异种脱钙骨基质颗粒的生物相容性实验研究

目的 评价制备的异种脱钙骨基质(demineralized bone matrix,DBM)植入体内的生物相容性,为进一步实验研究和临床应用提供依据.方法 取猪四肢长管状骨皮质骨经理化处理后,制备脱脂脱钙(材料A)和脱脂脱钙去细胞(材料B)两种粒径为250～810 μm的DBM颗粒和浸提液,骨颗粒脱脂脱钙后测钙、磷含量.采用标准的毒理学方法进行急性毒性实验、皮肤刺激实验、热原实验、溶血实验、细胞毒性实验和肌肉植入实验.结果 未脱钙皮质骨钙、磷含量分别为(189.09±3.12)mg/g和(124.73±2.87)mg/g:DBM颗粒的钙、磷含量分别为(3.48±0.09)mg/g和(3.46±0.07)mg/g;DBM颗粒钙、磷含量分别为未脱钙皮质骨的1.87%和2.69%.急性毒性实验:各组小鼠活动正常,7 d内小鼠无死亡,各组动物未见中毒症状或不良反应;7 d后各组小鼠体重日平均增加差异无统计学意义(P>0.05).皮内刺激实验观察显示,注射材料A、B浸提液和生理盐水处无明显红斑、水肿和皮肤坏死,极轻微刺激.热原实验两组动物体温升高最高均为0.4℃,符合<0.6℃的国家标准.材料A浸提液的溶血率为1.14%,材料B为0.93%,符合<5%的国家标准.异种DBM的细胞毒性为0～1级.肌肉内植入实验显示动物术后生存良好,各植入部位均未见组织坏死、积液及化脓感染.术后不同时间点植入材料A、B组局部细胞免疫定量评分比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 DBM颗粒的毒性程度为无毒,皮肤无刺激,无热原性,溶血率<5%,对细胞无明显毒性,具有良好的生物相容性和一定的骨诱导性.     

一种高效制备工艺对脱钙骨基质性能的影响

目的 目前脱钙骨基质生产工艺耗时长效率低,浪费资源和成本.本研究在保存骨诱导活性的前提下,显著缩短了脱钙骨基质的工艺时间.方法 采用动态脱钙和二次换酸工艺制备脱钙骨基质,对pH值、钙含量进行评价.用裸鼠体内植入实验评价这种脱钙骨基质骨诱导活性.结果 材料的pH值为6.2±0.3,呈弱酸性.钙含量为(0.6±0.2)％,符合＜6％的标准.裸鼠体内植入后创面一期愈合,无不良反应发生.其骨诱导活性阳性,4周时可见大量的新生骨组织、骨髓样组织和软骨化成骨现象.结论 该工艺可以提高脱钙骨基质生产效率,不影响材料活性.     

多聚赖氨酸修饰的脱钙骨基质支架材料的组织相容性研究

[目的]评价多聚赖氨酸修饰的脱钙骨基质支架材料(PLL-DBM)的组织相容性。[方法]采用标准的毒理学方法进行溶血实验、全身急性毒性实验、致癌实验和皮下植入实验验证多聚赖氨酸修饰的脱钙骨基质支架材料(PLL-DBM)的组织相容性。[结果]溶血实验测得溶血指数为2.617%,符合生物材料的国家标准(<5%);全身急性毒性实验:各组裸鼠活动正常,体重正常增长,未见中毒表现或不良反应,72 h内PLL-DBM材料浸提液组与生理盐水组裸鼠体重增长无明显差异(P>0.05),且4周内裸鼠无死亡;致癌实验显示实验组裸鼠正常存活,8个月内未见肿块形成,心、肝、脑、肺、肾、胰、脾组织学观察未见肿瘤细胞;皮下植入实验显示实验动物伤口未见感染、红肿及裂开等不良反应,置入材料无排异现象,取材时见材料周围肌肉颜色及质地正常。[结论]多聚赖氨酸修饰的脱钙骨基质支架材料(PLL-DBM)具有良好的组织相容性。     

表面脱钙骨基质明胶修复大块骨缺损的实验与临床研究

目的 探讨表面脱钙骨基质明胶修复大块骨缺损的疗效及相关问题。方法 将32只成年家兔随机分成A、B两组，双侧桡骨制成1cm骨缺损，分别植入表面脱钙骨基质明胶(SDBMG)、全脱钙骨基质明胶(VDBMG)及SDBMG、自体骨，术后定期进行X线、组织学检查(A组)及生物力学测定(B组)；临床采用人SDBMG治疗大块骨缺损31例，术后定期进行X线检查。结果 SDBMG呈由表及里的“渐进”诱导成骨过程；SDBMG的骨修复作用与自体骨相近，SDBMG侧抗压强度与自体骨侧的差异无显著性意义；临床随访示除1例因适应症选择不当而失败外，其它30例均治愈。结论 SDBMG具有良好的成骨作用和可靠的力学性能，可作为自体骨理想的替代材料修复大块骨缺损，但对活动期感染性骨缺损宜慎用。     

脱钙皮质骨基质的拉伸力学性能研究

目的探讨脱钙皮质骨基质厚度与拉伸力学性能的关系,为将其作为组织工程支架材料奠定实验基础。方法取市售新鲜小牛胫骨,常规快速脱钙制备脱钙皮质骨基质,大体观察其颜色、质地等物理性状,并进行脱钙检测。将脱钙皮质骨基质沿径向纵切成不同厚度的片材,并根据厚度分为4组(n=16),分别为A组100～300μm,B组300～500μm,C组500～700μm,D组700～1 000μm;对每组标本进行拉伸性能和组织学观测。结果大体观察显示脱钙皮质骨基质经H2O2处理后呈乳白色,柔韧性好,富有弹性。脱钙皮质骨基质的脱钙率达97.6%。A组强度及弹性模量明显小于B、C、D组(P<0.05),B、C、D组间比较差异均无统计学意义(P>0.05);脱钙皮质骨基质刚度随厚度增加呈逐渐增大趋势,A组刚度显著低于B、C、D组(P<0.05),B、C组低于D组(P<0.05),B、C组间差异无统计学意义(P>0.05);各组极限应变差异均无统计学意义(P>0.05)。组织学观察各组均可见典型骨单位结构,其最大直径范围为102～325μm,平均最大直径为182μm。结论骨单位的完整性对脱钙皮质骨基质的力学性能有重要影响;脱钙皮质骨基质作为组织工程支架材料,在厚度>300μm时可保持其拉伸力学性能。     

海绵状、泥灰状脱钙骨基质修复骨缺损

目的探讨海绵状脱钙骨基质(DBM)和泥灰状DBM修复骨缺损的能力。方法将兔四肢长骨骨干脱脂、脱钙后制成长度为500～1000 μm的纤维状及直径为200～400μm的颗粒状DBM,并与2%明胶混合分别制成海绵状DBM和泥灰状DBM。在9只兔双侧桡骨中段做一长10mm的骨膜骨缺损,分别植入海绵状DBM和泥灰状DBM及空白对照,每组各6个缺损,术后观察6周,于4、6周时拍摄X线片,并对实验动物的大体标本、骨密度、生物力学、新生骨矿化率及病理组织学改变进行观察。结果术后4、6周X线片显示两实验组骨缺损均修复,骨髓腔完整;空白对照组无一例修复骨缺损。骨密度测量显示海绵状DBM组新生骨骨密度与正常桡骨间差异无显著性(P >0.05),但泥灰状DBM组的新生骨骨密度与正常桡骨间差异有显著性(P< 0.05)。术后6周生物力学测定显示海绵状DBM组新生骨极限压缩强度值与正常桡骨差异无显著性(P >0.05),泥灰状DBM组低于正常桡骨且差异有显著性(P< 0.05)。两实验组新生骨矿化率差异无显著性(P >0.05)。组织学观察显示两实验组中DBM绝大部分被吸收,形成板状骨骨小梁及完整的骨髓腔,塑形完整, 新生骨内可见骨单位及局部尚未完全骨化的新生骨。结论海绵状DBM和泥灰状DBM均具有诱导成骨活性和骨传导能力,使用方便,新生骨塑形完整,生物力学强度高,矿化     

脱钙骨基质复合牛骨形态发生蛋白与单纯脱钙骨基质修复兔桡骨缺损比较

目的比较脱钙骨基质(DBM)复合牛骨形态发生蛋白(bBMP)和单纯DBM修复节段性骨缺损的能力.方法32只新西兰大白兔采用桡骨15 mm节段性骨缺损模型,随机分为2组:A组植入异体DBM与bBMP(10 mg)复合材料;B组植入异体DBM.术后4、8、12、16周,进行放射学检查、病理组织学检查和计算机图象分析新生骨面积.结果X线和组织学检查显示异体DBM与bBMP复合材料组的新骨生成、修复骨缺损能力优于异体DBM组,组织切片的计算机图象分析提示DBM bBMP组修复新骨面积大于DBM组,两者之间差异有显著性(4、8、12周P＜0.05,16周P＜0.01).结论异体DBM复合bBMP材料通过骨诱导和骨传导两种方式修复骨缺损,其修复骨缺损的能力要优于单纯DBM材料,是一种较为理想,具有高效成骨活性的植骨材料.     

应用脱钙骨基质和硫酸钙颗粒治疗骨缺损的初期结果

目的探讨使用骨移植替代物脱钙骨基质（DBM）和硫酸钙颗粒（OSTEOSET）治疗骨缺损的疗效。方法对同期手术治疗的52例骨缺损患者的缺损处,分别于术后第1、4、8周及3、6、12个月进行随访并摄X线片直至骨缺损愈合。统计分析患者的临床资料、X线片辅助分析骨缺损修复程度和并发症。结果随访8-12个月,植骨术后6、12个月分别有95%和99%患者的骨缺损显示有明显的新骨形成,修复水平为60%-100%。并发症为3例（5.77%）,经换药后治愈,未发生骨缺损不愈合。结论DBM和OSTEOSET在骨愈合早期可加速骨缺损的修复,并可作为新鲜自体髂骨的替代物。     

冻干脱钙骨表面纳米结构对细胞行为的影响

目的：探讨表面有纳米结构的冻干脱钙骨基质(nFDBM)的制备方法及该结构对成骨细胞生物学行为的影响。方法：取新鲜狗趾皮质骨按改良Urist法制备冻干脱钙骨基质(FDBM)，经Nd：YAG激光表面处理后，用原子力显微镜、扫描电镜观察其表面形态结构学变化。nFDBM、FDBM分别与狗自体骨髓基质细胞诱导分化来的成骨细胞体外构建材料——细胞复合物并植人该狗脊柱两侧深筋膜袋内，于植人前及术后第4、8周取材行扫描电镜及组织学观察。结果：FDBM经Nd：YAG激光处理后表面形成了规则的纳米级沟槽状三维结构。体外构建材料——细胞复合物后扫描电镜观察nFDBM表面细胞黏附密度及分泌基质量均高于FDBM。术后HE染色、扫描电镜观察见左侧植人物基本纤维化，表面未见明显成骨细胞及基质；右侧植人物原纳米沟槽一侧形成薄层骨样组织，表面为成骨细胞分泌的大量基质所覆盖。结论：Nd：YAG激光可在FDBM表面形成纳米级沟槽状三维结构；该结构有利于成骨细胞的黏附、生长和基质分泌。     

纳米羟基磷灰石/甲基丙烯酸2-羟基乙酯人工骨支架的制备及其功能评价

[目的]体外研究评价纳米羟基磷灰石/甲基丙烯酸2-羟基乙酯(nHA/pHEMA)生物支架的生物特性及其对转染骨形态发生蛋白-7(bone morphogenetic protein 7,BMP-7)的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal-stem cells,BMSCs)成骨分化的影响。[方法]将nHA与pHEMA复合构建nHA/pHEMA复合物支架。将BMP-7体外转染BMSCs并作为种子细胞接种至n HA/p HEMA支架。采用MTT、荧光显微镜及电镜扫描评价nHA/pHEMA支架的生物相容性和细胞毒性。ALP活性和RT-PCR检测分析BMP-7对复合nHA/pHEMA支架BMSCs成骨分化的影响。最后进行无侧限抗压试验评价nHA/pHEMA支架的生物力学特性。[结果]MTT荧光显微镜及电镜检测结果表明接种于nHA/pHEMA支架的BMSCs生长及增殖情况良好。BMP-7转染组与BMSCs组的细胞增殖水平差异无统计学意义(P0.05)。ALP活性检测发现BMP-7-BMSC组的ALP水平在培养第7 d和14 d明显高于BMSCs组(P0.05),RTPCR发现BMP-7-BMSCs组的RUNX2、COLI、OPN和OCN表达水平在培养第7 d和第14 d显著高于BMSCs组(P0.05)。生物力学检测发现nHA/pHEMA支架在高压力负荷及形变条件下未出现脆性骨折。[结论]nHA/pHEMA支架具有良好的生物相容性及生物力学特性,BMP-7能够显著促进复合nHA/pHEMA支架的BMSCs成骨分化,BMP-7-BMSCs与nHA/pHEMA支架复合可以作为理想的骨修复材料促进骨形成。     

rh-BMP-2壳聚糖微球的制备及体外检测

[目的]以壳聚糖为辅料,通过乳化交联法制备新型重组人骨形态发生蛋白-2缓释微球,并对其粒径、载药、体外释药、理化特性及降解特性进行检测,以评估应用生物可降解的壳聚糖微球作为BMP-2缓释载体的可行性.[方法]以京尼平作为交联剂,应用乳化交联法制备具有控制释放功能的负载rhBMP-2壳聚糖微球,应用扫描电镜观察微球的形态和粒径;利用酶联免疫吸附实验(ELISA)动态检测BMP-2壳聚糖微球的载药率、包封率和缓释规律以分析微球的缓释能力.[结果]乳化交联法制备的壳聚糖微球,球形良好,球体表面光滑,具有较高的包封率(>85%).体外药物释放试验表明,rhBMP-2可以从壳聚糖微球中缓慢释放,整个释放过程可达30 d.[结论]应用乳化交联法制备的负载rhBMP-2壳聚糖缓释微球,具有很好的控制释放rhBMP-2的能力.这种新型药物控制释放系统在细胞因子的控制释放及骨组织工程中有潜在的应用价值.     

符合骨支架材料条件的陶瓷化骨的制备和性能研究

目的:研究不同条件所形成的陶瓷化骨的理化性能,探讨合适的条件以使获得的陶瓷化骨满足骨支架材料所需的条件。并进一步探讨其生物学性能及细胞相容性。方法:不同预处理的猪肋骨进行分组,再经不同煅烧温度及时间处理得到多种陶瓷化骨;测定其理化性能和生物相容性。将小鼠间充质干细胞分别接种于单纯陶瓷化骨、Ⅰ型胶原改性的陶瓷化骨表面共培养,观察细胞在载体上的粘附生长情况。结果:各种处理所得到的陶瓷化骨主要成份均为羟基磷灰石;900℃煅烧2h以上条件所得陶瓷化骨有较高抗压强度,有良好的生物相容性和细胞相容性。胶原表面改性后的煅烧骨上细胞增殖较快。结论:不需通过预处理900℃煅烧2h以上条件所得的陶瓷化骨有较高抗压强度,有良好的生物相容性和细胞相容性,胶原改性后更有利于细胞的粘附和增殖,有望成为骨组织工程研究中理想的支架材料。     

靶向治疗大肠癌的纳米药物及其载体进展

大肠癌是目前世界发病率第四位的恶性肿瘤,发病初期临床表现不明显,因此早期较难发现,诊断出时大多属于进展期.进展期的治疗多用化疗、介入治疗、放疗等方法,其中化疗在杀伤肿瘤细胞的同时,对正常机体细胞也有杀伤作用.近年来,各类新兴纳米靶向递送系统不断发展,由于纳米粒子可靶向定位于肿瘤组织,因而其在肠道肿瘤尤其是伴有转移的肠道肿瘤治疗中的应用越来越受到人们的重视.笔者针对目前纳米药物载体材料的类型、研究现状及其在大肠癌研究中的应用做一综述.     

脱钙骨基质/磷酸钙复合骨水泥骨诱导活性观察

目的：观察磷酸钙骨水泥（CPC）中加入脱钙骨基质（DBM）后形成的复合骨水泥的成骨诱导活性。方法：将DBM/CPC复合骨水泥分别植入兔背肌肌袋内，于不同时间取材，通过组织学切片、ALP等手段观察异位诱导成骨情况。结果：术后2周，DBM/CPC复合骨水泥组可见间充质细胞增殖、聚集并包绕DBM骨粒。4周时，DBM已有部分吸收，并软骨样细胞和软骨样组织包裹。8周，DBM进一步吸收，软骨细胞和软骨组织逐渐成熟，新骨形成。12周，DBM吸收并被新骨组织部分或大部分代替且相互连接成片。ALP测定结果与组织学观察的新骨形成情况基本一致。结论：DBM/CPC复合骨水泥有较强的异位诱导成骨能力，诱导新骨的形成伴随着材料的降解，可以有效弥补单纯使用CPC时降解速度太慢和无骨诱导能力的不足。     

脱钙骨基质/磷酸钙复合骨水泥骨诱导活性观察

目的:观察磷酸钙骨水泥(CPC)中加入脱钙骨基质(DBM)后形成的复合骨水泥的成骨诱导活性。方法:将DBM/CPC复合骨水泥分别植入兔背肌肌袋内,于不同时间取材,通过组织学切片、ALP等手段观察异位诱导成骨情况。结果:术后2周,DBM/CPC复合骨水泥组可见间充质细胞增殖、聚集并包绕DBM骨粒。4周时,DBM已有部分吸收,并软骨样细胞和软骨样组织包裹。8周,DBM进一步吸收,软骨细胞和软骨组织逐渐成熟,新骨形成。12周,DBM吸收并被新骨组织部分或大部分代替且相互连接成片。ALP测定结果与组织学观察的新骨形成情况基本一致。结论:DBM/CPC复合骨水泥有较强的异位诱导成骨能力,诱导新骨的形成伴随着材料的降解,可以有效弥补单纯使用CPC时降解速度太慢和无骨诱导能力的不足。     

脱钙骨基质在脊柱融合中的临床应用进展

脊柱融合是脊柱外科中最常用的手术方式之一,在术中选择合适的植骨材料具有十分重要的意义。一种良好的骨移植材料需同时具备骨传导性、骨诱导性和成骨性三大特性。目前,临床上应用最广泛的骨移植材料为同种异体骨,包括新鲜冰冻骨、冻干骨和脱钙骨基质(demineralized bone matrix, DBM)三类,新鲜冰冻骨具有最高的机械稳定性,但存在免疫反应和疾病传播的危险性;冻干骨在其制备过程中,水分的丢失和辐照的电离破坏了其力学性能;DBM是一种由胶原蛋白(主要为Ⅰ型、Ⅳ型)、非胶原蛋白、生长因子、少量磷酸钙和细胞碎片等组成的天然骨移植材料,具有良好的骨诱导性及一定的骨传导性。目前,随着骨移植替代材料研究深入,DBM显示出了相当大的优势,同时在脊柱融合中发挥了重要作用。     

脱细胞软骨支架材料的制备及物理性质

目的 探讨脱细胞软骨生物支架材料(ACM)的制作方法,使其在孔隙率、比表面积、弹性模量等物理性质更加接近天然软骨.方法 猪膝关节软骨冻干加工为粉末,0.25%胰酶消化,1%曲拉通洗脱,蒸馏水洗净冻干,8 W 312 nm紫外线照射(UVI)后成型;扫描电镜观察孔径分布,压汞仪测定孔隙率等参数;INSTRON 5544对ACM进行抗雎弹性模量测定.结果 脱细胞生物支架材料为白色,略微发黄,外表呈多孔疏松网状结构,脆性大并有一定弹性;ACM孔隙率为68.54%,平均孔径为47.13 μm;ACM弹性模量为(1.05±0.38)MPa.结论 ACM在孔隙率、比表面积、平均孔径等方面符合关节软骨支架材料的要求.     

大豆多糖的制备及其功能性

本研究利用析因分析,探讨了从豆渣中制取大豆多糖的最适工艺条件,比较了大豆多糖在多种加工条件下的持水性变化,并应用于鱼圆加工,改善了鱼圆的保水性和质构。结果表明,在pH=9,温度30～50℃,处理时间20～30min,液固比4.5∶1时,可将豆渣中的蛋白质去除60%以上。食盐和蔗糖的存在,pH的变化和加热对多糖持水性的影响有限,该大豆多糖可用于多种食品。     

二溴对甲基偶氮甲磺光度法测定食品中微量铅

研究了新显色剂二溴对甲基偶氮甲磺（ＤＢＭ－ＭＳＡ）与铅的显色反应。在０．２４ｍｏｌ／Ｌ的磷酸介质中，铅与ＤＢＭ－ＭＳＡ形成稳定的蓝色配合物，其组成比为铅ＤＢＭ－ＭＡＳ＝１２，λｍａｘ＝６４２ｎｍ，ε＝９．５×１０４Ｌ／（ｍｏｌｃｍ）．铅在０～０．６μｇ／ｍＬ范围内符合比耳定律，测定０．４μｇ／ｍＬ时大多数金属离子的允许量在毫克量级。用于食品中微量铅的测定，结果令人满意。