Heptakis(2,6-O-二甲基)β环糊精对百日咳杆菌产毒的作用

作者报道在Stainer-Scholte(SS)百日咳合成培养基中加入一种化合物heptakis(2,6-O-二甲基)β环糊精(MeβCD),对百日咳I相菌的生长和百日咳毒素(PT)的产生有明显刺激作用。作者将SS培养基成份作了调整,主要增加谷胱甘肽和维生素C的量,又添加了商品酪蛋自氨基酸和MeβCD,称为环糊精液体     

百日咳无细胞菌苗的纯化和特性

作者研究了Biken百日咳无细胞菌苗的纯度、效力和毒性。菌苗提纯程序为:将Ⅰ相百日咳杆菌在S-S液体培养基中,36℃培养5天。经离心并过滤取上清,浓缩后,用1/3饱和硫酸铵在冷室中盐析,沉淀物溶于含1M氯化钠的pH8.0的磷酸盐缓冲液中,高速离心,上清经蔗糖密度梯度离心,用福尔马林脱毒。将此制剂稀释至特定浓度,加吸附剂氢氧化铝,制成Biken菌苗。作者用ELISA和聚丙烯酰胺凝胶电泳测定了减毒前原液中百日咳毒素(PT)和丝状血凝素(FHA)的含量,发现PT与FHA比率接近1∶1时,纯度为97～99%。日本对百日咳无细胞菌苗的要求比全菌     

对百日咳杆菌丝状血凝素和淋巴细胞增多促进毒素的血清学应答

本文用ELISA测定百日咳患者和DTP免疫后婴儿对百日咳杆菌丝状血凝素(FHA)和淋巴细胞增多促进毒素(LPT)的抗体应答。所用FHA和LPT系从百日咳杆菌Tohama株静止培养物上清中提取,按Cowell法精制。经鉴定证明FHA和LPT间无交叉污染。试验组婴儿于出生后1周内和2、4、6     

一种新的百日咳无细胞菌苗在健康成人志愿者中的试验

本文作者用一种新的百日咳无细胞菌苗(PV)在54名健康成人志愿者(男42人,女12人)中进行免疫原性和反应原性试验。这种新菌苗含丝状血凝素(FHA)、百日咳毒素(BT)和菌毛凝集原2和3(AGG 2+3)3种成份。PT和FHA是从百日咳杆菌培养物上清中纯化,AGG 2+3是从菌体中纯化。PT、FHA和AGG 2+3用甲醛脱毒。每份菌苗含有脱毒后的PT、FHA和AGG 2+3各10μg和1份佐剂。佐剂分氢氧化铝(A)和磷酸铝(B)两种。在54名志愿者中,15人接种PVA,20     

改良的百日咳菌苗

改良百日咳菌苗的研究是尽可能地去除或减少内毒素等与副反应相关的成分,提取在防御感染上有用的成分。从百日咳杆菌培养上清中回收百日咳毒素(PT)以及丝状血凝素(FHA)组分,去除内毒素,用福尔马林处理清除PT的毒性,加少量铝佐剂,制定沉淀精制百日咳菌苗,与白喉和破伤风类毒素一起组成新的DTP。实验室和临床试验结果表明,新型DTP保持了国际公认的免疫效力,与全菌体菌苗相比,其发热以及接种部位红肿和硬结等局部反应轻得多。这种改     

百日咳全菌体菌苗中百日咳毒素、丝状血凝素、69KDa外膜蛋白、凝集原2和3及脂多糖含量的测定

百日咳全菌体菌苗可诱导对多种抗原[如百日咳毒素(PT)、丝状血凝素(FHA)、69KDa外膜蛋白(69KDa OMP)、凝集原2和3(AGG 2和3)以及其他外膜蛋白]的抗体应答。在百日咳菌苗中,这些抗原成分的含量影响其免疫应答。 作者测定了丹麦当地4种百日咳菌株等量混合的百日咳全菌体菌苗中相应抗原成分的含量。菌苗经甲醛和硫柳汞灭活制成。每剂菌苗含16浊度单位(菌体数约为16×10~9)。从菌苗中提取各种抗原,用ELISA测定菌苗中各种抗原和脂多糖(LPS)含量。 应用2M尿素,在60℃加热30分钟,随后超声处理45秒是提取FHA、69KDa OMP、AGG2和3的最有效方法。提取PT的最佳方法是1M NaCl 4℃过夜,随后超声处理。     

百日咳69kDa蛋白预防小鼠喷雾感染的研究

沉降精制百日咳菌苗抗感染的抗原成份已知有百日咳毒素(PT)、丝状血凝素(FHA)、缴。最近有报告提出,菌体外膜蛋白69kDa(69k)具有预防小鼠脑内感染及喷雾感染的活性,作者对69k和其他抗原合并应用的抗感染效果进行了研究,获得了若干新的认识。实验选用雌性4周龄小鼠。FHA及PF用东浜1相菌的液体培养上清。缴和69k从培养菌体精制。各种抗原用甲醛灭活及脱毒后用于试验。抗原单独或按适当比例调整为     

百日咳毒素S1亚单位的抗原异质性

百日咳毒素(PT)由A原体(S1)和B低聚体两个功能部分组成,而B低聚体又由S2、S3、S4和S5四个亚单位组成。1984年,Watanabe报道用多克隆抗体双向扩散法检查5株百日咳杆菌的PT,发现其抗原性相同。本文作者旨在用单克隆和多克隆抗体弄清4株百日咳杆菌PT(尤其是S1亚单位)之间的抗原关系,便用单克隆抗体进行百日咳的免疫学诊断。在环糊精培养基中振荡培养百日咳Ⅰ相     

化学交联抗原组成的无细胞百日咳疫苗的效力

在联合疫苗与多价疫苗研制过程中 ,抗原总量的增加可能是个问题 ,制备高效抗原可使疫苗的抗原含量减至最小。研究发现弱抗原性抗原经化学交联后能诱生抗体。为此作者在小鼠呼吸道感染模型中研究了化学交联抗原组成的无细胞百日咳疫苗的效力。　　作者将百日咳杆菌 Tohama株在改良的S- S液体培养基中静止培养 5天后 ,取上清液提纯百日咳杆菌丝状血凝素 ( FHA)、百日咳毒素 ( PT)、百日咳 6 9k Da外膜蛋白( PRN)。然后将上述三种抗原以 9∶ 2∶ 1的蛋白比混合 ,加入 2或 50 m M 1 -乙基 - 3- ( 3-二甲胺基丙基 )碳化二亚胺 ( EDC)和 0 …     

百日咳患者和接种全细胞百日咳菌苗的婴儿血清中各类免疫球蛋白的水平

作者使用纯化的百日咳毒素(PT)、丝状血凝素(FHA)和凝集原2和3(Agg2/3),在ELISA试验中,测定了114名百日咳患者,49名与百日咳患者密切接触者和139名接种DTP(其中含百日咳全细胞菌苗)菌苗婴儿血清中PT、FHA和Agg2/3的IgG、IgA和IgM的应答。     

一种百日咳无细胞菌苗的研制及作为免疫加强剂在健康成人中的应用

本文报道一种主要由高纯度丝状血凝素(FHA)和百日咳毒素(PT)组成的百日咳菌苗,并对其在临床应用的安全性、反应原性和免疫原性进行评价。菌苗的制备:PF和FHA从百日咳Tohama菌株发酵培养液中提取和纯化,并进行各种鉴定。脱毒后采用淋巴细胞增多促进因子(LPF)、组胺致敏因子(HSF)和中国仓鼠卵巢(CHO)试验及高压液相层析(HPLC)检测其残留毒性。毒性恢复检测则在4℃或37℃放置1个月后重复上述试验,用天然毒素作为对照。一个接种量的菌苗含灭活的PT和FHA各25μg,将其吸附于0.5mg Al(OH)_3。通过测定特异性抗体和抗攻击感染保护力来确定菌苗的免疫原性和效力。接种对象为45     

百日咳Ⅰ相菌在含血环化糊精(CD)固体培养基与BG培养基上生长的比较

Bordet-Gengou(BG)培养基是百日咳菌苗生产、检定和临床分离细菌使用最广泛的培养基。但发现含甲基化β-糊精无血的固相化Stainer-Scholte培养基(SSCD)对百日咳Ⅰ相菌的生长及临床分离优于BG培养基。作者按Suruki和Aoyama等早期的配方配制的SSCD培养基未获百日咳菌的良好生长,故加33%脱纤维羊血于含多种氨基酸的改良Stainer-Scholte (SS)和SSCD培养基中,同     

比较自然感染和初免DTaP-HBV联合疫苗后的长期百日咳特异性免疫

为比较自然感染后和初免三组分无细胞百日咳疫苗 DTP-乙型肝炎疫苗 ( DTa P-HBV)联合疫苗 5年后的百日咳特异性体液免疫和细胞免疫 ,作者选取 5～ 6岁儿童 ,其中 38人在 3、5、1 1月龄接种过 DTa P- HBV,2 1人在 1岁以前自然感染过百日咳。用ELISA法测定血清抗百日咳毒素 ( PT)、丝状血凝素 ( FHA)和 6 9k Da外膜蛋白 ( PRN)特异性 Ig G抗体滴度 ;同时收集外周血单个核细胞 ( PBMC) ,用 PT、FHA和 PRN与之一起培育 ,测定淋巴细胞增殖应答及细胞因子的分泌水平。　　结果表明 ,免疫组的 PRN特异性 Ig G抗体阳性率和抗 PR…     

抗白细胞增多促进因子血凝素和抗丝状血凝素的抗体对百日咳的免疫作用

[Sato Y et al:Infect Immun 31(3):1223,1981(英文)] 作者用Arai等方法提纯了百日咳杆菌的丝状血凝素(FHA)和白细胞增多促进因子血凝素(LPF·HA),然后用FHA和甲醛解毒的LPF·HA分别免疫家兔。从免疫血清中提取γ球蛋白即抗-FHA和抗-LPF·HA,     

小鼠口服脂质体包被的丝状血凝素和百日咳类毒素后血清和呼吸道的抗体应答

本文报道以脂质体包被的丝状血凝素(FHA)和脱毒的百日咳毒素(PT)给小鼠口服后诱发的特异性全身和分泌性免疫应答。 纯化的FHA和PT通过溶剂稀释微载体技术包被在多层磷脂囊内,该磷脂囊由卵磷脂、磷脂酰乙醇胺、磷脂酸、中性脂按8:1:0.7:0.3的比例组成,经凝胶过滤去除游离FHA和PT。作者选用5～6周龄雌性BALB/c小鼠分别口服包被FHA的脂质体、包被PT的脂质体、包被FHA和PT的脂质体、游离FHA、游离PT、游离的FHA和PT,以及未包被的脂质体(作为对照)。每次剂量为4μg蛋白,0和4天基础免疫,第30天以同样剂量加强免疫。加强免疫后10天,采集血液和肺灌洗液,应用ELISA测定血清和肺灌洗液中特异性抗FHA和PT抗体滴     

百日咳杆菌丝状血凝素的制备及百日咳毒素和丝状血凝素血清抗体的分析

近十年来,提纯和检测百日咳杆菌丝状血凝素(FHA)、百日咳毒素(PT)和其它一些抗原技术的不断发展,为应用百日咳抗原检测血清学应答成为可能.可是这些技术通常十分复杂并且相当费钱.提供纯化抗原仅局限于少数专门研究实验室.作者建立了一种为临床和公共卫生实验室制备FHA血清的简单而经济的方法,利用这个方法开展了百日咳血清诊断的研究.     

含遗传脱毒的百日咳毒素的百日咳无细胞菌苗能在成人中诱导长期的体液和细胞免疫

作者对成人接种单组分和三组分百日咳无细胞菌苗后的长期免疫应答进行了随访研究,检测了由百日咳毒素(PT)、丝状血凝素(FHA)和69kDa蛋白诱生的抗体水平,及抗PT中和抗体滴度和细胞免疫应答。     

在菌苗效果现场试验中对用血清学和鼻咽培养法诊断百日咳的评价

用鼻咽涂抹接种对百日咳诊断有高特异性,但敏感度低,作为补充的血清学法可增加敏感性。本文根据鼻咽分离及测定血清中抗丝状血凝素(FHA)、抗百日咳毒素(PT)抗体,用中国仓鼠卵巢(CHO)细胞法测PT中和抗体等试验对接种和未接种菌苗的儿童血清进行分析,并对假阳性结果及患者早期抗体的变化作了研究。     

百日咳无细胞菌苗:用于婴儿和儿童初免程序的建议

1991～1992年间,美国食品和药物管理局(FDA)批准,婴儿于2、4、6月龄初免3剂百日咳全细胞菌苗DTP(DTwP)后,第4和第5剂免疫可用百日咳无细胞菌苗DTP(DTaP).最近,在欧洲完成的DTaP试验已证实这些菌苗用于婴儿初免有效.基于这些研究,FDA批准Tripedia〔Con-naught药厂,含百日咳类毒素(PT)和丝状血凝素(FHA)〕和ACEL-IMUNE〔Wyeth-Lederle药厂,含PT、FHA、2型菌毛蛋白(FIM2)和69kDa外膜蛋白(PRN)〕两种DTaP用于3剂初免程序.     

基因脱毒的PT与FHA、69KDa联合的百日咳无细胞菌苗Ⅰ期临床试验

脱毒的百日咳毒素(PT)在全菌体菌苗中是主要成份,对儿童具有保护性,PT菌苗用化学处理灭活,此过程既降低分子的免疫原性,而且不可能完全排除毒性逆转的危险性,为避免这些问题,作者系用基因诱变,得到自然脱毒的PT,并将其与丝状血凝素(FHA)、69KDa蛋白制成一种新的菌苗,并进行Ⅰ期临床试验。新菌苗基因脱毒PT-9K/129G和FHA由