-1）处理HepG2细胞24h和100μmol•L-1漆树黄酮处理HepG2细胞不同时间（12h、24h、48h）,流式细胞术和免疫荧光法观察漆树黄酮作用HepG2细胞的凋亡情况; Westem blot法检测漆树黄酮对HepG2细胞p53、Caspase-3 和Caspase-8蛋白的表达情况。结果:漆树黄酮能诱导HepG2细胞凋亡,呈剂量一时间依赖性; 漆树黄酮可增加p53蛋白的表达,降解Caspase-3 、Caspase-8酶原,提高Caspase-3 、Caspase-8活性。p53蛋白的上调与凋亡的发生呈正相关,Caspase-3 、Caspase-8酶原的降解与与凋亡的发生呈负相关。结论:漆树黄酮可诱导HepG2细胞凋亡,其机制可能与上调p53表达,活化Caspase-3、 Caspase-8有关。     

自噬抑制剂在内质网应激状态下对肝癌HepG2细胞和正常肝细胞L-02作用的差异

目的：研究自噬在内质网应激( ERS)状态下对肝癌HepG2细胞和正常肝细胞L-02作用的差异。方法体外常规培养的人肝癌HepG2细胞和正常肝细胞L-02,分别给予衣霉素( TM)单药和TM联合自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤( TM+3-MA)或氯喹( TM+CQ)作用12、24、48 h后,采用噻唑蓝( MTT)法检测细胞活力变化,流式细胞术检测细胞凋亡率, Western blot法检测自噬蛋白LC3的变化。结果 TM可引起HepG2细胞和L-02细胞死亡并呈时间依赖关系,3-MA或CQ均可增加TM对HepG2细胞的生长抑制作用,24 h细胞存活率分别为TM+3-MA组(60%)、TM+CQ组(72%)、TM组(86%),差异有统计学意义(P<0．01);但对于L-02细胞,其存活率分别为83%、84%、83%,活力没有明显差异;流式细胞术显示TM+3-MA、TM+CQ和TM组对HepG2细胞的凋亡率分别为15%、11%、7%,差异有统计学意义( P<0．01),但对L-02细胞,凋亡率分别为16%、17%、16%,未见明显差异;Western blot法结果显示TM作用引起两种细胞自噬增加,自噬抑制剂3-MA与CQ可引起两种细胞自噬作用减弱。结论自噬抑制剂(3-MA 或 CQ)均可显著增加TM对肝癌HepG2细胞的生长抑制作用,但对正常肝细胞L-02的生长抑制作用差异无统计学意义。自噬在ERS状态下可对肝癌细胞的生存提供保护,但对正常肝细胞无保护作用。     

丹皮酚逆转内质网应激诱导的HepG2细胞凋亡抵抗

目的 探讨丹皮酚逆转内质网应激诱导的HepG2肝癌细胞凋亡抵抗的作用机制.方法 采用MTT及末端双脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口标记技术(TUNEL)观察内质网应激诱导剂衣霉素对正常人肝细胞株HL-7702及人肝癌细胞株HepG2细胞的增殖抑制及凋亡作用;Western blot法测定内质网应激诱导剂衣霉素对正常肝细胞HL-7702及肝癌细胞HepG2的环氧合酶-2(COX-2)表达的影响;采用Western blot法及TUNEL法观察COX-2的选择性抑制剂塞来昔布对内质网应激下的肝癌细胞HepG2 COX-2的表达及凋亡的影响;采用MTT及TUNEL法观察丹皮酚对内质网应激下的HepG2肝癌细胞的增殖抑制及凋亡作用;Western blot法观察丹皮酚对内质网应激诱导的HepG2肝癌细胞 COX-2表达的影响:结果与正常肝细胞HL-7702相比,在 TM诱导的内质网应激作用下肝癌细胞HepG2的增殖抑制率及凋亡率减少(P＜0. 05),并且内质网应激可诱导肝癌细胞HepG2产生COX-2蛋白.而丹皮酚可下调内质网应激诱导的HepG2肝癌细胞中COX-2的表达,并使内质网应激诱导的肝癌细胞的凋亡增加.结论 丹皮酚可通过下调COX-2的表达从而逆转内质网应激诱导的HepG2肝癌细胞凋亡抵抗.     

水飞蓟宾诱导人肝癌细胞HepG2死亡及机制研究

目的：探讨水飞蓟宾对人肝癌细胞HepG2的杀伤作用及其机制。方法不同浓度水飞蓟宾处理HepG2细胞,采用MTT法检测HepG2细胞增殖情况,流式细胞术检测水飞蓟宾诱导HepG2细胞的凋亡情况。利用ROS荧光探针二氢乙啶（DHE）检测水飞蓟宾是否诱导HepG2细胞ROS的产生,并用ROS抑制剂抗坏血酸预处理后检测水飞蓟宾对HepG2的杀伤活性及诱导凋亡的能力。结果水飞蓟宾可显著抑制HepG2细胞的增殖并诱导其发生凋亡。水飞蓟宾处理后HepG2细胞的ROS显著增高（P〈0.05,P〈0.01）,用抗坏血酸预处理后水飞蓟宾对HepG2的增殖抑制作用降低,并抑制水飞蓟宾诱导的凋亡。结论水飞蓟宾通过诱导ROS的产生引起人肝癌细胞发生凋亡。