茶多酚对人γδT淋巴细胞和结肠癌细胞株SW-480的影响

目的:观察茶多酚对人γδT细胞杀伤肿瘤细胞活性的影响和诱导人结肠癌细胞株(SW-480)凋亡和死亡的作用。方法:在体外用不同浓度的茶多酚诱导人γδT细胞和SW-480细胞株,然后测定人γδT细胞杀瘤活性和对肿瘤细胞的作用。用不同浓度的茶多酚分别诱导SW-480细胞4 h后,弃含有茶多酚的培养液再继续培养24 h,然后测定其死亡和凋亡数,用γδT细胞作对照组。结果:茶多酚浓度350 mg/L,作用γδT细胞4 h后能明显增强γδT细胞的杀伤肿瘤细胞活性,与未诱导组和其他浓度组相比,P<0.01;γδT细胞对经茶多酚处理后的SW-480细胞杀伤活性也明显高于对照组(P<0.01)。各种浓度的茶多酚分别与γδT和SW-480细胞作用4 h,弃诱导液再继续培养24 h后,均能诱导其死亡和凋亡,在茶多酚浓度350 mg/L、诱导时间4 h时最明显;同一浓度的茶多酚诱导SW-480细胞死亡和凋亡率明显高于γδT细胞组。结论:茶多酚在一定浓度时能明显提高γδT细胞对肿瘤的杀伤活性;经茶多酚处理的SW-480细胞更易被γδT细胞杀伤。茶多酚浓度在350 mg/L时能诱导SW-480细胞凋亡而对人γδT细胞无影响。     

藻红蛋白对人结肠癌SW-480细胞凋亡的诱导作用

目的研究藻红蛋白(PE)对人结肠癌SW-480细胞凋亡的诱导作用。方法采用MTT法检测PE对SW-480细胞的生长抑制作用,流式细胞仪检测PE对SW-480细胞凋亡的影响。采用激光共聚焦显微镜Annexin V-FITC/PI双荧光染色观察藻红蛋白作用后SW-480细胞的变化。结果 PE对SW-480有较强的生长抑制作用,并呈剂量-效应关系(r=0.87,P<0.01),当PE剂量为40μg/mL,作用时间48 h时,其对SW-480细胞的抵制率达54.01%,IC50值为34.32μg/mL。结论 PE对SW-480细胞有较强的抑制作用,可以诱导其凋亡。     

青藤碱对人结肠癌细胞株SW480增殖和细胞周期的影响

目的 研究青藤碱对人结肠癌SW480细胞增殖和细胞周期的影响.方法 用不同浓度的青藤碱处理体外培养的人结肠癌SW480细胞24、48、72h后,采用CCK法检测细胞的增殖活性,采用流式细胞术检测细胞的细胞周期分布,并用光镜和透射电镜观察SW480细胞的形态学变化.结果 青藤碱在体外可抑制SW480细胞的增殖,并呈时间和剂量依赖性.干预48h后,中、低浓度的青藤碱（8mmol/L、4mmol/L）可诱导SW480细胞G1期细胞比例增加,而高浓度的SIN（16mmol/L、10mmol/L）可诱导G1期、G2期细胞比例增加.光镜与电镜下均见凋亡细胞增多.结论 青藤碱在体外能抑制人结肠癌SW480细胞增殖和诱导该细胞系的凋亡,其机制可能与其阻滞细胞周期进程有关.     

过氧化物酶增殖物激活受体γ配体曲格列酮对大肠癌细胞生长的影响

目的:探讨过氧化物酶增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptor-γ,PPARγ)在大肠癌细胞SW-480中的表达及PPARγ被其配体曲格列酮(troglitazone,TGZ)活化后对SW-480细胞生长的影响.方法:将SW-480细胞分为对照组和TGZ不同浓度(5,10,20,25 μmol/L)处理组.采用免疫印迹(Western blot)法检测SW-480细胞中PPARγ蛋白质的表达,利用细胞计数法和3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基溴化四唑(MTT)检测TGZ和PPARγ选择性阻断剂T0070907对SW-480细胞生长的影响,用流式细胞仪测定细胞凋亡.结果:大肠癌细胞系Lovo和HT-29中均有PPARγ高表达,SW-480细胞有相对低表达.细胞计数法和MTT 法显示随着TGZ浓度的增加, TGZ对大肠癌细胞SW-480生长抑制作用也增加.各组间比较差异有统计学意义.用TGZ的不同浓度 (5, 10, 20, 25 μmol/L)刺激SW-480后第48小时的抑制率分别为3.3%, 8.3%, 25%, 29%.用流式细胞仪检测显示TGZ对SW-480细胞诱导凋亡, 而且有剂量依赖关系.用TGZ刺激SW-480细胞后48 h测细胞凋亡时发现, TGZ浓度低于15 μmol/L时, TGZ对SW-480细胞诱导凋亡作用弱. TGZ浓度≥20 μmol/L时, 诱导凋亡作用明显,与未加药组比较差异有统计学意义. TGZ浓度达25 μmol/L时诱导凋亡更明显.细胞计数法显示随着PPARγ选择性阻断剂T0070907浓度的增加, 对大肠癌细胞SW-480生长诱导作用也增加.不同组间比较差异有统计学意义.结论:PPARγ在大肠癌细胞Lovo,HT-29, SW-480中均有表达,PPARγ被其配体活化后可抑制大肠癌细胞的生长,诱导凋亡.     

吡罗昔康对人γδT细胞和消化系统肿瘤细胞的作用比较

目的:探讨吡罗昔康对人γδT细胞杀伤消化系统肿瘤细胞株的影响。方法:用异戊烯焦磷酸法体外扩增人外周血γδT细胞。用不同浓度的吡罗昔康诱导γδT细胞和消化系统肿瘤SGC-7901、SW-1990、SW-480、SW-1116、LOVO细胞株,用MTT法检测吡罗昔康对这些细胞的抑制率和用乳酸脱氢酶法测定γδT细胞的杀伤活性,用流式细胞术检测诱导前后的γδT细胞和SGC-7901、SW-1990、SW-480、SW-1116和LOVO细胞凋亡百分率。结果:γδT细胞培养10d时从扩增前4.21%增加到70.35%。吡罗昔康各种浓度对SGC-7901、SW-1990、SW-480、SW-1116和LOVO细胞株抑制率明显高于γδT细胞。0.01~0.04mmol/L吡罗昔康诱导24h后的γδT细胞对5种肿瘤细胞的杀伤活性最高,浓度超过0.04mmol/L时杀伤活性呈下降趋势;SGC-7901、SW-1990、SW-480、SW-1116和LOVO细胞经不同浓度的吡罗昔康诱导24h后γδT细胞对其的杀伤活性与对照组比较无明显变化。0.16mmol/L吡罗昔康诱导24h对SGC-7901、SW-1990、SW-480、SW-1116和LOVO细胞株的凋亡率分别为12.26%、13.46%、14.59%、25.64%和39.36%,显著高于γδT细胞(8.16%)。结论:吡罗昔康在临床常规使用的药物浓度时可增强γδT细胞杀伤肿瘤细胞作用,超过这一浓度可明显抑制γδT细胞和肿瘤细胞的增殖能力和杀伤活性及增加细胞的凋亡率;吡罗昔康对肿瘤细胞株的抑制率明显高于γδT细胞。这一结果为临床吡罗昔康预防消化道肿瘤的用量提供了实验依据。     

华蟾素抑制人结肠癌SW-480细胞增殖及诱导凋亡的研究

目的：观察华蟾素（Cinobufacini）抑制人结肠癌（SW-480）细胞系增殖及诱导凋亡的生物学效应。方法：以人结肠癌SW-480细胞为研究对象,采用MTT法观察细胞增殖抑制的影响;采用吖啶橙（AO）/溴乙锭（EB）荧光染色法观察细胞凋亡形态,并计算凋亡率。结果：在20~120μg/mL,华蟾素能明显的抑制SW-480细胞的增殖;AO/EB荧光染色法显示：随着药物浓度的增加细胞凋亡率逐渐增加。结论：华蟾素具有抑制人结肠癌（SW-480）细胞生长增殖,促进凋亡的作用。     

西咪替丁对人结肠癌细胞株LoVo生长及凋亡的影响

目的:探讨西咪替丁对体外培养的人结肠癌细胞株LoVo的抑制和诱导细胞凋亡的作用.方法:采用MTT比色法、流式细胞术、形态学观察和TUNEL法检测不同浓度的西咪替丁溶液处理LoVo细胞后的生长状况、形态学、分子生物学改变.结果:西咪替丁可抑制LoVo细胞的增殖,且有剂量依赖性的趋势:1×10-2mol/L西咪替丁处理LoVo细胞48h后,在光镜、电镜检测中,可见典型的凋亡细胞;流式细胞术检测凋亡率为32.7%,bcl-2相关蛋白表达率为36.74%;TUNEL法进一步从分子生物学角度证实凋亡的发生.结论:西咪替丁对结肠癌细胞LoVo有抑制作用,主要机制为诱导其发生凋亡,凋亡发生的原因与西咪替丁可下调bcl-2蛋白的表达有关.     

辣椒素对人结肠癌SW480细胞株增殖作用的影响

目的 了解辣椒素对人结肠癌 SW480 细胞株增殖作用的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 采用MTT检测法,观察终浓度100～400 μmol/L的辣椒素作用24、48 h对人结肠癌SW480 细胞株生长作用的影响;采用流式细胞仪检测400 μmol/L辣椒素作用人结肠癌 SW480 细胞株后其细胞周期变化和凋亡率.结果 辣椒素能抑制结肠癌 SW480 细胞株增殖,呈浓度、时间依赖性.在400μmol/L辣椒素作用下,结肠癌SW480细胞株停滞于G0/G1期.辣椒素作用24、48 h,SW480 细胞凋亡率升高(F=8.73、8.10,q=4.86～7.30,P<0.01).结论 辣椒素抑制 SW480 细胞增殖,并诱导其凋亡,其机制可能是阻滞细胞周期于G0/G1,期.     

光动力作用对人结肠癌细胞转录因子激活蛋白-4表达的影响

目的观察不同浓度光敏剂酞菁锌对结肠癌细胞株SW480的生长抑制作用及其对转录因子激活蛋白-4(AP-4)表达的影响。方法应用CCK-8方法评估光动力作用后SW480细胞的存活率,通过流式细胞技术、RT-PCR技术、Western blot技术检测光敏剂酞菁锌光动力作用后对SW480细胞凋亡和AP-4基因表达等生物学行为的影响。结果酞菁锌光动力治疗对结肠癌细胞株SW480生长增殖具有明显抑制作用,其效应呈浓度和光照剂量依赖性;流式细胞仪分析显示SW480细胞呈G2/M期阻滞;SW480细胞的凋亡率随酞菁锌浓度增加逐步上升。2.0μg/mL酞菁锌光动力作用SW480细胞48 h后其AP-4 mRNA水平下降了81%,培养液上清液AP-4蛋白浓度下降了75.6%(P<0.01)。结论应用光敏剂酞菁锌光动力作用能有效抑制SW-480细胞AP-4的表达,进而抑制细胞的生长、增殖及诱导细胞的凋亡,为结肠癌治疗提供了新的思路和手段。     

鹅去氧胆酸诱导HCT-116细胞凋亡及其作用机制研究

目的 研究鹅去氧胆酸(CDCA)对结肠癌细胞HCT-116的影响,并探讨其作用机制.方法 采用体外细胞培养、四甲基偶氮唑蓝(MTT法)、苏木素-伊红染色(HssssE染色)、吉姆萨染色(Giemsa染色)、吖啶橙/溴化乙锭染色(AO/EB染色)和流式细胞术检测经CDCA诱导处理对结肠癌HCT-116细胞的存活率、形态学变化、细胞周期、线粒体膜电位和细胞凋亡率的影响.结果 试验结果表明,CDCA作用于结肠癌细胞HCT-116细胞株48 h的半抑制浓度为0.304 mmol/L.0.800 mmol/L CDCA处理48 h后细胞抑制率达88.4％,且表现出细胞体积缩小、细胞核固缩和染色质凝聚等凋亡特征性的形态学改变.流式细胞仪检测结果显示,经CDCA诱导处理后,细胞株细胞周期被阻滞于G2/M期,线粒体膜电位降低,0.400 mmol/L CDCA处理48 h后HCT-116细胞凋亡率达54.5％.结论 CDCA对人结肠癌HCT116细胞株的抑制作用与其剂量有依赖性,并可能通过线粒体途径诱导人结肠癌细胞HCT-116细胞株凋亡.     

苏林酸诱导结肠腺癌HT—29细胞凋亡的实验研究

为观察苏林酸对结肠腺癌ＨＴ－２９细胞有无促凋亡作用,采用流式细胞仪检测、ＤＮＡ电泳和透射电镜观察苏林酸对ＨＴ－２９细胞的促凋亡作用。结果：流式细胞式、ＤＮＡ电泳和透射电镜观察均显示苏林酸可诱导ＨＴ－２９细胞凋亡,且具有时间和剂量依赖性。用０．３ｍｍｏｌ／Ｌ、０．６ｍｍｏｌ／Ｌ和１．２ｍｍｏｌ／Ｌ苏林酸处理４８小时,凋亡细胞分别占５．８％、７．６％和１１．７％,处理７２小时则分别升为１２．５％、１５     

氟尿嘧啶联合渥曼青霉素对人结肠癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨氟尿嘧啶(Fu)联合渥曼青霉素(wortmannin)对人野生型及突变型p53结肠癌细胞株（HCT-116和SW-480）增殖和凋亡的影响,阐明p53对人结肠癌细胞增殖和凋亡的作用。方法：将处于对数生长期的 HCT-116和SW-480人结肠癌细胞株分为空白对照组、氟尿嘧啶组、氟尿嘧啶联合渥曼青霉素组和氟尿嘧啶联合渥曼青霉素及p53抑制剂（PFT-α）组,分别给予氟尿嘧啶、渥曼青霉素及PFT-α,采用噻唑盐比色法(MTT)、Annexin V-FITC流式细胞术（FCM）检测各组细胞12、24和48 h的存活率和细胞凋亡率。结果：与氟尿嘧啶组比较,渥曼青霉素联合氟尿嘧啶组HCT-116和SW-480细胞存活率显著降低（P<0.05）,并随时间延长而逐渐降低;流式细胞术（FCM）检测,各组细胞凋亡率随时间的延长而增高（P<0.05）;与渥曼青霉素联合氟尿嘧啶组比较,氟尿嘧啶联合渥曼青霉素及PFT-α组HCT-116细胞存活率及细胞凋亡率无明显变化（P>0.05）,而SW-480细胞48 h的存活率显著降低（P<0.05）,凋亡率显著增高（P<0.05）。结论：渥曼青霉素能显著增强氟尿嘧啶对人结肠癌细胞增殖的抑制作用并促进结肠癌细胞凋亡;抑制p53表达能进一步增强渥曼青霉素联合氟尿嘧啶对p53突变型SW-480细胞增殖的抑制作用并促进细胞凋亡。
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苏林酸诱导结肠腺癌HT-29细胞凋亡的实验研究

为观察苏林酸对结肠腺癌HT-29细胞有无促凋亡作用,采用流式细胞仪检测、DN A电泳和透射电镜观察苏林酸对HT-29细胞的促凋亡作用.结果:流式细胞术、DNA电泳和透射电镜观察均显示苏林酸可诱导HT-29细胞凋亡,且具有时间和剂量依赖性.用0.3mmol/L 、0.6mmol/L和1.2mmol/L苏林酸处理48小时,凋亡细胞分别占5.8%、7.6%和11.7%,处理72 小时则分别升为12.5%、15.4%和24.2%,而对照组凋亡细胞分别占2.9%和5.1%,处理组和对照组差异显著(P＜0.05).以上结果表明,本实验条件下,苏林酸可诱导HT-29细胞凋亡,抑制其增殖.     

酒石酸锑钾在诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡中的影响

目的:本研究旨在明确酒石酸锑钾(PAT)在体外对人肝癌BEL7402细胞凋亡的影响及抑癌机制。方法:用PAT以不同浓度、不同时间作用于人肝癌BEL7402细胞,以诱导其凋亡。用MTT比色法观察其细胞毒性,荧光显微镜、透射电镜、TUNEL染色法及流式细胞术(FCM)等方法来检测凋亡,观察其形态学和生化方面的变化。结果:PAT以剂量依赖和时间依赖的方式抑制BEL7402细胞的生长。5～40μmol·L-1的PAT处理48h后,形态学上,肝癌细胞表现为细胞皱缩、核质浓缩、核碎裂、细胞起泡以及凋亡小体形式等凋亡特征的形态学改变。DNA末端原位标记染色法、流式细胞仪均能检测到凋亡细胞。结论:PAT在体外诱导肝癌BEL7402细胞凋亡,能作为一种凋亡诱导剂用于肝癌的治疗。     

二氢青蒿素对结肠癌细胞系SW480增殖凋亡的影响

目的:研究二氢青蒿素(DHA)对结肠癌细胞系SW480的增殖、凋亡的作用,初步探讨其机制。方法:采用结肠癌细胞SW480为研究对象,观测不同浓度和作用时间的DHA对细胞作用,MTT噻唑蓝比色法检测对细胞的增殖抑制作用,普通光镜观察细胞形态的变化,分别PI单染及Annexin-V双染法流式细胞术分析细胞周期分布和早期凋亡率的变化,免疫细胞化学检测凋亡抑制蛋白Survivin及效应蛋白Caspase-3表达情况。结果:DHA对SW480细胞增殖有抑制作用且呈浓度和时间依赖性。普通光镜下观察SW480呈典型的凋亡形态学改变。流式细胞仪检测细胞阻滞于G0/G1期,随药物剂量增大G0/G1期比例而逐渐增高,S期比例降低,Annexin-V双染法示早期细胞凋亡率呈明显浓度依赖性升高。免疫细胞化学结果示DHA作用48 h后Survivin表达减弱,而Caspase-3表达增强,呈剂量依赖关系。结论:DHA能显著抑制结肠癌细胞生长,影响细胞周期,诱导细胞凋亡,可能与抑制Survivin蛋白表达,促使Caspase-3表达增强有关。     

华蟾素对结肠癌细胞SW480生物学行为的影响

目的研究华蟾素对人结肠癌细胞株SW480细胞生物学行为的影响。方法采用华蟾素（0.01mg/L、0.1mg/L、1mg/L）干预SW480细胞,MTT实验检测细胞增殖能力的改变,流式细胞术检测细胞凋亡比例变化,Transwell小室实验观察药物作用前后细胞侵袭能力的改变。结果华蟾素对SW480细胞有显著的增殖抑制作用,且呈现浓度和时间依赖性,经药物作用的细胞凋亡比例显著增高,侵袭能力明显下降。结论华蟾素能抑制结肠癌细胞增殖,诱导其凋亡,具有一定的临床应用前景。     

二烯丙基二硫化物对人子宫内膜癌HEC-1-B细胞增殖抑制和凋亡诱导作用

目的研究二烯丙基二硫化物(DADS)对人子宫内膜癌HEC-1-B细胞增殖和凋亡的影响。方法 MTT法检测DADS对HEC-1-B细胞的增殖抑制作用,采用AnnexinV/PI双标记流式细胞术检测DADS对HEC-1-B细胞的凋亡诱导作用;Hoechst-33528染色,观察细胞凋亡形态。结果用100、200、400μmol/L DADS处理HEC-1-B细胞24、48 h,在100μmol/L剂量即可抑制细胞的增殖,随着剂量和时间的增加,DADS对细胞的抑制作用明显增强。DADS对HEC-1-B细胞的增殖抑制存在时间-剂量依赖关系。用200μmol/LDADS处理48 h后,流式细胞术检测细胞凋亡率达40.91%。Hoechst-33528染色可见细胞出现明显的凋亡形态学改变。结论 DADS对HEC-1-B细胞具有增殖抑制并诱导凋亡的作用,提示DADS对子宫内膜癌的治疗可能具有重要价值。     

LTD4及MK571对人结肠癌细胞SW480、Caco-2凋亡和增殖作用的体外研究

目的 观察半胱氨酰白三烯D4（LTD4）及半胱氨酰白三烯受体1拮抗剂MK571对人结肠癌细胞株SW480、Caco-2增殖和凋亡的影响.方法 MTT法检测细胞生长活性;FITC Annexin V/碘化丙啶（PI）双染流式细胞术检测细胞的凋亡率;PI染色细胞,用流式细胞仪检测细胞周期.结果 12.5 ～ 400 μg/L的LTD4对结肠癌SW480细胞有促增殖作用,且存在时效和量效依赖性;而1.6～12.5μg/L的LTD4处理24、48 h,对SW480细胞的增殖抑制作用无明显影响,作用时间延长至72 h,可促进SW480细胞的增殖.50～ 400 μg/L的LTD4对结肠癌Caco-2细胞有促增殖作用,且存在时效和量效依赖性;而1.6-50 μg/L的LTD4对结肠癌Caco-2细胞的影响与对照组相比差异无统计学意义.6.25～200 μmol/L的MK571对结肠癌SW480细胞有抑制作用,且存在时效和量效依赖性;而0.8 ～ 6.25 μmol/L的MK571对SW480细胞的影响与对照组相比无明显差异.25～ 200 μmol/L的MK571对结肠癌Caco-2细胞有抑制作用,且存在时效和量效依赖性;而0.8～ 25 μmol/L的MK571对结肠癌Caco-2细胞的影响与对照组相比差异无统计学意义.与阴性对照组相比,25 ～ 100 μg/L的LTD4对2种结肠癌SW480细胞和Caco-2细胞有促凋亡作用,且存在时效和量效依赖性;而100、200 μmol/L的MK571对2种结肠癌的凋亡无明显作用.与阴性对照组相比,25 ～ 100 μg/L的LTD4可以降低2种结肠癌细胞株G0/G1期比例,增加G2/M及S期比例;而100、200 μmol/L的MK571增加2种结肠癌细胞G0/G1期的比例,降低G2/M及S期比例.结论 LTD4具有促进人结肠癌SW480、Caco-2细胞株增殖的作用,该作用可能的作用机制是抑制凋亡、增加G2/M及S期细胞比例.MK571可抑制2种结肠癌细胞株的增殖,但对凋亡无明显影响,其抑制增殖作用的可能机制是阻滞细胞于G0/G1期.