局部皮质内注射海人酸对皮质和海马一氧化氮合酶阳性神经元…

本实验用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶组织化学方法组合ＧＦＡＰ免疫组化方法，对微量海人酸皮质内注射后的一氧化氮合酶阳性神经元和胶质细胞等的变化进行了研究。表明：注射内区的一氧化氮合酶阳性神经元很快消失，注射侧皮质和海马的阳性神经元和神经末梢溃变。     

app/ps1双转基因阿尔茨海默病模型小鼠脑内胶质细胞的激活及iNOS的表达

目的研究10～12月龄雌性app／ps1双转基因阿尔茨海默病(AD)模型小鼠(app／ps1,dtg)脑内小胶质细胞和星形胶质细胞的激活,以及诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide,iNOS)的表达。方法免疫组织化学结合刚果红组织学染色,普通光学显微镜观察。结果在app／ps1 dtg小鼠皮质和海马内有广泛的神经炎斑形成,围绕在神经炎斑周围的小胶质细胞和星形胶质细胞处于活化状态,且活化的星形胶质细胞表达iNOS。结论app／ps1 dtg小鼠能够模拟AD病人脑内的主要病理过程。神经胶质细胞的激活及iNOS的表达在app／ps1 dtg小鼠和AD脑内病理过程中具有重要的作用。     

雌激素对app/ps1双转基因阿尔茨海默病模型小鼠海马老年斑形成的抑制作用

目的：用无偏性体视学定量研究雌激素对app／ps1双转基因(app／ps1 dtg)AD模型小鼠海马β-淀粉样蛋白(Aβ)沉积及老年斑形成的抑制作用。方法：雌性app／ps1 dtg小鼠行双侧卵巢切除,于颈部皮下植入可持续释放60d的17β-雌二醇片剂(17-β pestradiol,E2);60d后取脑行冰冻切片,6E10免疫组化染色显示沉积于海马的Aβ,刚果红组织学染色显示老年斑,无偏性体视学测量海马内Aβ斑及老年斑的总体积。结果：E2抑制Aβ在海马内沉积,降低海马内Aβ斑的总体积,并抑制老年斑的形成。结论：E2防治阿尔茨海默病可能与E2抑制Aβ在脑内沉积并聚集形成老年斑有关。     

神经元型一氧化氮合酶在快速衰老小鼠额叶皮质中的增龄性改变

为了观察快速衰老小鼠(senescence accelerated mouse,SAM)衰老过程中大脑额叶皮质中nNOS的分布和表达变化,探讨NO/nNOS在中枢神经系统衰老中的作用。采用雄性快速衰老亚系8小鼠(senescence accelerated mouse/prone8,SAMP8)及抗快速衰老亚系1小鼠(senescence accelerated mouse/resistance1,SAMR1)为研究对象,其中SAMP8为实验组,SAMR1为对照组,每组动物再分为青年组(2月龄)和老年组(10月龄)两组。用免疫组织化学方法观察SAM额叶皮质中的nNOS神经元的形态和分布,并计数nNOS阳性神经元在额叶皮质中的数量;用RT-PCR法检测额叶皮质中nNOS mRNA表达水平。结果显示:SAMP8老年组与青年组相比,额叶皮质中nNOS阳性神经元的数量显著增加(15.8±6.3vs8.0±4.9,P<0.05);SAMP8与SAMR1比较,青年组额叶皮质nNOS阳性神经元的数量差异无统计学意义,老年组额叶皮质nNOS阳性神经元的数量显著增加(15.8±6.3vs7.5±5.3,P<0.05)。SAMP8老年组额叶皮质nNOS mRNA水平明显高于SAMP8青年组(1.00±0.17vs0.67±0.13,P<0.01)和老年组SAMR1(1.00±0.17vs0.67±0.11,P<0.01)。以上结果提示:额叶皮质中nNOS神经元的数量增加可能产生过量NO,NO可能参与了SAMP8快速衰老的过程。本研究的结果为通过调节额叶皮质NO产量来延缓衰老及衰老相关功能障碍提供了依据。     

局部皮质内注射海人酸对皮质和海马一氧化氮合酶阳性神经元的影响

本实验用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶组织化学方法结合ＧＦＡＰ免疫组化方法，对微量海人酸皮质内注射后的一氧化氮合酶阳性神经元和胶质细胞等的变化进行了研究．结果发现：注射区内的一氧化氮合欧阳性神经元很快消失；注射侧皮质和海马的旧阳性神经元和神经末梢溃变；至注射海人酸后８ｈ，这些变化波及到对侧皮质和海马．随着皮质内一氧化氮合酶阳性神经元的溃变，在注射侧皮质和海马内的一些神经元、星形胶质细胞出现新的一氧化氮合酶活性，这些新的酶活性可能是诱导型的一氧化氮合酶．这些结果表明：表达一氧化氮合酶的皮质和海马神经元对海人酸的毒性很敏感，神经细胞和非神经细胞中出现的诱导型的一氧化氮合酶可能是海人酸引起脑损伤时机体的适应性反应．     

脑缺血预处理对大鼠海马CA1区一氧化氮合酶活性和一氧化氮含量的影响

目的：观察脑缺血预处理（CIP）后大鼠海马一氧化氮合酶（NOS）活性和一氧化氮（NO）含量的变化，探讨NO在脑缺血耐受（BIT）诱导中的作用。 方法： 将140只凝闭双侧椎动脉的Wistar大鼠分为sham、CIP组、损伤性缺血组和CIP＋损伤性缺血组。夹闭双侧颈总动脉致全脑缺血3 min作为CIP，10 min作为损伤性缺血，第4组中CIP与损伤性缺血之间间隔3 d。所有动物均于末次脑缺血恢复再灌注后0 h、2 h、16 h、24 h、36 h、72 h和7 d（每个时点n=5）取海马CA1区脑组织，分光光度法检测NOS活性，硝酸还原酶法检测NO2-/NO3-含量。 结果： CIP组NOS活性和NO2-/NO3-含量于再灌注后16 h开始升高，24 h达高峰，接近sham组的1.5倍，36 h降至基础水平，其升高的持续时间短于BIT诱导的时程（1-7 d）；损伤性缺血组NOS活性和NO2-/NO3-含量的变化趋势与CIP组类似，但其峰值（24 h）超过sham组的2倍，显著大于CIP组（P<0.05）；CIP+损伤性缺血组NOS活性和NO2-/NO3-含量亦有一定程度的升高，但其峰值（24 h）明显低于损伤性缺血组(P<0.05)。 结论： CIP引起NOS活性及NO2-/NO3-含量的适度增加，参与BIT的诱导；同时CIP阻止损伤性缺血后NO的过量生成所致的细胞毒性作用可能是其诱导BIT的另一途径。     

胰岛素对糖尿病大鼠海马一氧化氮合酶阳性神经元变化的影响

观察实验性糖尿病大鼠海马一氧化氮合酶（NOS）阳性神经元变化及胰岛的治疗作用。给成年SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素制备糖尿病大鼠模型，每日给予长效胰岛素2－3U使血糖低于10mmol/L，于第3月及第6月末以NADPH－d组化法显示海马NOS阳性神经元。并做Morris水迷宫行为学测试。海马NOS阳性神经元密度变化如下：糖尿病组齿状回3月时显著减少（P＜0．01），6月时更明显（P＜0．01）；CA1区6月时显著降低（P＜0．01）；治疗组齿状回3月时恢复正常，而6月时低于正常（P＜0．01）但高于糖尿病组3月时（P＜0．05），CA1区3月，6月均恢复正常。行为学测试中各组大鼠逃避潜伏期变化与齿状回NOS阳性神经元密度变化一致。以上变化可能与糖尿病学习记忆功能损伤有关。胰岛素治疗可延缓其发生。     

2型糖尿病模型db/db小鼠海马NOS阳性神经元变化

目的　观察人类 2型糖尿病模型———C5 7BL/KsJdb/db(db/db)小鼠海马NOS阳性神经元变化。方法　糖尿病组 :6周龄C5 7BL/KsJ(db +db +)小鼠 5只 ,尾静脉空腹血糖高于 11.1mmol/L且肥胖。对照组 :非糖尿病小鼠C5 7BL/KsJ(?+) 5只 ,尾静脉空腹血糖低于 6 .0mmol/L体重正常 ,于 30周龄 (成模第 6月末 )时 ,灌注固定取脑 ,以NADPH d组化法显示海马NOS阳性神经元。结果　与正常对照组相比 ,糖尿病组小鼠海马齿状回NOS阳性神经元密度显著减少 (P <0 0 1)。结论　糖尿病时NOS阳性神经元数量减少 ,NO的合成降低表明NO可能参与糖尿病中枢神经系统功能障碍     

APP/PS1转基因AD鼠海马CA1区神经元突触超微结构

目的:探讨携带5个家族性基因突变的APP/PS1转基因阿尔茨海默病(AD)(5×FAD)模型小鼠海马CA1区神经元突触超微结构改变。方法:应用透射电镜观察和形态计量学分析5×FAD转基因AD鼠海马CA1区GrayⅠ型突触界面结构参数,包括突触间隙长度、突触间隙面积、突触后致密物浓度和突触界面曲率的变化。结果:5×FAD转基因AD鼠海马CA1区神经元突触活性区长度显著小于对照组,差异有统计学意义;突触后致密物厚度、突触界面曲率及宽度与对照组差异无统计学意义。结论:5个家族性突变基因导致小鼠海马CA1区神经元突触可塑性的改变,这可能是该突变基因导致的发病机制之一。     

大鼠海马和颞叶一氧化氮合酶阳性神经元在学习记忆时的表达

目的　对获得空间辨别性学习记忆大鼠的海马结构和颞叶皮质内一氧化氮合酶 (NOS)免疫阳性神经元系统的观察 ,为一氧化氮 (NO)在学习记忆活动中的作用提供形态学依据。方法　以经水迷宫训练获得空间辨别性学习记忆的大鼠为模型组 ,建立游水对照组和空白对照组。用免疫组化的方法观察 3组大鼠海马和颞叶的NOS阳性神经元的形态学特征及测定免疫反应阳性产物的光密度值 (OD )。结果　 (1)NOS阳性神经元在 3组大鼠海马和颞叶呈散在分布。在海马CA1、CA2、CA3、CA4及龄状回 (DG)都有少量分布 ,颞叶以Ⅱ、Ⅲ、Ⅴ、Ⅵ层分布为主。神经元胞体形态有锥体形 ,圆形或椭圆形 ,梭形3种。 (2 )模型组大鼠海马和颞叶皮质NOS阳性神经元较对照组明显增多。 (3)其免疫反应阳性产物的OD值也较对照组明显增大。结论　NOS阳性神经元形态发生了可塑性变化 ,参与了学习记忆     

APP/PS1双转基因小鼠大脑皮质老年斑的病变对其学习记忆能力的影响

β-淀粉样蛋白(Aβ)沉积形成的老年斑是Alzheimer’s disease(AD)的主要病理特点,学习记忆功能障碍是其行为学的重要变化。为探讨老年斑对学习记忆的影响,本实验用17、28、44周C57系APP/PS1双转基因小鼠各4只,同龄野生型C57小鼠做对照,用Y-型迷宫方法比较不同年龄的AD模型鼠和C57鼠学习记忆能力的差异,利用免疫组织化学方法检测小鼠大脑皮质老年斑的病理变化,并比较AD模型鼠脑内老年斑的病变与其学习记忆能力改变之间的关系。结果显示:17周和28周AD模型鼠的学习记忆能力的各测试指标与对照组相应指标间均相差不显著(P>0.05),而44周AD模型鼠的学习记忆能力明显下降,各项指标与对照组相比具有显著性(P<0.01)。17周AD模型鼠脑切片上,可见大脑皮质内有少量老年斑的形成,而44周AD鼠皮质内斑块数量明显增多,体积明显增大。本结果提示老年斑的病变在一定程度上影响了其行为学的改变,这可能与β-淀粉样蛋白沉积继发的神经元缺失密切相关。     

血管性痴呆大鼠记忆障碍与海马神经型一氧化氮合酶表达的关系

目的：探讨NO参与血管性痴呆大鼠学习记忆障碍的作用机制。方法：要用4－血管阻断的方法建立大鼠血管性痴呆模型,以免疫组化法检测海马神经型一氧化氮合酶蛋白表达的变化;以Nissl染色方法,结合图象分析统计海马神经元丢失比率,同时采用Y－型迷宫,进行行为学检测,定量测定其学习记忆成绩,结果：在血管性痴呆大鼠空间分辨学习记忆能力发生严重障碍时,海马CA1区神经元丢失比率较正常对照组增高,神经型一氧化氮合酶蛋白表达增加。结论：神经型一氧化氮合酶可能引起海马CA1区神经元凋亡或坏死增加,海马神经元受损,导致血管性痴呆大鼠学习记忆障碍。     

脑缺血早期大脑皮质和尾壳核一氧化氮合酶神经元的进程变化

目的：探讨一氧化氮合酶神经元在脑缺血早期（２４ｈ内）的变化规律。方法：ＮＡＤＰＨ－ｄ组织化学方法。结果：各组间正常侧ＮＯＳ神经元无明显变化，散在分布于皮质的Ⅱ～Ⅵ层，以Ⅳ～Ⅵ为主，尾壳核内ＮＯＳ神经元数量较多，密集分布于外侧区。缺血１５ｍｉｎ和３０ｍｉｎ组，缺血中心区皮质和尾壳核ＮＯＳ神经元数量减少，形态无明显变化；缺血１ｈ和２ｈ组，皮质和尾壳核内ＮＯＳ神经元数量进一步减少，突起变短；缺血３ｈ和６     

脑缺血后大鼠海马及纹状体一氧化氮合酶阳性神经元的变化

夹闭大鼠双侧颈总动脉２ｈ后，用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶反应观察了大鼠海马及纹状体一氧化氮合酶阳性神经元的变化及神经损伤。结果显示：在缺血损伤严重的ＣＡ１区及齿状回一氧化氮合酶阳性神经元较正常动物明显增多并深染，而在同样严重受损的纹状体一氧化氮合酶阳性神经元较正常者明显减少。结合文献及本结果提示：一氧化氮在脑缺血所致的神经损伤中起着重要作用，而海马、纹状体的一氧化氮合酶阳性神经元本身可能具有不同的抗伤害机制．     

7-硝基吲唑对大鼠大脑皮质离子型谷氨酸受体和GABAA受体的影响

目的　探讨一氧化氮 (NO)对大鼠脑皮质离子型谷氨酸受体 (NMDA、AMPA、KA受体 )和 GABA受体的影响。　方法　将 Wistar大鼠腹腔注射神经细胞结构型一氧化氮合酶抑制剂 7-硝基吲唑 ,以氚标配体分别标记 NMDA、AMPA、KA和 GABAA 受体 ,用图像分析仪对大鼠额区、顶区、后肢区、梨状区、压部后区和味觉区皮质内标记受体进行定量分析。　结果　实验组大鼠额区、后肢区和梨状区内 NMDA、AMPA、KA受体和 GABAA 受体含量均显著增加 ;顶区皮质内 NMDA、KA受体和 GABAA 受体增加显著 ;味觉区皮质内 KA受体增加显著。　结论　 NO可能参与大鼠脑皮质离子型谷氨酸受体和 GABA受体水平的调节     

大鼠,金黄地鼠和家兔视网膜内一氧化氮合酶分布的比较

用ＮＡＤＰＨ黄递酶组织化学染色法观察了正常成年大鼠、金黄地鼠和家兔视网膜内一氧化氮合酶的分布，并比较了３种不同动物的区别。结果显示，在视网膜内ＮＯＳ阳性神经元主要为分布于内核层的无长突细胞、节细胞层的移位无长突细胞和少数节细胞，不同种类动物的视网膜内，ＮＯＳ阳性细胞的配布、密度和细胞形态均有差异。大鼠视网膜内ＮＯＳ阳性细胞多尾于内核层无长突细胞和节细胞层移位无长细胞，偶见于视网膜节细胞。金黄地鼠视     

C57black/6小鼠全脑缺血模型的海马区Bcl-2和Bax的表达

使用 C5 7black/6小鼠制造的全脑缺血模型 ,观察全脑缺血后海马 Bcl-2和 Bax的表达 ,为这种新的模型在脑缺血研究中的应用提供实验依据。双侧颈总动脉夹闭 15 min诱发全脑缺血模型 ,2 4h后取脑组织进行 Bcl-2和 Bax免疫组织化学染色。缺血组海马 Bax阳性反应神经元数目增多 ,主要分布在 CA1 区 ,胞浆深染 ,假手术组 Bax阳性细胞数目少 ,染色浅。缺血组 CA3区和齿状回 Bcl-2阳性反应神经元数目增多 ,胞浆染色深 ,假手术组 Bcl-2阳性细胞数目少 ,染色浅。C5 7black/6小鼠全脑缺血模型的海马内 Bcl-2和 Bax表达发生改变 ,Bax表达增加在 CA1 区 ,Bcl-2表达增加在 CA3区和齿状回 ,提示二者在该模型的脑缺血后神经细胞死亡过程中发挥作用     

金属硫蛋白对培养神经细胞迟发性损伤的作用和一氧化氮的表达

本文以新生大鼠原代培养皮质神经元为实验材料，造成迟发性神经元损伤模型．在不同时程内，测试培养液中的细胞乳酸脱氢酶漏出量和用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核着苷酸脱氢酶染色反应，观察培养细胞中一氧化氮合酶的表达水平．结果表明，缺血组在缺血与再灌流中，细胞乳酸脱氢酶漏出量明显高于对照组，差异显著（Ｐ＜０．００１）．一氧化氮合酶阳性神经元数量在缺血组的缺血时即明显高于对照组（Ｐ＜０．０１），再灌流后一氧化氮合酶表达仍然强烈，与对照组相比有显著差异（Ｐ＜０．０１）．当损伤细胞再灌流时，同时加入金属硫蛋白后，显示一氧化氮合酶表达减弱，和缺血组相比有显著差异（Ｐ＜０．０５～０．００１），细胞乳酸脱氢酶漏出量在再灌流后的早期近似于对照组．结合文献和本实验结果提示：在迟发性神经元损伤形成过程中一氧化氮起着重要作用；金属硫蛋白对脑缺血后迟发性神经元损伤有一定保护作用，是一种细胞保护剂，可望用于临床，控制缺血再灌流损伤。     

运动对小鼠海马结构和大脑皮质胆碱能纤维的影响

用组织化学方法结合体视学测量研究小鼠海马结构和大脑皮质胆碱能纤维的年龄变化以及长期适量运动（跑转笼）对胆碱能纤维的影响。以同年龄对照组心重／体重比率均值的２倍标准差作为运动有效标准。结果显示，老年鼠（２４月龄）海马ＣＡ１区、ＣＡ３区，齿状回分子层和运动、体感皮质第Ⅲ和Ⅴ层乙酰胆碱酯酶（ＡＣｈＥ）阳性纤维密度明显低于成年鼠（１３月龄）和青年鼠（５月龄）（Ｐ＜０．０１），后两者间除海马ＣＡ３区分子层纤维密度成年鼠稍低外Ｐ＜０．０５），其它各区无显著差异（Ｐ＞０．０５）；５月龄小鼠经过８和１９个月运动后，被检各区ＡＣｈＥ阳性纤维密度均显著高于同年龄对照组（Ｐ＜０．０１）。结果表明从青年开始的长期适量运动能够促进海马和皮质内胆碱能纤维的增生，延缓衰老时胆碱能纤维的丢失。