大蒜素及前药对人食管癌细胞Eca9706的增殖抑制及其凋亡基因表达的影响

目的研究大蒜素和它的前药(蒜氨酸+蒜氨酸酶)对食管癌细胞Eca 9706的增殖抑制及对凋亡基因表达的影响。方法用大蒜素和大蒜素前药处理食管癌细胞Eca 9706,采用MTT法检测癌细胞的增殖抑制作用,实时定量RT-PCR检测凋亡基因的表达。结果大蒜素及其前药对食管癌细胞增殖抑制呈现时间和剂量相关性,大蒜素前药的抑制效果优于大蒜素。实时定量RT-PCR表明大蒜素和它的前药上调了癌细胞bax和caspase-3 mRNA的表达,下调survivin、突变型p53和bcl-2 mRNA的表达。结论大蒜素及其前药抑制食管癌细胞增殖和诱导凋亡可能是通过线粒体通路实现。     

榄香烯诱导小鼠黑色素瘤B16细胞凋亡的实验研究

目的:观察榄香烯对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖和凋亡的影响。方法:不同浓度榄香烯体外处理小鼠黑色素瘤B16细胞,采用MTT比色法、流式细胞仪分析技术及荧光染色等方法,检测榄香烯对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖和凋亡的影响。结果:榄香烯能抑制B16细胞增殖,使细胞停滞于G0/G1期,S期细胞明显减少,其作用呈明显浓度依赖性。形态学及流式细胞术分析结果均提示:在本实验条件下,榄香烯可诱导B16细胞凋亡,其诱导作用亦显示明显的浓度依赖关系。在此基础上,进一步分析发现:榄香烯可诱导B16细胞原癌基因bcl-2表达降低,抑癌基因p53表达增强。结论:榄香烯在体外通过干扰细胞周期、诱导细胞凋亡明显抑制B16细胞增殖,其作用机制可能与其诱导癌基因bcl-2表达减少、p53表达增加有关。     

红芪多糖HPS-3体外诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡研究

目的:研究红芪多糖均一组分HPS-3体外对人胃腺癌MGC-803细胞增殖及凋亡的作用。方法:应用MTT法、显微荧光术和流式细胞术测定HPS-3对MGC-803细胞的增殖、细胞周期和诱导凋亡的影响,应用流式细胞术测定对Bc1-2和Bax蛋白表达的影响。结果:HPS-3对MGC-803细胞具有抑制增殖、G2/M期阻滞和诱导凋亡作用;HPS-3降低bcl-2蛋白表达,对Bax蛋白表达无明显作用。结论:HPS-3可通过抑制人胃腺癌MGC-803细胞的生长增殖、G2/M期阻滞、诱导细胞凋亡,降低bcl-2蛋白等作用机制发挥肿瘤作用。     

红芪多糖HPS-3体外诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡的研究

目的:研究红芪多糖均一组分HPS-3体外对人胃腺癌MGC-803细胞增殖及凋亡的作用。方法:应用MTT法、显微荧光术和流式细胞术测定HPS-3对MGC-803细胞的增殖、细胞周期和诱导凋亡的影响,应用流式细胞术测定对Bc1-2和Bax蛋白表达的影响。结果:HPS-3对MGC-803细胞具有抑制增殖、G2/M期阻滞和诱导凋亡作用;HPS-3降低bcl-2蛋白表达,对Bax蛋白表达无明显作用。结论:HPS-3可通过抑制人胃腺癌MGC-803细胞的生长增殖、G2/M期阻滞、诱导细胞凋亡,降低bcl-2蛋白等作用机制发挥肿瘤作用。     

大蒜活性物质对高脂小鼠血脂代谢的影响

目的比较大蒜活性物质对高血脂小鼠血脂代谢的影响。方法血浆中血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和丙二醛(MDA)的水平测定以及超氧化物歧化酶(SOD)活力测定均采用试剂盒方法测定;3-羟-3-甲戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMG-CoA还原酶)活力通过NADPH光吸收的减少量进行测定。结果大蒜素和蒜氨酸+蒜氨酸酶能降低高血脂小鼠TC、LDL-C和MDA的水平,抑制HMG-CoA还原酶活力,提高HDL-C水平和SOD酶活力。与高血脂组相比,处理各组有显著差异,并呈现剂量依赖性。结论大蒜素和蒜氨酸+蒜氨酸酶都具有良好的降血脂作用,其机制可能与阻断脂质过氧化、抑制胆固醇合成途径中的限速酶———HMG-CoA还原酶的活性密切相关,并且蒜氨酸+蒜氨酸酶降低TC水平和HMG-CoA还原酶活性、提高HDL-C水平和SOD酶活力的效果优于大蒜素。     

大蒜素对人喉癌Hep-2细胞周期与细胞凋亡的影响

目的研究大蒜素对人喉癌Hep-2细胞周期与细胞凋亡的影响。方法实验分为空白对照组、大蒜素25μg/m L组、大蒜素50μg/m L组、大蒜素100μg/m L组和顺铂40μg/m L组,取对数生长期人喉癌Hep-2细胞,每组分别给予相应干预24 h后,采用MTT法测定细胞增殖抑制率,通过流式细胞术检测细胞周期、观察细胞凋亡状况并计算凋亡率,RTPCR法检测bcl-2 mRNA和bax mRNA表达并计算bax/bcl-2表达比值,Western blotting法检测Caspase-3蛋白表达情况。结果与空白对照组比较,大蒜素50μg/m L组、大蒜素100μg/m L组和顺铂40μg/m L组人喉癌Hep-2细胞增殖抑制率显著升高,细胞周期G0/G1期显著增长、G2/M期显著缩短,细胞凋亡率显著升高,bcl-2 mRNA表达显著下调而bax mRNA显著上调,bax/bcl-2表达比值显著升高,Caspase-3蛋白表达显著上调,差异均有统计学意义(P均<0.05)。大蒜素100μg/m L组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率和Caspase-3蛋白表达量均显著高于顺铂40μg/m L组(P均<0.05)。结论大蒜素具有阻滞人喉癌Hep-2细胞周期进程和促进其凋亡的作用,机制可能与其能够调节凋亡相关基因和蛋白表达有关。     

大蒜冻干粉指纹图谱的建立及蒜氨酸含量测定

目的:建立大蒜冻干粉指纹图谱及蒜氨酸含量测定方法,为大蒜冻干粉的质量控制提供依据.方法:对9种杀酶条件和9个酶抑制剂(羧甲基羟胺半盐酸盐)用量进行筛选以确定样品的前处理方法;建立15批大蒜冻干粉的指纹图谱,并用中药指纹图谱相似度评价系统(2012版)进行相似度评价;建立蒜氨酸的含量测定方法,与《美国药典》衍生化法的样品...     

蒜氨酸+蒜酶共同作用对环磷酰胺处理小鼠免疫功能的调节作用

目的 观察蒜氨酸+蒜酶对环磷酰胺所致免疫低下小鼠免疫功能的调节作用.方法 环磷酰胺造模法制作免疫抑制小鼠模型,给药10 d,测定小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率、血清溶血素、脾淋巴细胞增殖功能及血清IL-2含量,观察蒜氨酸+蒜酶对小鼠免疫功能的影响.结果 与模型组比较,蒜氨酸+蒜酶在中、高剂量可明显提高环磷酰胺所致免疫低下小鼠的腹腔巨噬细胞吞噬率,也可促进血清溶血素形成和脾淋巴细胞的增殖,高剂量可提高血清IL-2含量.结论 蒜氨酸+蒜酶对环磷酰胺处理小鼠免疫功能低下有免疫保护作用.     

薄层扫描法测定大蒜中蒜氨酸的含量

葱属植物大蒜 (ＡｌｌｉｕｍｓａｔｉｖｕｍＬｉｎｎ .)被誉为天然广谱抗菌药物 ,在心脑血管疾病预防、抗肿瘤、提高免疫力和抗衰老等方面有一定功能 ,并能降血糖、提高机体对葡萄糖的耐受量功能 ,对肝脏具有保护作用。蒜氨酸 (ａｌｌｉｉｎ)是大蒜的功效成分 ,以稳定、无臭的形式存在于大蒜鳞芽中 ,在水的参与下与存在于细胞壁中的蒜酶 (ａｌｌｉｉｎａｓｅ)发生化学反应 ,产生大蒜素 (ａｌｌｉｃｉｎ) ,进一步分解产生大蒜新素等。由于大蒜成分的多样性和不稳定性 ,至今尚未有统一的标准方法对大蒜中的蒜氨酸进行含量测定。本实验以蒜氨酸…     

N-马来酰-L-缬氨酸酯姜黄素对胃癌MGC-803细胞周期的影响

目的:研究N-马来酰-L-缬氨酸酯姜黄素(MVC)对胃癌MGC-803细胞周期的作用机制。方法:采用MTT法检测MVC对肿瘤细胞的生长抑制作用;采用流式细胞术检测MVC对MGC-803细胞周期的影响;采用Western blot印迹法检测MVC对MGC-803细胞周期相关基因蛋白p21WAF1/CIP1,Cdc 2和Cyclin B1表达的影响。结果:20μmol.L-1 MVC可明显抑制MGC-803细胞生长,可明显诱导MGC-803细胞S,G/M期阻滞。20μmol.L-1MCV作用MGC-803细胞24 h,p21WAF1/CIP1蛋白表达增高,Cdc 2蛋白表达减少。结论:MVC可通过增加细胞周期相关基因p21WAF1/CIP1蛋白的表达和下调Cdc 2蛋白表达,使MGC-803细胞的周期阻断在S,G2/M期,从而抑制MGC-803细胞的生长。     

川楝素提取物诱导K562细胞凋亡的实验研究

目的探讨川楝素提取物对人白血病K562细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用及其机制。方法采用MTT法检测川楝素提取物对K562细胞增殖的影响;Wright′s染色观察细胞的形态学改变;流式细胞技术检测细胞周期与凋亡率的变化;Annexin V/PI双标记法检测细胞的早期凋亡变化;DNA琼脂糖凝胶电泳观察DNA片段化;比色法检测Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9相对活性的改变;RT-PCR检测凋亡相关基因p21、bcr/abl、H-rasmRNA表达水平的改变。结果川楝素提取物显著抑制K562细胞的增殖,并呈剂量-时间依赖性,作用72h的IC50值为20nmol/L;处理组细胞可见典型的凋亡形态学改变;细胞周期和Annexin V/PI双标记检测表明川楝素提取物可诱导K562细胞凋亡,并呈剂量-时间依赖性;处理组细胞DNA琼脂糖凝胶电泳出现明显的DNAladder;处理组细胞Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的活性均显著增加;p21、H-ras mRNA表达上调,bcr/abl mRNA表达下调。结论川楝素提取物对K562细胞具有增殖抑制和诱导凋亡的作用,其机制与Caspase信号途径的活化有关。     

麦门冬汤合千金苇茎汤提取部位对非小细胞肺癌H460细胞毒作用的研究

目的:通过药效评价实验筛选出麦门冬汤合千金苇茎汤(简称金方)的有效部位。方法:MTT法观察不同浓度的金方提取出的8个部位对肺癌NCI-H460细胞和正常人胚肺成纤维细胞HFL-I生长增殖的影响,初步筛选有效部位;平板细胞克隆形成试验,检测有效部位对肿瘤细胞克隆形成能力的影响;同时用流式细胞仪进行细胞周期检测分析,评价有效部位对细胞周期的影响;Hoechst33258染色后在荧光显微镜下观察NCI-H460细胞凋亡的形态变化。结果:不同浓度提取各部位中,6部位对NCI-H460细胞有显著的生长抑制作用;作用72 h后,荧光显微镜下可见NCI-H460细胞核固缩,染色质凝聚等凋亡形态学特征;流式检测显示对NCI-H460细胞主要抑制在S期,并有凋亡细胞出现。结论:麦门冬汤合千金苇茎汤提取各部位中6部位对NCI-H460细胞具有细胞毒作用,可有效抑制肺癌细胞生长,并对人体正常细胞(胚肺成纤维细胞)无显著影响,可以进一步分离筛选组分及单体化合物。     

Catharanthus roseus cell cultures: Growth,alkaloid synthesis and antidiabetic activity

Suspension cultures of Catharanthus roseus were established from three different cell lines namely, CWS, CWS-A and CWS-G on MS medium supplemented with 2,4-D (0.4 ppm). The three cell lines were cultured in growth and production media. Cell line CWS grown in production medium showed a PCV (packed cell volume) of 70% in 21 days. The cells synthesized 0.10% ajmalicine in the production medium and the cell extract caused a 71% decrease in blood sugar in diabetes induced rats. In growth medium the cells showed a PCV of 97% in 21 days and produced trace amounts of alkaloids. The cell extracts did not show any antidiabetic activity. The CWS-A cell line showed a PCV of 98% in 21 days and synthesized 0.036% ajmalicine in production medium. The extracts had no hypoglycaemic effect. In growth medium the cells showed a 98% PCV in 21 days and produced trace amounts of alkaloids. The cell extract caused an 86% decrease in blood sugar. The CWS-G cell line grown in flasks failed to synthesize significant levels of alkaloids both in growth and production media. The cell extracts did not show any antidiabetic activity.     

苦参素诱导卵巢癌HO8910细胞凋亡的初步研究

目的:观察苦参素对卵巢癌细胞株HO8910的抑制增殖效应及凋亡诱导作用.方法:用苦参素处理H08910细胞,采用MTT法检测药物对细胞的抑制作用,倒置显微镜观察细胞形态学改变;琼脂糖凝胶电泳观察DNA降解,以及应用流式细胞仪观察细胞凋亡过程中细胞周期的变化.结果:在苦参素作用下,HO8910细胞呈凋亡改变,DNA琼脂糖凝胶电泳呈典型的凋亡特征.细胞凋亡的同时,细胞周期发生特定的改变.结论:苦参素能抑制卵巢癌细胞增殖,诱导卵巢癌细胞凋亡.     

大蒜鳞茎蒜氨酸酶基因克隆及其在毕赤酵母中的表达

目的从大蒜鳞茎中克隆蒜氨酸酶基因,构建蒜氨酸酶真核表达载体,并在毕赤酵母系统中表达,进一步探讨重组蒜氨酸酶的生物学活性。方法利用RT-PCR方法克隆大蒜鳞茎蒜氨酸酶基因,通过pPIczαC载体构建pPIczαC-蒜氨酸酶真核表达质粒,电转化法导入毕赤酵母X-33,筛选阳性克隆,经甲醇诱导后取表达上清进行SDS-PAGE和Western blotting分析。利用丙酮酸法检测重组蒜氨酸酶和提取的天然蒜氨酸酶的活性,Lowry法测2种蒜氨酸酶蛋白质量,通过比活力比较2种酶活性大小。结果从大蒜内克隆出蒜氨酸酶基因,大小为1 500 bp,重组蒜氨酸酶相对分子质量约为5.5×104,存在于毕赤酵母表达上清液中。重组蒜氨酸酶比活力为(82.09±3.89)U/mg,天然蒜氨酸酶比活力为(176.49±5.06)U/mg。结论蒜氨酸酶基因可以在毕赤酵母表达系统中获得表达,重组蒜氨酸酶具有酶活性,但是其活性低于提取的天然蒜氨酸酶。     

人参皂苷Rg3诱导膀胱癌细胞系EJ的凋亡作用

目的：探讨Rg3抑制膀胱癌细胞的作用及其诱导凋亡的机制。方法：用一定质量浓度的Rg3 处理膀胱癌细胞系EJ细胞,MTT法检测细胞增殖活力和抑制率50%的时候药物的浓度(IC₅₀)；Hoechst33258荧光染色观察凋亡细胞的形态；流式细胞仪分析细胞周期及细胞凋亡率；免疫细胞化学观察caspase-3的表达变化；琼脂糖凝胶电泳测定DNA梯状带。结果：Rg3抑制EJ细胞生长,呈浓度依赖关系,Rg3处理细胞48 h的IC₅₀为125.5 mg·L^-1；经150 mg·L^-1Rg3处理细胞24 h和48 h后,观察到典型的凋亡细胞形态,即染色质凝集、核片段化、凋亡小体、核内致密的颗粒状荧光及caspase-3的表达增加；并呈时效依赖关系；用75 mg·L^-1Rg3处理细胞24,48,150 mg·L^-1的Rg3处理细胞48 h后,Rg3诱导了细胞凋亡和调节细胞周期,S期和G₂/M期的细胞比率增加,G₀/G₁的细胞比率下降；凋亡率从对照组的(1.05±0.17)%分别上升到(8.41±0.98)%,(18.57±2.20)% 和(33.98±1.64)%,琼脂糖凝胶电泳检测出典型的DNA梯形条带,其效应随药物浓度的增加和作用时间的延长而增强。结论：Rg3可通过诱导EJ细胞凋亡而发挥其抑制细胞增殖的作用。     

通莲I号方及其拆方对食管癌Eca109细胞增殖及细胞周期的影响

目的: 研究通莲I号方及其拆方在不同浓度下对食管癌Eca109细胞形态和生长周期的调节作用;探讨该方抑制食管癌细胞增殖的机制。 方法: 将Eca109细胞以1×10⁶个/皿密度接种于Φ100 mm培养皿中,以10％小牛血清DMEM培养液培养,37 ℃,5%饱和湿度的CO₂培养箱孵育,细胞贴壁24 h,分别加入浓度为25~3 200 mg·L^-1倍比梯度的通莲I号方(T)、清热解毒拆方(Q)、活血行气拆方(H)、滋阴养血拆方(Z)等4方提取液,孵育48 h后,MTT比色法检测细胞增殖变化、光镜观察细胞形态、流式细胞技术(FCM)测定细胞周期。 结果: T,Q,H的IC₅₀值分别为386,771,729 mg·L^-1;与空白对照组(C)相比,T,Q,H 3方显著影响Eca109细胞周期变化:G1期细胞所占比率分别为69.43%,60.84%,61.90%。同时,T,Q,H组细胞的S期与C组比较,均有显著性差异(P<0.05),T方作用最强。而Z方对细胞的抑制作用较弱,与C组无显著性差异。 结论: 通莲I号方通过抑制细胞进入S增殖期从而干预食管癌Eca109细胞生长,各拆方具有协同作用,全方作用最优。     

苦参碱通过MAPK信号转导通路促进U937细胞凋亡

目的:探讨苦参碱(mattine,Mat)对人淋巴瘤细胞株(U937)的抗癌作用及其分子机制.方法:用0.1,0.2,0.3,0.4,0.5 g·L~(-1)Mat处理U937细胞后,分别采用倒置显微镜和电子显微镜观察细胞形态学变化;台盼蓝拒染法及MTT实验检测细胞增殖抑制作用;Westem blot方法检测细胞MAPK的磷酸化活性.结果:0.2 g·L~(-1) Mat对人组织淋巴瘤U937细胞的增殖有抑制作用;0.2 g·L~(-1) Mat作用U937细胞48 h后,倒置显微镜下可见细胞数目减少,有些细胞变小、变圆,随着Mat作用浓度的增加,U937细胞逐步出现增多的凋亡细胞;Mat可以抑制U937细胞中ERK的活性,并在一定程度上提高p38和JNK的活性.结论:Mat可以在体外抑制人淋巴瘤细胞U937的增殖作用,诱导其凋亡,并且Mat可能通过抑制U937细胞中ERK的活性,提高p38和JNK的活性发挥其诱导凋亡作用.     

薏苡仁油对人原位胰腺癌BxPC-3细胞生长及VEGF和bFGF表达的影响

目的研究薏苡仁油(康莱特注射液)体外对人原位胰腺癌BxPC-3细胞生长和血管生长因子的影响,探讨薏苡仁油抗肿瘤作用机制。方法薏苡仁油作用BxPC-3细胞后,经瑞氏染色观察细胞形态,Hoechst 33258荧光染色、DNA梯度电泳观察细胞凋亡;流式细胞仪检测细胞周期的变化;ELISA法检测血管内皮生长因子(VEGF)、成纤维细胞生长因子(bFGF)的变化。结果薏苡仁油(2 mg/mL,20μL/mL)作用于BxPC-3细胞后,瑞氏染色可见细胞出现典型的凋亡小体,Hoechst33258荧光染色可见BxPC-3细胞出现特征性凋亡变化,琼脂糖电泳观察到明显的细胞凋亡特征性DNA梯形条带;细胞周期阻滞在G0/G1期;细胞上清液中VEGF、bFGF的表达水平明显下调。结论薏苡仁油能影响BxPC-3细胞生长周期,导致细胞周期阻滞,下调VEGF和bFGF的表达水平,可能对抑制胰腺癌细胞的扩散产生一定作用。     

木犀草素抑制人胃癌BGC-823细胞增殖作用的研究

目的研究木犀草素(Luteolin,Lu)对人胃癌BGC-823细胞增殖的体外抑制作用及其机制。方法 DPPH法测定Lu抗氧化活性;MTT法测定Lu对BGC-823细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞周期分布影响及诱导凋亡的作用;倒置显微镜下观察细胞形态学变化。结果 Lu清除自由基的能力与其浓度呈正相关(r2=0.979);5,10,20,40μmol/L的Lu作用48 h后对BGC-823细胞增殖抑制率分别为5.08%,7.09%,25.27%和53.77%,半数抑制浓度(IC50)为(37.88±5.81)μmol/L;Lu以浓度依赖性阻滞细胞周期在G2/M期,且S期细胞比例呈下降趋势。40μmol/L的Lu作用72 h后,BGC-823细胞凋亡率显著增高(P<0.01);镜下观察发现经Lu处理后细胞固缩并伴随细胞膜破裂的现象。结论 Lu在体外对人胃癌BGC-823细胞增殖有明显的抑制作用,且呈剂量依赖性;抗氧化、改变细胞周期及诱导细胞凋亡是其抗肿瘤作用的机制。