荧光下豚鼠听觉离体毛细胞的凋亡改变

目的:探讨离体耳蜗毛细胞的凋亡改变。方法:采用胶原酶制备离体耳蜗毛细胞、0.01%吖啶橙进行荧光染色,荧光显微镜观察凋亡改变。结果:凋亡毛细胞的主要形态特征包括:胞核皱缩;荧光显微镜下凋亡毛细胞呈红色或红黄色荧光,毛细胞形态完整,无胞膜破裂或胞质溢出。结论:离体耳蜗毛细胞的凋亡改变使细胞呈红色或红黄色荧光,胞膜完整。     

离体耳蜗毛细胞凋亡形态及凋亡率

目的探讨离体时相对耳蜗毛细胞的凋亡改变。方法采用胶原酶制备离体耳蜗毛细胞，0．01％吖啶橙进行荧光染色，在倒置显微镜、荧光显微镜和电镜下观察凋亡改变。结果凋亡毛细胞的主要形态特征包括：胞膜完整，有皱折扭曲，双折光现象明显减弱或消失；胞核位置基本正常，有时胞核皱缩；纤毛泡状或倒伏；胞质内可见布朗运动。荧光显微镜下凋亡毛细胞呈红色或红黄色荧光，毛细胞形态完整，无胞膜破裂或胞质溢出。随着离体时间延长，毛细胞凋亡数逐步增多，凋亡率增高。结论离体环境下凋亡细胞有其独特的形态特征，跟活性毛细胞和坏死毛细胞有明显差别；随着离体时间的延长，毛细胞凋亡率逐渐增高。     

高渗对豚鼠外毛细胞线粒体电位的影响

目的观察离体豚鼠耳蜗外毛细胞线粒体膜电位在高渗环境中的变化.方法解剖显微镜下仔细分离出第2-4回基底膜,采取外毛细胞,用粘附式细胞仪和线粒体膜电位特异性荧光探针观察外毛细胞(OHC)线粒体膜电位的变化.结果高渗环境可导致OHC线粒体内荧光强度降低,OHC形态发生变化.结论高渗透压可破坏OHC线粒体跨膜电位,进而影响其功能.     

顺铂对离体培养小鼠耳蜗毛细胞的损伤及凋亡作用

目的建立新生昆明小鼠离体顺铂耳毒性模型,研究顺铂对离体培养小鼠耳蜗毛细胞的损伤及凋亡作用。方法分离生后3d的昆明小鼠耳蜗基底膜,在含有1%牛血清白蛋白的DMEM/F12培养基中进行培养。采用异硫氰酸四甲基罗丹明标记的鬼笔环肽荧光染色方法观察不同浓度顺铂对小鼠耳蜗毛细胞的损伤,同时应用Hoechst 33258染色技术检测耳蜗毛细胞的凋亡。结果不同浓度顺铂均可使小鼠耳蜗毛细胞发生凋亡的形态学变化。顺铂浓度为4mg·L-1时,耳蜗毛细胞缺失率和凋亡率明显增大,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。随着顺铂浓度的增高(8～64mg·L-1),耳蜗毛细胞缺失率和凋亡率亦显著增大,呈现明显的量效关系(P<0.01)。结论应用新生昆明小鼠能建立可靠的离体顺铂耳毒性模型;顺铂可导致耳蜗毛细胞凋亡,提示凋亡可能是顺铂耳毒性机制之一。     

姜黄素对人肝星状细胞形态学的影响

目的:观察姜黄素对人肝星状细胞LX-2形态学的影响.方法:通过HE染色及丫啶橙荧光染色观察LX-2细胞经0(对照)、10、20、30、40及50/umol/L的姜黄素作用12 h后的形态学变化.结果:①倒置显微镜下可见对照组细胞呈成纤维细胞样表型,而姜黄素组细胞数变少,细胞变小,形态向椭圆形或圆形改变,胞质浓缩,且随姜黄素浓度的增加变化更加明显.②HE染色光镜下观察显示,姜黄素组凋亡细胞增加,表现为胞体缩小、变圆,胞核固缩、碎裂,染色体被染成蓝黑色.③丫啶橙染色激光共聚焦显微镜下可见明显的凋亡细胞的多种形态改变,凋亡小体清晰可见.结论:经姜黄素作用人肝星状细胞可出现明显的增殖受抑、细胞凋亡的形态学改变.     

豚鼠耳蜗外毛细胞凋亡时听力变化的实验观察

目的观察耳蜗外毛细胞发生凋亡时听力改变情况.方法对20只豚鼠药物造模,诱发耳蜗外毛细胞发凋亡.应用TUNEL技术观察凋亡表达,测试ABR阈值观察听力变化.结果应用丁胺卡那霉素1天即可诱发豚鼠耳蜗外毛细胞发生凋亡,连续应用3d,耳蜗外毛细胞凋亡呈强阳性表达,但ABR阈值无明显改变;随着用药时间延长,凋亡细胞数目增加,甚至出现部分毛细胞缺失现黎,此时ABR阈值明显升高.结论耳蜗外毛细胞发生凋亡早期对豚鼠听力无明显影响,随着耳毒性药物应用时间延长,豚鼠ABR阈值升高可能存在两种原因毛细胞凋亡或毛细胞坏死.     

中等强度冲击波负压暴露后豚鼠耳蜗毛细胞核形态学观察

目的观察冲击波负压(BUP)暴露后早期豚鼠耳蜗毛细胞胞核的病理形态学变化。方法将豚鼠在负压峰值为-44.5~-48.8kPa的中等强度BUP暴露3次,于BUP暴露后7d解剖取出耳蜗,应用DNA荧光染料Hoechst 33342显示毛细胞核,在荧光显微镜下毛细胞病理损害情况并进行计数。结果BUP暴露后7d,豚鼠耳蜗毛细胞可见胞核肿胀、胞核缺失、胞核固缩3种病变,以核肿胀发生最高,其次是核缺失,核固缩最为少见,3种病变的总发生率达(17.3±3.2)%,明显高于正常对照组(P<0.001)。结论BUP暴露可导致耳蜗外毛细胞核明显的病理性改变,这种改变可能是造成听力损失的主要原因之一。     

卡那霉素对体外培养小鼠耳蜗毛细胞的损伤作用

目的建立新生昆明小鼠耳蜗Corti器体外培养模型,研究卡那霉素（kanamycin,KM）对体外培养小鼠耳蜗毛细胞的损伤作用。方法分离生后3d的小鼠耳蜗基底膜,平铺在胶原凝胶表面,然后在含有1%牛血清白蛋白的DMEM/F12培养基中进行培养。采用异硫氰酸四甲基罗丹明标记的鬼笔环肽荧光染色方法观察不同浓度（0.05、0.1、0.2、0.3mmol/L）KM对小鼠耳蜗毛细胞的影响,耳蜗毛细胞计数检测毛细胞缺失情况。结果不同浓度KM均可使小鼠耳蜗外毛细胞出现纤毛倒伏、排列紊乱等形态变化。KM浓度为0.05mmol/L时,耳蜗外毛细胞缺失率明显增大,与对照组比较有显著性差异（P〈0.05）,而耳蜗内毛细胞缺失率无明显变化（P〉0.05）。随着KM浓度的逐渐增高（0.1～0.3mmol/L）,耳蜗内、外毛细胞缺失率亦显著增大,呈现明显的量效关系（P〈0.05或P〈0.01）。结论KM可对体外培养的小鼠耳蜗毛细胞产生损伤作用,内耳器官培养是研究药物耳毒性的有效方法。     

依托咪酯对氯化钾和咖啡因诱发豚鼠耳蜗外毛细胞内钙离子移动的影响

目的 观察不同浓度依托咪酯对氯化钾和咖啡因诱发的豚鼠耳蜗外毛细胞内钙离子移动的影响,探讨其对听觉外周感受器(耳蜗)作用的可能机制.方法 ①30个活性良好的外毛细胞随机分为3组(n=10):对照组(C组)、低浓度依托咪酯组(E1组)、高浓度依托咪酯组(E2组),用Fluo-3AM荧光指示剂染色,分别给予 Hanks液、50、100 μmol/L依托咪酯预处理20 min.在激光共聚焦显微镜下动态观察各组预处理前、后以及40 mmol/L氯化钾诱发的细胞内钙荧光染色强度峰值的变化.②分组同①,观察各组预处理前、后以及20 mmol/L咖啡因诱发的细胞内钙荧光染色强度峰值的变化.结果 ①C组加入40 mmol/L氯化钾后细胞内钙荧光强度峰值从基础值105上升至221(P<0.01),E1组从基础值101上升至187(P<0.01),E2组从基础值103上升至150(P<0.01),E1组、E2组峰值分别较C组下降了近15.4%(P<0.05)和32.1%(P<0.01).②C组加入20 mmol/L咖啡因后细胞内钙荧光强度峰值从基础值112上升至154(P<0.05),E1组从基础值103上升至148(P<0.05),E2组从基础值104上升至143(P<0.05).但E1组和E2组细胞内钙荧光强度峰值较C组差异无显著性意义(P＞0.05).结论 依托咪酯可浓度依赖性地抑制耳蜗外毛细胞电压依赖性Ca2+通道开放,减少胞外钙内流,降低耳蜗外毛细胞内钙离子浓度,而对内质网Ryanodine型钙库无明显影响.     

豚鼠耳蜗外毛细胞凋亡时听力变化的实验研究

目的：观察耳蜗外毛细胞发生凋亡时听力改变情况。方法：对20只豚鼠药物造模,诱发耳蜗外毛细胞发生凋亡。应用TUNEL技术观察凋亡表达,测试ABR阈值观察听力变化。结果：应用丁胺卡那霉素1天即可诱发豚鼠耳蜗外毛细胞发生凋亡,连续应用3d,耳蜗外毛细胞凋亡呈强阳性表达,但ABR阈值无明显改变;随着用药时间延长,凋亡细胞数目增加,甚至出现部分毛细胞缺失现象,此时ABR阈值明显升高。结论：耳蜗外毛细胞发生凋亡早期对豚鼠听力无明显影响,随着耳毒性药物应用时间延长,豚鼠ABR阈值升高可能存在两种原因：毛细胞凋亡或毛细胞坏死。     

小儿耳鼻喉手术麻醉的新进展

因小儿耳鼻喉手术刺激强,时间短,且常与气道相关,故麻醉的控制有一定难度,现对国内外现阶段小儿耳鼻喉手术麻醉的改良方法及新观点进行评述,以期对临床工作有较好的指导意义。     

大鼠脑出血灶周围星形胶质细胞内糖原含量的变化

目的：研究脑出血后局部超微结构的变化，探讨脑出血的病理生理过程，为临床治疗提供理论依据．方法：健康雄性SD大鼠4只，随机等分为实验组和对照组．实验组采用细菌胶原酶注射制作纹状体脑出血模型，对照组采用相同方法在相应部位注入等体积生理盐水，采用透射电镜观察脑出血后24h病变局部及其周围和对照组超微结构的变化和糖原的水平变化．结果：电镜观察到在脑出血动物出血灶周围区，不同类型的细胞内均可见到各种各样的超微结构改变．最为醒目的是在脑内血肿周围星形胶质细胞胞质和突起内有大量的糖原颗粒聚集，尤其在毛细血管周围的胶质细胞突起内非常明显；小胶质细胞和少突胶质细胞内均未发现明显糖原颗粒存在．在生理盐水对照组动物，相应部位的各种细胞的超微结构正常；而且神经元、各种胶质细胞和毛细血管内皮细胞内均无明显糖原颗粒聚集．结论：脑出血周围糖原含量增高，局部存在明显的糖代谢障碍．     

云南省2006年登革热监测分析

目的了解云南省登革热的疫情动态、人群抗体水平、媒介伊蚊种群（包括成幼虫孳生和密度变化）的动态变化、为登革热流行趋势的预测、预警和制定防治对策、措施提供科学依据。方法各级医疗、卫生、检疫机构的医务人员对疑似、临床病例进行及时发现和诊断;在流行季节前随机抽取正常人群血清,-20℃保存,用ELISA方法进行血清学检测;在6～10月采用定时、定点调查法,对登革热的主要传播媒介白纹伊蚊、埃及伊蚊的种群、孳生环境、伊蚊幼虫指数和成蚊密度进行监测,每月1次。结果2006年云南省发生输入性登革热病例18例;健康人群登革热IgG抗体阳性率8．09％。伊蚊幼虫密度布雷图指数（BI）、容器指数（Cl）分别在14～98、4．7～73．68之间,白纹伊蚊成蚊密度在3．5～34只,人工小时之间。结论云南省输入性登革热疫情有不断上升的趋势;人群抗体水平登革热IgG抗体阳性率较高,提示当地人群中可能存在该病毒的既往感染或隐性感染;媒介伊蚊幼虫布雷图指数、容器指数和白纹伊蚊成蚊密度均较高。对登革热传播具有极高的危险性,应引起高度注意。     

2001年我国医药研究的若干进展

随着国内外生命科学和生物技术等的飞速发展,我国医药技术在2001年取得了长足的进步。提前完成了我国所承担的人类基因组汁划中的1％测序任务,到2000年,中国科学家在功能基因研究和基因组多样性领域共完成研究论文1850篇,遍及医药各领域,研究手段和水平可于国际先进水平媲美,中国完全有条件在“后基因时代”成为主角之一。     

黄芪在体内抗氧化作用的实验研究

目的:探讨黄芪水提物抗氧化、清除体内自由基的生物活性。方法:将昆明种小鼠随机分为对照组和黄芪低、中、高剂量组,每组10只。连续灌胃给药7天,采血后,迅速取出肝组织,制成匀浆。测定超氧化物歧化酶(SOD)的活力及丙二醛(MDA)含量。结果:黄芪可减少MDA含量,增强SOD活力。结论:黄芪可有效清除体内的氧自由基,具有减少氧化应激引起的器官损伤和延缓机体衰老的作用。     

Cohort Mortality Study in Three Ceramic Factories in Jingdezhen in China

To investigate the health impacts of crystalline silica mixed dust and other potential occupational hazards on workers in ceramic factories, a cohort study of 4851 workers registered in the employment records in 3 ceramic factories in Jingdezhen city of China between 1972 and 1974 was identified. The cohort mortality was traced throughout 2003 with an accumulation of 128970.2 person-years, revealed 1542 deaths. Standardized mortality ratios （SMRs） were calculated for the main causes of death by using Chinese national mortality rates as reference. The mortality from all causes in three ceramic factories was 12.0‰ and the cumulative mortality was 31.8%. Malignant neoplasm, cardiovascular diseases, respiratory diseases, infectious diseases were the first four illnesses that threaten workers’ life, and they accounted for 73.2% of all deaths. The results of this study showed that the standardized mortality ratio for all subjects was 1.02, which is very close to that expected on the basis of the China national mortality rates. Statistically significant mortality excesses for respiratory disease （SMR=1.36）, pneumoconiosis （SMR=37.34）, infectious disease （SMR=5.70） and pul- monary tuberculosis （SMR=3.88） were observed. The mortality of 2938 dust-exposed workers was higher than that of 1913 non dust-exposed workers. Except for pneumoconiosis, the mortality from lung cancer, non-malignant respiratory diseases and pulmonary tuberculosis in dust-exposed workers were significantly increased as compared with that in non-exposed workers, and the relative risks （RRs） were 1.86 （1.16–2.99）, 2.50 （1.84–3.40）, 1.81 （1.34–2.45）. The exposure-response relationships between cumulative dust exposure level and mortality from all causes, colorectal cancer, lung cancer, respiratory diseases, and pulmonary tuberculosis were also identified. The findings indicated that silica mixed dust in ceramic factories has harmful impact on the workers’ health and life span in ceramic factory.     

2005年汕头市登革热定点监测结果分析

目的 通过定点监测为汕头市登革热流行趋势的预测、预警和制定防治对策、措施提供科学依据。方法收集监测点的登革热疫情、人群抗体水平和媒介伊蚊等监测资料，用EPI2002软件统计分析。结果2005年汕头市无登革热疫情，抗登革热病毒IgG、IgM阳性率低，伊蚊幼虫孳生密度高峰在6、8、9、10月份，低谷在4、7、11月份，孳生情况随着月平均降水量、平均气温变化而变化；孳生场所以农村、暂时性容器为主。结论汕头市有登革热流行的自然、社会环境条件，人群普遍对登革热易感，8～10月是发动爱国卫生运动，清除伊蚊孳生地，预防、控制登革热流行的适当时机。     

2009年泉州市流感监测结果分析

目的了解泉州市2009年流感活动情况及其型别特征。结论通过流行病学和病原学监测,对泉州市流感流行情况进行分析。结果 2009年全市流感样病例占就诊人数的0.26%～2.34%;全年采集监测标本1392份,经RT-PCR法检测样本阳性率为22.34%;经MDCK细胞分离流感毒株134株,其中季节性H3N2和HINl型各占60.45%和11.19%,甲型H1N1流感占21.64%,B型占6.70%。结论 2009年泉州市流感春夏季以季节性H3N2亚型流感为优势毒株,秋冬季以甲型H1N1流感为流行株,需加强泉州市流感监测和流感病毒抗原变异研究。